局部应用GDNF对脊髓前角运动神经元的保护作用研究

目的:研究周围神经损伤后经蛛网膜下腔置管局部应用外源性胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对脊髓前角运动神经元的保护作用.方法:成年SD大鼠随机分为2组,GDNF组和生理盐水(NS)组各24只.切断大鼠坐骨神经致相应眷髓前角运动神经元损伤,于L5.6椎间隙行蛛网膜下腔置管,GDNF组注入外源性GDNF 6μl(10μg/ml),NS组同法注6μl生理盐水.不同时间处死动物并取材,对L4-L6节段脊髓标本冰冻切片,行HE染色,尼氏体染色、胆碱酯酶染色.结果:GDNF组脊髓前角运动神经元的存活率、胆碱酯酶阳性颗粒面积均比NS组有明显提高,两组差异有统计学意义(P<0.05).结论:周围神经损伤后通过蛛网膜下腔注入外源性GDNF对相应的脊髓运动神经元有保护作用.     

胶质源性神经营养因子对脊髓损伤后功能及前角运动神经元酶组织化学改变的

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）对损伤脊髓运动功能及前角运动神经元酶组织化学改变的影响。方法 改良Ａｌｌｅｎ撞击致Ｔ１３脊髓不完全损伤。蛛网膜下腔分别给予生理盐水和ＧＤＮＦ,不同时间分别：（１）测定大鼠后肢神经功能;（２）利用酶组织化学染色方法显示脊髓侧前角运动神经元中胆碱酯酶（ＣｈＥ）和酸性磷酸酶（ＡＣＰ）活性并通过计算机图像分析系统将酶活性量化、比较。结果 （１）神经功能随时间延长而逐渐恢复,ＧＤＮＦ有助于功能恢复,但３周时均未达正常标准;（２）ＣｈＥ和ＡＣＰ活性随时间延长而向正常趋近,ＧＤＮＦ显著加强了这一趋势,（３）随着ＣｈＥ水平上升和ＡＣＰ水平降低。大鼠后肢运动功能逐渐恢复,两者呈现较强的相关性。结论 （１）前角运动神经元酶学改变与神经功能恢复密切相关;（２）ＧＤＮＦ加强前角运动神经元酶     

胶质细胞源性神经营养因子对运动神经元发育及运动神经元性疾病的作用

目的 追溯近年国内外有关胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotropic factor，GDNF)与运动神经元发育及疾病研究的进展。方法 广泛查阅近期有关GDNF与运动神经元关系的文献，综述GDNF的分子结构、作用方式及治疗时给药方式。结果 GDNF对运动神经元发育及运动神经元疾病有广泛的作用，对脊髓运动神经元的发育起一定调控作用，可以挽救出现损伤的运动神经元。结论 GDNF在运动神经元疾病的治疗上，具有潜在的临床价值和不可估量的前途。     

阳离子脂质体介导GDNF体内转基因对脊髓损伤后运动神经元的保护作用

目的 :观察阳离子脂质体介导的胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)体内转基因对大鼠脊髓损伤 (SCI)后伤区脊髓前角运动神经元的影响。方法 :采用改良Nystr m法制备大鼠胸段脊髓后路压迫损伤模型 ,将阳离子脂质体DC Chol和重组质粒 pEGFP GDNFcDNA混合后直接注入大鼠损伤脊髓。利用RT PCR技术和荧光显微镜检测GDNF体内转基因的表达。应用尼氏染色、酶组织化学染色方法观察前角运动神经元死亡的数目和胆碱酯酶(CHE)及酸性磷酸酶 (ACP)的变化。结果 :1周后在注射局部GDNFmRNA和GDNF有较高表达。GDNF体内转基因早期 (1～ 4周 )SCI区前角运动神经元死亡的数目减少 ,CHE和ACP变化的幅度降低。结论 :GDNF体内转基因能减少脊髓不完全性损伤后引起的神经元坏死 ,阳离子脂质体介导GDNF体内转基因治疗创伤性SCI的方法是可行的。     

胶质源性神经营养因子对脊髓损伤后功能及前角运动神经元酶组织化学改变的研究

目的　探讨胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对损伤脊髓运动功能及前角运动神经元酶组织化学改变的影响。方法　改良Allen撞击致T13 脊髓不完全损伤 ,蛛网膜下腔分别给予生理盐水和GDNF ,不同时间分别 :①测定大鼠后肢神经功能 ;②利用酶组织化学染色方法显示脊髓侧前角运动神经元中胆碱酯酶 (ChE)和酸性磷酸酶 (ACP)活性并通过计算机图像分析系统将酶活性量化、比较。结果　①神经功能随时间延长而逐渐恢复 ,GDNF有助于功能恢复 ,但 3周时均未达正常标准 ;②ChE和ACP活性随时间延长而向正常趋近 ,GDNF显著加强了这一趋势 ;③随着ChE水平上升和ACP水平隆低 ,大鼠后肢运动功能逐渐恢复 ,两者呈现较强的相关性。结论　①前角运动神经元酶学改变与神经功能恢复密切相关 ;②GDNF加强前角运动神经元酶学改变 ,呈现对损伤神经元有保护作用。     

局部应用GDNF对运动神经的保护作用研究

目的研究周围神经损伤后,经蛛网膜下腔置管局部应用外源性胶质细胞源性神经营养因子（glial cellline-derived neurotrophic factor,GDNF）对脊髓前角运动神经元的保护作用。方法成年SD大鼠随机分为两组,即手术加生理盐水组和手术加GDNF组。切断大鼠坐骨神经致相应脊髓前角运动神经元损伤,于L5、6腰椎椎间隙行蛛网膜下腔置管,并注入外源性GDNF（10μg/mL）,分别与术后4、8、12周行神经功能指数检测;于不同时间处死动物并取材,对L4～6节段脊髓标本冰冻切片,行尼氏体染色、光镜检查,并于术后12周取坐骨神经,行电镜检查并采用图象分析仪检测有髓神经纤维数目、髓鞘厚度和轴突直径。结果GDNF组的坐骨神经功能指数、脊髓前角运动神经元的存活率、有髓神经纤维数目、髓鞘厚度和轴突直径均优于对照组,经统计学处理,两组差异有显著性（P〈0.05）。结论通过蛛网膜下腔注入外源性GDNF保护相应的脊髓运动神经元的同时也促进外周神经功能的恢复。     

许旺细胞源神经营养因子对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的 了解许旺细胞源神经营养因子对神经损伤所致脊髓前角运动神经元死亡的保护作用。方法 选用出生３周ＳＤ鼠切断坐骨神经,神经近侧行旺细胞源神经营养因子或生理盐水,４周后观察腰４－５节段脊髓前角运动神经元的存活率和一氧化氮合成酶表达情况。结果术后４周,营养因子组神经元的存活率是９３．４％,生理盐一是５９．６％,两组一氧化氮合酶表达均未见增加。结论 许旺细胞源神经营养因子对员的俏髓前角运动神经元有明显     

神经生长因子对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的：证实神经生长因子（ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）对脊髓前角运动神经元有保护作用。方法：切断ＳＤ大鼠一侧坐骨神经，借助单盲端硅胶管系统在神经损伤局部给予ＮＧＦ。术后行酶组织化学检测。结果：坐骨神经切断可致腰段脊髓前角运动神经元明显损害，其表现为神经元乙酰胆碱脂酶（ａｃｅｔｙｌ－ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ，ＡｃｈＥ）活性降低和酸性磷酸酶（ａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＣＰ）活性升高，应用ＮＧＦ可显著改善上述酶学变化。结论：ＮＧＦ对受伤的脊髓前角运动神经元有保护作用     

大鼠脊髓损伤后GDNFmRNA表达变化及意义

目的　探讨 GDNFm RNA在大鼠脊髓损伤后表达变化及其意义。方法　改良 Allen’s脊髓撞击 (10 g× 7.5 cm)致伤大鼠 T1 段脊髓 ,以 β- Actin为内参照物 ,应用半定量 RT- PCR方法 ,观察大鼠脊髓损伤前及损伤后不同时间 GDNFm RNA表达变化。结果　 GDNFm RNA在正常成年大鼠脊髓微量表达 ,脊髓损伤后 2 4h表达增加 5倍 ,72 h增加 2 0倍 ,7d增加 4倍 ,10 d仍高于正常水平。结论　脊髓损伤后早期 GDNFm RNA表达增加 ,是神经元自我保护作用的一种表现 ;损伤神经元修复需要大量 GDNF,应用 GDNF治疗脊髓损伤时应早期用药     

胶质细胞源性神经营养因子体内转基因对皮质脊髓束再生的影响

目的通过非病毒载体阳离子脂质体介导,探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因体内转染对成年大鼠脊髓损伤后皮质脊髓束再生的影响.方法采用NystrOm法制备大鼠胸髓后路压迫损伤模型,压迫重量为50 g,时间为5 min,造成大鼠胸段脊髓急性重度损伤.用微量注射器将阳离子脂质体DC-Chol 6μl和重组质粒pEGFP-GDNF cDNA 2μg混合后注入大鼠损伤脊髓.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术和荧光显微镜检测GDNF体内转基因后在局部的表达,通过辣根过氧化物酶(HRP)顺行追踪技术和神经微丝(NF)免疫组织化学活性的变化来评价GDNF基因体内转染对大鼠皮质脊髓束再生的影响.结果 GDNF基因体内转染1周后显示在基因注射局部有转录和蛋白水平表达.脊髓损伤后4周在损伤区可见较多的皮质脊髓束再生,损伤区NF阳性轴突数(524.33±80.55)/低倍视野较对照组(309.84±56.65)/低倍视野明显增多(P＜0.01).结论阳离子脂质体介导GDNF体内转基因能促进近端皮质脊髓束再生和神经骨架蛋白的修复.     

大鼠脊髓损伤后坐骨神经GDNFmRNA表达变化及意义

目的：探讨大鼠脊髓损伤后GDNFmRNA在坐骨神经的表达变化及其意义。方法：Allen's方法致大鼠T13段脊髓不完全损伤后，以β-Actin为内参照物，应用半定量RT-PCR方法，观察大鼠坐骨神经在脊髓损伤前、后不同时间GDFNmRNA表达变化。结果：脊髓损伤前GDNFmRNA在大鼠坐骨神经仅有微量表达，脊髓损伤后24h表达增加4倍，72h增加15倍，7d增加3倍，10d仍高于正常水平。结论：脊髓损伤后坐骨神经高表达GDNFmRNA，是神经元通过“胞体--轴突--靶器官”途径自我保护的一种反应形式，GDNF治疗脊髓损伤时应早期用药以获得最佳效果。     

胶质细胞源性神经营养因子与神经病理性疼痛

胶质细胞源性神经营养因子（gtial cell line—derived neurotrophic factor．GDNF）是神经营养因子家族成员之一。GDNF对中枢和周围神经系统多种抻经元的生长,发育、分化,维持和损伤修复起重要作用。另外,GDNF还参与中枢和外周水平神经病理性疼痛的形成和发展。该文主要就GDNF和神经病理性疼痛的研究作一简要综述。     

大鼠脊髓损伤后坐骨神经GDNFmRNA表达变化及意义

目的探讨大鼠脊髓损伤后坐骨神经表达GDNFmRNA的变化及其意义.方法 Allen's方法致伤大鼠T13段脊髓,造成不完全性脊髓损伤,截取坐骨神经,以β-Actin(β-肌动蛋白)为内参照物,应用半定量RT-PCR方法,观察大鼠坐骨神经在脊髓损伤前、后不同时间GDNFmRNA表达变化.结果脊髓损伤前GDNFmRNA在大鼠坐骨神经仅有微量表达,脊髓损伤后24小时表达增加4倍,72小时增加15倍,7天增加3倍,10天仍高于正常水平.结论脊髓损伤后坐骨神经高表达GDNF,是神经元通过"胞体-轴突-靶器官"途径自我保护的一种反应形式,GDNF治疗脊髓损伤时应早期用药.     

肋间神经转位脊髓神经根桥接联合应用GDNF促进大鼠脊髓损伤后功能恢复

目的：肋间神经转位脊髓神经根桥接联合应用胶质源性神经营养因子(GDNF)恢复大鼠脊髓损伤的功能。方法：将成年大鼠分为脊髓半切洞损伤组(A组)、脊髓半切洞损伤 肋间神经转位脊髓神经根桥接组(B组)、脊髓半切洞 肋间神经转位脊髓神经根桥接 胶质源性神经营养因子(C组)。手术后应用联合行为评分(CBS)。感觉诱发电位(SEP)和运动诱发电位(MEP)检查，测定脊髓功能恢复情况。结果：3组CBS得分A组＞B组＞C组，SEP和MEP潜峰时，均A组＞B组＞C组，统计分析均有显著差异性(P＜0.05)。结论：肋间神经转位脊髓神经根桥接联合应用胶质源性神经营养因子能促进损伤脊髓功能的恢复。     

胶质细胞源性神经营养因子对周围神经再生的作用

目的研究胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对周围神经再生的作用.方法硅管套接大鼠坐骨神经,术中一次性将GDNF、生理盐水(nor-mal saline solution,SAL)分别加入硅管中.术后4周,应用溃变神经纤维染色法、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)逆行追踪技术观察GDNF对轴突再生的影响.结果与SAL组相比,GDNF组渍变神经纤维面积明显减少,溃变神经纤维面积百分率由17.3%降低到1.9%(P＜0.01);GDNF组脊髓标记胞体显著增加,HRP标记胞体数的百分率由43.5%上升到68.3%(P＜0.01).结论外源性GDNF能明显促进周围神经再生.