结核病DNA疫苗的研究进展

1990年Wolff等［1］报道，他们在一次基因治疗的实验研究中意外地发现不加任何处理的基因也可在骨骼肌细胞中表达蛋白至少2个月。经与美国Merek公司联合研究，1993年Ulmer等［2］首先报道用甲型流感病毒基因免疫小鼠，不仅可表达蛋白、刺激机体产生特异性免疫应答，还可保护小鼠抵抗异株流感病毒的攻击。从此，核酸疫苗（nucleicacidvaccine）成为世界瞩目的防治传染病的研究新热点。核酸疫苗包括DNA疫苗和HNA疫苗，由能引起机体保护性免疫反应的病原体抗原的编码基因和载体组成，将其直接导人机体细胞后，并不与福主染色体整合，而是通…     

甲肝疫苗应用策略研究

甲型病毒性肝炎在我省发病率一直很高，现已有有效疫苗一甲肝减毒活疫苗，预防旱型肝炎最有效的措施就是接种甲肝疫苗，但甲肝疫苗价格高，受经济发展的影响，不少地区难以大范围推广接种，如何降低疫苗防病的成本，扩大免疫屏障的范围，是一个值得研究的课题。     

结核杆菌Ag85A DNA疫苗在小鼠体内的免疫效应比较

目的探索增强结核杆菌DNA疫苗有效性的新方法，为研制并开发新一代高效结核杆菌DNA疫苗奠定基础。方法分别构建结核杆菌Ag85A抗原基因真核表达质粒及其与小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的真核嵌合表达质粒，体外转染COS7细胞检测两种重组质粒的表达活性后，将其分别用作DNA疫苗给BALB／c小鼠肌内注射，检测小鼠体内特异性体液免疫和细胞免疫应答相关指标，同时进行动物免疫保护性实验，比较分析两种DNA疫苗在小鼠体内的免疫效应。结果结核杆菌Ag85A抗原蛋白基因与小鼠粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子的嵌合DNA疫苗在小鼠体内的免疫原性明显强于Ag85A抗原基因非嵌合DNA疫苗，但两种DNA疫苗的免疫保护性无明显差异。结论粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与结核杆菌免疫保护性抗原基因嵌合DNA疫苗能显著增强结核病DNA疫苗的免疫原性。     

mpt64-卡介苗重组疫苗免疫原性研究

目的研究rapt64-卡介苗重组疫苗的免疫原性。方法以生理盐水、卡介苗、mpt64-卡介苗重组疫苗免疫小鼠，采用ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体，MTS法分析小鼠脾淋巴细胞增殖指数。结果mpt64-卡介苗重组疫苗组小鼠体重变化与对照组相比，无显著性差异。应用不同抗原检测各组小鼠不同时间采集的血清，rapt64-卡介苗重组疫苗组有MPT64特异性抗体产生，而卡介苗组无MPT64特异性抗体产生；卡介苗、mpt64-卡介苗重组疫苗免疫后15d，抗体水平已有升高，45d达到最高水平。用不同抗原刺激实验组及对照组小鼠脾淋巴细胞，平均刺激指数均达2．0以上。结论结核分枝杆菌mpt64基因在卡介苗中能够表达特异的蛋白，刺激小鼠产生特异性抗体。     

几种SARS DNA疫苗对BALB/c小鼠重要器官影响的组织病理学研究

目的 用组织病理学方法观察几种SARSDNA疫苗对BALB／c小鼠重要器官的影响，为研制安全有效的SARSDNA疫苗奠定基础。方法 用RT-PCR的方法从SARS冠状病毒（SARS-CoV）基因组中扩增出M片段、E片段、N片段和S基因的两个主要片段S1，S2，然后将这些基因片段分别亚克隆至pVAC真核表达载体，制备出几种SARSDNA疫苗pVAC-S1、pVAC-S2、pVAC-M、pVAC-E、pVAC-N。用这些疫苗分别或联合免疫BALB／c小鼠后，取小鼠重要器官心、肝、脾、肺、肾，观察其组织病理学改变。结果 鼠心、脾和肾未见明显的组织病理学异常，但部分小鼠的肝和肺表现出下列病理变化：肝：出现片状肝细胞染色加深和肝细胞核固缩等凋亡早期改变，部分还可见到肝细胞水变性和肝窦变窄甚至消失等病变。肺：肺泡隔增厚，肺泡轮廓消失，或肺组织淤血水肿，甚至出现支气管肺炎改变。同时，在pVAC空质粒对照组也可见个别小鼠出现上述肝、肺病变。结论 由于对肝、肺产生组织病理学异常改变，制备高效、安全的SARS DNA疫苗还有待进一步研究和完善，载体的选择和质粒的用量也是必须加以考虑的问题。     

新型胃癌靶向纳米疫苗的制备及其生物学活性的研究

目的以胃癌特异性多肽抗原MG7为靶点，CpG寡核脱氧核苷酸为佐剂研制胃癌特异性纳米疫苗，并观察其对小鼠的免疫效能及其作用。方法人工合成胃癌MG7-抗原（MG7-Ag）的模拟表位多肽，用磁力超声法将其与新型免疫佐剂CpG共包封于纳米乳剂中，通过透析纯化，高效液相色谱（HPLC）检测其包封效率。所制备纳米疫苗免疫健康BALB／c小鼠，通过酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中抗MG7抗体的效价；酶联免疫斑点法（ELISPOT）测定小鼠脾细胞毒性T淋巴细胞活性，流式细胞仪检测淋巴细胞分型。同时，用表达MG7-Ag的小鼠艾氏腹水瘤细胞对免疫小鼠进行肿瘤攻击，观察疫苗对小鼠的保护作用；对成瘤小鼠进行疫苗治疗，观察疫苗的抑瘤率。结果成功制备了胃癌特异性MG7-Ag的纳米疫苗，并具有较好的包封率和较高的稳定性，可诱导小鼠产生特异性MG7抗体，ELIS-POT检测共包封组与对照组相比分泌干扰素（IFN）-γ的活性细胞明显增高，流式细胞仪分析显示主要活性细胞为CD4^＋淋巴细胞。抑瘤实验结果共包封疫苗组肿瘤抑瘤率达82．5％，较对照组（1．8％）显著增高。结论所制备的MG7抗原肽与佐剂共包封纳米疫苗可以诱导小鼠产生较强的抗肿瘤免疫反应，并具有一定保护和治疗作用。     

重组转化生长因子β1疫苗诱导产生抗体的活性检测及抗纤维化作用

目的探讨重组转化生长因子（TGF）β1疫苗诱导Balb／c小鼠产生的抗体对TGFβ1体外中和活性检测及抗肝纤维化作用。方法TGFDl抗原表位插入乙型肝炎核心抗原（HBcAg）的免疫优势区c／e1区，原核表达蛋白作为重组TGFβ1疫苗免疫小鼠，诱导产生高效价中和抗体，酶联免疫吸附法检测免疫血清抗体滴度，貂肺上皮细胞生长抑制法检测抗体血清对TGFβ1体外中和活性，将疫苗用于四氯化碳造模的小鼠预防肝纤维化。结果重组TGFβ1疫苗可以诱导小鼠产生高滴度的抗-TGFβ1并与表达的融合蛋白及抗原肽结合，可以阻断TGFβ1对貂肺上皮细胞的抑制活性，减轻小鼠肝纤维化。结论HBCAg作为载体蛋白构建的重组TGFβ1疫苗可以诱导高滴度的中和抗体产生，在体外阻断TGFβ1活性，可作为抗纤维化疫苗用于抗纤维化动物模型。     

一例甲型H1N1流感疫苗免疫失败的病例报告

2009年4月25日,世界卫生组织（WHO）正式确认新型甲型H1N1流感暴发,疫情快速蔓延,同时甲型H1N1流感疫苗研发工作也在全球迅速展开,中国最早完成甲型H1N1流感疫苗临床试验,山东省9月22日开始接种疫苗。11月9日,山东省疾病预防控制中心接到一例接种甲型H1N1流感疫苗病例后发热、咽痛、咳嗽伴全身酸痛等典型流感样症状的病例报告,     

甲型肝炎

汕头市1990．2003年甲型肝炎流行特征分析与免疫策略探讨——黄少珊等（广东汕头市疾病预防控制中心515031）：《疾病监测》，2005，20（1）：8-9[目的：分析汕头市1990-2003年甲型肝炎流行特征，为制定预防控制策略的制定提供科学依据。方法：对汕头市甲肝疫苗推广应用前后甲型肝的流行特征进行比较分析。结果：推广疫苗前，甲肝的发病呈波浪式，     

紫外线减活日本血吸虫尾蚴疫苗免疫小鼠肺部iNOS的表达及其与免疫保护关系的研究

目的研究紫外线照射减活日本血吸虫尾蚴疫苗免疫小鼠后肺部诱导型～氧化氮合酶(iNOS)的动态表达及其与保护性免疫的关系。方法用紫外线照射减活尾蚴疫苗免疫小鼠，30d后用尾蚴攻击感染。于感染后第4d、9d取免疫小鼠和未免疫小鼠肺脏，用RT-PCR半定量的方法检测各组小鼠肺部iNOS的转录水平；用免疫组化方法确定iNOS在肺部的蛋白表达定位。结果正常小鼠肺部无iNOS转录和蛋白表达。免疫小鼠和未免疫小鼠感染血吸虫尾蚴后第4d肺部iNOs有较高水平的转录表达。感染后第9d，免疫组小鼠iNOS的表达较第4d下降，而未免疫组小鼠肺部iNOS的表达消失。免疫组化结果表明，免疫组小鼠肺部炎症病灶细胞中存在iNOS的表达。结论移行到肺部的血吸虫童虫能诱导肺部表达iNOS，紫外线减活尾蚴疫苗能促使小鼠肺组织较长时间表达iNOS，iNOS在肺部的持续表达可能与该疫苗使宿主产生的免疫保护力有关。     

一种恶性疟原虫多价重组候补疫苗引起小鼠免疫反应的研究

本实验检测了一种恶性疟原虫多价重组候补疫苗在小鼠体内引起的体液免疫和细胞免疫反应。该重组疫苗包含了MSA1、MSA2、RESA上的T细胞和／或B细胞刺激位点及IL－1、TT上的T细胞刺激位点；尤其是含有Spf66的序列。经重组疫苗免疫后，BALB／c小鼠和C57BL／6小鼠均产生了明显的抗重组疫苗的抗体，且经重组疫苗免疫的BALB/c小鼠脾细胞在体外经重组疫苗刺激后发生了明显的增殖，并产生了明显的IL－2。以上结果提示该候补疫苗具有免疫原性，且具有一定的T细胞刺激能力和一定的广谱识别能力，其能否有效地刺激人淋巴细胞还需进一步研究。     

人单纯疱疹病毒Ⅱ型gD抗原的原核表达及免疫效果测定

目的制备预防人单纯疱疹病毒感染的疫苗。方法扩增人单纯疱疹病毒Ⅱ型的gD基因，克隆人载体，导人大肠埃希菌表达系统，表达、分离、纯化抗原蛋白，然后进行小鼠动物免疫实验，测定小鼠的抗体水平；最后攻毒实验，观察小鼠的病理变化和死亡率。结果免疫后，gD抗原和IFN-γ联合免疫组小鼠体内产生抗体最高，其次gD抗原免疫组。生理盐水组小鼠病理变化出现最早也最重，且死亡最多；gD抗原免疫组小鼠病理变化出现较晚，症状也轻，死亡也少；gD抗原和IFN-γ联合免疫组小鼠无死亡。结论制备小鼠抗人单纯疱疹病毒的疫苗是可行的。此疫苗是否能刺激人体产生抗单纯疱疹病毒的抗体，是否对人有免疫效果，还有待于进一步研究。     

新型乙型肝炎病毒核心区核酸疫苗的免疫原性研究

目的观察新型乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)核酸疫苗的免疫原性。方法应用新型人体应用载体质粒pSW389l构建HBcAg核酸疫苗(pSW3891／HBc)，对照组和实验组Balb／c小鼠分别以基因枪法免疫对照载体质粒(PSW3891)和HBcAg核酸疫苗，采用酶联免疫吸附试验检测抗HBc，乳酸脱氢酶(LDH)释放测定法检测小鼠HBcAg特异性cTL杀伤活性。结果HBcAg核酸疫苗可在体外293T细胞中高效表达，免疫小鼠后可产生高滴度抗HBc(1：97200)，免疫鼠脾细胞HBc特异性CTL杀伤活性达73．25％。结论新型HBcAg核酸疫苗在Balb／c小鼠实验中表现出良好的体液和细胞免疫原性。     

甲型肝炎疫苗接种对HIV感染病人是安全的

据医学空间网11月3日报道(原载Clin Infect Dis 2004；39：1207-1213)，一种失活甲型肝炎病毒疫苗似乎对HIV感染病人安全，也能很好耐受。     

甲型与乙型肝炎疫苗研究现状

病毒性肝炎分为甲、乙、丙、丁、戊五型.目前仅甲、乙两型疫苗研制成功,乙型肝炎疫苗已广泛应用.1 甲型肝炎疫苗1.1 灭活甲肝病毒疫苗自从1979年Plovcst 等首次用狨猴肝细胞及恒河猴胚肾细胞在体外培养成功甲型肝炎病毒以来,许多研究者就尝试通过大量培养甲肝病毒的方法,制备灭活甲肝病毒疫苗.目前已选出CLF 和HM 175两个毒     

MTT法检测牛口蹄疫基因疫苗免疫小鼠T淋巴细胞增殖反应的研究

目的检测牛口蹄疫基因疫苗免疫小鼠后的细胞免疫水平,全面评价牛口蹄疫基因疫苗的免疫效果.方法采用MTT法检测牛口蹄疫基因疫苗免疫小鼠的T淋巴细胞增殖反应能力,以期反应出免疫小鼠的细胞免疫应答水平.结果通过MTT法检测出牛口蹄疫基因疫苗能够激发小鼠的细胞免疫应答.结论 MTT法是检测细胞免疫水平的方法之一,能够有效地检测牛口蹄疫基因疫苗免疫小鼠淋巴细胞的增殖反应.     

乙型肝炎病毒复制调控元件对HBV DNA疫苗诱导的免疫应答

目的研究乙型肝炎病毒（HBV）复制调控元件增强子Ⅰ（ENHⅠ）及前S2（Pre-S2）抗原基因对HBV DNA疫苗诱导的免疫应答的影响。方法采用常规聚合酶链反应（PCR）从HBV adr亚型全基因DNA序列中分别扩增HBsAg、PreS2-HBsAg、HBsAg-ENHI和PreS2-HBsAg-ENHⅠ基因片段，重组到VR1012载体中，构建4种HBV DNA疫苗，转染HepG2细胞并免疫Balb／C小鼠。通过细胞免疫化学、酶联免疫分析（ELISA）、酶联免疫斑点试验（ELISPOT）等方法检测其在HepG2细胞内的表达及小鼠的体液及细胞免疫应答。结果转染的HepG2细胞表达相应的目的蛋白．ENHⅠ及Pre-S2抗原基因均可增强HBV DNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg；免疫接种小鼠后第2周产生抗-HBs及HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL），Pre—S2抗原基因可增强HBV DNA疫苗免疫Balb／C小鼠诱导的抗-HBs及HBsAg特异性CTL的产生，ENHⅠ基因对免疫应答无影响。结论ENHI及Pre—s2抗原基因均可增强HBVDNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg．Pre-S2抗原基因可增强HBVDNA疫苗免疫Balb／C小鼠引起的免疫应答。     

恶性疟原虫DNA疫苗在小鼠组织中的表达

目的 探讨恶性疟原虫FCC－1／HN株环孢子蛋白（CSP）DNA疫苗在小鼠组织中的表达。方法 用盐酸布比卡因对BALB／c小鼠的骨骼肌进行了预处理，然后在同一部位注射重组真核表达质粒pBK/CSP。分别在免疫后4周和8周应用间接免疫酶法检测免疫小鼠注射部位肌肉组织中重组蛋白CSP的表达。结果 小鼠经DNA疫苗免疫4周和8周后肌肉组织及其周围结缔组织均呈现特异性阳性反应。结论 疟疾DNA疫苗免疫小鼠后，肌肉组织及其周围结缔组织有重组CSP蛋白的表达。     

弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠的体液免疫反应及保护性观察

目的观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗在小鼠体内诱导的体液免疫反应，以及产生的保护性效果。方法P30乳酸球菌口服免疫BAILB／c小鼠，以gp42乳酸球菌组和生理盐水组为对照，4周内免疫7次，免疫结束后，分别收集各组小鼠血清，ELISA法检测血清中总抗体IgG和抗体亚类IgG1和IgG2a水平，同时用100个弓形虫RH株速殖子攻击各实验小鼠。结果P30乳酸球菌口服免疫小鼠组检测到了相应的抗体，抗体亚类IgG2a的生成量稍高于IgG1，两对照组均检测不到明显的相应抗体；攻击后，口服疫苗免疫组平均存活时间多于对照组4d。结论P30乳酸球菌口服疫苗刺激小鼠产生了相应的抗体，诱导产生了偏向Th1型的免疫反应，且在小鼠体内发挥了部分保护作用。     

优化构建UreB/HpaA双价幽门螺杆菌减毒活菌疫苗的免疫保护作用

目的 以减毒鼠伤寒沙门菌为载体，通过在UreB和HpaA间引入由3个甘氨酸残基组成的三肽柔韧接头，构建成UreB／HpaA双价抗幽门螺杆菌(Hp)活疫苗，并对照相应单价疫苗和空白载体研究其对C57BL／6小鼠的免疫保护效果。方法 用序列重叠延伸聚合酶链反应扩增带3个甘氨酸残基柔韧接头的融合基因UreB／HpaA，进一步以减毒鼠伤寒沙门菌SL3261为载体构建UreB／HpaA双价活疫苗，观察其在小鼠体内的稳定性。用双价活疫苗株免疫Ⅱ级C57BL／6小鼠1次，对照单价活疫苗和空白载体观察其在体内诱导的特异抗体反应和对小鼠的免疫保护作用。结果 测序结果显示，3个甘氨酸残基的编码序列GGTGGAGGC已成功地插入UreB／HpaA融合基因中。双价疫苗灌喂小鼠后，至少能在脾脏和回肠末段存留10d。双价疫苗在小鼠体内诱导血清特异性IgGl和IgG2a水平明显升高。UreB／HpaA双价疫苗的免疫保护率为77．3％(17／22)，而UreB疫苗和HpaA疫苗的免疫保护率分别为50．0％(12／24)和43．5％(10／23)。结论 引入柔韧接头，优化构建表达UreB和HpaA的双价抗Hp活疫苗。UreB／HpaA双价活疫苗对Ⅱ级C57BL／6小鼠有更好的免疫保护作用。