胰岛素对糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞糖摄取的影响

目的：研究胰岛素对糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞糖摄取的影响。方法：按照培养基中胰岛素的浓度（0,10-6mol/L）,将对照组和糖尿病组成骨细胞分为N、N＋Ins、DM、DM＋Ins4组,荧光显微镜观察它们对2-脱氧荧光葡萄糖（2-NBDG）的摄取能力。结果：2-NBDG的摄取量,20min时由大到小依次为N＋Ins〉DM＋Ins〉DM〉N;40min时依次为DM〉N＋Ins〉N及DM＋Ins。结论：胰岛素可以抑制糖尿病大鼠成骨细胞过高的糖摄取。     

糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞体外特性的研究

目的：研究体外培养糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞生长分化的特性。方法：20只6周龄雌性SD大鼠随机平均分为2组，实验组腹腔注射四氧嘧啶（200mg／kg），对照组注射生理盐水。模型建立成功10d后，取下颌骨行成骨细胞培养。MTT法、PNPP法、考马斯亮蓝法、放射免疫法及钙结节茜素红染色检测细胞的增殖能力、蛋白校正ALP含量、骨钙素水平及矿化能力。结果：实验组2d、4d、6d MTT相对比值高于对照组（P〈0．05），3d、7d、14d、21d ALP含量低于对照组（P〈0．01），28d总骨钙素水平以及钙结节的数量及面积均低于对照组（P〈0．01）。结论：急性糖尿病早期促进体外培养大鼠下颌骨成骨细胞的增殖，抑制其基质成熟和矿化，可建成具有内在缺陷的成骨细胞模型。     

胰岛素对糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞分化的影响

目的：研究胰岛素对糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞分化的影响。方法：按照培养基中胰岛素的浓度（0,10-5,10-6,10-7 mol/L）,将对照组和糖尿病组成骨细胞分为N、DM、DM＋Inse-5、DM＋Inse-6及DM＋Inse-7四组,用PNPP法、考马斯亮蓝法、放射免疫法及RT-PCR分别检测各组蛋白校正ALP含量（3、7、14、21d）、骨钙素水平（0~28d）以及ColΙA1、Runx2（2d）的mRNA表达。结果：N组在4个时间点的ALP含量均为最高,各组的变化趋势大体一致,于14天时达到最高值,21d下降;N组0~7dBGP分泌量达峰值,之后逐渐降低,而DM各组的变化趋势与之相反;DM加胰岛素各组的ColΙA1的mRNA表达较DM组明显增强,而Runx2表达明显减弱（P〈0.05）。结论：胰岛素可以纠正糖尿病大鼠成骨细胞的分化功能障碍。     

改良大鼠下颌骨成骨细胞原代培养与鉴定

目的:探讨高效的原代成年大鼠下颌骨成骨细胞培养方法,为进一步的实验研究奠定基础。方法:将4-6周SD成年大鼠处死并取出下颌骨,剪碎,用改良的酶消组织块培养法培养细胞,通过相差显微镜观察,用碱性磷酸酶染色、骨钙素免疫荧光染色和钙结节染色等方法对所获得的细胞进行鉴定。结果:所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态特征,碱性磷酸酶染色、骨钙素染色和钙结节染色均呈阳性。结论:改良的酶消组织块培养法,可获得大量高纯度的下颌骨成骨细胞,所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能。     

高糖对大鼠下颌骨成骨细胞葡萄糖摄取的影响

目的：探讨高糖对胰岛素诱导的下颌骨成骨细胞葡萄糖摄取和葡萄糖转运蛋白1（glucose transporter1,GLUT1）表达的影响。方法：分离培养大鼠下颌骨成骨细胞,分别予以5.5mmol/L、16.5mmol/L浓度葡萄糖和胰岛素干预,采用氟-18（F-18）标记的脱氧葡萄糖（18F-FDG）测定成骨细胞的葡萄糖摄取,采用Western印迹法检测GLUT1表达水平。采用SPSS13.0软件包对数据进行方差分析和t检验。结果：高糖培养时,成骨细胞的葡萄糖摄取无明显变化,但GLUT1的表达增加35%（P〈0.01）,胰岛素的应用对葡萄糖摄取无明显影响,但明显使GLUT1的表达下调33%（P〈0.01）。结论：高糖能够引起成骨细胞对胰岛素的敏感性下降,诱导成骨细胞产生胰岛素抵抗。     

新生大鼠下颌骨成骨细胞的分离、培养与鉴定

目的 探求高效、经济、方便的新生大鼠下颌骨成骨细胞的原代培养方法,为研究下颌骨成骨细胞的相关特性奠定基础.方法 无菌条件下取新生24h大鼠的下颌骨,采用组织块贴壁法培养成骨细胞,通过细胞形态学观察、碱性磷酸酶染色(alkaline phosphatase,ALP)、茜素红染色对细胞进行鉴定,并与颅骨分离的成骨细胞进行对...     

贴壁组织块反复消化法培养新生大鼠下颌骨成骨细胞及鉴定

目的探讨经济、高效的原代新生大鼠下颌骨成骨细胞培养方法。方法将新生24 h SD大鼠处死并取出下颌骨,剪碎,用改良的贴壁组织块反复消化法培养细胞,噻唑蓝（MTT）比色法检测其增殖能力,通过相差显微镜观察,用骨钙素免疫荧光染色、碱性磷酸酶染色和钙结节染色方法对所获得的细胞进行鉴定。结果MTT实验显示接种后1～3 d内细胞增殖缓慢,为细胞生长适应期,第7天达到高峰,以后增长速度逐渐减慢。所培养的细胞能形成矿化结节,碱性磷酸酶染色、骨钙素染色和钙结节染色均呈阳性,具有典型的成骨细胞形态特征。结论改良的贴壁组织块反复消化法可获得大量且纯的新生大鼠下颌骨成骨细胞,所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能。     

盐酸二甲双胍对大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的：研究盐酸二甲双胍（MF）对大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响，为糖尿病患者经种植牙给药假说提供实验依据。方法：分离培养原代下颌骨成骨细胞，分别给予不同浓度的MF，MTT法检测大鼠下颌骨成骨细胞的增殖、生化法测定碱性磷酸酶（ALP）活性、钙吸收、茜素红S钙染法检测矿化结节形成。结果：在一定浓度范围内，MF可以提高成骨细胞数量和ALP活性，促进钙吸收及矿化结节形成。结论：MF能促进原代下颌骨成骨细胞的增殖分化及矿化，提高成骨细胞的成骨能力。     

人胚成骨细胞体外原代培养和鉴定

目的：针对成骨细胞原代分离培养常用方法——酶消化法的优缺点，探讨组织块法应用的可行性和应用价值。方法：取材于６个月引产胎儿头盖骨，以含５０ｍｇ／ＬＬ－抗坏血酸的ＤＭＥＭ培养液进行培养，细胞以碱性磷酸酶组化染色、骨钙素免疫组化染色、钙化结节ｖｏｎＫｏｓｓａ染色以及细胞形态观察进行起源鉴定。结果：原代培养第５天即有三角形或短梭形细胞自骨块游出，同时亦可见骨块逐渐碎裂。至第７天，碎裂的组织块下有三角形或方形细胞出现。至第１２天，细胞长满。所得细胞经碱性磷酸酶、骨钙素、钙化结节等指标的鉴定，证实为成骨细胞。结论：对成骨细胞而言，组织块法是一种可靠、简便、快速的细胞原代分离培养方法。     

不同流动剪切力对原代大鼠成骨细胞细胞骨架的调节作用

目的:从细胞水平探索细胞骨架在将机械应力刺激信号转导进入细胞中并产生应答反应的作用机制。方法:在建立力学刺激细胞培养系统的基础上，对体外分离培养的原代大鼠颅骨成骨细胞分别施加1．2或1．9N／m^2的流动剪切力，激光共聚焦显微镜下观察流动剪切力作用后成骨细胞细胞骨架的改变。结果:1．2N／m^2的流动剪切力作用1h后，受力细胞及其细胞突起沿流动方向一致被拉长。细胞中央微丝呈束状排列，荧光标记强度明显增强。去除剪切力继续培养24h后，细胞恢复无方向的排列，细胞脑浆微丝重新分布于细胞的周围。1．9N／m^2的流动剪切力作用1h后，受力细胞发生明显的皱缩，细胞脱落明显，脑浆微丝出现解聚消失现象。继续培养24h后，细胞形态及微丝无明显恢复。结论:细胞骨架是成骨细胞受到流动剪切力后的一个机械刺激感受体，成骨细胞受力后形态学的变化是细胞骨架应力纤维变化的结果。     

糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞葡萄糖转运蛋白-1及胰岛素受体α1的表达

目的检测糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞中葡萄糖转运蛋白（GLUT）-1、胰岛素受体（IR）α1的表达,探讨其对成骨细胞分化功能障碍的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹分析、免疫组织化学染色观测糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞及对照组细胞中GLUT-1、IR α1的表达。结果糖尿病组GLUT-1及IR α1的mRNA表达高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。2组细胞中GLUT-1、IR α1的蛋白表达与其mRNA表达相似。结论糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞保留了对供体来源的高糖、低胰岛素环境作出的适应性变化,这可能是造成其分化功能障碍的原因之一。     

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目的    探索一种纯度高、数量大、操作简便的大鼠原代成骨细胞培养方法,为后续的实验研究奠定基础。方法    2009年3—9月在中国科学院金属研究所生物实验室,选择出生24 h内的大鼠胎鼠4只,摘取颅骨,采用胰蛋白酶和Ⅰ型胶原酶交替消化分离成骨细胞并进行传代培养。相差显微镜下观察原代培养的成骨细胞形态;并采用碱性磷酸酶（ALP）染色、Ⅰ型胶原免疫荧光染色及茜素红染色对培养的细胞进行鉴定。结果    该方法培养出的细胞具有典型的成骨细胞形态特征,ALP染色、Ⅰ型胶原免疫荧光染色及茜素红染色均表现为阳性。结论        酶交替消化法原代培养胎鼠成骨细胞,获得的成骨细胞纯度高、数量大,可作为一种相对可靠、有效的原代成骨细胞培养方法。     

种植体周围炎对颌骨成骨细胞生物学功能的影响

目的 研究种植体周围炎条件下炎性微环境对颌骨成骨细胞生物学功能的影响。方法原代分离培养和纯化种植体周围炎来源和正常组织来源的人颌骨成骨细胞,取第3代细胞进行鉴定和检测,MTT法检测成骨细胞的增殖能力,实时定量聚合酶链反应法检测成骨细胞相关基因骨钙素（OCN）、Runx2、Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）的表达,Western blot法检测成骨细胞相关蛋白OCN的表达。结果从培养第4天起,种植体周围炎来源的成骨细胞的增殖活力明显低于正常组织来源的成骨细胞（P<0.05）。培养7 d时,与正常组织来源的成骨细胞相比,种植体周围炎来源的成骨细胞相关基因OCN、Runx2、Col Ⅰ的表达均显著降低（P<0.05）,相关蛋白OCN的表达也显著降低（P<0.05）。结论 种植体周围炎的炎性微环境降低了颌骨成骨细胞的增殖及分化能力。     

低浓度雌二醇对骨质疏松大鼠颌骨成骨细胞增殖分化能力的影响

目的:研究低浓度雌二醇对骨质疏松大鼠颌骨成骨细胞增殖分化能力的影响.方法:选用3月龄健康未孕雌性SD (Sprague-Dawley)大鼠20只,随机分为卵巢切除术组(ovx组),假手术组(sham组).术后12w取ovx组双侧下颌骨,培养成骨细胞.采用低浓度雌二醇(10-10mol/L)干预成骨细胞3d后,检测碱性磷酸酶、骨钙素的表达、PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen)蛋白表达和增殖能力.结果:低浓度雌二醇明显促进了成骨细胞的增殖能力(MTT检测,雌二醇组:0.372±0.023;对照组:0.175±0.011)和PCNA蛋白表达(雌二醇组:0.495±0.023;对照组:0.176±0.012),增加了成骨细胞的碱性磷酸酶(雌二醇组:0.495±0.023;对照组:0.176±0.012)和骨钙素(雌二醇组:14.26±1.71;对照组:9.17±1.01).结论:低浓度雌二醇增加了骨质疏松大鼠颌骨成骨细胞的增殖分化能力,可用来颌骨骨质疏松症防治的探索研究.     

同一个体成骨细胞和牙周韧带成纤维细胞的原代培养

目的：探索用简单，高效的方法对同一个体的成骨细胞和牙周韧带成纤维细胞进行原代培养，以便迅速建立相关的体外研究模型，为进一步研究两种细胞的相互作用奠定基础。方法：实验用酶消化法结合组织块培养法获取大鼠牙周韧带成纤维细胞，用组织块移行生长法培养成骨细胞，并对细胞培养中取材的对象和部位，酶消化时间，污染的控制等进行探讨。结果：发现所获得的细胞符合成骨细胞和成纤细胞的形态特征和生物学特性，且生长良好。结论：用酶消化法结合组织块培养法培养大鼠牙周韧带成纤维细胞，其方法可行，结果可靠。