硼替佐米对胰腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的影响

目的:探讨硼替佐米（BTZ）对胰腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的影响。方法:体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1细胞,分别给予硼替佐米（0,2,10,50,250 nmol/L）作用24 h,采用MTT法检测PANC-1细胞活力,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Western blot检测细胞凋亡及PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果:与0 nmol/L硼替佐米相比,不同浓度硼替佐米处理后,PANC-1细胞生长抑制率均显著升高（P＜0.05）,G0/G1期细胞比例均显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,细胞中cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达增高（P＜0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白表达降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性;裸鼠成瘤实验中,不同浓度硼替佐米作用后,肿瘤瘤体质量显著降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性。结论:硼替佐米能抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖,诱导其凋亡,推测硼替佐米可能通过调节PI3K/Akt通路,激活凋亡蛋白基因表达,抑制抗凋亡蛋白基因的表达,诱导PANC-1细胞凋亡。     

红花多糖抑制PI3K/Akt信号通路诱导人胃癌细胞凋亡的研究

目的 探讨红花多糖通过抑制PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞凋亡的机制。方法 MTT比色法观察SPS对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖的抑制作用,流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡,实时荧光定量RT-PCR法和Western Blot法检测蛋白激酶B(Akt)基因及蛋白的表达情况。结果 红花多糖在一定范围内以剂量依赖方式和时间依赖方式抑制SGC-7901胃癌细胞生长。流式细胞仪检测,SGC-7901细胞经红花多糖处理24 h,其早期凋亡率、细胞坏死或晚期凋亡率显著增加,呈现明显的剂量依赖性。Real-time PCR和Western Blot检测发现,SPS处理的细胞Akt基因及蛋白表达量明显下降。结论 红花多糖对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖具有明显的抑制作用,该抑制作用具有一定的时间依赖性和剂量依赖性;红花多糖能够下调Akt mRNA表达,降低Akt和p-Akt蛋白的表达量,抑制Akt通路发挥抗肿瘤作用。     

PTEN/PI3K/Akt信号通路对K562细胞凋亡调控的研究

 目的 探讨PTEN/PI3K/Akt信号传导通路对人慢性粒细胞白血病细胞系K562的增殖、凋亡调控的研究及可能的分子作用机制。 方法 将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-PTEN-GFP）及空载体（Ad-GFP）腺病毒,转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562。通过MTT检测细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞增殖指数,同时用细胞光镜、电镜形态等方法检测细胞凋亡,荧光定量PCR（FQ-PCR）检测PTEN及凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-_xL、Bax mRNA水平变化,Western blot检测PTEN及Akt、p-Akt蛋白水平变化。 结果 与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP 转染K562细胞后,细胞增殖受抑,增殖指数降低,凋亡率增加,p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-_xL mRNA表达降低,促凋亡基因Bax mRNA表达增加。 结论 过表达PTEN可能通过抑制PI3K/Akt通路抑制K562细胞系增殖,促进细胞凋亡。     

PI3K/Akt信号通路在肿瘤化疗耐药中的作用

磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在细胞内发挥重要的作用,参与了许多生理和病理活动.目前研究发现在许多肿瘤中过度激活的PI3K/Akt信号通路与肿瘤化疗耐药的产生密切相关,体外研究显示采用PI3K/Akt信号通路抑制剂可以逆转肿瘤细胞的耐药.本文简要介绍了PI3K/Akt信号通路的基本组成结构,并重点介绍其在肿瘤化疗耐药中的作用.     

VES对MDA-MB-453细胞PI3K/Akt信号通路的影响

目的：检测维生素E琥珀酸酯（vitamin E succinate,VES）对MDA-MB-453乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路中PI3K及Akt表达的影响。方法：不同浓度VES作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-453（Her-2过表达株）24h和48h,VES的浓度分别为5、10和20μg/ml。RT-PCR法检测VES作用前后PI3K及Akt的mR-NA表达变化。结果：VES对MDA-MB-453乳腺癌细胞PI3 K/Akt信号通路中PI3 K有抑制作用（P〈0.05）,并呈时间-剂量依赖关系;而对Akt无明显的抑制作用（P〉0.05）。结论：VES可能是通过作用于PI3K/Akt信号通路而发挥其对MDA-MB-453乳腺癌细胞的抑制及凋亡作用。     

Melittin对非小细胞肺癌增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响

目的 探讨Melittin对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响。方法 分别采用0、10、20、50、100 μmol／L Melittin处理NSCLC细胞株A549、SPC-A1及人肺上皮细胞株16HBE 24、48、72和96 h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测各细胞株的增殖抑制率变化,同时采用流式细胞术Annexin-FITC／PI双染法及PI单染法检测不同浓度Melittin 处理24、48 h后的A549细胞凋亡及细胞周期情况,Western blotting检测不同浓度Melittin处理48 h后的A549细胞中PI3K／Akt信号通路相关蛋白（Akt和PTEN）及凋亡促进基因（caspase-9）的表达情况。结果 在10～100 μmol／L范围内,Melittin可呈剂量和时间依赖的方式提高A549、SPC-A1细胞的增殖抑制率,差异均有统计学意义（P＜0.05）,但对16HBE无细胞毒性作用（P＞0.05）;与0 μmol／L比较,除10 μmol／L Melittin处理24 h后的晚期凋亡率和G2／M期细胞比例无统计学差异（P＞0.05）,10～100 μmol／L的早、晚期凋亡率、G0／G1期细胞比例及PTEN和caspase-9蛋白水平均升高,S期、G2／M期细胞比例及Akt水平均降低,以上差异有统计学意义（P＜0.05）,且10～100 μmol／L范围内各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 Melittin可对NSCLC细胞有毒性作用,但对正常肺上皮细胞无影响,且可诱导A549细胞凋亡及细胞周期阻滞并抑制PI3K／Akt信号通路的激活。     

芹菜素通过 PI3K/Akt 信号通路诱导 Hela 细胞凋亡

目的：初探芹菜素（Apigenin）对人宫颈癌细胞 Hela 的抑制机制。方法：MTT 法检测 Apigenin 对 Hela细胞的增殖抑制作用,实时无标记细胞分析技术测量 Apigenin 对 Hela 细胞生长曲线的影响。Western blot 检测 Apigenin 对 Hela 细胞中 PI3K/ Akt 信号通路的影响。结果：与阴性对照组相比,Apigenin 能显著抑制 Hela细胞的增殖（P <0.01）,当药物浓度为20μmol/ L 时抑制率达到（80.5±5.3）%,IC50值为（6.8±0.8）μmol/ L。细胞生长曲线反映,Apigenin 减缓了 Hela 细胞的增殖,对数期细胞经20μmol/ L Apigenin 处理后,细胞数量迅速下降。Western blot 结果显示,Apigenin 能显著抵抗 IGF -1引起的 Akt 激活但并不能降低 PI3K 的磷酸化水平。同时 Apigenin 还能降低 Bcl -2/ Bax 比例,提高 Caspase -3活性,启动细胞线粒体凋亡。结论：Apigenin可以通过 PI3K/ Akt 信号通路促进 Hela 细胞的凋亡。     

L-精氨酸抑制人肺腺癌A549细胞增殖及对PI3K/Akt信号通路的影响北大核心CSCD

目的探讨L-精氨酸(L-Arginine,L-Arg)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法不同浓度L-Arg(16、32、64、96、128 mmol/L)、不同时间(24、36、48 h)条件下处理A549细胞,MTT检测细胞增殖,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期进程,Western blot检测PI3K/Akt(phosphatidylinositol-3-kinases/Akt)信号通路活化状态。结果(1)L-Arg能显著抑制A549细胞增殖,其效果与浓度及时间有关(P<0.05);(2)显微镜结果显示,与对照组比较,随着L-Arg浓度的增高,细胞数目降低,细胞形态变得不规则;(3)高浓度L-Arg在48 h促进细胞凋亡作用最强,阻滞细胞周期在G_0/G_1期最明显(P<0.05);(4)L-Arg浓度越高,p-Akt S473磷酸化越低(P<0.05),凋亡蛋白Cleaved Caspase-3和Bad表达越强(P<0.05)。结论 L-Arg可抑制A549细胞增殖,诱导凋亡,其机制与PI3K/Akt信号通路激活受限、上调Cleaved Caspase-3、Bad蛋白表达有关。     

大鼠乳腺癌骨转移模型中PI3K/Akt信号通路参与诱导疼痛

目的 探讨骨癌痛大鼠模型中PI3K/Akt信号通路参与痛觉过敏的产生和维持及其脊髓机制.方法 Wistar大鼠,体重在180~200 g,将大鼠随机分为3组:癌痛模型组(A组)、假手术组(B组)、正常组(C组),A组大鼠左侧胫骨髓腔内单次注入Walker256乳腺癌细胞建立大鼠胫骨癌痛模型,B组大鼠左侧胫骨注入等量生理盐水,C组做不给药处理.A组造模后第7天,评估筛选成模的大鼠,随机分为3组:癌痛组(A1组)、癌痛+NS组(A2组)、癌痛+抑制剂组(A3组).正常对照组(C组)随机分为2组:空白对照组(C1组)、空白+抑制剂组(C2).A3组和C2组分别在第13、14、21天鞘内注射Akt抑制剂GSK690693,A2组在第13、14、21天鞘内注射等量生理盐水,A1组、B组、C1组均不给药处理.在第0、7、14、21天,分别检测大鼠机械性缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩腿潜伏期(thermal withdrawal latency,MWT).第21天行为学测试后处死大鼠,取大鼠脊髓L4~L6区段,用免疫组化及Western blot检测大鼠脊髓的磷酸化Akt(p-Akt)水平.结果 实验观察到大鼠的MWT和TWL均显著降低,第7天及14天A1组、A2组、A3组及B组分别与C1组比较,P<0.05,第21天A3组与A1组、A2组分别比较,P<0.05.与C1组比较,骨癌痛模型组大鼠脊髓背角p-Akt表达增强,鞘内注射Akt抑制剂可降低脊髓背角p-Akt的表达.结论 PI3K/Akt信号通路参与了骨癌痛的中枢敏化,在大鼠骨癌痛发生发展过程中起着重要作用.     

LPA经PI3K/Akt信号转导通路抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡

 目的 研究PI3K/AKT信号转导通路对LPA保护顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡作用的影响。 方法 MTT法检测LPA和LY294002对DDP作用后的SKOV3细胞增殖活性的影响;Hoechst33258荧光染色 观察凋亡细胞;FCM分析细胞凋 亡率;凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA“梯状”条带;Western blot检测LPA、LY294002对磷酸 化Akt蛋白表达的影响。 结果 LPA+LY294002+DDP组对SKOV3细胞增殖的抑制作用、凋亡小体的产生及细胞凋亡率高于 LPA+DDP组(P<0.05),而与 LY294002+DDP组差异无统计学意义, DNA片段凝胶电泳示LPA作用后不产生明显的凋亡片段, LPA和LY294002同时作用可出现DNA断裂梯形条带。Western blot结果示LPA作用后磷酸化Akt 蛋白表达升高,而LY294002作用后,磷酸化Akt蛋白表达明显下降。 结论 LPA通过激活PI3K/Akt信号转导通路抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡。     

粉防己碱诱导人视网膜母细胞瘤细胞凋亡及其机制研究

背景与目的：粉防己碱(tetrandrine,Tet)是一种天然化合物,其抗视网膜母细胞瘤作用尚不清楚。该研究拟检测Tet对人视网膜母细胞瘤细胞的抗肿瘤作用,并进一步阐明其作用机制。方法：采用CCK-8法检测Tet对视网膜母细胞瘤细胞活力的抑制作用;应用Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况;在2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’, 7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)染色后,采用流式细胞术检测细胞内反应性活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;采用蛋白［质］印迹法(Western blot)检测细胞Akt、p-Akt蛋白表达量。结果：Tet显著抑制视网膜母细胞瘤细胞活力,Tet浓度为4、8、10和20 μmol/L处理细胞24 h时,WERI-Rb-1细胞抑制率分别为5.7%、25.0%、55.1%和84.9%,Y79细胞抑制率分别为2.4%、2.9%、23.8%和54.2% (P<0.01);10 μmol/L Tet处理细胞12、24和48 h时,WERI-Rb-1细胞抑制率分别为6.0%、45.5%和74.7%,Y79细胞抑制率分别为2.9%、19.4%和43.3%(P<0.01)。Tet诱导细胞凋亡,以10 μmol/L Tet处理细胞24和48 h时,WERI-Rb-1细胞凋亡率分别为(23.70±1.75)%和(34.83±3.15)%,Y79细胞凋亡率分别为(9.62±2.69)%和(14.97±1.50)%(P<0.01),凋亡抑制剂Z-VAD-FMK能够显著抑制Tet对视网膜母细胞瘤细胞的凋亡诱导作用(P<0.05)。10 μmol/L Tet作用细胞6及12 h后,细胞的ROS产生量较对照组明显上升(P<0.01),N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)能够抑制Tet诱导产生的ROS(P<0.01),NAC抑制ROS后,细胞的凋亡率较单独Tet作用组明显下降(P<0.01)。Tet能够抑制视网膜母细胞瘤细胞PI3K/Akt信号通路。结论：Tet诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡,该作用机制与细胞内ROS升高、PI3K/Akt信号通路抑制有关。     

PI3K/Akt途径在朊蛋白介导胃癌耐药中的作用研究

目的:探讨PI3K/Akt途径在朊蛋白(PrPc)介导胃癌耐药中的作用.方法:脂质体基因转染法建立高表达PrPc的胃癌细胞亚系.Western印迹检测转染细胞中Akt蛋白的表达.噻唑蓝(MTT) 比色法测定单独或联用PI3K抑制剂LY294002时转染细胞对化疗药物的敏感性.流式细胞仪检测单独或联用LY294002时转染细胞内阿霉素蓄积和潴留.结果:将PrPc正义载体pcDNA-PrP转入SGC7901,成功建立PrPc高表达胃癌细胞亚系并命名为PS;空载体转染细胞命名为BS.Western-Blot显示磷酸化Akt在PS中的表达较BS及SGC7901增高,而三者的总Akt则无差别.未经LY294002处理时,在阿霉素或长春新碱的作用下,PS的存活率分别为91.4%±3.4%和89.4%±3.8%,较BS(79.2%±4.3%和75.9%±2.1%)明显增高(均 ),PS细胞内阿霉素蓄积量和潴留量分别为4.4±0.3和4.2±0.4,明显低于BS(8.2±0.5和8.0±0.3)(均 );当联合LY294002处理后,PS在两种药物作用下的存活率均随着LY294002浓度的增加逐渐降低,并均在LY294002为30μmol/L时接近BS(均 ),PS细胞内阿霉素蓄积量和潴留量逐渐增高,并均在LY294002为30μmol/L时接近BS(均 ).结论:PrPc介导的胃癌耐药与PI3K/ Akt途径活性密切相关,抑制PI3K/ Akt途径活性可逆转PrPc介导的胃癌耐药.     

抑制PI3K/Akt信号转导通路提高化疗效果的实验研究

目的:探讨通过抑制PI3K/Akt信号转导通路提高抗癌药物对恶性肿瘤细胞的杀伤作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇单独或联合PI3K抑制剂LY294002对人宫颈癌HeLa细胞和人乳腺癌MCF7细胞的抑制率;采用流式细胞技术检测药物单独或联合作用对HeLa细胞和MCF7细胞凋亡的影响。结果:①联合LY294002能够显著提高塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇对HeLa细胞和MCF7细胞抑制率(P<0.05)。②LY294002与塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇的协同治疗指数均小于1,具有协同治疗作用。③联合LY294002能够增加HeLa细胞和MCF7细胞的凋亡水平。结论:抑制PI3K/Akt信号转导通路能够显著提高塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇对HeLa细胞和MCF7细胞的杀伤作用。     

胃肠道间质瘤PI3K-Akt信号转导通路介导的细胞凋亡相关因子的检测及其意义

目的:研究P13K/Akt信号转导通路介导的细胞凋亡相关因子在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及意义.方法:RT-PCR检测P13K、NF-κB、XIAP、bcl-2与survivin在:124例GIST及癌旁正常组织中mRNA水平.结果:在GIST中,PI3K、NF-κB mRNA表达与NIH分级、肿瘤侵袭转移、黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关.XIAP mRNA随NIH分级表达上调;XIAP表达与GIST组织分化程度呈负相关,即分化程度越低,XIAP阳性表达率愈高,伴有肿瘤侵袭转移的GIST病例XIAP表达水平较高,同时XIAP的表达与黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关.bcl-2 mRNA水平表达上调,与NIH分级、黏膜受侵有关,而与年龄、性别、组织学类型、转移复发及周围组织浸润无关.survivin mRNA在GIST中的表达与NIH分级、肿瘤侵袭转移、黏膜受侵等因素有关,而与年龄、性别以及组织学类型无关.由于NF-κB的调控作用,各指标之间mRNA的水平变化旱正相关.结论:GIST中PI3K/Akt信号转导通路的活化可以进一步激活NF-κB mRNA,从而进入细胞核内调控凋亡相天因子XIAP、bcl-2以及survivin mRNA水平的表达.     

PI3K/Akt/mTOR信号传导通路与恶性肿瘤浸润和转移的研究进展

PI3K/Akt/mTOR信号通路作为细胞内重要信号传导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,在细胞内发挥着抑制凋亡、促进增殖的关键作用,它与人类多种肿瘤的发生发展密切相关.本文综述了PI3K/Akt/mTOR信号通路的组成与功能、调节以及其抗肿瘤细胞凋亡作用机理等方面的研究进展,并就其抗细胞凋亡作用在肿瘤治疗中的应用作了评述,期待为以PI3K/Akt/mTOR信号通路中关键分子为靶点的肿瘤治疗研究提供参考.