分泌型白细胞蛋白酶抑制剂对急性肺损伤新生大鼠肺组织中TNF-α表达的影响

目的研究分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)在新生大鼠急性肺损伤模型中的抗炎作用。方法利用脂多糖(LPS)气管内滴入制备新生大鼠急性肺损伤的模型;设立SLPI治疗组、LPS组、生理盐水对照组和正常对照组。SLPI治疗组在气管内滴入LPS前预先滴入400μgSLPI。4h后取肺组织匀浆,用ELISA法检测TNF-α的含量。结果SLPI组的肺组织中TNF-α含量(2798·6±618·5)ng/ml,显著低于LPS组(4579·4±357·4)ng/ml,P<0·05。结论在新生大鼠急性肺损伤模型中,SLPI能抑制LPS诱导的TNF-α表达。     

内毒素致新生大鼠急性肺损伤IL-18的变化

目的 探讨内毒素致新生大鼠急性肺损伤与IL-18水平的关系.方法 内毒素5 mg/kg腹腔注射7日龄SD新生大鼠致急性肺损伤模型,同时设腹腔内注射生理盐水对照组,每组12只.注射后1、4、8 h采集血,1、4 h采集肺组织,检测血浆,肺组织匀浆IL-18水平.结果 内毒素注射后新生大鼠1 h,血浆IL-18水平就显著上升(6.38±1.62)pg/ml,4 h达到高峰(34.28±17.89)pg/ml,8 h后明显回落(14.61±2.16)pg/ml,仍高于生理盐水对照组(1.63±1.18)pg/ml;4 h组肺组织匀浆IL-18水平(508.96±105.38)pg/ml显著高于1 h组(346.08±21.23)pg/ml(P＜0.01),且肺组织匀浆IL-18水平高于同时点血浆IL-18水平(P＜0.01).结论 IL-18是一种早期的致炎因子,在急性肺损伤的发生中起重要的作用,可作为急性肺损伤的诊治指标之一.     

内毒素致新生大鼠急性肺损伤IL-18的变化

目的探讨内毒素致新生大鼠急性肺损伤与IL-18水平的关系。方法内毒素5mg/kg腹腔注射7日龄SD新生大鼠致急性肺损伤模型,同时设腹腔内注射生理盐水对照组,每组12只。注射后1、4、8h采集血,1、4h采集肺组织,检测血浆,肺组织匀浆IL-18水平。结果内毒素注射后新生大鼠1h,血浆IL18水平就显著上升(6.38±1.62)pg/ml,4h达到高峰(34.28±17.89)pg/ml,8h后明显回落(14.61±2.16)pg/ml,仍高于生理盐水对照组(1.63±1.18)pg/ml;4h组肺组织匀浆IL-18水平(508.96±105.38)pg/ml显著高于1h组(346.08±21.23)pg/ml(P<0.01),且肺组织匀浆IL-18水平高于同时点血浆IL18水平(P<0.01)。结论IL18是一种早期的致炎因子,在急性肺损伤的发生中起重要的作用,可作为急性肺损伤的诊治指标之一。     

氢化可的松对内毒素致急性肺损伤大鼠多形核白细胞氧自由基释放的影响

目的　　观察氢化可的松 (6mg/kg)对内毒素致急性肺损伤 (ALI)大鼠多形核白细胞(PMN)释放氧自由基 (OFR)及肺部病理改变的影响 ,探讨激素在ALI中发挥作用的可能机制。方法复制大鼠ALI模型 ,随机分为空白组、内毒素组 (LPS组 )、氢化可的松组 (HC组 ) ,空白组于注药后 6h、LPS组和HC组分别于注药后 2、4、6h抽血检测OFR释放 ,同时比较各组间肺组织病理改变。结果　(1)LPS组大鼠肺病理符合ALI表现。 (2 )OFR释放 3组比较有差异显著意义 (P <0 0 1) ,LPS组较空白组明显增强 (P <0 0 5 ) ,并在观察时间内 (2～ 6h)不断升高。HC组在各时点较LPS组均明显降低(P <0 0 5 ) ,在 4h抑制作用最明显 ,达 98 2 %。 (3)肺病理半定量评分 ,3组间差异有显著意义 (P <0 0 1)。与空白组相比 ,LPS组与HC组评分均显著升高 (P <0 0 5 )。而与LPS组相比 ,HC组病理评分显著降低 (P <0 0 5 )。结论　在LPS诱导ALI大鼠模型中 ,OFR大量释放在ALI发病中起了重要作用 ,6mg/kgHC可使肺损伤改善 ,同时对OFR释放可产生明显、持续的抑制 ,提示HC对ALI起保护作用 ,机制可能是通过抑制PMN释放OFR而实现     

肾上腺素对内毒素血症大鼠细胞因子的影响

目的观察肾上腺素(EPI)对内毒素(LPS)血症大鼠体内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-10(IL-10)的影响。了解其在大鼠体内是否有抗炎作用。方法2006-11—2007-09,于广州医学院实验动物中心将50只SD大鼠随机分为5组(每组10只):正常对照组大鼠静脉输注生理盐水2·4mL·kg-1·h-1;LPS组大鼠静脉注射内毒素6mg·kg-1后静脉输注生理盐水2·4mL·kg-1·h-1;低、中和高剂量EPI组大鼠静脉注射内毒素6mg·kg-1后,分别静脉输注肾上腺素0·12μg·kg-1·min-1、0·3μg·kg-1·min-1和0·6μg·kg-1·min-1。在当即、第2小时、第6小时三个时点取血,检测血清TNF-α、IL-1β和IL-10水平。结果与对照组比较,LPS组大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-10水平均升高。与LPS组比较,高剂量EPI组血清TNF-α水平明显下降(P<0·05),血清IL-10水平明显升高(P<0·05),而血清IL-1β水平在两组间差异无显著性(P>0·05)。TNF-α、IL-1β和IL-10水平在中低剂量EPI组与LPS组间差异无显著性(P>0·05)。结论肾上腺素对内毒素血症大鼠具有抗炎作用,提示肾上腺素对于调控脓毒症时过度炎症反应具有潜在的临床应用价值。     

肿瘤坏死因子-α和γ-干扰素在胎粪吸入性肺损伤新生大鼠中的表达及其意义

目的探讨TNF-α和IFN-γ在新生大鼠胎粪吸入性肺损伤中的表达及其意义。方法 7日龄健康大鼠随机分为胎粪吸入性肺损伤模型组(M组)和9 g.L-1盐水对照组(C组)。对比分析2组肺组织病理情况,免疫组织化学法检测2组肺组织TNF-α和IFN-γ的表达,ELISA检测2组血和支气管肺泡灌洗液中TNF-α和IFN-γ水平。结果 1.M组双肺有炎性损伤,C组双肺无炎性损伤。2.M组肺湿/干质量比值明显高于C组(P<0.05)。3.M组肺组织TNF-α与IFN-γ表达强于C组(Pa<0.05),M组肺组织TNF-α与IFN-γ的表达呈正相关(r=3.741,P=0.004),C组肺组织TNF-α及IFN-γ的表达无相关性(r=2.316,P=0.014)。4.M组血TNF-α及IFN-γ水平高于C组(Pa<0.05),M组支气管肺泡灌洗液TNF-α及IFN-γ水平高于C组(P=0.001,0.001)。结论TNF-α和IFN-γ均参与胎粪吸入性肺炎的发病过程。     

外源性肺表面活性物质对急性肺损伤新生儿血清血小板活化因子、肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 探讨急性肺损伤(ALI)新生儿血清中血小板活化因子(PAF)、TNF.α的表达以及肺表面活性物质(PS)对PAF、TNF.α表达的影响.方法 选择ALI患儿20例作为研究对象,分别于PS治疗前及治疗24 h、72 h,取外周静脉血2 mL,采用酶联免疫吸附试验定量测定血清PAF、TNF.α水平,同时进行血气分析,并对不同时间段血清PAF、TNF.α水平及动脉血氧分压[pa(O2)]/吸氧体积分数(FiO2)进行对比分析.结果 经PS治疗24 h,PAF、TNF.α水平与治疗前比较明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),pa(O2)/FiO2明显升高,与治疗前对比,差异有统计学意义(P<0.01);治疗72 h,PAF、TNF.α、pa(O2)/FiO2与治疗前对比,差异均有统计学意义(Pa<0.01).结论 PS能够减少ALI新生儿PAF、TNF.α的表达,改善氧合和临床表现.     

重组蛋白酶抑制蛋白拮抗中性粒细胞释放炎性介质的作用

目的克隆分泌型白细胞蛋白酶抑制(SLPI)蛋白基因并表达人SLPI重组蛋白,探讨其拮抗中性粒细胞释放炎性介质的作用。方法抽提人外周血中性粒细胞mRNA,克隆SLPI基因,构建质粒,转染后抽提纯化蛋白,实验分组后,分别进行不同剂量的SLPI和内毒素(LPS)共处理中性粒细胞。A组:正常对照组(不予LPS和重组SLPI蛋白处理);B组:LPS处理组(加终质量浓度0.001 g·L-1的LPS);C组:低剂量重组SLPI蛋白干预组(加重组SLPI蛋白0.010 g·L-1和终质量浓度0.001 g·L-1的LPS);D组:中剂量重组SLPI蛋白干预组(加重组SLPI蛋白0.050 g·L-1和终质量浓度0.001 g·L-1的LPS);E组:高剂量重组SLPI蛋白干预组(加重组SLPI蛋白0.100 g·L-1和终质量浓度0.001 g·L-1的LPS)。然后进行中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性实验、炎性介质释放实验以及转录因子STAT3活性实验,分别测定NE活性、炎性介质IL-6/IL-8表达量及转录因子STAT3的DNA结合活性。结果成功构建SLPI基因全长cDNA的真核表达载体,发现重组SLPI蛋白呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的NE活性[(17.78±0.54)nmol·L-1vs(5.46±0.12)nmol·L-1,P<0.05]。重组SLPI蛋白也显著抑制LPS诱导的炎性介质IL-6[(179.51±6.61)ng·L-1vs(63.13±4.55)ng·L-1,P<0.05]和IL-8[(192.98±7.65)ng·L-1 vs(103.42±4.76)ng·L-1,P<0.05]的释放及转录因子STAT3的DNA结合力升高。结论 SLPI可有效抑制NE活性,减轻炎性损伤。     

内毒素休克大鼠血清TNF-α及心脏TNF-αⅠ型受体表达的变化及意义

目的 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在内毒素休克时心脏损伤中的作用。方法 通过大鼠股静脉注射不同剂量内毒素建立内毒素休克动物模型，用ELISA方法检测不同时间点血清TNF-α水平，用免疫组化方法检测心脏TNF-αⅠ型受体的表达。结果注射内毒素后血清TNF-α水平开始上升，于90min达高峰，然后逐渐下降，于3．5h接近正常水平．而且小剂量组TNF-α上升幅度高于大剂量组。注射内毒素后TNF-αⅠ型受体表达明显增强，内毒素的剂量越大，TNF-αⅠ型受体表达越强。结论 内毒素休克时的心脏损伤与异常升高的TNF-α有关，TNF-α的负相肌力作用是通过诱导TNF-αⅠ型受体表达完成的，TNF-αⅠ型受体的异常表达为TNF-α发挥作用提供了信号转导基础。     

幼年鼠急性肺损伤骨髓间充质干细胞干预机制的研究

目的探讨幼年鼠急性肺损伤（acutelunginjury,ALI）肺组织核转录因子（nuclearfactor,NF）-κB及肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor,TNF）-α的变化,观察ALI动物模型应用骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSCs）干预后肺组织损伤的修复程度。方法30只雄性C57幼年鼠采用随机数字表法随机分为3组：模型组、对照组、模型＋MSCs组（实验组）,每组再分为12h、48h2个亚组（每组各5只）。模型组腹腔注射脂多糖（1ipopolysaccharide,LPS）（10mg／kg）建立幼年鼠All模型,对照组同期注入等容积生理盐水,实验组在腹腔注射LPS同时经尾静脉注射MSCs（1×10^6／m1）0．1ml。观察肺组织病理变化并应用免疫组织化学法检测NF-κB及TNF-α蛋白表达的变化。结果与对照组相比,模型组12h、48h时,幼年鼠肺组织NF-κB、TNF-α蛋白表达显著增高（P〈0．05）,而实验组12h、48h时幼年鼠肺组织NF-κB、TNF-α蛋白表达较模型组显著降低[NF-κB：12h：（0．181±0．008）0D值VS（0．203±0．008）OD值,48h：（0．197±0．002）0D值VS（0．210±0．005）0D值;TNF-α：12h：（0．185±0．004）OD值VS（0．201±0．011）OD值,48h：（0．185±0．002）OD值VS（0．215±0．009）OD值]（P〈0．05）。病理学观察显示：模型组鼠肺组织呈现典型的炎症病理变化,包括肺泡充血、出血、水肿,肺泡腔和血管壁中性粒细胞浸润,肺泡壁增厚等肺损伤性病变;实验组肺组织损伤程度明显减轻。结论幼年鼠LPS致All模型组肺组织NF-κB及TNF-α蛋白表达增高,LPS致ALI的发病机制可能与NF-κB及TNF-α蛋白表达升高有关。应用MSCs干预后,实验组12h、48h时幼年鼠肺组织NF-κB、TNF-α蛋白表达较模型组显著降低,实验组肺组织损伤减轻,提示MSCs能够减轻ALI肺组织的炎症反应并参与了肺组织损伤的修复。     

血小板源性生长因子对新生大鼠高氧肺损伤的影响

目的　探讨血小板源性生长因子 (PDGF)在新生大鼠高氧肺损伤中时空作用机制。方法　应用免疫组织化学法定位PDGF表达 ,反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测各时间点 (生后 4、7、10、14d)PDGFmRNA水平。结果　随日龄增加 ,PDGF A、 B含量发生不同的变化。高氧暴露下PDGF BmRNA含量及其表达均显著高于空气组 (P <0 .0 5 ,<0 .0 1)。而PDGF AmRNA水平及其表达却显著低于空气组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论　高氧降低PDGF A水平 ,增加PDGF B含量。PDGF A、 B共同参与高氧暴露下肺组织损伤过程 ,是肺发育阻滞的重要因素。     

重组人促红细胞生成素对新生鼠慢性高氧肺损伤防治的作用

目的探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对新生鼠慢性高氧肺损伤防治的机制。方法新生Waster大鼠生后随机分组Ⅰ空气对照组;Ⅱ空气 rhEPO组;Ⅲ高体积分数氧对照组;Ⅳ高体积分数氧 rhEPO组。Ⅲ、Ⅳ组暴露高体积分数氧中(FiO285%),Ⅱ、Ⅳ组于生后d0和d2予rhEPO注射液1200U/kg,背部皮下注射。在实验d14观察生存率、体质量、肺质量、肺组织病理改变、放射状肺泡计数(RAC),免疫组织化学法检测肺组织血管内皮标志-CD31及血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果Ⅳ组病理改变减轻,生存率提高,体质量、肺质量、RAC和肺微血管数目高于Ⅲ组[(25.88±2.59)vs(18.8±3.93)P<0.001;(0.37±0.07)vs(0.25±0.05)P<0.001;(7.37±0.93)vs(5.03±1.2)P<0.001;(4.1±1.3)vs(2.1±1.3)P<0.001],肺组织VEGF表达增加(P<0.001)。结论rhEPO对慢性高氧肺损伤有保护作用,机制可能与其保护并促进肺微血管形成并增加VEGF的表达有关。     

三磷酸腺苷合成酶6、8与早产新生大鼠高氧肺损伤的相关性

目的 探讨线粒体呼吸链三磷酸腺苷合成酶6、8（ATPase6、8）与早产新生大鼠高氧肺损伤的关系。方法 早产新生SD大鼠生后1d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于常压氧舱中，氧体积分数〉850mL／L；空气组置于同一室常压空气中。二组分别于实验后1、4、7、10和14d提取其肺组织RNA．采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定ATPase6、8mRNA表达。结果 1．与空气组比较，高氧暴露1dATPase6mRNA表达显著增强（P〈0．05）；4、7、10d时无显著性差异（Pa〉0．05）；14d又显著增强（P〈0.01）。2．高氧组与空气组比较，ATPase8mRNA表达于1、4、10d时无显著改变（Pa〉0．05）；7、14d时明显增强（Pa〈0．05）。结论 高体积分数氧暴露诱导线粒体呼吸链中ATPase6、8异常表达，这种变化可能参与早产新生大鼠高氧肺损伤的发病过程。     

阿奇霉素对新生大鼠高体积分数氧肺损伤的影响

目的探讨阿奇霉素对高体积分数氧(高氧)诱发新生大鼠肺损伤的影响。方法选用出生2d的新生Wistar大鼠90只,雌雄不拘,随机分为3组:空气对照组、高氧模型组、阿奇霉素治疗组(阿奇霉素组),每组各30只。空气对照组新生鼠暴露在室内空气中;高氧模型组和阿奇霉素组新生鼠暴露在900mL·L-1氧气中,共14d;阿奇霉素组新生大鼠于出生第2天起,每天分别腹腔内注射阿奇霉素200mg·kg-1;空气对照组和高氧模型组新生鼠腹腔内注射9g·L-1盐水。第3、7、14天每组各处死10只动物,取肺组织,光镜下观察其肺组织的病理变化;采用免疫组织化学染色检测其肺组织干扰素-γ(IFN-γ)、结缔组织生长因子(CTGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果IFN-γ在空气对照组无阳性表达;高氧模型组第7天达到高峰,第14天明显下降,但仍高于空气对照组;阿奇霉素组IFN-γ表达强度在各时间段均低于高氧模型组(Pa<0.05)。CTGF在空气对照组无阳性表达;高氧模型组随吸入高氧时间延长,阳性表达逐渐增强;阿奇霉素组CTGF表达强度在各时间段均低于高氧模型组(Pa<0.05)。MMP-9在空气对照组仅有散在的阳性细胞着色;...     

银杏叶提取物对脂多糖诱导新生大鼠急性肺出血的保护作用

目的探讨银杏叶提取物(GBE)对脂多糖(LPS)诱导新生大鼠急性肺出血的保护作用。方法1.用LPS(5 mg/ kg)腹腔注射方法制备新生大鼠肺出血动物模型。2.随机分成GBE预处理(4、8、16 mg/kg)组和LPS(5 mg/kg)组。结果注射LPS后4 h时形成肺大面积出血。肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量在4 h表达明显。肺组织核转录因子(NF-kB)免疫组织化学提示4 h表达较明显。而预先给予GBE可显著缓解上述变化。结论GBE在防治肺急性炎症性疾病中有一定应用前景。     

高压氧治疗对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型的保护作用

目的观察高压氧治疗对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用。方法用2.0 ATA的高压氧对新生大鼠HIBD模型进行治疗,1h/(次·d),治疗7 d后处死。观察各组大鼠死亡率、体质量增长率、左/右脑重量比值、脑组织肉眼病理形态学改变。TUMEL检测大脑皮质和海马神经细胞凋亡情况。结果与HIBD组比较,高压氧治疗可使治疗组大鼠的体质量增长率和左/右脑重量比值增加,大鼠死亡率和脑组织病变减轻、神经细胞凋亡减少。结论高压氧治疗对新生大鼠HIBD 模型具有保护作用。     

重组人促红细胞生成素对新生大鼠高体积分数氧肺损伤的防治效果

目的 探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对新生大鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤的防治作用.方法 新生SD大鼠96只随机分为:空气加9 g/L盐水组(Ⅰ组),空气加rhEPO组(Ⅱ组),高氧加9 g/L盐水组(Ⅲ组),高氧加rhEPO组(Ⅳ组).Ⅲ、Ⅳ组新生大鼠暴露于950 mL/L氧气中,Ⅱ、Ⅳ组新生大鼠于暴露第2、4、6天予rhEPO 800 U/kg腹部皮下注射.在暴露第3、7、14天,各组分别取8只处死,HE染色观察其肺组织结构变化,双抗体夹心法测定其肺组织IL-8.Western blot检测其核因子-κB(NF-κB)p65蛋白水平.结果 与Ⅰ组比较,随高氧暴露时间延长,Ⅲ组第3天出现肺泡炎性反应渗出,第7天更为明显,第14天肺泡数量减少,大小不均,肺大泡形成;Ⅳ组病理改变减轻,炎性反应细胞浸润减少.Ⅳ组第7、14天肺组织核因子-κB(NF-κB)p65水平较Ⅲ组显著减少[(0.28±0.07)%vs(0.35±0.07)%,(0.27±0.05)%vs(0.33±0.06)% Pa<0.05],其肺组织匀浆中IL-8水平较Ⅲ组有所减少[(112.38±32.08)ng/L vs (158.0±37.33)ng/L,(98.78±29.66)ns/L vs (170.88±42.26)ng/L Pa<0.05].结论 rhEPO对新生大鼠高氧肺损伤有保护作用,机制可能与抑制NF-κB活化、减少IL-8分泌有关.     

角质细胞生长因子对吸入高体积分数氧新生大鼠肺组织的影响

目的 研究角质细胞生长因子(KGF)对高体积分数氧(高氧)暴露下新生大鼠肺组织结构的影响.方法 将新生的108只SD大鼠随机分为空气组、高氧组和KGF干预组,每组36只.每组又分为3d、7d、14d3个亚组.高氧组、KGF干预组大鼠持续暴露于氧体积分数＞950mL·L-1氧箱中,KGF干预组于吸氧同时背部皮下注射重组人角质细胞生长因子(rhKGF)1mg·d-1,连用3d后改为0.5mg·d-1直至实验结束.空气组和高氧组给予等量9g·L-1盐水.空气组大鼠呼吸空气.3d、7d、14d亚组在相应时间点取肺组织,通过肉眼及光镜下观察其肺组织病理学变化,并作肺泡辐射状计数(RAC).结果 空气组7d时出现肺泡化,14d时肺泡化成熟.高氧组时小血管扩张充血,肺间质细胞增多,7d时肺间隔变厚,肺泡腔大小不一,肺泡数减少,14d时肺泡数明显减少,肺泡大小不等,出现明显纤维化.KGF干预组7d时可见肺泡结构较完整,14d时少数肺泡融合,间质细胞增生不严重.高氧组3d时RAC与空气组相比差异无统计学意义(P＞0.05),7d、14d时RAC与空气组相比差异均有统计学意义(Pa＞0.01).KGF干预组各时间点RAC与空气组比较差异均无统计学意义(Pa＞0.05).结论 长时间暴露于高氧环境,可导致新生大鼠肺组织发育障碍,但KGF能促进肺泡的发育,减轻纤维化,可有效减轻高氧吸入对新生大鼠肺组织的损伤.