细胞信号转导因子——Rab5a的表达与宫颈癌转移相关性的研究

目的：研究Rab5a基因在正常组织和癌组织的表达及Rab5a基因的表达与宫颈癌淋巴结转移因素的相关性，初步探讨细胞信号转导因子Rab5a与肿瘤转移的关系。方法：选用近几年诊断明确的宫颈癌标本46例；用免疫组化技术检测Rab5a表达：结果：Rab5a的表达在正常组织中不表达，而在癌组织中有不同程度的表达（P〈0．01）。宫颈癌中Rab5a的表达程度与淋巴结转移有明显相关性（P〈0．05）。结论：Rab5a是一个可能与宫颈癌转移相关的基因。     

宫颈癌RAS相关区域家族1A基因启动子甲基化检测及临床意义研究

目的 检测宫颈癌RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子甲基化状态并探讨其在宫颈癌分子诊断与预后评估中的临床意义.方法 应用甲基化特异性PCR和逆转录PCR分别检测我院2008年1月-2009年1月确诊的65例宫颈癌组织和癌旁正常组织RASSF1A基因启动子甲基化状态和mRNA表达,比较两者间的差异与临床病理因素之间的关系.结果 65例宫颈癌组织中有48例检测出甲基化条带(甲基化率73.8%),mRNA表达呈抑制状态,癌旁组织中有4例检测出甲基化条带(甲基化率6.2%),mRNA表达正常;不同年龄的患者RASSF1A基因启动子甲基化率间差异无统计学意义(P＞0.05);肿瘤直径越大,RASSF1A基因启动子甲基化率越高;宫颈鳞状细胞癌、腺癌和腺鳞癌RASSF1A基因启动子甲基化率分别为82.0%、40.0%和60.0%,三者间差异有统计学意义(P＜0.05);宫颈癌RASSF1A基因启动子甲基化率随着临床分期和淋巴结转移增加而增加,甲基化率在不同国际妇产科联盟(FIGO)分期及有无淋巴结转移中的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 RASSF1A基因启动子甲基化与宫颈癌的发病机制紧密相关,其在宫颈鳞状细胞癌中甲基化发生率明显高于腺癌,可作为宫颈癌的分子诊断和预后评估的生物标志物.     

同源盒基因A5在宫颈癌中的表达与预后的关系研究

目的 探究分析同源盒基因A5(homeobox gene A5,HOXA5)在宫颈癌组织中的表达水平与预后的关系。方法 收集2018-01/2021-12月于作者医院行宫颈癌根治术患者的临床资料,所有患者均行病理活检明确诊断为宫颈癌。免疫组织化学法检测宫颈癌患者肿瘤组织中HOXA5蛋白表达,分析其表达水平与肿瘤组织学分类、肿瘤直径、淋巴结转移、血管侵犯、临床分期等临床病理特点及预后的关系。结果 HOXA5在宫颈癌组织中呈低表达,且宫颈癌组织及癌旁组织中HOXA5表达水平比较具有统计学差异(χ²=24.320,P<0.001);宫颈癌组织中HOXA5蛋白水平与患者淋巴结转移、血管侵犯、国际妇产科联盟(international federation of gynecology and obstetrics, FIGO)分期等临床病理特点相关(P均<0.05);宫颈癌组织中HOXA5蛋白水平、淋巴结转移、血管侵犯、FIGO分期是影响患者预后不佳的影响因素(P<0.05)。结论 HOXA5基因在宫颈癌组织中低表达,HOXA5表达水平、患者淋巴结转移、血...     

S100A6在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的研究S100A6基因在不同宫颈病变组织中的表达情况,分析其与宫颈癌淋巴结转移的关系。方法应用荧光定量PCR技术定量分析宫颈良性病变13例、宫颈癌未合并淋巴结转移和宫颈癌合并淋巴结转移各25例的宫颈组织中S100A6基因的表达量。结果 S100A6基因在不同病变宫颈组织中均有表达,宫颈癌合并淋巴结转移组中表达最高,宫颈癌未合并淋巴结转移组表达次之,宫颈良性病变组最低。结论 S100A6基因在不同病变宫颈组织中表达均有差异,随着宫颈病变程度及浸润转移表达增高,结合临床可以作为评价宫颈癌转移浸润危险性的参考指标之一。     

STIL和PRR11在宫颈癌组织的表达水平及其与淋巴结转移的相关性

目的:分析SCL/TALl断裂点(STIL)和富含脯氨酸蛋白11(PRR11)在宫颈癌组织的表达水平及其与淋巴结转移的相关性。方法:选择我院2020年1月至2022年1月收治的143例宫颈癌患者作为研究对象,术中收集患者宫颈癌组织和肿瘤邻近正常癌旁组织。采用蛋白质印迹法(Western Blot)对癌组织和癌旁组织中STIL和PRR11蛋白水平进行检测;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对STIL和PRR11 mRNA水平进行检测;比较不同FIGO分期患者中STIL和PRR11蛋白水平;比较淋巴结转移和非转移患者中STIL和PRR11蛋白水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析STIL和PRR11水平对宫颈癌淋巴结转移的诊断价值,曲线下面积(AUC)表示诊断价值;采用Pearson分析STIL和PRR11蛋白表达之间的相关性。结果:宫颈癌组织中STIL、PRR11蛋白水平及其基因相对表达量均明显高于癌旁组织(P<0.05); FIGO分期越高,STIL、PRR11蛋白水平明显越高(P<0.05);淋巴结转移患者中STIL、PRR11蛋白水平均明显高于未转移(P<...     

PAR1、PAR4在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:对宫颈癌组织中PAR1和PAR4基因的表达进行检测,并对其相关的临床意义进行探讨。方法:选取宫颈癌患者手术切除标本84例,所有病例经病理确诊,对照为癌旁非癌宫颈组织。对患者的年龄、有无淋巴结转移、肿瘤分化程度及临床TNM分期分组对照HPV16和P16基因的表达。RT-PCR检测PAR1和PAR4 mRNA的表达,荧光定量PCR检测PAR1和PAR4基因的表达量。结果:宫颈癌标本中PAR1和PAR4基因的表达率分别为63.1%和72.6%,显著高于癌旁正常对照宫颈组织的21.4%和29.8%(P均<0.01)。PAR1和PAR4基因在宫颈癌标本中的表达量分别为0.61±0.15和0.67±0.17,也显著高于对照组织的0.13±0.07和0.21±0.08(P均<0.01)。PAR1和PAR4基因的表达率和表达量在患者肿瘤分化程度、有无淋巴结转移及临床不同分期之间都存在统计学差异(P<0.05),但不同年龄患者之间无统计学差异(P>0.05)。相关性分析显示宫颈癌组织中PAR1和PAR4基因的表达呈正相关(r=0.664,P<0.01)。结论:PAR1和PAR4基因的高表达在宫颈癌的发生发展中起到一定的作用,对其联合检测有可能用于宫颈癌分化程度的评估、临床分级以及判断预后等方面。     

宫颈癌中耐药相关基因的表达及临床研究

目的:探讨宫颈癌组织中,多项耐药相关基因(P- gp、GST- π,TOPO )的表达水平及其临床意义。方法:免疫组化链霉菌素-生物素(S- P)法对术前未使用过化疗、放疗及免疫治疗的5 6例宫颈癌及癌旁组织,30例正常宫颈组织行P- gp,GST- π,TOPO 检测。结果:宫颈鳞癌与腺癌中各耐药基因的表达差异无显著性(P>0 .0 5 ) ,在不同分化程度及有无转移的宫颈癌中表达差异有显著性(P<0 .0 5 ) ,在癌组织、癌旁组织及正常宫颈组织中表达差异有显著性(P<0 .0 1) ,其中P- gp与GST- π在宫颈癌中的表达差异有极显著性(P<0 .0 1)。结论:宫颈癌中多药耐药相关基因的表达是癌的发生、分化程度及转移行为的生物学表现。临床上对3种以上耐药相关因子的综合检测意义重大,有助于指导临床对宫颈癌的化疗。     

食管鳞状细胞癌转移相关miRNAs差异表达谱分析

目的应用microRNA表达谱芯片技术,选取有详细临床病理数据及随访资料的食管鳞状细胞癌组织及相应正常食管粘膜组织,分析食管鳞癌患者有淋巴结转移组和无转移组差异性表达的miRNA。方法选取10例新鲜冻存的食管鳞癌组织及其相应的正常食管粘膜组织,使用microRNA芯片(miRCURY LNAmicroRNA芯片,Exiqon公司),筛选出食管鳞状细胞癌组织中差异表达的miRNA并进行聚类分析;运用实时定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)验证结果的可靠性;最后通过生物信息学分析预测其靶基因。结果有淋巴结转移组与无淋巴结转移组相比较,差异表达的miRNA共有40个,其中表达上调者miRNA 22个,表达下调者miRNA 18个,经过聚类和PAM分析及real-time RT-PCR技术验证,筛选出二个具有组织特异性表达的miRNAs(miRNA-612和miRNA-583)。miRNA-612的表达上调及miRNA-583的表达下调在有淋巴结转移和无淋巴结转移食管癌中差异具有显著意义。结论通过miRNA芯片发现的相关差异性表达的miR-NA,有可能成为食管鳞状细胞癌淋巴结转移特征性的分子标志物,并为进一步认识和研究miRNA在食管鳞癌发生发展中的作用,寻找并鉴定与临床诊治相关的靶分子奠定基础。     

宫颈鳞状细胞癌中Klotho和c-myc的表达及相关性研究

目的:通过对正常宫颈上皮组织和宫颈鳞状细胞癌(CSCC)中Klotho和c-myc的检测,探讨两者在宫颈癌发生、发展过程中的作用及其相关性。方法:使用免疫组化SP法检测Klotho及c-myc在正常宫颈上皮组织及CSCC组织中的表达。结果:Klotho在正常宫颈组织中的表达显著高于CSCC组织,其表达与宫颈癌患者年龄、宫颈癌FIGO分期与淋巴结转移无关,差异无统计学意义(P0.05)。c-myc在CSCC组织中的阳性表达明显高于正常宫颈上皮组织,其表达与组织学分级、FIGO分期及淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P0.05)。Klotho与c-myc的表达呈负相关(rs=-0.486,P0.05)。结论:Klotho可能在宫颈癌的发病过程中起重要作用;c-myc与宫颈癌的侵袭及转移有关。联合检测Klotho与c-myc对宫颈癌的预防、早期诊断和治疗提供理论依据。     

基因芯片筛选早期子宫颈鳞癌淋巴转移相关基因

目的应用基因芯片技术筛选早期子宫颈鳞癌淋巴转移相关基因。方法利用代表人类全基因组的Affymetrix U133 plus 2．0基因表达谱芯片筛查淋巴转移的早期子宫颈鳞癌组织、未转移子宫颈鳞癌组织及正常子宫颈上皮之间的基因表达差异,并进行生物信息学分析。结果与未转移子宫颈鳞癌相比,淋巴转移宫颈癌2倍以上差异表达的基因322条,其中表达上调的基因182条,表达下调的基因140条;4倍以上差异基因37条,其中在淋巴转移组织中上调基因21条,下调基因16条。差异表达基因的功能分类包括：DNA依赖的转录调节基因、发育基因、免疫反应基因、蛋白质水解基因和细胞问信号传导基因等。而三组间两两比较发现,在正常子宫颈与无转移宫颈癌组织中表达无差异的基因中,发现转移组和未转移组表达水平具有2倍以上差异的基因有23条,其中在转移组中,上调基因16条,下调基因7条。与正常子宫颈相比,未转移组中表达上调的基因中有8条基因在转移组表达下调;与正常组相比。未转移组中表达下调的基因中有6条基因在转移组表达上调。在所有未转移宫颈癌组织较正常宫颈组织表达上调的基因中,未发现在转移组有进一步表达上调的基因;在所有未转移宫颈癌组织较正常宫颈组织表达下调的基因中,也未发现在转移组有进一步表达下调的基因。结论早期子宫颈鳞癌淋巴转移是复杂的多基因作用的结果。本实验初步提供了宫颈癌发生淋巴转移的总体基因表达改变图谱。     

胃癌淋巴结转移相关基因差异表达分析

[目的]探讨胃癌淋巴结转移过程中相关基因群的表达和功能。[方法]从6例胃癌患者分别抽取胃癌和淋巴结转移组织的总RNA,采用逆转录的方法,制成cDNA链,并以两种荧光Cy5和Cy3标记后做探针,与含有14784条人类14KcDNA基因表达谱芯片进行杂交。以Agilent荧光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,进行计算机处理和分析,筛选出胃癌淋巴结转移组织中差异表达的基因,并用RT—PCR实验对部分差异表达基因进行验证。[结果]在14784条基因中,胃癌原发灶与淋巴结转移组织间存在差异表达的基因共80条,其中59条基因表达显著上调,21条基因表达显著下调。经RT-PCR验证,差异表达趋势与基因芯片技术检测的结果一致。[结论]胃癌组织和淋巴结转移组织之间存在多个差异表达的基因,胃癌淋巴结转移的发生与发展是多种相关基因表达失常所致。     

宫颈鳞癌组织转移相关基因的初步筛查

目的: 应用基因芯片检测盆腔淋巴结转移组和无转移组宫颈鳞癌组织中差异表达基因,从中筛选肿瘤转移相关基因。方法: 利用基因芯片技术对4例盆腔淋巴结转移组和6例无转移组宫颈鳞癌组织标本进行差异表达基因检测,并用Real-time PCR对部分差异表达基因进行验证。通过基因库检索、PUBMED文献检索和基因本体分析从差异表达基因中筛选肿瘤转移相关基因。结果: 从盆腔淋巴结转移组及无转移组宫颈鳞癌组织中筛选出表达差异明显的基因329个,通过Real-time PCR验证,基因芯片结果可靠。从差异表达基因中筛选出与肿瘤转移相关基因44个。结论: 通过基因芯片筛查,初步建立了宫颈鳞癌转移相关差异基因表达谱,说明宫颈鳞癌的转移过程受多基因调控。     

利用cDNA微阵列进行宫颈鳞癌的分子筛查

目的使用cDNA微阵列筛选浸润性宫颈鳞癌的淋巴结转移相关基因。方法应用包含18 432个基因的cDNA微阵列测定IB期宫颈鳞癌的全基因序列,包括已知功能的人类转录子和表达序列标签ESTs,分为正常组、淋巴转移组、无淋巴转移三组宫颈组织。为了证实不同的基因表达,选择3个基因进行了冰冻组织的RT-PCR检测和石蜡组织的免疫组化检测。结果经统计学分析,与无淋巴转移浸润性宫颈鳞癌组织比较,有淋巴转移的癌组织有677个基因大于2倍差异,其中上调494个(72.97%),下调183个(27.03%),表达序列标签EST为61个(9.01%),这些基因涉及代谢、发育、信号传导、分化、DNA结合转录和离子通道等。6倍差异基因14个,其中只有nel(chicken)like-2下调,其余为上调基因。RT-PCR和免疫组化的结果与cDNA微阵列结果一致。结论利用cDNA微阵列检测基因的表达状态可以预测宫颈鳞癌淋巴结转移和宫颈癌的预后情况。Cx43的低表达、ETV5和整合素alpha 2的高表达可能会成为评估浸润性宫颈鳞癌恶性程度的重要指标。这些分子有利于预测浸润性宫颈鳞癌的预后及其相应的分子治疗。     

Expression Profile of Metastasis-associated Genes in Esophageal Squamous Cell Carcinoma

Esophageal cancer (EC) is one of the mostcommon fatal cancers in the worldwide , and ischaracterized by its high metastasis ,local lymphnode and blood metastasis at early stage , whichmay be the key factors of its recurrence and poorprognosis[1]. Thus ,better elucidation of molecularmechanism during metastasis is expected to i m-prove prevention and treat ment of EC. Many stud-ies have contributed to advance inits molecular as-pects . This li mited information based on singlegene ,however ,i…     

结合激光微切割与cDNA芯片技术筛选胃癌进展过程中差异表达的基因

目的:结合激光微切割(LMD)和基因芯片技术筛选胃癌淋巴结转移相关基因,从中进一步确定在胃癌发生和转移过程中都有差异表达的基因。方法:采用LMD技术,从17例胃癌患者手术标本中获取高纯度的正常胃黏膜细胞及原发灶和相应淋巴结转移灶中的肿瘤细胞。用基因芯片比较其中2例原发灶与淋巴结转移灶中肿瘤细胞基因表达谱的差异,半定量RT-PCR方法验证芯片结果;并在另15份标本中,进一步确定在胃癌发生和转移过程中都有差异表达的基因。结果:发现49个基因的表达在胃癌原发灶肿瘤细胞中比淋巴结转移灶明显上调,37个基因的表达明显下调,mRNA水平的验证结果与芯片结果相符。同时,筛选出4个在胃癌发生和转移过程中都有差异表达的基因,其中3个基因(OPCML,RNASE1和YES1)的表达规律与肿瘤抑制基因相似,即正常黏膜中表达最高,肿瘤原发灶次之,淋巴结转移灶表达最低;而另一个基因(AKC1)的表达规律则与癌基因相似。结论:采用LMD和基因芯片技术,成功筛选出胃癌进展过程中的差异表达基因,为进一步研究胃癌发生和转移的机制奠定了良好的基础。     

利用mRNA差异显示和基因芯片技术联合筛选乳腺原发癌与淋巴结转移癌患者的差异表达基因

目的 通过乳腺原发癌与配对的淋巴结转移癌基因表达谱的比较研究筛选乳腺癌转移相关基因。方法 首先利用mRNA差异显示（mRNA DD）技术筛选乳腺原发癌与其配对的淋巴结转移癌的差异表达基因片段,将差异基因片段克隆、测序并与GenBank同源性比较;然后利用同位素标记的反向斑点杂交和荧光标记的基因芯片杂交方法验证筛选得到的差异基因;采用实时定量逆转录聚合酶链反应（real-time RT—PCR）方法检测差异表达基因在7个不同生物学行为乳腺癌细胞系的mRNA表达。结果 乳腺癌的淋巴结转移癌与其原发癌的基因表达谱具有高度一致性,但也有少量差异表达的基因;mRNADD筛选得到16个差异基因,包括4个未知基因并已登录在GenBank,序列号为BG518428、BG518429、BM005520、BM005521,4个已知序列未知功能基因和8个已知基因。其中驱动蛋白样DNA结合蛋白（KNSL4）和二氢嘧啶脱氢酶（DYPD）为在同位素标记的反向斑点杂交和基因芯片杂交的验证结果中证实在转移癌中的表达较原发癌下调的基因。KNSL4 mRNA在7个不同生物学行为乳腺癌细胞系的表达,随着细胞转移能力的增强呈下调趋势。结论 乳腺原发癌与配对的淋巴结转移癌基因表达谱的相似性证实,淋巴结转移癌是其原发癌的转移亚克隆,二者的差异表达基因可能与细胞的转移表型相关;KNSL4和DYPD为3种方法均证实的在转移癌中表达下调的基因,是潜在的乳腺癌转移相关基因;KNSL4与乳腺癌细胞转移的生物学行为相关,提示其可能在乳腺癌转移中起重要作用。     

应用表达谱芯片筛选病理性瘢痕组织的差异表达基因

目的：采用表达谱芯片对病理性瘢痕组织和正常人皮肤组织进行检测,筛选病理性瘢痕组织的差异表达基因。方法：应用基因表达谱芯片筛选病理性瘢痕组织与正常人皮肤组织的差异表达基因,对差异表达基因数据进行Go和Pathway分析。结果：病理性瘢痕组织与正常人皮肤组织相比,差异表达2倍以上基因5 001个,差异表达5倍以上基因956个,差异表达20倍以上基因144个。结论：病理性瘢痕组织与正常皮肤组织在基因表达上,存在显著差异。病理性瘢痕的发生是由多种基因、多条通路共同参与作用的,基因通路间呈网络样动态连接。     

采用单引物扩增法标记的基因芯片技术筛选乳腺原发癌与淋巴结转移癌的差异表达基因

目的比较乳腺原发癌与淋巴结转移癌的基因表达差异,筛选乳腺癌转移相关基因。方法采用单引物扩增(SPA)标记方法和含21000个人功能基因的Oligo芯片,比较10例淋巴结转移阳性乳腺癌患者的原发癌及淋巴结转移癌的基因表达差异,筛选至少5对样本中有1．5倍以上相同差异表达趋势的基因;采用实时定量RT—PCR方法对差异表达基因进行病例验证。结果SPA方法标记靶标可使用于一张芯片杂交的起始总RNA模板量减少至0．25μg;共筛选出57个基因在至少5对样本中有1．5倍以上相同的差异表达趋势,其中19个基因在转移癌中表达上调,38个基因下调,8个差异表达基因与细胞黏附和运动能力有关,14个与信号传导有关,14个与细胞生长代谢有关;实时定量RT—PCR检测30例乳腺癌原发癌与配对的淋巴结转移癌中纤维粘连蛋白(FN)的mRNA表达,转移癌中FN的mRNA表达平均相对表达量较原发癌下调3．6倍,配对t检验差异有统计学意义(t=-3．188,P=0．003)。结论(1)单引物扩增标记靶标的方法灵敏度高、重复性好。(2)以乳腺癌的淋巴结转移癌作为原发癌的转移亚克隆进行基因表达的差异比较,筛选得到的基因涉及了细胞黏附和运动能力、细胞信号传导、细胞生长代谢等与转移相关的生物学过程。(3)FN可能参与乳腺癌的转移过程,是潜在的预测乳腺癌转移和预后的分子标志。     

肺癌诊断基因的初步筛选

目的 筛选肺癌细胞恶性转化不同时期差异表达的基因，以期用于肺癌的诊断。方法 应用抑制消减杂交技术(SSH)、测序、cDNA芯片(cDNA Miemarray)、northern blot。结果 利用SSH建立了永生化人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化不同时期差异表达基因的cDNA文库，其中，A消减文库(BEP2D细胞的cDNA为tester，α粒子照射BEP2D细胞后35代恶性转化细胞R15Hp35的cDNA为driver)有416个克隆，B消减文库(α粒子照射BEP2D细胞后20代转化细胞R15Hp20的cDNA为tester，BEP2D和R15Hp35细胞的cDNA混合后为driver)有301个克隆，C消减文库(R15Hp35细胞的cDNA为tester，BEP2D细胞的eDNA为driver)有586个克隆。对文库中107个克隆单向测序发现：19个克隆在GenBank中没有查到对应的同源序列，其它88个克隆共代表了76个不同的已知基因。然后，将3个文库中全部克隆的cDNA制作成cDNA芯片，用该芯片筛选了15例肺癌组织、5例肺癌旁组织和其他8种癌组织(肝癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、白血病、子宫内膜癌、脑神经角质瘤和结肠癌)中mRNA的表达差异。结果，获得肺癌组织高于肺癌旁组织表达的eDNA26个，肺癌旁组织高于肺癌组织表达的31个，2者高于其他8种癌组织的分别为：肺癌旁组织中63个，肺癌组织中87个。将这208个具较大差异表达的基因重新制作成cDNA芯片，再选用临床上同一鳞癌病人鳞癌和鳞癌癌旁组织各1例与该芯片杂交，发现这些筛选出的基因的确在癌组织和癌旁组织中存在较大差异。结论 这些初步筛选出的差异表达基因有望成为肺癌诊断的侯选基因。