脐血NK细胞的杀伤活性及其影响因素

目的探讨脐血NK细胞的杀伤活性及其影响因素。方法对成人脐血及外周血NK细胞的活化和抑制性受体、细胞毒性颗粒、胞内细胞因子的表达进行检测。结果脐血NK细胞与成人外周血NK细胞的大部分指标均无差异,但脐血NK细胞的NKG2A、CD94表达明显升高,而颗粒酶B表达则较低。结论脐血NK细胞抑制性受体NKG2A/CD94表达升高,颗粒酶B降低是脐血NK细胞活性低于外周血NK细胞的主要原因。     

新型免疫活性细胞CIK体外对肝癌细胞的杀伤

目的 观察人体CIK(cytokine-induced killer)细胞的体外增殖力及杀伤肝癌细胞活性.方法 采取健康自愿者的成分血,用淋巴细胞分离液分离获得外周血单个核细胞(PBMC),在体外培养条件下,通过加入不同细胞因子(如IFN-γ,IL-1,IL-2,CD3 mAb)培养诱导成CIK细胞和LAK细胞,观察不同培养细胞的增殖能力;用流式细胞仪对培养细胞做细胞表型动态分析,观察培养细胞的表面标志;与LAK细胞作对比,用MTT法测定并比较不同效应细胞的体外抗肝癌细胞活性.结果 CIK细胞在培养14 d后开始大量增殖且在含人血清的培养基中增殖数量最多,可达500多倍.经表型分析表明,CIK细胞属于异质细胞群,在培养过程中,CD3+CD56+双阳性细胞的绝对数量获得了大量增殖,至56 d时可占细胞总数的51.26%,是CIK主要的效应细胞;实验表明,CIK细胞体外杀伤肝癌细胞的活性明显优于LAK细胞.结论 CIK细胞是一种具有较强杀伤肝癌细胞的免疫活性细胞,有可能应用于抗肿瘤的生物治疗.     

RT-PCR半定量检测外周血单个核细胞中fgl2凝血酶原酶基因的表达

目的：探讨逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)半定量检测fgl2凝血酶原酶在正常人外周血单个核细胞(PBMNC)中的表达及其规律。方法：根据genbank中fgl2凝血酶原酶基因序列设计一对引物，以β—actin的表达为内参照，采用RT—PCR方法半定量检测体外培养体系中不同时点的PBMNC中fgl2凝血酶原酶mRNA的表达及变化规律。结果：fgl2凝血酶原酶mRNA的表达水平在新鲜分离的PBMNC中表达最高，随着培养时间的延长而逐渐降低，至72h几乎不能检测出。结论：RT—PCR方法半定量检测PBMNC中fgl2凝血酶原酶mRNA灵敏度高；PBMNC中的fg12凝血酶原酶在体外培养体系中不能持续表达。     

白细胞介素-18对单个核细胞的调节作用及其机制

背景:白细胞介素(IL)鄄18是一种促炎性细胞因子,对多种免疫反应具有重要调节作用。目的:观察IL鄄18对单个核细胞产生1型辅助性T细胞(Th1)细胞因子干扰素(IFN)鄄γ和IL鄄2的影响,及其对细胞内核因子(NF)鄄κB活化的影响,以揭示IL鄄18对单个核细胞的调节作用及其机制。方法:以不同浓度的IL鄄18或IL鄄18 IL鄄12刺激小鼠脾单个核细胞(SMC),采用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)检测IFN鄄γ和IL鄄2mRNA的表达,采用酶联免疫吸附测定检测IFN鄄γ和IL鄄2蛋白浓度,采用凝胶电泳迁移率改变实验(EMSA)检测NF鄄κB的活化。结果:IL鄄18刺激后,SMC培养上清液中的IFN鄄γ蛋白浓度随IL鄄18浓度的增高而相应增高;100ng/mlIL鄄18与不同浓度的IL鄄12共刺激后,IFN鄄γ蛋白浓度随IL鄄12浓度的增高而相应增高,与对照组相比有显著差异(P<0.05)。各刺激组的IL鄄2蛋白浓度与对照组相比均无明显改变(P>0.05)。IL鄄18或IL鄄18 IL鄄12刺激后,SMC中NF鄄κB活化。结论:IL鄄18可单独或与IL鄄12协同诱导单个核细胞分泌Th1细胞因子IFN鄄γ,NF鄄κB活化参与了这一过程的信号转导。     

无症状HBeAg阳性患者外周血单个核细胞培养液中IL-10、IL-12及γ-IFN检测水平的研究

探讨HBbAg阳性无症状乙肝病毒感染者免疫调控状况．采用外周血单个核细胞(PBMC)，体外刺激诱导培养，用ELISA法同时检测IL—10、IL—12及γ—IFN，并以抗—HBe阳性者、慢性肝炎及体检健康者作为对照。发现IL—10不受HBeAg /抗—HBe^ 的影响，经受刺激培养后其分泌明显高于正常对照组，在轻度ALT增高病人中亦呈分泌增强状态。γ—IFN在无症状HBeAg^ 组测定值明显较低；但在无症状抗—HBe^ 、ALT及TBil异常组增高。IL—12检测水平在HBV感染各组均显著高于正常对照组，与血清转换及肝功异常无关。免疫负调控优势可发生于无症状HBeAg携带者。IL—12在乙肝病毒感染时生成量可能高于正常人。     

IL—2在小鼠抗弓形虫作用的研究

目的分析IL—2的抗弓形虫作用,并探讨其机制。方法采用3H一尿嘧淀（3H—U）特异性标记弓形虫在小鼠腹腔巨噬细胞（MouseperitonealmacrophageMPM）内的增殖实验及125I-UdR标记的细胞毒实验,观察IL—2在小鼠抗弓形虫中的作用。结果体外应用IL—2对MPM抗弓形虫作用无影响,体内应用IL—2能明显延长急性弓形虫感染小鼠的生存时间（P＜0.05）。IL—2治疗组小鼠脾细胞杀伤肿瘤细胞及弓形虫感染自身靶细胞的能力,明显高于对照组（P＜O.001）;正常小鼠NK细胞及LAK细胞杀伤自身感染弓形虫靶细胞的能力,显著低于杀伤肿瘤细胞的能力（P＜0.001）;IL—2诱导的LAK细胞杀伤自身感染弓形上靶细胞的能力,明显高于NK细胞（P＜0.001）,且与LAK细胞杀伤肿瘤靶细胞的能力无明显差别。结论以上结果表明,IL—2体内应用提高弓形虫感染小鼠生存能力的机制,可能与提高体内LAK细胞杀伤自身感染弓形虫靶细胞的能力有关;NK细胞的抗弓形虫机制,可能在于激活NK细胞产生IFNγ和TNFα等细胞因子,间接作用于巨噬细胞而发挥作用。     

脐血、外周血内皮祖细胞分化成内皮细胞的实验研究

目的探讨人的脐血、外周血内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells,EPCs）体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,并检测其表型和功能。方法新鲜脐血和健康成年人的外周血,使用Ficoll密度梯度离心法得单个核细胞,在M199培养基中体外培养,3d后去除悬浮细胞,继续培养,诱导EPCs增殖和分化。流式细胞仪检测EPCs标志CD34和内皮细胞特异性标志CD31表型,RTPCR检测ecNOS,flk1/KDR基因水平表达,免疫组化验证蛋白水平表达,并进一步通过NO活性的变化检测内皮细胞的功能。结果流式细胞仪检测,外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcells,PBMC）刚分离时,CD34阳性表达率为（1.1±0.8）%,培养3d后为（16.9±6.2）%。细胞形态观察发现,刚分离的单个核细胞呈圆形,形态小,3d后有明显集落形成,7d后梭形细胞线样排列,随培养时间增加,细胞形态逐渐变大,呈现出典型铺路石样改变。脐血单个核细胞（umbilicalcordbloodmononuclearcells,CBMC）和PBMC培养10d后,CD31阳性表达率分别为（76±17）%和（82±9）%。RTPCR检测有内皮细胞特异性成分ecNOS,flk1/KDR的表达。免疫组化染色,细胞膜和细胞浆中有弥漫性棕色出现,呈阳性反应,证实了蛋白水平的表达。培养10d的贴壁细胞随着VEGF浓度增加,NO生成增加,具有内皮细胞的功能。结论脐血,外周血EPCs体外分离,纯化,诱导培养后的贴壁细胞表型检测,大部分细胞具有内皮系标志物,并具有产生NO功能。     

脐血外周血内皮祖细胞成内皮细胞的体外比较研究

目的:探讨人脐血、外周血内皮祖细胞(EPCs)体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,并对两者分化成内皮细胞的能力进行比较。方法:新鲜脐血和健康成年人的外周血,Ficoll密度梯度离心法得单个核细胞,磁珠分选方法(MACS)分离脐血CD34 单个核细胞(MNCCD34 )。脐血单个核细胞(CBMC)、外周血单个核细胞(PBMC)和MNCCD34 在M-199培养基体外培养,血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导EPCs增殖和分化。采用细胞形态学观察比较细胞克隆形成率的区别,流式细胞仪检测不同来源的EPCs分化后CD31阳性细胞率。结果:MNCCD34 培养3 d后,细胞克隆形成率为(24.25±6.5)/(3×107)细胞;CBMC贴壁细胞培养3 d后,为(103.00±10.10)/(3×107)细胞;PBMC贴壁细胞培养3 d后,为(74.25±5.44)/(3×107)细胞。CBMC分化形成的贴壁细胞和细胞簇数目多于PBMC(P<0.05),但单个核细胞分化形成的克隆率均明显高于MNCCD34 细胞(均P<0.05)。细胞培养10 d后CD31阳性率为:CBMC为(76.24±16.54)%,PBMC为(82.2±9.0)%,MNCCD34 为(70.03±10.27)%,MNCCD34-仅为(36.5±11.78)%。结论:相似数目的细胞,CD34 细胞单独培养形成的贴壁细胞和细胞簇数目明显少于CBMC和PB-MC(均P<0.05)。培养10 d后CD31阳性细胞率则差异无统计学意义(P>0.05),提示不同来源的EPCs分化率无显著区别,主要来自CD34 细胞群。     

CIK细胞及其中穿孔素在抗肿瘤中的作用

细胞免疫比体液免疫在抗肿瘤效应中发挥着更重要的作用.细胞毒性T细胞(CTL)和NK细胞杀伤靶细胞的作用机制已较清楚,主要是通过细胞直接杀伤和分泌抗肿瘤细胞因子两种途径.在抗肿瘤的细胞免疫应答中CTL及NK细胞起着重要作用.CIK细胞是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子(如抗CD3,McAb,IL-2,IFN-γ,IL-1α)共同培养诱导后获得的一群异质细胞.由于该细胞同时表达CD3、CD56两种膜蛋白分子,故又被称为NK细胞样T细胞,兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点.     

慢乙肝患者PBMC中HBV—DNA存在状态的测定及其临床意义

用限制性长度多态性分析法 (RestrictionFragmentlengthPloymorphism ,RFLP)加半定量的SouthernFragmentlengthPloymorphism ,RFLP)加半定量的SouthernBlot法测定 40例慢乙肝患者外周血单个核细胞中HBV -DNA的不同存在状态 :游离型和 /或整合型 ,并同时测定其血清Ig、C3、C4 、NK细胞活性、TNF(肿瘤坏死因子 )、CD4 + /CD8+ 。结果显示 :40例中阳性 35例 (2 2例为整合型 ,10例为混合型 ,3例为游离型 ) ;整合型较混合型(包括游离型 )其IgG、IgM、C3、NK细胞活性、TNF、CD4 + /CD8+ 明显降低 ,存在显著性差异 (P <0 0 1)。提示 :HBV感染PBMC后可影响机体的免疫应答     

从外周血分离单核细胞的不同方法及各自特点

单核细胞是机体重要的固有免疫细胞,能吞噬并清除受伤和衰老的细胞及其碎片,参与人体的免疫炎症反应。单核细胞能进一步分化为巨噬细胞和树突状细胞,二者在建立有效的免疫应答中发挥着重要作用。单核细胞及巨噬细胞和树突状细胞被广泛应用在基础与临床医学的相关研究中。本文将介绍从外周血中分离单核细胞的几种不同方法,并比较分析其优劣性,帮助研究者选择合适的分离方法以高效地获得符合实验要求的单核细胞,为后续研究奠定基础。     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞对HBV不同区抗原的增殖反应

目的进一步明确外周血细胞免疫在ＨＢＶ感染过程中的作用。方法对２０例急性乙型肝炎（乙肝）患者、２３例慢性乙肝患者、２０例正常献血员进行了研究,用氮蓝四唑实验（ＭＴＴ）测定乙肝患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）对ＨＢＶ不同区抗原的增殖反应。结果在急性乙肝患者ＰＢＭＣ对抗原的增殖反应大于慢性乙肝患者及正常对照,ＰＢＭＣ对ＨＢｃＡｇ的增殖反应最高,ＨＢｅＡｇ次之,而对ＨＢｓＡｇ的反应均较弱。另外,无论在急性、慢性患者,其ＰＢＭＣ对抗原的增殖反应水平与血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）的变化无明显相关性。血清ＨＢＶＤＮＡ阴性、ＨＢｅＡｇ阴性的慢性肝炎或慢性肝炎急性发作患者,其ＰＢＭＣ对ＨＢＶ抗原的增殖反应较弱,在血清ＨＢＶＤＮＡ或ＨＢｅＡｇ阳性患者,增殖反应较强,而当血清ＨＢＶＤＮＡ、ＨＢｅＡｇ均阳性时,增殖反应最强,表明外周细胞免疫与ＨＢＶ的复制及清除相关。结论ＨＢＶ感染后,外周血中存在对ＨＢＶ抗原的细胞免疫,这种细胞免疫可能与乙肝的发病及ＨＢＶ的清除有关。     

儿科患儿ABX血液分析仪检测中间型细胞镜检的探讨

目的：探讨三分群ABX MICROS60血液分析仪在儿科患儿血常规检查时中间型细胞（MO）镜检复查规则,以保证血细胞分析的正确性。方法：收集216例儿科门诊常规标本进行全自动血液分析仪检测,同时进行外周血涂片人工镜检,将仪器分类的MO结果与人工镜检分类结果进行对比分析。结果：2种方法分类结果比较,MO〈10％时,方法间差异无统计学意义,有良好的相关性;MO≥10％时,r值0．310,P〈0．05,2种方法间差异有统计学意义,相关性差,同时该组标本人工镜检异常结果检出率11．3％。结论：当血液分析仪检测白细胞分类MO为10％以上时,均应作瑞特染色人工镜检复查,以防止幼稚细胞、异型淋巴细胞、嗜酸粒细胞等病理性细胞漏检。     

Analysis for the optimal blood draw speed to collect sufficient peripheral blood mononuclear cells by COBE Spectra

In recent years the procedures for peripheral blood mononuclear cell (PBMNC) harvests have gradually been increasing. These PBMNCs are collected for several treatments, for example, donor lymphocyte infusion (DLI), immunotherapy for solid carcinoma, and regeneration therapy for ischemic limbs. In order to analyze the optimal procedure for collecting PBMNCs safely and efficiently, we evaluated 129 PBMNC apheresis procedures from April 1996 to May 2003, without hemopoietic stem cell mobilization by G-CSF. In every case, PBMNC collections were performed with a COBE Spectra cell separator (Gambro BCT). The median apheresis volume was 5550 mL. The median of blood draw speed was 48.1 mL/min. The median TNC (total nuclear cell) number in products was 50.4 x 10(3)/ micro L. In the regression analysis, no significant correlation was seen between the blood draw speed and the concentrations of TNC in products (Y = aX + b, a = 0.842497, b = 17.11352, r = 0.222032, P = 0.012464). A positive correlation was seen between WBC on apheresis day and the concentrations of TNC (Y = aX + b, a = 0.009822, b = 3.224679, r = 0.550431, P = 2.93 x 10(-11)). A significantly higher correlation was seen between the MNC (mononuclear cells) on apheresis day and the concentrations of TNC (Y = aX + b, a = 0.028278, b = 13.09266, r = 0.696988, P = 9.486 x 10(-9)). This study has shown evidence that a higher increment of blood draw speed does not provide a higher concentration of products. An adequate apheresis speed is about 40 mL/min. If we want to obtain sufficient cell counts, it is very important to obtain sufficient volume with a moderate blood draw speed, therefore protecting against side-effects.     

白细胞介素-17在狼疮性肾炎外周血单个核细胞上的表达及意义

目的　探讨白细胞介素 - 17(IL - 17)在狼疮性肾炎患者 (LN)外周血单个核细胞 (PBMC)表达和分泌及其与LN疾病活动性的关系。方法　用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测LN活动期患者血浆及PBMC体外自发培养或刺激培养的上清液中IL - 17蛋白水平 ,流式细胞仪免疫荧光分析法检测PBMC表达IL - 17的水平 ;用逆转录 -聚合酶联反应 (RT -PCR)法测定LN活动期患者PBMC体外自发培养和刺激培养后的IL - 17mRNA的表达水平。结果　LN活动期患者血浆检测不出IL - 17(<5ng/L) ;PBMC自发培养和PHA刺激培养下 ,LN活动期、LN静止期和正常对照 ,三组均检测不出IL - 17;而PBMC在CD3mAb +CD2 8mAb和PMA +ionomycin刺激培养下 ,较自发培养和PHA刺激培养 ,上述 3组IL - 17水平均明显升高 (P <0 .0 1) ,LN活动期PBMC表达、分泌IL - 17水平与SLE疾病活动指数 (SLEDAI)呈明显正相关。结论　LN活动期患者PBMC表达、分泌IL -17水平存在明显异常 ,并能反映LN疾病活动程度     

支气管哮喘患者外周血巨噬细胞移动抑制因子的表达及意义

目的 观察巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)在支气管哮喘(简称哮喘)患者外周血中的表达水平及其意义.方法 应用酶联免疫吸附试验法和荧光定量PCR技术,测定56例哮喘患者(哮喘组)和34名健康对照者(正常对照组)外周血MIF的表达水平.根据临床症状和肺功能检查将哮喘患者分为发作期组和缓解期组,其中发作期组32例,缓解期组24例,并对结果进行统计学处理.结果 血浆MIF的浓度和外周血单个核细胞MIF mRNA的表达水平:哮喘组高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);哮喘发作期组高于缓解期组,差异有统计学意义(P<0.05);但缓解期组与正常对照组之间差异无统计学意义.结论 MIF可能参与哮喘的病理过程并发挥重要作用,哮喘患者发作期组血MIF mRNA表达及血MIF水平显著增高,其变化可反映疾病的活动性.     

支气管哮喘患者外周血巨噬细胞移动抑制因子的表达及意义

目的观察巨噬细胞移动抑制因子（macrophagemigrationinhibitoryfactor,MIF）在支气管哮喘（简称哮喘）患者外周血中的表达水平及其意义。方法应用酶联免疫吸附试验法和荧光定量PCR技术,测定56例哮喘患者（哮喘组）和34名健康对照者（对照组）外周血MIF的表达水平。根据临床症状和肺功能检查将哮喘患者分为发作期、缓解期两组,其中发作期32例,缓解期24例,并对结果进行统计学处理。结果血浆MIF的浓度和外周血单个核细胞MIFmRNA的表达水平：哮喘组高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;哮喘发作期组高于缓解期组,差异有统计学意义（P〈0．05）;但缓解期组与正常之间差异无统计学意义。结论MIF可能参与哮喘的病理过程并发挥重要作用,哮喘患者发作期血MIFmRNA表达及血MIF水平显著增高,其变化可反映疾病的活动性。     

The effects of indomethacin on in vitro peripheral blood mononuclear cell reactivity in human schistosomiasis

The peripheral blood mononuclear cell (PBMN) proliferative responses of cells from patients with schistosomiasis were studied in the presence and absence of indomethacin in the culture medium. PBMN cultures were exposed to antigenic extracts of either adult S. mansoni worms (SWAP) or cercariae (CAP), and assayed for the incorporation of tritiated thymidine. More than 70% of the 48 patients studied with SWAP and the 40 patients studied with CAP, were not substantially effected by the addition of indomethacin to the cultures. The remainder (less than 30%) was augmented more than 50% by indomethacin and comprise a group which gave initially low responses to these antigenic preparations. Further analysis indicated that in some schistosomal patients the effect of an adherent suppressor cell population may, in part, be based on a prostaglandin-mediated, indomethacin-sensitive suppressive mechanism. However, the majority of patients, most of whom display adherent suppressor cells, are unaffected by indomethacin. Apparently, other adherent cell suppressor mechanisms are responsible for the regulation observed.     

扩张型心肌病患者外周血单个核细胞白细胞介素-35表达及分泌的初步研究

目的:观察白细胞介素-35(IL-35)在扩张型心肌病(DCM)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中表达和血浆水平变化,探讨其在DCM发病中的作用。方法:选择对象为30例DCM的患者(DCM组),24例心力衰竭的患者(HF组)及30例健康体检者为正常对照组。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定PBMCS的IL-35特异性亚基EB病毒诱导基因3(EBI3)mRNA的表达。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中IL-35水平。结果:①DCM组PBMCs表达IL-35的EBI3mRNA水平(0.15±0.03)明显降低于HF组(0.34±0.08)及正常对照组(0.33±0.07)(均P0.01),而HF组及正常对照组间差异无统计学意义(P0.05);②DCM组(24.08±4.40)血浆IL-35的水平明显低于HF组(53.03±5.04)和正常对照组(43.89±8.01)(均P0.01),而HF组及正常对照组间差异无统计学意义(P0.05);③DCM组血浆中IL-35含量与射血分数呈正相关(r=0.449,P0.05),与心功能NYHA分级呈负相关(r=-0.839,P0.01)。结论:DCM患者的IL-35表达下调,提示IL-35可能在DCM的免疫发病机制中起了一定作用。