单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D酵母表达载体的构建

目的:构建含有单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白D全基因片段的克隆载体及酵母表达载体,为进一步真核表达重组gD蛋白奠定基础.方法:应用PCR方法从HSV-Ⅰ基因组中扩增糖蛋白D的全长基因,产物回收后与pMD-18T载体连接,并转化,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体pMD18T-gD;克隆载体与表达载体双酶切后,产物连接、转化大肠杆菌JM109,筛选、测序后确定构建了酵母表达载体pGAPZαA-gD.结果:重组质粒pMD18T-gD和pGAPZαA-gD经PCR和酶切均出现相应长度的片段,测序结果证实为gD基因,序列分析同源性为99.66%.结论:成功构建了含有单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D全基因的克隆载体及酵母表达质粒.     

单纯疱疹病毒I型糖蛋白D核酸疫苗的构建及初步研究

目的构建、制备Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白Ｄ重组质粒ＤＮＡ疫苗，初步检测其诱导机体产生体液免疫应答的效果，为研制ＨＳＶ－１新型疫苗奠定基础。方法用ＰＣＲ的方法从ＨＳＶ－１病毒基因组中扩增糖蛋白Ｄ（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｄ，ｇＤ）基因，利用基因重组技术构建重组质粒；将重组质粒体外转染真核细胞ＣＯＳ－７，Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测表达产物；于ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后腿胫前肌注射免疫，０、２周各免疫１次，１００μｇ／次。初次免疫后０、２、４、６周眼眶采血，ＥＬＩＳＡ间接法检测抗体。结果重组质粒酶切出相应大小片段，经测序证实为ＨＳＶ－１ｇＤ序列。Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ证实能够在体外真核细胞中表达。免疫小鼠后，产生特异性抗体，抗体滴度１∶２０００。结论ＨＳＶ－１ｇＤ重组质粒ＤＮＡ有可能作为ＨＳＶ－１的ＤＮＡ疫苗，用于防治ＨＳＶ－１感染及其相关疾病。关键词单纯疱疹病毒角膜炎ＤＮＡ疫苗糖蛋白Ｄ     

单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D核酸疫苗的构建及初步研究

目的：构建、制备Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白D重组质粒DNA疫苗,初步检测其诱导机体产生体液免疫应答的效果,为HSV-1新型疫苗奠定基础。方法：用PCR的方法从HSV－1病毒基因组中扩增糖蛋白D（glycoprotein D,gD)基因,利用基因重组技术构建重组质粒;将重组质粒体外转染真核细胞COS－7,Western blotting检测表达产物;于BALB／C小鼠后腿胫前肌注射免疫,0、2周名免疫1次,100μg/次。初次免疫后0,2,4,6周眼眶采血,ELISA间接法检测抗体。结果：重组质粒酶切出相应大小片段,经测序证实为HSV－1gD序列。Western blotting证实能够在体外真核细胞中表达。免疫小鼠后,产生特异性抗体,抗体滴度1：2000。结论：HSV-1gD重组质粒DNA有可能作为HSV－1的DNA疫苗,用于防治HSV－1感染及其相关疾病。     

单纯疱疹病毒1型糖蛋白D核酸疫苗的构建及初步免疫观察

目的 构建用于防治单纯疱疹的核酸疫苗并观察其免疫效果。方法 用PCR反应,从HSV-F株基因组DNA中扩增出gD蛋白的全部编码序列,将其插入pcDNA3.1（ ）的PCMV下游,构建HSV gD核酸疫苗,并用酶切分析和测序鉴定;通过中和试验、ELISA方法和攻击试验检测是用pLy-D三次肌肉接种小鼠的免疫效果。结果 经鉴定证实了HSV gD核酸疫苗pLy-D的构建,实验小鼠产生了对HSV-1特异性的抗体（抗体滴度：ELISA法1：203,中和试验法1：37）。并经受了HSY-1病毒的攻击（存活率：70%）。结论 成功构建出了HSV gD核酸疫苗pLy-D,用其接种小鼠可以诱导产生特异性免疫反应,并具有良好的保护作用。     

热休克蛋白70-Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D DNA疫苗的构建及表达

目的：针对Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）包膜糖蛋白D（gD）,以热休克蛋白70（Hsp70）为载体,构建pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗。方法：将Hsp70和HSV-2gD蛋白的基因分别克隆至真核表达载体pVAX,构建成重组质粒pVAX-Hsp70-gD并测序鉴定。重组质粒pVAX-Hsp70-gD转染COS-7细胞,用免疫组化、SDS-PAGE和West-ern blotting方法鉴定重组质粒的表达情况。结果：测序证实重组质粒序列正确,表达产物的SDS-PAGE分析发现,在相对分子量为92 000处有外源蛋白表达,与预期蛋白带一致。免疫组化方法和Western blotting也证明,构建的重组质粒能在COS-7细胞内表达。pVAX-Hsp70-HSV2gD组核酸疫苗免疫的小鼠,其脾淋巴细胞培养上清中γ-干扰素的水平高于其他组（P〈0.05）。结论：成功构建了pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗,为其进一步的研究打下了基础。     

构建单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因真核表达载体

从单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV－Ⅱ）Sav株感染的Hep-2细胞培养液和细胞裂解液中提取HSV－Ⅱ基因组DNSA，以此为模板，用PCR方法获取胸苷激酶（TK）基因，将获取的DNA片段克隆入真核表达载体pcDNA3中，筛选阳性克隆测序，结果表明：本研究获取的HSV－Ⅱ－TK基因全部编码区为1128bp，编码376个氨基酸，结果表明：本研究扩增出HSV－ⅡTK基因的全部编码区序列，并成功构建真核表达载体pcDNA3／TK.     

单纯疱疹病毒I型DNA疫苗的构建(英文)

目的　构建表达单纯疱疹病毒 1型糖蛋白D的DNA疫苗。方法　采用聚合酶链式反应 (PCR) ,从HSV 1基因组中扩增出 gD基因 ,插入中间载体pGEM T ,然后克隆入真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建重组质粒 pLy D .经部分测序和限制性内切酶分析证实。将pLy D转染Cos 7细胞 ,并肌肉接种ICR小鼠。用免疫组化和ELISA方法分别检测gD蛋白表达及小鼠血清中的特异性抗体。结果　转染的Cos 7细胞中有 gD蛋白的表达 ;经三次肌肉免疫接种的小鼠血清中有特异性HSV 1抗体产生。结论　本研究构建的重组质粒 pLy D能够在哺乳动物细胞中表达目的蛋白 ,免疫接种后可以诱导动物产生免疫反应     

单纯疱疹病毒Ⅰ型DNA疫苗的构建

目的 构建表达单纯疱疹病毒1型糖蛋白D的DNA疫苗。方法 采用聚合酶链式反应（PCR），从HSV-1基因组中扩增出gD基因，插入中间载体pGEM-T，然后克隆入真核表达载体pcDNA3.1，构建重组质粒pLy-D，经部分测序和限制性内切酶分析证实，将pLy-D转染Cos-7细胞，并肌肉接种ICR小鼠。用免疫组化和ELISA方法分别检测gD蛋白表达及小鼠血清中的特异性抗体。结果 转染的Cos-7细胞中有gD蛋白的表达；经三次肌肉免疫接种的小鼠血清中有特异性HSV-1抗体产生，结论 本研究构建的重组质粒pLy-D能够在哺乳动物细胞中表达目的蛋白，免疫接种后可以诱导动物产生免疫反应。     

单纯疱疹病毒包膜糖蛋白gD的研究进展

HSV gD包膜糖蛋白是HSV的结构蛋白之一，具有重要的抗原表位，参与病毒穿膜过程，介导了病毒的细胞问扩散，在病毒感染和宿主免疫过程中起着重要作用，也是目前疫苗研究的热点。其分子和功能特性的研究对HSV作用机制，预防的研究有着重要意义。近年来，该领域的研究取得一定进展。现就HSVgD糖蛋白结构与功能及疫苗研制方面的研究进展作一综述。     

单纯疱疹病毒1型糖蛋白B基因疫苗的构建

目的：构建用于治疗和预防单纯疱疹病毒性角膜炎的核酸疫苗,探讨单纯疱疹病毒1型糖蛋白B(HSV-1gpB)基因作为基因疫苗的可能性。方法：利用PCR技术从HSV-1 SM44毒株基因组中扩增出编码HSV-1gpB去除N端部分信号肽序列(39 bp)的基因片断（2 673 bp）,定向插入真核表达质粒pcDNA3载体中,构建出重组真核表达质粒pcDNA-gpB,并对其进行酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定。 结果：双酶切重组质粒pcDNA-gpB,电泳可见两条带,分别为目的基因（2 700 bp）和线性质粒pcDNA3（5 400 bp）; 以重组质粒pcDNA-gpB为模板进行PCR扩增,在2 700 bp位置扩增出特异的产物;测序结果表明,克隆基因插入方向正确,与GenBank中登录的HSV-1 F株gpB基因序列比较,同源性达99.5%。 结论：利用PCR技术从HSV-1 SM44株基因组中扩增出编码HSV-1gpB去除N端部分信号肽序列（39 bp）的基因片断（2 673 bp）, 成功地构建了HSV-1基因疫苗pcDNA-gpB。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型Stocker株gD膜外区基因的克隆与序列测定

目的：为了克隆单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV－1）gD膜外区基因。方法：采用Vero细胞培养HSV－I Stocker株,并提取病毒DNA作为PCR模板。PCR扩增出的gD片段经EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ双酶切,插入质粒pB220相应位点,转化E.coliDH5α。重组质粒经PCR、酶切鉴定命名为pBV220-gD。对克隆的HSV－I Stocker株gD基因进行序列,并与其他HSV－Ⅰ,ⅡgD基因相应部分进行比较。结果：核苷酸序列同源性分别为99．77％、86．55％,氨基酸序列同源性分别为99．31％、88．28％。结论：SHV－Ⅰ gD基因的克隆为表达该基因,进一步研制重组抗原诊断试剂、研究亚单位疫苗及gD,gD受体的结构功能奠定了基础。     

ELISA法检测单纯疱疹病毒Ⅱ型特异性抗体的临床应用研究

目的 探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－２）感染的早期特异检测手段。方法 对５２例性病门诊的生殖器疱疹患者改良的ＥＬＩＳＡ方法进行了ＨＳＶ－ｇＤ２ＩｇＧ检测并同细胞分离方法进行对比观察。结果 病毒分离的阳性率为６９．２％,ＥＬＩＳＡ法检测抗体的阳性率６５％,两种方法检测结果差异无显著性。结论：ＥＬＩＳＡ法检测血清疱疹病毒ＩｇＧ抗体具有简便,快速,特异的优点,适合于临床大规模检测之有     

PCR-RFLP法对单纯疱疹病毒感染诊断和分型的研究

目的 建立单纯疱疹病毒的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测法,为生殖器疱疹的诊断及分型提供可靠而特异的方法。方法 以特异性引物法为对照,用一对单纯疱疹病毒外层通用引物扩增出长度为438bp的片断,并进行酶切以分型。结果 PCR-RFLP法可特异性检测出单纯疱疹病毒并进行分型,同特异性引物法比较。两种方法无显著性差异。结论 PCR-RFLP法是一种准确、特异的对单纯疱疹病毒感染进行诊断和分型的方法。     

单纯疱疹病毒Us3基因功能的研究进展

单纯疱疹病毒Us3基因编码为一个丝/苏蛋白激酶,作为一个附加基因,其产物Us3蛋白激酶(Us3PK)与介导病毒抗宿主细胞凋亡关系密切。Us3基因诱导的宿主细胞形态学变化与病毒在细胞间的传播能力密切相关,此为Us3基因的一个新功能,作者对此作一综述。     

干扰素治疗单疱病毒性角膜炎

【目的】探讨干扰素对单疱病毒性角膜炎的疗效。【方法】用干扰素给治疗组（30例）患者分别行结膜下、同侧耳前淋巴结区、同侧腋下淋巴结区注射与用聚肌胞对对照组（28例）患者行同样部位注射，进行疗效砒。【结果】治愈率：治疗组30例中，治愈26例，治愈率86．6％；对照组28例中，治愈18例，治愈率64．2％，两组差别有显著性（P〈0．05）。复发率：随访18～24个月，治疗组有效30例中，复发1例，复发率3．33％，对照组有效25例中，复发5例，复发率20．0％，两组差别有显著性（P〈0．05）。【结论】干扰素治疗单疱病毒性角膜炎具有治愈率高和复发率低的优点。     

结核病患者单纯疱疹病毒感染的检测及临床意义

目的了解结核病患者单纯疱疹病毒的感染情况,探讨其可能对结核病病情的影响。方法采用金标免疫斑点渗滤法分别检测51例肺结核患者和30例正常健康人血浆单纯疱疹病毒感染的IgM和IgG。结果肺结核患者组HsV—IgM的阳性率为88．24％与对照组（66．67％）相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;HSV-IgG的阳性率为80．39％,与对照组（70．00％）相比,差异无统计学意义（P〉0．05）;有肺炎表现者HSV-IgG的阳性率为61．11％,与无肺炎表现的患者组（90．91％）相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;经统计学处理,HSV的活动性感染与病程、分期、痰涂片阳性无相关性（P〉0．05）。结论肺结核患者存在较高的活动性单纯疱疹病毒感染,活动性单纯疱疹病毒感染与病情轻重有一定关系。     

大黄乙醇提取物对小鼠疱疹性脑炎的治疗作用

目的:研究中药大黄乙醇提取物对病毒性脑炎的治疗作用。方法:采用标准昆明鼠为动物模型,用单纯疱疹病毒I型(HSV-1)进行脑内局部接种,制成小鼠疱疹性脑炎模型,以无环鸟苷为阳性对照,用不同剂量的大黄乙醇提取物进行治疗。结果:大黄乙醇提取物可以显著提高疱疹性脑炎小鼠的存活率,延长平均存活时间,减轻脑组织的病理改变,明显消除脑内的病毒抗原,降低各个时期的病毒滴度。皮下注射给药3.3g/(kg·d)与4.9g/(kg·d)组效果优于无环鸟苷对照组。结论:中药大黄能有效地治疗由单纯疱疹病毒引起的脑炎,在体内有抗病毒作用,是一种有效的抗病毒中药,其在抗病毒领域的开发前景广阔。