核因子κB诱捕物寡核苷酸对肾小管上皮细胞炎症因子表达的影响

目的 研究核因子(NF)κB结合位点诱捕物寡核苷酸(NF—κBdecoyODN)对肾小管上皮细胞的NF-κB活性及下游炎症因子表达的影响。方法 (1)鱼精蛋白-脂质体法转染NF-κBdecoy ODN：将NF-κBdecoyODN与鱼精蛋白、脂质体混合，转染至TNF—α刺激培养的大鼠肾小管上皮细胞内，测定转染率。(2)凝胶电泳迟滞分析测定转染NF-κBdecoy ODN后细胞NF-κB活性。(3)RT—PCR方法检测转染NF-κB decoy ODN后细胞ET-1、iNOS、ICAM-1、VCAM-1以及MCP-1mRNA表达水平。结果 当 ／一比例为4时，鱼精蛋白-脂质体法转染率高达93．20％；转染NF-κB decoy ODN可抑制TNF—α激活的NF-κB活性，从而进一步抑制ET-1、iNOS、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的mRNA表达。结论 (1)鱼精蛋白-脂质体法是一种不受血清影响的高效率转染方法。(2)NF—κBdecoy ODN在体外通过抑制NF-κB活性，进而影响肾小管上皮细胞炎症因子的表达。     

转染核因子κB decoy寡核苷酸在肝癌耐药细胞株的定位及对其活性的影响

本研究我们通过阿霉素逐步诱导肝癌HepG2细胞，建立稳定表达MDR1的肝癌耐药细胞株HepG2／ADM，转染核因子(NF-κB)decoy寡核苷酸，观察NF-κB在肝癌耐药细胞株转染前后的动态变化。     

核因子κB反义寡核苷酸对转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下，核因子κB（NF-κB）反义寡核苷酸对体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2）转分化的影响。 方法 采用脂质体介导的方法将NF-κB反义寡核苷酸（AS-ODN）导入细胞，以TGF-β1（10 μg/L）刺激HK-2细胞24 h后，用RT-PCR方法检测细胞中NF-κB mRNA及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA表达，用荧光光谱法分析α-SMA蛋白的表达，并以倒置相差显微镜观察细胞转分化过程的形态变化。 结果 TGF-β1诱导24 h后，HK-2细胞中NF-κB mRNA的表达显著上调，为空白对照组的8倍以上（P < 0.01）。NF-κB反义寡核苷酸导入细胞后，可显著抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞的 NF-κB mRNA表达，比TGF-β1组减少75％（P < 0.05），同时，α-SMA mRNA和蛋白表达亦较TGF-β1组均明显下调（P < 0.05）。 结论 NF-κB反义寡核苷酸可抑制TGF-β1诱导肾小管上皮细胞NF-κB的表达，抑制肾小管上皮细胞转分化，可能有利于肾间质纤维化的防治。     

核因子-κB反义寡核苷酸对肝纤维化小鼠肝组织核因子-κB活性和病理改变的影响

目的 应用核因子(NF)-κB反义寡核苷酸(ASON)治疗肝纤维化小鼠模型,观察NF-κB p65 ASON对小鼠肝组织NF-κB活性和肝纤维化程度的影响,探讨NF-κB p65 ASON治疗肝纤维化的可能机制.方法 实验小鼠分组:正常组(8只)、肝纤维化模型组(8只)、反义寡核苷酸(NF-κB p65 ASON)治疗组(8只)、正义寡核苷酸(SON)治疗组(8只)、错义寡核苷酸(MSON)治疗组(8只)、NF-κBp65 ASON对照组(8只)、SON对照组(8只)和MSON对照组(8只);采用凝胶迁移率变动分析(EMSA)检测NF-κB DNA结合活性;病理切片(Masson染色)评价肝纤维化小鼠模型肝纤维化程度.结果 NF-κB p65 ASON治疗组小鼠肝组织NF-KB活性(12411.75±502.78)、肝纤维化病理积分(1.13±0.64)比模型组(16 346.88 ±449.05、2.88±0.64)明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).soN治疗组(16460.38±575.26、2.75±1.17)和MSON治疗组(15 959.25±746.27、3.00±0.53)的NF-κB活性、肝纤维化病理积分与模型组比较差异无统计学意义(P>0.01).结论 NF-κB p65 ASON能显著抑制小鼠肝组织的NF-κB活性,降低肝纤维化程度.     

核因子-κB靶向性寡核苷酸"圈套"策略对创伤性炎症大鼠肝脏损伤的作用

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)靶向性寡核苷酸(ODN)“圈套”策略对创伤性炎症大鼠肝脏损伤的作用。方法 Wistar大鼠96只，随机分成对照组、创伤性炎症组、“圈套”ODN组和变异“圈套”ODN组，各组动物分别于术后3、6、12、24、48和72h分批处死。运用凝胶迁移变动分析(EMSA)检测创伤性炎症术后肝脏组织NF-κB的活性及合成“圈套”ODN的体外竞争抑制试验。检测血清转氨酶水平，在光镜下观察肝细胞损伤程度，电镜下观察肝脏超微结构改变，以线粒体的肿胀程度作为肝细胞损伤的评价指标。结果 创伤性炎症后3h肝脏NF-κB的活性开始升高，12h达高峰，72h后基本恢复正常。“圈套”ODN在体外能有效地抑制NF-κB活性。血清ALT含量在伤后明显上升，于24h达高峰，肝细胞出现明显的水肿、变性和坏死，肝小叶结构破坏明显。“圈套”ODN治疗6h后，大鼠血清ALT水平明显降低，肝小叶结构损伤明显好转，线粒体的肿胀明显减轻。结论 NF-κB靶向性“圈套”ODN通过特异性抑制NF-κB活性，可以有效地减轻创伤性炎症大鼠肝脏结构和功能的损伤。     

大黄素对重症急性胰腺炎大鼠核因子-кB的影响

目的 观察大黄素对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠核因子-кB(NF-кB)的影响,探讨大黄素治疗SAP的作用机制.方法 胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠建立大鼠SAP模型.将雄性Wistar大鼠随机分为SAP模型组、大黄素干预组(E1组)及正常对照组(Sham组).观测各组不同时间点(注射牛磺胆酸钠后3、6、12 h)血清淀粉酶、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量,胰腺病理组织学评分,免疫组织化学方法 检测各组胰腺组织的核因子(NF)-кB的表达.结果 与SAP组比较,EI组各时间点(3、6、12 h)的病理学评分(13.41±2.14比18.42±3.14比15.89±1.98)、血清淀粉酶(U/L)(3634.2±247.8比4758.5±305.2比4687.8±345.8)、TNF-α(g/L)(2.24±0.47比2.87±0.87比2.76 ±0.82)和IL-6(g/L)(2.14±0.34比2.83±0.44比2.71±0.37)明显降低(P＜0.05),NFKB p65阳性表达率(0.31±0.06比0.44±0.09比0.33±0.08)下降(P＜0.05).各时间点SAP大鼠胰腺组织NF-κB p65的阳性率随血清TNF-α及IL-6含量变化.结论 大黄素可能通过胰腺组织NF-κB而调控血清炎症因子含量,以降低SAP大鼠血淀粉酶,发挥治疗作用.     

核因子κB圈套策略对膀胱癌细胞侵袭力的影响

目的 探讨核因子(NF)-κB环状哑铃型圈套寡核苷酸(CD-ODN)对膀胱癌NF-κB活性和细胞侵袭能力的影响以及有关的作用机制.方法 脂质体介导法瞬时转染CD-ODN及其突变体(CD-ODN-mut)入膀胱癌BIU87细胞株,荧光素酶报告基因的方法检测不同处理组NF-κB活性的改变;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western-blot检测尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的表达水平;重建基底膜试验检测细胞侵袭能力的变化.结果 转染CD-ODN后BIU87细胞株NF-κB活性被抑制,uPA的表达水平下降,细胞侵袭能力减弱,而转染CD-ODN-mut后无此作用.结论 NF-κB组成性活化可促进uPA的表达,从而导致膀胱癌细胞的侵袭和转移.而CD-ODN能有效的阻断这一通路,降低膀胱癌的侵袭潜能.     

核因子-кB靶向性寡核苷酸"圈套"策略对创伤性炎症大鼠肝脏TNF-α的作用

目的 探讨NF-κB靶向性寡核苷酸(ODN)“圈套”策略对创伤性炎症大鼠肝脏TNF-α的作用。方法 Wistar大鼠96只，随机分成对照组、创伤性炎症组、“圈套”ODN组和变异“圈套”ODN组。运用凝胶阻滞实验检测创伤性炎症术后肝脏组织NF-κB的活性及合成“圈套”ODN的体外竞争抑制试验，用RT-PCR检测大鼠肝脏组织TNF-α mRNA水平，ELISA检测大鼠肝脏组织TNF-α的蛋白水平。结果 大鼠创伤性炎症术后3h肝脏NF-κB的活性开始升高，术后12h达高峰。肝脏组织TNF—α mRNA水平和蛋白水平也明显上升，与NF-κB的活性改变一致，“圈套”ODN在体外能有效地抑制NF-κB活性。“圈套”ODN治疗后大鼠肝脏组织TNF—α的表达明显下降，肝脏功能明显好转，而变异“圈套”ODN没有效果。结论 NF-κB靶向性“圈套”ODN通过特异性抑制NF—κB活性，可以有效地抑制创伤性炎症大鼠肝脏炎症介质TNF—α的释放，从而改善肝脏功能。     

脂质体介导NF-κB decoy ODN对重症急性胰腺炎大鼠肺炎症因子mRNA表达和肺损伤的影响

目的 探讨脂质体（liposome）介导转录因子NF—κB诱捕物（decoy）寡聚脱氧核苷酸（oligodeoxynucleotide，ODN）对重症急性胰腺炎SD大鼠肺部NF-κB活性及受其调控炎症基因mRNA表达和肺损伤的影响。方法 以牛磺胆酸钠（STC）诱导SD大鼠建立重症急性胰腺炎模型，以假手术组为对照组，于建模后1h分别静脉注射裸ODN、脂质体／decoy ODN复合物、脂质体／scrambled ODN复合物和生理盐水，注射4h后应用电泳迁移率变动（EMSA）分析NF-κB的活性，利用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测肺组织ICAM-1、IL-1α、IL-2、TNF—α、VCAM-1mRNA表达，同时检测氧分压、肺组织湿／干重比率和肺组织髓过氧化物酶（MPO）。结果 EMSA显示脂质体／decoy ODN复合物组NF—κB活性明显低于生理盐水组、脂质体／scrambled ODN复合物组和裸ODN组（P〈0.05），RT—PCR显示脂质体／decoy ODN复合物组ICAM-1、IL-1α、IL-2、TNF—α、VCAM-1mRNA表达小于生理盐水组、脂质体/scrambled ODN复合物组和裸ODN组（P〈0．05）。与生理盐水组、脂质体／scrambled ODN复合物组和裸ODN组相比，脂质体／decoy ODN复合物组动脉血氧分压升高，肺组织湿／干重比率和肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性降低（P〈0．05）、结论 NF—κB decoy ODN可特异性抑制肺NF-κB活性及其调控的炎症因子ICAM-1、IL—1α、IL-2、TNF-α、VCAM-1mRNA的表达，减轻肺损害。     

烧伤血清对内皮细胞核因子-κB核移位的影响

目的　了解烧伤血清对内皮细胞核因子 κB (NF κB)异二聚体 p5 0 /p6 5核移位 ,以及核抑制因子κB(IκB)α降解的影响 ,进一步探讨烧伤血清对内皮细胞的活化作用。方法　采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株ECV 30 4 ,分别用正常人血清、烧伤患者血清、烧伤患者血清 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐 (PDTC)刺激内皮细胞 ,并以正常培养的内皮细胞为对照。应用激光共聚焦显微镜观察刺激 30、6 0、12 0、4 80min后内皮细胞 p5 0 /p6 5核移位情况 ,采用Western印迹法检测刺激 30、6 0、90、12 0min后内皮细胞IκBα蛋白降解的情况。　结果　与对照组比较 ,烧伤血清刺激内皮细胞 30min后 ,p5 0、p6 5即发生核移位 ,30～ 6 0min达高峰 ,2h后恢复至刺激前状态 ;而烧伤血清刺激 30min后 ,IκBα发生降解 (P <0 .0 1) ,刺激 4 5～ 6 0min后最为明显 ,2h后表达逐渐恢复。PDTC能有效抑制烧伤血清作用 30、6 0min后 ,p5 0、p6 5的核移位和IκBα降解。 　结论　烧伤血清可导致内皮细胞NF κBp5 0、p6 5发生核移位 ,并使IκBα降解 ,进而活化NF κB ,诱导内皮细胞分泌细胞因子。PDTC对这一系列变化可能有抑制作用     

核因子-кB诱骗寡核苷酸增强阿霉素对肝癌耐药细胞化疗敏感性的机制

目的研究核因子(NF)-кB诱骗(decoy)寡核苷酸对肝癌耐药细胞株HepG2／阿霉素(ADM)化疗敏感性的影响及其内在机制。方法培养肝癌耐药细胞株,转染FITC标记的NF-кB decoy寡核苷酸,通过荧光显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位的观察,凝胶迁移率实验检测转染前后NF-кB结合活性的变化,加入ADM,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,采用流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡,观察转染NF-кB decoy寡核苷酸后肝癌耐药细胞对化疗药物的敏感性变化,DEVD-pNA降解法检测Caspase-3的活性变化,Western blot检测bcl-2蛋白表达的变化。结果转染荧光标记的NF-кB decoy寡核苷酸1 h,倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜显示定位于细胞核内,凝胶阻滞分析实验(EMSA)分析示NF-кB decoy寡核苷酸能够降低NF-кB核内结合,加入化疗ADM(0．1 mg/L)后,ADM作用24 h后出现细胞凋亡,流式细胞术、TUNEL法检测NF-кB decoy寡核苷酸转染HepG2／ADM细胞的凋亡,与对照组相比,凋亡指数增加,Caspase-3的活性增加,bcl-2的表达下调。结论NF-кB decoy寡核苷酸转染肝癌耐药细胞株HepG2／ADM后,能够抑制NF-кB的激活,Caspase-3活性增加和bcl-2的表达下调是其增加化疗药物的敏感性的可能机制。     

核因子κB活化对急性坏死性胰腺炎肺泡巨噬细胞炎症介质表达的影响及意义

目的探讨核因子κB（NF-κB）活化对急性坏死性胰腺炎（ANP）肺泡巨噬细胞（AM）分泌炎症介质的影响和对肺损伤的影响。方法30只成年SD大鼠随机分为正常对照组、ANP后1、3、6、12h组，每组6只。逆行性胰胆管注射5％牛磺酸钠建立ANP大鼠模型，正常对照组大鼠自胆胰管内逆行注入生理盐水。经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞，检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶（MPO）水平、肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNFα），一氧化氮（N0）水平，测定肺泡巨噬细胞TNFαmRNA、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达情况。行肺组织的病理学检查并评分，同时行免疫组化检查肺组织中NF-κB的表达。结果正常肺组织较少见到NFκB活化的AM，ANP各组肺组织均可见到NF-κB活化，并且随时间进展NF-κB逐渐由细胞质更多进入细胞核。ANP大鼠肺损伤随着病情进展而逐渐加重，肺组织MPO及支气管肺泡灌洗液中蛋白含量逐渐升高；肺泡巨噬细胞分泌TNFα，NO水平逐渐升高，至6h达到高峰，12h又回落。ANP发生后，肺泡巨噬细胞TNFαmRNA、iNOSmRNA的表达情况与TNFα，NO的变化趋势相似。ANP大鼠各组指标与正常对照组相比均有统计学差异（P〈0．05）。结论ANP形成后，NF-κB发生活化，使AM炎症介质表达增强，并促进肺损伤。     

烧伤患者血清对单核细胞核因子κB核移位的影响

目的　观察烧伤患者血清 (以下称烧伤血清 )对单核细胞核因子κB(NF κB)异二聚体p5 0、p6 5核移位及核抑制因子κBα(IκBα)降解的影响 ,进一步探讨烧伤血清对单核细胞活化的作用。　方法　收集体外培养的人外周血单核细胞 (PBMC),分别用正常人血清、烧伤血清、烧伤血清 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐 (PDTC)刺激PBMC(依次分为对照组、烧伤血清组、PDTC组 ) ,应用激光共聚焦显微镜观察血清刺激 30、6 0、12 0、4 80min后PBMC的p5 0、p6 5核移位 ;采用Western印迹法检测刺激 30、6 0、90、12 0min时PBMC的IκBα蛋白降解情况。　结果　与对照组比较 ,刺激 30min后烧伤血清组PBMC中p5 0、p6 5即发生核移位 ,30～ 6 0min达高峰 ,12 0min后核内聚集减少 ,回复至刺激前状态。刺激 30min后烧伤血清组PBMCIκBα发生降解 ,刺激 6 0min后含量几乎为零 ,与对照组比较差异有非常显著性意义 (P <0.0 1),12 0min后表达水平逐渐恢复。PDTC组PBMCIκBα降解 [刺激 6 0min后含量为 (11 5 7± 1.98)× 10 4积分灰度值 ]及p5 0、p6 5核移位程度比烧伤血清组轻 (P <0 0 1)。　 结论　烧伤血清可导致PBMCIκBα降解和 p5 0、p6 5核移位 ,进而活化NF κB,诱导PBMC分泌细胞因子。PDTC对此变化有抑制作用     

核因子-κB在狼疮肾炎肾组织中的表达及其意义

目的了解狼疮肾炎(LN)肾组织中核因子(NP)-κB的表达并探讨其与LN肾脏病理改变和肾功能损害的关系.方法以NF-κB亚基P65单抗为抗体,采用微波免疫组织化学染色(APAAP法)检测LN肾组织NF-κB表达,并进一步分析其与肾小球内C-myc蛋白表达、LN活动指数、肾脏病理和功能损害的关系.结果狼疮肾炎肾组织中NF-κB表达较正常肾组织显著增高,以WHOⅣ型为最显著.NF-κB在肾小球和肾小管均有表达,但小管表达更显著.LN肾组织NF-κB阳性细胞数与肾小球C-myc蛋白表达量、肾组织活动指数、肾脏病理改变和肾功能损害显著相关.结论NF-κB可能参与了LN的发病机制,肾组织中NF-κB的表达可作为反映狼疮肾组织活动病变和进行性肾损害的参考指标.     

核因子-κB与病理性疼痛关系的研究进展

核转录因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)是一种重要的转录因子,近年来研究表明其不仅在免疫反应、炎症及细胞凋亡中起着重要作用.在病理性疼痛的发生发展过程中亦至关重要.现就NF-κB在病理性疼痛发生发展中作用的研究进展,对其详细的作用机制可能为疼痛性疾病的治疗提供一个良好的前景作一综述.     

RelA反义寡核苷酸对胰腺癌细胞增殖活性的影响

目的 研究核因子-κBp65(RelA)反义寡核苷酸对胰腺癌细胞株Capan-2增殖活性的影响。方法 噻唑蓝(MTT)还原法、克隆形成试验观察RelA反义寡核苷酸对细胞的生长抑制,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Rel AmRNA变化,细胞免疫组织化学检测RelA蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期。结果 RelA反义寡核苷酸作用后,细胞生长抑制率可达43.5％,克隆形成率下降(47.3±8.2 vs 26.7±5.5,P<0.05),RelA mRNA表达降低,RelA蛋白表达下降(70.8±6.5 vs 49.5±6.0,P<0.01),G_0/G_1期细胞由56.54％增至82.83％,S期细胞由39.06％减至11.29％。结论 RelA反义寡核苷酸能够抑制胰腺癌细胞的生长。     

核因子－κB活化在急性胰腺炎发病中的作用

核因子 κＢ(ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ ,ＮＦκＢ)是一类普遍存在、能与多种基因的启动子或增强子κＢ位点发生特异性结合并启动基因转录的蛋白质的总称。现已发现与炎症和免疫反应有关的许多细胞因子、粘附分子基因含κＢ位点 ,ＮＦ κＢ能根据所在细胞的不同 ,通过不同的机制 ,参与这些基因的转录调节[1,2 ] 。急性胰腺炎 (ａｃｕｔｅｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ,ＡＰ)的治疗仍是外科一大难题 ,因其发病机理不甚清楚 ,不能进行针对性治疗 ,所以临床治疗一直无突破性进展。重症ＡＰ有较高的病死率 ,在 2 0 %左右 ,ＡＲＤＳ及…     

褪黑素对烧伤脓毒症大鼠肝脏核因子-κB表达的影响

本实验旨在观察褪黑素对烧伤脓毒症大鼠肝脏核因子（NF）-κB表达的影响，为临床防治烧伤脓毒症肝损伤提供依据。[第一段]     

核因子-κB诱骗寡核苷酸增强阿霉素对肝癌耐药细胞化疗敏感性的机制

目的 研究核因子（NF）-κB诱骗（decoy）寡核苷酸对肝癌耐药细胞株HepG2／阿霉素（ADM）化疗敏感性的影响及其内在机制。方法培养肝癌耐药细胞株，转染FITC标记的NF-κB decoy寡核苷酸，通过荧光显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位的观察，凝胶迁移率实验检测转染前后NF-κB结合活性的变化，加入ADM，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖，采用流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡，观察转染NF-κB decoy寡核苷酸后肝癌耐药细胞对化疗药物的敏感性变化，DEVD-pNA降解法检测Caspase-3的活性变化，Western blot检测bcl-2蛋白表达的变化。结果转染荧光标记的NF-κB decoy寡核苷酸1h，倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜显示定位于细胞核内，凝胶阻滞分析实验（EMSA）分析示NF-κB decoy寡核苷酸能够降低NF-κB核内结合，加入化疗ADM（0.1mg／L）后，ADM作用24h后出现细胞凋亡，流式细胞术、TUNEL法检测NF-κBdecoy寡核苷酸转染HepG2／ADM细胞的凋亡，与对照组相比，凋亡指数增加，Caspase-3的活性增加，bcl-2的表达下调。结论 NF-κB decoy寡核苷酸转染肝癌耐药细胞株HepG2／ADM后，能够抑制NF-κB的激活，Caspase-3活性增加和bcl-2的表达下调是其增加化疗药物的敏感性的可能机制。