脱氧核酶对鼻咽癌细胞端粒酶活性的抑制作用

目的探讨脱氧核酶对端粒酶RNA组分的切割作用及对鼻咽癌端粒酶活性的抑制作用。方法针对端粒酶RNA组分(hTR)的核苷酸序列,合成“10～23”型脱氧核酶及其类似物,提取总RNA在体外切割hTRmRNA;转染鼻咽癌细胞后,用RTPCR扩增hTR基因片段,用PCRELISA法测定端粒酶活性。结果未经修饰的脱氧核酶DzT和在DzT的3′末端添加倒位连接T碱基的脱氧核酶DzTi在体外能够有效地切割hTRmRNA;在转染鼻咽癌细胞后,DzTi比DzT对hTRmRNA表现出更强的切割作用,DzTi能够显著地降低鼻咽癌细胞端粒酶活性(P<0.01);但DzTi和DzT转染对鼻咽癌细胞的生长均没有明显的影响(P>0.05)。DzT和DzTi的催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzT’和DzTi’在胞外和胞内均不表现对hTRmRNA的切割作用。结论人工合成的脱氧核酶能够高效特异地切割端粒酶RNA组分,并降低鼻咽癌细胞的端粒酶活性。作为一种新发现的催化性核酸,脱氧核酶在肿瘤的基因治疗领域中将具有极其重要的应用价值。     

端粒酶活性检测对急性髓细胞白血病的临床意义

目的 研究急性髓细胞白血病（AML）的端粒酶活性表达情况,探讨端粒酶活性检测对AML的临床意义。方法 选取不同亚型AML病人74例,以良性血液病和骨髓形态学正常的非血液病病人作对照,采用改良TRAP-银染法及亚利恩凝胶成像系统分析检测其骨髓标本内的端粒酶活性水平并随访。结果 良性血液病病人端粒酶阴性或低水平表达;AML初诊时端粒酶活性显著升高（F=36．76,q=14．65,P〈0．01）．完全缓解后活性下降（q=10．75,P〈0．01）,复发时端粒酶活性又升高（q=7．61,P〈0．01）。同时端粒酶活性与预后相关,活性高者往往预后较差。结论 端粒酶活性与AML的发生、发展密切相关,可作为AML恶性克隆增殖的分子标志。     

原癌基因c-myc和白血病

近年研究表明,白血病的发生与细胞原癌基因的激活和抑癌基因的缺失或突变有着密切的关系。其中原癌基因c-myc是目前研究最为广泛的癌基因之一,其基因扩增和过度表达,可促进细胞增殖、抑制细胞分化。在某些因素引起细胞增殖停滞时,c-myc基因的持续表达还可促进细胞凋亡。并且发现c-myc在白血病中高度表达与白血病的发生、发展及预后有关。笔者就c-myc基因的结构、功能及其在白血病中的表达与意义作一综述。1.c-myc基因的结构和功能myc基因家族成员有3个:cell-myc(c-myc)、human-myc(N-myc)和myc-related-gene(L-myc)。它们具有类似的结构和…     

脱氧核酶对端粒酶RNA的切割和乳腺癌细胞凋亡相关基因表达的作用

目的 探讨脱氧核酶对端粒酶RNA组分(hTR)的切割作用及对人乳腺癌细胞凋亡相关基因bcl-2和bax表达的影响。方法 针对hTR基因的核苷酸序列,合成“10~23”型脱氧核酶及其类似物,提取总RNA在体外切割hTRRNA;转染乳腺细胞后,用RT-PCR扩增hTR基因片段,用PCR-ELISA法测定端粒酶活性,用RT-PCR和荧光免疫测定凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果 未经修饰的脱氧核酶DzT和在DzT的3’末段添加倒位连接T碱基的脱氧核酶DzTi在体外能够有效地切割hTRRNA;在转染乳腺癌细胞后,DzTi比DzT对hTRRNA表现出更强的切割作用,DzTi能够显著地降低乳腺癌细胞端粒酶活性(P<0.05),但对乳腺癌细胞的生长和细胞凋亡相关基因bcl-2和bax基因没有明显的影响(P>0.05)。DzT和DzTi的催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzT’和DzTi’在胞外和胞内均不表现对hTRRNA的切割作用。结论 人工合成的脱氧核酶确实能够高效特异地切割端粒酶hTRRNA,并降低乳腺癌细胞的端粒酶活性。作为一种新发现的催化性核酸,脱氧核酶在肿瘤的基因治疗领域中可能具有极其重要的应用价值。     

维甲类化合物Ro13—7410对白血病细胞端粒酶活性的抑制

为深入探讨第三代维甲类化合物Ｒｏ１３－７４１０诱导白血病细胞凋亡和分化的机制。本文采用ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ－ＰＡＧＥ两种方法观察了ｏ１３－７４１０对ＨＬ－６０细胞端粒酶活性的影响。实验结果显示在Ｒｏ１３－７４１０诱导ＨＬ－６０细胞亡和分化的过程中端粒酶活性逐渐下降，结论：Ｒｏ１３－７４１０能明显抑制ＨＬ－６０细胞端粒酶活性，且可能与白血病细胞的增殖抑制和诱导凋亡及分化作用有关。     

儿童急性白血病骨髓端粒酶活性异常的临床意义

目的研究儿童急性白血病(AL)骨髓端粒酶活性变化特点,探讨端粒酶活性异常的临床意义.方法用TRAPEZETM试剂盒测定AL患儿骨髓单个核细胞端粒酶活性,分析端粒酶活性水平异常与临床指标间的相关性.结果儿童AL骨髓端粒酶活性较正常对照高6倍;存在细胞遗传学异常者骨髓端粒酶活性高于无细胞遗传学异常者(P＜0.05);初发急性非淋巴细胞白血病(ANLL)中骨髓端粒酶活性与发病时外周血白细胞计数呈显著线性正相关(r=0.70,P＜0.05);ANLL中,高端粒酶活性组出现复发或死亡的机率高于低活性组;AL完全缓解时骨髓端粒酶活性降至正常范围,复发时骨髓端粒酶活性再度升高.结论儿童AL时骨髓端粒酶活性升高,完全缓解时降至正常;端粒酶活性与AL诸临床指标的相关性提示其作为AL危险因素的可能性.     

急性白血病不同病期端粒酶活性及其预后意义初探

目的：观察急性白血病（AL）不同病期端粒酶活性及其与AL预后的关系。方法：用端粒重复扩增酶联免疫法进行端粒酶活性半定量测定。结果：（1）初发AL端粒酶活性与首次完全缓解（CR）期无显著差异而与CR期超3个月者差异显著；（2）CR3个月后持续高端粒酶活性提示缓解期短，预后不佳。结论：CR3个月后端粒酶活性可作为预后判定指标之一，而发病前端端酶活性与预后无关。     

放疗诱导宫颈癌细胞凋亡与c-myc蛋白表达

目的 :探讨在放射治疗前、中宫颈癌细胞凋亡与c myc蛋白表达的关系 .方法 :对 4 8例宫颈癌患者分别于放疗前、放疗 2 0Gy/ 2wk取活检 ,石蜡包埋 .应用原位缺口末端标记法 (TUNEL)检测细胞凋亡 ,应用免疫组化SP法对c myc蛋白进行检测 .结果 :4 8例宫颈癌患者放疗前、放疗 2 0Gy ,凋亡阳性率分别为 6 7%和 85 % ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;宫颈鳞癌患者病理分级增高 ,临床分期越晚凋亡阳性率均有降低 ,但无显著性差异 .放疗前c myc蛋白阳性表达率为 86 % ,放疗2 0Gy其表达率为 4 3% ,显著性降低 (P <0 .0 1 ) ;放疗 2 0Gy,c myc蛋白表达与凋亡有明显相关 .结论 :c myc蛋白表达与放射诱导宫颈癌细胞凋亡有关     

动态观察端粒酶活性在儿童急性淋巴细胞白血病预后判断中的意义

目的 :研究儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)的治疗及其相关预后因素。　方法 :以多药联合化疗方案进行诱导缓解和缓解后治疗 ,以诱导治疗第 1 4天的骨髓原始淋巴细胞比例作为治疗反应敏感性指标 ,以端粒重复序列扩增 银染色技术检测端粒酶活性作为微小残留白血病指标。　结果 :90 % (1 9/ 2 1 )的儿童ALL获完全缓解(CR)。在中位随访时间 5 5 (1 2～ 1 2 0 )个月内 ,6例复发 ,7例已连续完全缓解 (CCR) 2 4～ 5 4个月 ,现仍在连续治疗中 ;6例已停止治疗 1 8～ 6 0个月。全组患儿 5年无复发生存率为 6 5 .5 %。诱导治疗第 1 4天骨髓检查分级为M1(原始细胞为 <5 % )、M2 (原始细胞 5 %～ 2 5 % )和M3 (原始细胞 >2 5 % )型者分别为 6 7%、1 4 %和 1 9%。 1 4例M1 型ALL的 5年无复发生存率明显高于 7例M2 和M3 型 (分别为 84 .6 %和 1 5 .8% ,P <0 .0 1 )。在CR后端粒酶持续阳性或在治疗期间由阴性转为阳性的ALL复发率明显增加。　结论 :诱导治疗第 1 4天骨髓检查结果是判断ALL长期存活的重要预后因素 ;不同治疗阶段检测骨髓细胞端粒酶活性可作为微小残留白血病指标     

端粒酶的义寡核苷酸抑制肺癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒粒酶反义寡核苷酸对肺癌细胞端粒酶活性的抑制作用.方法脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸转染A549肺腺癌细胞株,采用TRAP-PCR-ELIsA法半定量检测转染后肺腺癌细胞端粒酶活性,观察它们的变化结果端粒酶反义寡核苷酸转染A549细胞72h后,A549细胞端粒酶活性明显下调.结论端粒酶反义寡核苷酸可以有效抑制肺腺癌细胞端粒酶活性.     

川芎嗪对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨川芎嗪对K562细胞端粒酶活性及凋亡的影响,进一步研究川芎嗪抗白血病作用的分子机制。方法：用光学显微镜及透射电镜观察经川芎嗪作用后K562细胞具有的凋亡形态学改变,采用流式细胞仪检测Fas蛋白的表达;采用多聚酶链式反应酶联免疫测定法（PCR—ELIsA）检测白血病细胞端粒酶活性。结果：川芎嗪能抑制K562细胞端粒酶活性,随药物浓度增加和利用时间的延长,其抑制作用增强,并能诱导K562细胞凋亡,使Fas蛋白水平上调。结论：川芎嗪能显著抑制K562细胞端粒酶活性,其作用可能与诱导细胞凋亡有关。在此过程中,Fas也可能参与了细胞凋亡的调节。     

RNAi靶向人端粒酶逆转录酶对人肝癌细胞的生长抑制作用

目的 利用RNAi技术降低人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达,抑制其活性,研究其对人肝癌细胞的增殖和凋亡影响.方法 构建针对hTERT基因的siRNA真核表达载体pLXSN-EGFP-U6-siTERT,制备靶向hTERT的重组逆转录病毒;用重组逆转录病毒感染HepG2人肝癌细胞,以TRAP法检测端粒酶活性变化;流式细胞仅检测细胞凋亡率;MTT法检测肿瘤细胞生长抑制情况.结果 成功制备出hTERT siRNA逆转录病毒表达载体;重组病毒感染HepG2细胞24、48、72 h后端粒酶活性分别下降了23.84%、58.03%和85.01%(P＜0.05);感染后24 h细胞凋亡率29.05%;MTT实验结果显示肿瘤生长受到抑制,并存在一定量效和时效关系.结论 hTERT siRNA能特异性使hTERT基因表达抑制,端粒酶活性下降,肝癌细胞增殖受到抑制.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对胃癌细胞端粒酶活性的抑制作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对SGC－7901胃癌细胞端粒酶活性的影响。方法 用不同浓度的EGCG处理7901细胞,采用MTT法和PCR－ELISA法测定增殖抑制率和端料酶活性,用RT－PCR法测定端粒酶亚单位hTR、TP1、hEST2／hTRT和c-myc cRNA的表达。结果 EGCG在100μmol／L以下浓度对7901细胞增殖无明显抑制作用,而在200μmol/L以上浓度时对7901细胞增殖有明显的抑制作用,其24h和48hIC50分别为27．4μmol／L和19．5μmol／L。EGCG处理7901处理7901细胞能显著抑制其hEST2／hTRT和c-mycmRNA表达,且抑制程度与EGCG剂量有关,但对hTRRNA和TP1mRNA表达无明显影响。结论 EGCG在非细胞毒性剂量时就能有效地抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,此可能是其防癌抗癌的机制之一。     

三氧化二砷对HL-60细胞端粒酶活性表达的抑制作用

目的:探讨不同浓度的三氧化二砷(As2O3 )与HL-60细胞共反应不同时间后对其端粒酶活性表达的抑制作用.方法:采用端粒重复序列扩增(TRAP)-银染法检测HL-60细胞的端粒酶活性,并经Smart view生物电泳图像分析系统扫描分析.结果:浓度分别为0.1 μmol/L、1.0 μmol/L、5.0 μmol/L的As2O3 与HL-60细胞共培养3天,HL-60细胞相对端粒酶活性由97.83%下降至9.62%,且具有剂量依赖性和时间依赖性.结论:As2O3可有效抑制HL-60细胞的端粒酶活性.     

胡桃醌对白血病细胞增殖的抑制作用

目的: 探讨胡桃醌对白血病细胞增殖的抑制作用,阐明胡桃醌抗白血病的机制。方法: 体外培养人白血病K562、Jurkat、U937、U266及NB4细胞株,按不同处理因素分组：调零组,含有培养基、MTT和三联溶解液;空白对照组,含有各种人白血病细胞、药物溶解介质、培养液、MTT 和三联溶解液;实验组,分别采用不同浓度（终浓度为0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00和16.00 mg/L）的胡桃醌作用各种细胞株。MTT比色法检测胡桃醌对白血病细胞的增殖抑制作用。流式细胞术测定不同浓度胡桃醌对K562细胞株凋亡的影响。结果: 胡桃醌对白血病K562、Jurkat、U937、U266及NB4细胞株增殖均有较强的抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)(48 h)分别为3.87、1.13、4.48、1.87和4.67 mg/L。其中胡桃醌对Jurkat和U266细胞的抑制效果最为明显（P<0.05）,胡桃醌对其他3个白血病细胞株的IC50值均<40 mg/L,且胡桃醌对这5种细胞株增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性。流式细胞术检测显示,胡桃醌可诱导K562细胞凋亡,1、2、4、8和16 mg/L胡桃醌作用6 h,K562细胞凋亡率分别为(4.54±0.6) %、(11.5 4±0.6) %、(28.7±0.3) % 、(45.0±1.2) %和(76.1±1.4) %。结论: 胡桃醌可抑制多种白血病细胞株增殖,其机制可能与促进白血病细胞凋亡相关。     

苦参碱诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的 研究苦参碱对人胃癌细胞诱导凋亡作用及端粒酶活性变化。方法苦参碱处理人胃癌细胞株SGC-7901后，用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应，显微镜下观察胃癌细胞形态变化，应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期和凋亡，用PCR-ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果不同浓度的苦参碱对SGC-7901有明显抑制作用，且呈时间依赖性及剂量依赖性，形态学观察也发现大量神经细胞的染色质凝聚，核碎裂，凋亡小体产生，细胞即出现明显的凋亡形态特征，FCM检测结果显示苦参碱作用后，G0／G1期细胞比例增高，S期、G2／M期细胞比例下降，苦参碱在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调，且随苦参碱浓度增大和时间延长，抑制作用逐渐增强。结论苦参碱对人胃癌细胞具有明显抑制作用，诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一。     

hTR反义寡核苷酸对急性白血病原代细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的　探讨端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸 (ASODN)对急性白血病 (AL)原代细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法　应用与人hTR起始密码子互补的硫代ASODN处理AL原代细胞 ,用台盼蓝拒染的方法计数活细胞 ,用端粒酶重复扩增分析 (TRAP) -PCR -ELISA检测法观察端粒酶活性的变化 ,用Giemsa染色、Hoechst332 5 8 PI双染荧光显微镜检查及流式细胞仪检测凋亡细胞的发生。结果　经hTR -ASODN作用后 ,AL原代细胞端粒酶活性明显受到抑制 ,并与ASODN的浓度和处理时间相关 ,10 μmol/LASODN在作用 72h时端粒酶活性为( 0 0 95± 0 0 6 ) ,较细胞对照组 ( 1 15 4± 0 15 )下调明显 (P <0 0 1) ;在作用第 5天经荧光显微镜可观察到ASODN组细胞凋亡形态学变化。流式细胞仪检测到其凋亡率为 ( 31 72± 8 6 4 ) ,与细胞对照组的凋亡率 ( 6 33± 0 91)比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　hTR -ASODN可明显抑制AL原代细胞端粒酶活性并诱导其凋亡 ,hTR可能成为白血病基因治疗新靶点     

三氧化二砷对Hela细胞hTERTmRNA表达的调节和对端粒酶活性的影响

目的：观察三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌细胞(Hela细胞)端粒酶活性及端粒酶逆转录酶(hTERTmRNA)表达的影响。方法：以2μmoL／L的As2O3作用于人宫颈癌Hela细胞，在不同时间点用MTT法检测Hela细胞活力的变化，用流式细胞仪检测细胞周期的变化，用RT-PCR法检测hTERTmRNA表达的变化，用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性的变化。结果：随着As2O3作用时间的延长，Hela细胞的活力逐渐降低，G0／G1期细胞所占比例升高，S期细胞所占比例减少，hTERTmRNA表达水平逐渐降低，端粒酶活性逐渐下降。结论：As2O3可引起Hela细胞周期阻滞，hTERTmRNA的表达水平下调，端粒酶活性降低。     

微R-181a对人白血病K562细胞株的抑制作用及其机制的初步探讨

目的 探讨miR-181a对白血病K562细胞生长的抑制作用及其机制。方法 利用Oligofectamine脂质体法将化学合成的miR-181a转染K562细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和台盼蓝拒染法检测其对K562生长抑制的作用，结合基因芯片技术检测miR-181a对K562细胞基因表达谱的影响，筛选肿瘤相关差异基因。结果 MTT法和台盼蓝拒染法结果显示，转染后各时间点转染组K562细胞的生长均受到了明显地抑制。瑞氏一吉姆萨染色显示，转染组细胞表现出典型的生长抑制的变化。基因芯片筛出肿瘤相关差异基因30个，其中20个表达下调，10个表达上调。结论 miR-181a可能通过增强抑癌基因的表达，削弱癌基因的表达，从而抑制白血病细胞的增殖和生长。因此。其抗癌效应可应用于肿瘤的治疗。