13种培养基对鼠疫菌药敏试验影响观察

药敏试验对培养基的要求比较严格 ,Kiring-Bauer方法选用 Mulllleer- Hinton培养基 [1] (以下简称MH培养基 ) ,该培养基在药敏试验中广为应用 ,被列为专用培养基。鼠疫菌虽在普通培养基上生长良好 ,但常用的培养基为赫金格尔琼脂、肉浸液琼脂 ,为了明确普通培养基可否用于鼠疫菌的药敏试验 ,我们对不同的普通培养基与 MH培养基进行了比较 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1.1　培养基 :本次试验选用四类培养基 ,其中赫金格尔类包括赫金格尔琼脂、赫金格尔溶血、赫金格尔龙胆紫溶血、赫金格尔亚硫酸钠、赫金格尔干燥 99- 1、赫金格尔干…     

两种鼠疫菌培养基现场应用效果评价

在前文中 [1 ] ,我们报道了六种鼠疫菌培养基筛选试验的研究结果。以胰酶消化液兔溶血培基为对照基 ,市售营养琼脂培基和胰蛋白月示为主要成分自制的五种培基 ,鼠疫菌在这些培基上生长均良好 ,并具鼠疫菌特点的典型菌落。其中营养琼脂培基和胰蛋白月示两种培基操作简便、经济 ,便于基层使用和质控 [1 ]。为验证所筛选出的这两种培基在鼠疫现疫区分离鼠疫菌的效果 ,于 2 0 0 0年 9月在临沧县凤翔镇及蚂蚁堆乡有动物鼠疫流行并波及到人间的现场作了以上两种培养基和对照培养基应用效果的比较 ,结果如下。1　材料和方法1 .1　试剂 :K2 HPO4,1…     

检测鼠疫菌培养基的质量控制

鼠疫是人兽共患的烈性传染病。鼠疫疫源地证实,鼠疫疫情的判定是以分离到鼠疫菌为依据^[1],而鼠疫菌分离的主要环节是培养基和基础液赫金格尔消化液的质量控制。本文对其制备、贮存、性能测试、影响因素、注意事项等方面应采取的质量控制进行讨论。     

鼠疫菌对链霉素药敏试验的质量控制研究

鼠疫是众所周知的甲类烈性传染病,它发病急、传播快、病死率高,严重威胁人类生命,造成社会动荡,妨碍经济发展等。链霉素是目前广泛用于治疗鼠疫患者的首选药物,长期以来,在临床治疗中起着主导作用。但是,伴随着新型抗菌药物的逐年增加和鼠疫菌耐药株的发现,临床治疗鼠疫则需更多地依靠药敏试验指导选择用药。鉴于鼠疫领域,目前尚无统一规范的药域实验方法,欲使实验方法标准化,必须了解实验因素影响结果的程度,从而采取必要的控制措施,固定实验条件,以建立统一的方法。为此,我们对几种主要实验因素做了定量的研究。本文介绍这…     

一种分离鼠疫菌的指示性选择培养基的实验报告

从腐败的啮齿动物(特别是自毙鼠)、土壤、粪便、蚤体内以及动物肠内容物等中欲检出鼠疫菌,往往检出率较低,如果用一种新的指示性培养基就能较好地解决这个问题,笔者就此做了试验,结果如下。1 材料与方法1.1 试剂 进口蛋白胨、酵母侵膏粉、甘露醇、去氧胆酸钠、新生霉素、K_2HPO_4,亚硫酸钠。1.2 被试菌株 鼠疫EV菌、鼠伤寒、假结核菌、大肠杆菌V_(517)     

选择培养基分离鼠疫菌的实验研究

开展鼠疫监测以来一直使用营养琼脂培养基、赫氏培养基和龙胆紫血液培养基分离培养鼠疫菌,这些培养基的缺点是选择性差,所有营养条件要求不高的细菌均可生长,鼠疫菌菌落特征不典型,常常与一些杂菌菌落难以辨认。为此,我们选择国际上认可的耶氏菌选择培养基(Yersinia selective     

赫氏培养基不同氨基氮含量对鼠疫菌生长的影响

目的探讨不同氨基氮含量对鼠疫菌生长的影响观察。方法同批次消化液不同含量（120mg/L、150mg/L、170mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L）氨基氮作为基础消化液制备的赫氏琼脂培养基（指100mL培养基内所含的氨基氮）进行活菌数实验,寻找出适宜鼠疫菌生长的最佳氨基氮。结果通过反复实验发现6种不同氨基氮含量对鼠疫菌生长影响中170mg/L含量的赫氏培养基优于其它5种氨基氮含量培养基,经统计学分析有差异（P〈0.05）。结论鼠疫菌生长的最佳氨基氮含量为170mg/L。     

不同pH刚果红培基的鼠疫菌Pgm试验报告

鼠疫菌的色素沉着试验(Pgm),可以检定其吸收外源性色素的能力,它是鼠疫菌毒力决定体之一;Pgm±突变率可作为鼠疫菌分型的指标之一;对鼠疫菌在蚤体内形成菌栓有着重要作用。因此Pgm试验在确定鼠疫菌生物学性状,在自然界保存和感染宿主的能力方面都有重要作用。     

鼠疫菌耐热抗原用于血凝试验的研究

鼠疫被动血凝试验(简称血凝试验)已被国内外广泛应用。Amies曾用乙醇沉淀获得鼠疫菌荚膜抗原,Baker用饱和硫酸铵分段盐析获得特异性水溶性抗原。目前,国内外多用水溶性抗原进行鼠疫血凝试验。但该抗原提取方法较复     

鼠疫菌质粒上标识基因的筛选

目的 筛选鼠疫菌质粒上保守、稳定、特异的DNA标识序列.方法 选择32条源于鼠疫菌质粒上DNA序列,采用常规PCR技术,对云南家、野鼠两型共40株鼠疫菌、47株非鼠疫菌、鼠疫菌疫苗株EV76(阳性对照),进行了特异性验证试验和稳定性鉴定试验.结果 筛选出4对相对保守、稳定、特异的DNA标识序列:YPMT1.05c,YPMT1.03c,YPMT1.42及YPMT1.04c.结论 所筛选的4对鼠疫菌DNA标识序列,可用于鼠疫快速诊断.     

胶体金免疫层析法诊断鼠疫的特异性试验

目的研究胶体金免疫层析法用于鼠疫快速诊断的特异性。方法采用胶体金免疫层析测试条和鼠疫反向间接血凝试验(RIHA)平行检测。结果检测鼠疫菌F1抗原具有很强的特异性,不与包括小肠结肠炎和假结核耶尔森等其他细菌发生交叉免疫反应。结论该方法简便、快速、敏感,适合现场鼠疫监测。     

鼠疫耶尔森氏菌快速检测研究进展

目的论述一套对鼠疫耶尔森氏菌特异性强、快速、灵敏度高的快速检测方法,对鼠疫做到早发现、早预防、早诊断、早治疗,预防和控制鼠疫的发生和流行。方法查阅和收集国内外相关鼠疫耶尔森氏菌快速检测的文献和资料。结果鼠疫耶尔森氏菌检测技术向着快速、敏感、特异的标准化和国际化方向发展,其检测技术更加先进、齐全、完备。结论鼠疫耶尔森氏菌的检测技术从细菌学、血清学及分子生物学等正向更快速、更先进的方向发展,这对鼠疫防治将发挥重要作用。     

多重PCR快速鉴定鼠疫耶尔森氏菌

目的　建立鼠疫耶尔森氏菌多重PCR鉴定系统 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定。方法　针对分别存在于pFra、pRst质粒上毒力基因caf1和pla ,以及一段 2 76bp染色体序列 3a分别设计引物。采用多重PCR技术 ,同时检测caf1、pla、3a三个靶序列。结果　应用该多重PCR反应体系 ,对我国鼠疫耶尔森氏菌 17个生态型及新发现的青海田鼠鼠疫疫源地菌株的多重PCR扩增结果表明 ,实验菌株中除 2株分别缺失pFra、pPst质粒而扩增出 2条产物带外 ,其余 5 2株均扩增出预期的 3条产物带 ,相关菌株均阴性 ,其检测灵敏度为 1× 10 -4ngDNA。 结论　该方法用于鼠疫耶尔森氏菌的鉴定简便、快捷 ,具有很高的特异性和敏感性 ,为鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定提供了有力手段     

鼠疫菌6MD质粒在假结核菌中的表达及其对假结核菌毒力的影响

使用电穿孔转化技术,将鼠疫耶尔森氏菌所携带的6MD 质粒转移到假结核耶尔森氏菌中,获得了杂交菌株。该杂交菌株能够表达鼠疫菌素Ⅰ及凝固酶,但其毒力却仍与作为受体的假结核菌株类似,而没有向鼠疫菌的毒力水平接近。本文对这种现象的可能原因进行了分析。     

鼠疫耶尔森氏菌荧光标记扩增片段长度多态性分型方法

目的 建立荧光标记扩增片段长度多态性(FAFLP)技术平台，探讨鼠疫菌基因分型。方法 用5种核酸限制性内切酶消化鼠疫菌基因组DNA，选择最佳内切酶组合，酶切片段经接头连接后，用荧光素标记的5条EcoRⅠ引物和9条MseⅠ引物组成的引物配对扩增，选择最佳引物组合，进行系列PCR条件的优化。扩增产物经ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer(遗传分析仪)检测，GeneScan等软件进行分析。结果 成功建立FAFLP技术平台。结论 FAFLP具有快速、简便、廉价、分辨率高、重复性好和污染少的优点，可用于鼠疫菌的基因分型分析。     

对1株疑似鼠疫耶尔森氏菌的系统鉴定

目的对1株可疑菌株进行系列验证实验,以确定其是否为鼠疫耶尔森氏菌（以下简称鼠疫菌）。方 法用鼠疫细菌学常规方法和分子生物学手段确定其生物学表型特征、特异性基因及基因组特征。结果该菌 株具备鼠疫菌的典型形态特征;能被鼠疫噬菌体完全裂解;主要生化特性为阿胶糖（＋）、鼠李糖（－） 、麦芽糖（＋）、蜜二糖（－）、甘油（＋）、脱氮（+）,与典型鼠疫菌一致。毒力因子检查结果为均 为阴性;对实验动物小白鼠完全无致死能力。全基因组芯片杂交实验和PCR扩增表明55023菌株没有鼠疫菌 的三个质粒;也不具鼠疫标识基因;pgm位点代表性基因YPO1954扩增阳性,YPO1908扩增阴性,表明其pgm 位点不完整;差异片段（DFR）分型结果表明该菌株缺失了14个DFR,不符合鼠疫菌的特征;多位点序列分 型（MLST）分析结果表明该菌株与鼠疫存在16个碱基的差异,而与血清III型假结核耶尔森氏菌仅相差两 个碱基。结论尽管55023菌株具备鼠疫菌的一些表型特征,但基因组特征表明其不是鼠疫菌,而可能是血 清III型的假结核耶尔森氏菌;噬菌体裂解结果等表型不能作为鼠疫菌鉴定的最终标准。     

贵州省鼠疫耶尔森菌生物学特征研究

目的研究贵州省鼠疫耶尔森菌的生物学特征,探讨疫源地性质。方法对37株鼠疫菌进行生化试验、营养需求试验、毒力基因检测、随机扩增多态性DNA分析和脉冲场电泳分析。结果37株鼠疫菌均不发酵鼠李糖和甘油,发酵麦芽糖和阿拉伯糖,脱氮阳性。选择20株代表菌株检测均为苯丙氨酸依赖(Phe )、谷氨酸半依赖(Glu±);用Pla、Cafl、inv、hms4对引物分别进行PCR扩增,均得到456、249、1000和700bp的目标基因条带;随机引物(RAPD)分析均获得505、790、1140和1680bp的条带;脉冲场电泳图谱显示338、242.5、168和77kbp的条带。结论贵州省鼠疫菌株的生物学特征与云南省滇闽居民生态型鼠疫菌相同。     

鼠疫诊断芯片的探针制备

目的 探索制备鼠疫诊断芯片特异性探针的新方法。方法 直接采用限制性核酸内切酶Sau3A Ⅰ消化鼠疫耶尔森菌3个致病性质粒，克隆在T载体上，再经巢式PCR扩增制备成打印芯片的探针。结果 该法收集到250条探针用于打印芯片。分别与鼠疫耶尔森菌，同属的假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌杂交，可筛选出杂交信号强阳性的特异点阵。结论 该法简便可行，适于制备鼠疫诊断芯片的探针。     

中国鼠疫耶尔森菌染色体结构特征的研究

目的 了解中国鼠疫耶尔森菌不同分离株之间的染色体结构差异,探索染色体重排在鼠疫菌中发生的原因及用于菌株遗传特征识别和亲缘关系分析的可能性.方法 以完成全基因组测序的首株鼠疫菌株CO92(美国)为参考株,以从中国分离出的已完成全基因组测序的4株鼠疫菌株(内蒙古91001、云南剑川D182038、云南玉龙D106004、西藏那曲Z176003)为对比株,根据美国国立生物技术信息中心网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome)上公布的这5株鼠疫菌的染色体序列及染色体上所有编码基因序列间的相似性,将鼠疫菌染色体人为的划分成多个大的DNA节段(染色体板块),确定这些板块在不同鼠疫菌株间排列方式的差异以及板块之间的断裂区片段的基因组成;根据菌株两两比较所得的重排差异结果,分析菌株间的亲缘关系.结果 除Z176003菌株外,CO92、D182038、D106004、91001菌株可被分成44个相对独立的染色体板块,板块内部基因组成和排列高度稳定,板块之间可以相对移动.与参考株CO92菌株比较,D182038、D106004菌株染色体均存在13处重排,Z176003菌株染色体存在14处重排,91001菌株染色体存在37处板块排列顺序的改变.菌株间两两比较,D106004与Z176003菌株之间仅有8处染色体板块排列方式不同,表明二者的亲缘关系最为接近.CO92菌株染色体上的相邻板块之间存在43个断裂区,有39个断裂区的DNA片段含有插入序列,其中25个插入序列为IS100.结论 鼠疫菌基因组具有一定的流动性,不同菌株间的染色体结构存在较大差异,染色体重排事件发生的原因与其拥有的插入序列密切相关.菌株间染色体的重排差异,能用于菌株遗传特征的识别和亲缘远近关系的分析.