与血管生成相关的生长因子及其受体在巩膜穿刺孔嵌顿组织内的表达

目的 了解玻璃体手术巩膜穿刺孔嵌顿的眼内组织是否表达了与血管生成相关的生长因子及其受体。 方法 在玻璃体手术中，共取10例从巩膜穿刺孔脱出的眼内组织。冰冻切片，用免疫组织化学方法检查血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)、血小板源性生长因子-A(platelet-derived growth factor-A, PDGF-A)、转化生长因子-β1(transforming growth factor, TGF-β1)及其受体。 结果 脱出的眼内组织包括：视网膜和玻璃体组织各3例、变性的红细胞2例，睫状体和纤维组织各1例。VEGF和bFGF及其受体在所有标本均为阳性，PDGF-A、TGF-β1及其受体仅在大部分标本阳性。阳性染色包括了视网膜的细胞、睫状体色素细胞和非色素细胞、纤维细胞和部分玻璃体内的细胞。 结论 嵌顿在巩膜穿刺孔的眼内组织表达了与血管生成相关的生长因子及其受体，可能会参与前段增殖性玻璃体视网膜病变发生发展。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 34-37)     

培养人视网膜色素上皮细胞在PVR患者视网膜下液作用下c-fos和c-jun的表达

目的 观察培养的人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium，hRPE)在不同程度增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)患者视网膜下液(subretinal fluid，SRF)作用下细胞增生与c—fos和c—jun的表达。方法 不同程度PVR患者SRF作用于培养的hRPE细胞后利用细胞计数和MTT比色实验观察SRF对培养hRPE细胞的作用，同时采用SP法在不同时间点作兔抗人c—fos多抗和兔抗人c—jun多抗的免疫组织化学染色。结果 PVR患者SRF作用组与对照组相比可明显促进培养hRPE细胞的增殖，同时实验组hRPE细胞c—fos和c—jun均表达增高，视网膜下液作用lh后，Fos蛋白抗体染色阳性，细胞核呈明显棕黄色染色；3h表达达高峰，持续约12h；视网膜下液作用lh后，Jun蛋白抗体染色阳性，细胞核呈明显棕黄色染色；6h表达达高峰，持续约48h，对照组hRPE细胞(未经SRF作用仅加入等量PBS)Fos蛋白抗体和Jun蛋白抗体染色均为阴性。结论 PVR患者SRF中含有能诱导c—fos和c—jun等“立早基因”转录的细胞外生长或分化因子；c—fos和c—jun的表达是SRF促进RPE细胞的增殖过程中一个非常重要的早期分子事件。     

TGF-β1对胎儿晶状体上皮细胞增殖的作用

目的 探讨转化生长因子－β1（transforming growth factor-β1,TGF－β1)对胎儿晶状体上皮细胞增殖的作用。方法 用SP免疫对48例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行细胞增殖核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA),TGF－β1免疫组织化学染色。结果 PCNA，TGF－β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均表达；免疫阳笥细胞随着胎龄的增加而减少。PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色；TGF－β1阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状；经相关分析：TGF－β1与PCNA呈正相关。结论 PCNA，TGF－β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达；TGF－β1与PCNA呈正相关，具有促进晶状体上皮细胞增殖的作用。     

豚鼠近视眼视网膜Müller细胞中TGFβ2、VIP、DA的表达

目的 研究转化生长因子β2(TGFβ2)、血管活性肠肽(VIP)和多巴胺(DA)在原代培养的豚鼠近视眼视网膜Müller细胞中的变化.方法 眼罩遮盖诱导豚鼠近视眼,酶消化法原代培养其视网膜Müller细胞,GFAP、Vimentin免疫组织化学染色进行细胞鉴定.Westren blotting检测TGFβ2、VIP、酪氨酸羟化酶(TH)蛋白在正常对照眼、自身对照眼和近视眼视网膜Müller细胞中的表达情况.高效液相色谱-电化学法测定视网膜Müller细胞分泌DA的质量浓度变化.结果 眼罩遮盖14d后,豚鼠遮盖眼眼轴延长,近视形成.酶消化法成功培养出豚鼠视网膜Müller细胞,95%以上的培养细胞阳性表达GFAP和Vimentin.正常对照眼、自身对照眼和遮盖眼视网膜Müller细胞均阳性表达TGFβ2、VIP、TH蛋白,遮盖眼表达TGFβ2和VIP蛋白上调(P＜0.05)、TH蛋白下调(P＜0.05).与正常对照眼、自身对照眼比较,遮盖眼视网膜Müller细分泌DA减少.结论 Müller细胞是视网膜近视信号因子TGFβ2、VIP和DA的一个重要来源.在近视发生过程中Müller细胞可能通过合成、分泌这些近视信号因子,参与近视发生的调控.     

CD81在正常大鼠神经视网膜上的表达

目的 观察CD81在正常大鼠神经视网膜上的表达.方法 用抗CD81抗体对正常大鼠视网膜组织进行免疫组织化学染色,并对神经视网膜进行Western blot分析,同时用细胞免疫组织化学染色法检测体外培养视网膜神经胶质细胞的CD81表达.结果 大鼠视网膜神经节细胞层、内丛状层和外丛状层呈阳性网状致密染色;Western blot分析神经视网膜层出现CD81阳性条带;体外培养的大鼠视网膜神经胶质细胞也呈CD81阳性表达.结论 正常大鼠的神经视网膜表达CD81,视网膜神经胶质细胞是表达CD81的一种细胞类型.     

组织型谷氨酰胺转移酶在牛眼小梁细胞中的表达及意义

本实验应用免疫组织化学和RT-PCR法检测体外培养的牛眼小梁细胞(bovine trabecu lar m eshwork cell,BTMC)是否表达组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutam inase,tTG),以探讨tTG与原发开角型青光眼(POAG)的发病学关系。1材料与方法1.1 BTMC的体外培养和鉴定参见我科过去报道的方法。1.2免疫组织化学染色用0·02 mol/L PBS将培养在盖玻片呈棕黄色阳性染色(图1)。阴性对照未见阳性染色(图2)。2.2 RT-PCR检测结果及鉴定从BTMC中提取总RNA,几乎不含蛋白质和DNA。应用特异性牛tTG引物,将从BTMC提取的RNA逆转录所得的cDNA…     

整合素α5β1在视网膜下膜中的表达

目的 研究整合素α5β1及其配体纤维粘连蛋白(FN)在视网膜中的表达.方法 通过玻璃体切割术采集14例视网膜脱离病例的视网膜下膜标本,用免疫组织化学法检测下膜中角蛋白、整合素α5β-1及FN的表达.免疫荧光双标记法研究视网膜下膜色素上皮细胞与整合素α5β1表达的关系,用激光扫描共聚焦显微镜定量分析视网膜下膜与正常视网膜下膜组织中整合素α5β1表达的差异.结果 14例下膜标本中整合素α5β1和FN表达均呈阳性,免疫组织化学染色呈棕黄色,免疫荧光呈绿色或红色.角蛋白表达呈阳性的视网膜色素上皮(RPE)细胞的细胞膜上表达α5β1,见于下膜的全层;正常视网膜组织中α5β1的表达见于邻近Bruch膜的表面.两者比较差异有统计学意义(t=12.01、9.20,P＜0.05).结论 在视网膜下膜组织中RPE细胞整合素α5β1表达上调,其配体FN也显著表达,表明整合素α5β1与FN参与了视网膜下膜的形成.     

增生性糖尿病视网膜病变增生前膜的观察及细胞表型的检测

目的 探讨增生性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)的视网膜增生前膜的病理形态改变和细胞表型的变化.方法 视网膜前膜组织来自10例PDR患者玻璃体切割手术中取出的视网膜前增生膜,直接铺片进行光镜暗视野模式下观察形态变化.视网膜前增生膜组织包埋在冷冻胶中,冰冻切片后进行转化生长因子-β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)、上皮细胞钙黏蛋白和波形蛋白免疫组织化学研究.结果 PDR患者的视网膜前膜内含大量毛细血管,并包含有色素上皮细胞成分,可观察到无管腔的内皮细胞条素和微血管瘤.免疫组织化学观察表明TGF-β1在8例V期PDR患者血管增生膜中强表达,而对照组正常视网膜中表达阴性.增生膜内钙黏蛋白E表达较弱,而波形蛋白表达呈强阳性.结论 PDR的视网膜前膜内含丰富血管和细胞,TGF-β1表达的升高可能是细胞表型变化的原因之一.     

豚鼠近视眼视网膜Müller细胞中TGFβ2、VIP、DA的表达

目的研究转化生长因子β2（TGFβ2）、血管活性肠肽（VIP）和多巴胺（DA）在原代培养的豚鼠近视眼视网膜Müller细胞中的变化。方法眼罩遮盖诱导豚鼠近视眼,酶消化法原代培养其视网膜Müller细胞,GFAP、Vimentin免疫组织化学染色进行细胞鉴定。Westren blotting检测TGFβ2、VIP、酪氨酸羟化酶（TH）蛋白在正常对照眼、自身对照眼和近视眼视网膜Müller细胞中的表达情况。高效液相色谱-电化学法测定视网膜Müller细胞分泌DA的质量浓度变化。结果眼罩遮盖14d后,豚鼠遮盖眼眼轴延长,近视形成。酶消化法成功培养出豚鼠视网膜Müller细胞,95%以上的培养细胞阳性表达GFAP和Vimentin。正常对照眼、自身对照眼和遮盖眼视网膜Müller细胞均阳性表达TGFβ2、VIP、TH蛋白,遮盖眼表达TGFβ2和VIP蛋白上调（P〈0.05）、TH蛋白下调（P〈0.05）。与正常对照眼、自身对照眼比较,遮盖眼视网膜Müller细胞分泌DA减少。结论Müller细胞是视网膜近视信号因子TGFβ2、VIP和DA的一个重要来源。在近视发生过程中Müller细胞可能通过合成、分泌这些近视信号因子,参与近视发生的调控。     

转化生长因子α对鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体调控作用的研究

目的 观察转化生长因子α（TGFα）对鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体 (GLAST) mRNA、蛋白质表达及摄取活性的调控作用。方法 取出生后7～10 d 的新生昆明小鼠视网膜组织，体外进行Müller细胞的培养。同一原代细胞的第3～4代细胞培养后随机分为2组：①TGFα干预组：分别加入浓度为50、75、125、150 ng/ml的TGFα，每种浓度3孔；②对照组：仍用含20%胎牛血清的Dulbeccon改良Eagle培养基培养。采用L-3H-谷氨酸摄取分析方法观察不同浓度TGFα对Müller细胞GLAST摄取活性的影响；逆转录聚合酶链反应方法分析Müller细胞GLAST mRNA表达的差异；免疫组织化学染色方法检测Müller细胞GLAST蛋白质表达的变化。结果随着TGFα浓度的增加，L-3H-谷氨酸的摄取量及GLAST mRNA表达量均逐渐增加，TGFα浓度为125 ng/ml时，L-3H-谷氨酸的摄取量达到最大值，为对照组的266%，同时GLASTmRNA表达量也达到最大值，为对照组的近4倍。免疫组织化学染色显示当TGFα浓度为125 ng/ml时，干预组Müller细胞内的GLAST蛋白表达量明显高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 TGFα可通过上调GLAST mRNA和蛋白质的表达增加视网膜Müller细胞谷氨酸转运体GLAST的摄取活性。     

大鼠视网膜神经细胞的原代培养

目的:在前人建立的方法上优化SD大鼠视网膜神经细胞体外培养的技术和方法,为后续研究提供实验基础。方法:使用胰酶消化法分离新生1～3dSD大鼠视网膜神经细胞,以DMEM/F12为培养基体外培养,免疫组织化学染色的方法进行鉴定。结果:观察光镜下培养的细胞贴壁生长,部分细胞伸出突起,且有些突起相互连接。免疫细胞化学染色显示,培养的细胞大多数抗神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)抗体反应阳性。结论:视网膜神经细胞体外培养成功为进一步进行视网膜疾病的研究创造了条件。     

大鼠外伤性PVR中胶质纤维酸性蛋白免疫组织化学观察

对大鼠眼后段芽通伤所致的外伤性增殖性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）形成过程中视网膜Ｍｕｌｌｅｒ细胞的胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）免疫活性改变及神经胶质细胞移行分布进行动态观察。伤后３天，Ｍｕｌｌｅｒ细胞ＧＦＡＰ阳性染色开始增强；第７天，整个视网膜Ｍｕｌｌｅｒ细胞呈ＧＦＡＰ阳性着色；１４天即可见有神经胶质细胞出现于视网膜前增生纤维组织中；第２１及２８天，在观网膜前及穿通伤口的增生纤维组织中可见大量视网膜神经胶质细胞存在，提示反应性星形胶质化是ＰＶＲ的主要病变基础，是造成视网膜损害的重要原因。     

神经生长因子诱导基因B-β在大鼠视网膜无长突细胞发育过程中的表达

观察孤儿核受体神经生长因子诱导基因B-β(nerve growth factor-induced gene B-β,NGFIB-β)在大鼠视网膜发育过程中蛋白表达的动态变化及与无长突细胞的相关关系。方法采用孕14d、16d、18d妊娠大鼠(各5只)、生后0d、3d、5d、6d、7d、9d、13d、15d(各5只)的幼鼠及成熟大鼠(5只),全部处死后立刻取出眼球组织于福尔马林中固定,石蜡包埋、组织切片,免疫组织化学及免疫组织化学双重染色后显微镜下观察。结果NGFIB-β在视网膜发育过程中的表达出现了显著的动态变化。NGFIB-β首先在孕18d胎鼠视网膜组织出现少量表达,阳性表达主要在内核层内缘,随着发育的进行阳性细胞数目明显增多,生后3~7d达到高峰,之后随着细胞的成熟阳性表达又逐渐减少,成熟的视网膜组织内仅见少量阳性细胞,通过NGFIB-β和视网膜无长突细胞特异性标记物突出融合蛋白-1的免疫组织化学双重染色显示NGFIB-β阳性细胞为无长突细胞,两种蛋白共同表达在一个细胞内。结论NGFIB-β在大鼠视网膜无长突神经细胞的分化成熟过程中起重要作用。     

三种视网膜病视网膜前膜中基质金属蛋白酶及其天然抑制分子的表达

目的 研究增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)、增殖性玻璃体视网膜疾病(proliferative vitreoretinopathy,PVR)和急性视网膜坏死(acute retinalnecrosis,ARN)患者视网膜前膜中基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases:MMPs)及其天然抑制物(tissueinhibitorsofmetalloproteinages,TIMPs)的表达情况.方法 玻璃体手术中剥取PVR、PDR和ARN患者的视网膜前膜,同供体眼视网膜作为正常对照,冰冻切片后进行免疫组织化学染色,包括:MMP-1,MMP-2,MMP-3,MMP-7,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2.结果 正常视网膜中能够观察到MMP-1,MMP-3,TIMP-1和TIMP-2的表达,在PVR、PDR和ARN患者标本中各种分子的表达都增强,尤以MMP-2,MMP-3和MMP-7明显.结论 正常视网膜中存在MMPs和TIMPs分子维持着细胞外基质动态的平衡,在PVR,PDR和ARN患者中MMP-2,MMP-3和MMP-7等MMPs分子表达增强,在其病变过程中可能起重要作用.     

增殖性糖尿病视网膜病变基质金属蛋白酶的表达

目的:研究增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)视网膜增殖膜纤维化和新生血管形成与MMP-2和MMP-9异常表达的关系.方法:采用免疫组织化学方法,检测PDR患者20例视网膜前纤维血管膜MMP-2和MMP-9的表达,并与增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)10例非血管性增殖膜进行对比研究.结果:PDR增殖膜MMP-2和MMP-9染色阳性率分别为70%和85%,PVR增殖膜MMP-2和MMP-9染色阳性率分别为80%和60%.在PDR增殖膜上可见血管周围基质MMP-9染色阳性,而且与PVR增殖膜相比,PDR增殖膜MMP-9表达有显著提高.结论:PDR增殖膜MMP-2和MMP-9均有表达,在PDR新生血管形成和纤维化的病理过程中起重要作用.     

视网膜前膜IgG、C_3、胶原和Ki－M_7免疫组织化学研究

采用免疫组织化学染色对１２例增殖性玻璃体视网膜病变的视网膜前膜组织进行检查。光镜下，８例前膜主要由视网膜色素上皮细胞、成纤维细胞样细胞、巨噬细胞及胶原纤维构成；免疫荧光染色的前膜组织分别呈ＩｇＧ、补体Ｃ３、Ⅲ型胶原及Ｋｉ－Ｍ７抗体反应阳性。表明视网膜前膜中有体液免疫成分介入，巨噬细胞在ＰＶＲ形成的免疫反应机制中可能起重要作用。     

视网膜前膜IgG,C3,胶原和Ki—M7免疫组织化学研究

利用免疫组织化学染色对１２例增殖性玻璃体视网膜病变的视网膜前膜组织进行检查。光镜下，８例前膜主要由视网膜色素上皮细胞，成纤维细胞样细胞、巨噬细胞及胶原纤维构成，免疫荧光染色的前膜组织分别呈ＩｇＧ、补体Ｃ３、Ⅲ型胶原及Ｋｉ－Ｍ７抗体反应阳性，表明视网膜前膜中有体液免疫成分介入，巨噬细胞在ＰＶＲ形成的反应机制中可能起重要作用。     

血管内皮生长因子在兔眼前段缺血模型中的表达

目的通过直肌断腱术制备兔眼前段缺血（ASI）模型,观察血管内皮生长因子（VGEF）在兔眼前段缺血模型中的表达,探索ASI的发病机制。方法新西兰白兔16只,左眼对照;右眼造模：切断右眼上、下、内、外四条直肌;于术后第1、3、7、14天,分别随机处死4只兔,并迅速摘取眼球;做免疫组织化学检查,并采用计算机图像分析。结果 （1）裂隙灯观察：各组左眼未发生明显变化。右眼：自术后第1天,眼前段均发生了不同程度的缺血表现。（2）免疫组织化学方法：左眼出现个别眼睫状体、视网膜弱阳性。右眼虹膜、睫状体色素上皮、晶状体前囊、视网膜多层VGEF阳性表达。图像分析睫状体色素上皮VGEF表达情况：术后第1天即有表达,第7天达到高峰,第14天表达衰减。结论 VEGF在兔ASI模型中的表达上调,并随时间而衰减,提示其可能为该病的发病机制之一。     

孔源性视网膜脱离视网膜下液中TGF—β1含量与PVR存在关系的初步探讨

目的：定量测定孔源性视网膜脱离患视网膜下液中转化生长因子β1的含量,探讨转化生长因子β1与增殖性玻璃体视网膜病变程度的相对应关系。方法：采集30例行孔源性视网膜脱离复位术患的视网膜下液,用TGF－β1试剂盒进行检测。结果：30例视网膜脱离患视网膜下液中均含有TGF－β1,SRF中TGF－β1含量随着病程的延长而增加,随着PVR严重程度的增加而增加。结论：在PVR形成的中,随着PVR程度的增加,视网膜下液中TGF－β1的含量随之增加,这可能为细胞迁移,增,膜收缩形成的原因,将来也许可以用拮抗TGF－β1的方法去预防和治疗PVR的形成。