Rho在二氧化硅诱导的人支气管上皮细胞α平滑肌肌动蛋白表达中的作用（英文）

目的：探讨Rho在二氧化硅（SiO2）诱导人支气管上皮细胞（HBECs）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达中的作用。方法：以SiO2处理的HBE细胞为研究对象,免疫细胞化学及Western印迹检测α-SMA表达;GST pull down分析Rho的活化情况;干预实验中用Rho抑制剂Y27632处理细胞后,West-ern印迹检测SiO2对α-SMA表达的影响。结果：SiO2（0,50,100,200,300μg/mL）分别作用HBECs细胞72h后,α-SMA表达增强,其中以200μg/mL SiO2组α-SMA表达最强,为对照组的（5.09±1.98）倍（P〈0.01）;用200μg/mL SiO2分别作用HBECs细胞1,2,6,12,24h后,Rho明显活化（P〈0.01）;Rho抑制剂Y27632明显抑制了SiO2诱导的α-SMA表达,20和30μmol/L的Y27632抑制率分别为68%和75%（P〈0.01）。结论：Rho参与介导SiO2诱导的HBECs中α-SMA的表达。     

ERK信号通路调控二氧化硅诱导的人支气管上皮细胞上皮-间质转化

目的:探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路在二氧化硅( SiO2)诱导人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBEC)上皮-间质转型(epithelial-mesenchymal transit...     

二氧化硅对人支气管上皮细胞TGF—β1基因产物表达的影响分析

目的分析人支气管上皮细胞（16HBE）在二氧化硅（SiO2）粉尘染毒后TGF-β1基因产物的表达情况,为探索矽肺新的治疗途径提供基础资料。方法以16HBE作为靶细胞,以灭菌SiO2粉尘配置30μg／ml及60μg／ml两种不同浓度的悬浮液（以含10％FBS的DMEM培养基定溶）,以不同浓度的SiO2粉尘悬液分别培养16HBE靶细胞8h、16h、24h、32h,各做三个平行实验孔,同时,做10％FBS的DMEM空白对照;以免疫细胞化学方法检测TGF—β1基因产物的表达。结果在经30ug／ml及60ug／mlSiO2粉尘悬浮液培养8h、16h、24h、32h后,各实验孔16HBE细胞扫描灰度值均较对照组细胞低,结果提示,16HBE细胞经SiO2粉尘染毒后TGF—β1基因产物表达增加。结论体外实验条件下,SiO2粉尘可上调16HBE细胞TGF-β1基因产物的表达。     

ERK信号通路调控二氧化硅诱导的人支气管上皮细胞上皮-间质转化

目的:探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路在二氧化硅(SiO2)诱导人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBEC)上皮-间质转型(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)中的作用机制。方法:SiO2(0～300μg/mL)处理HBEC 72 h,或不同浓度的U0126(0～30μmol/L)干预1 h后再行200μg/mL SiO2刺激72 h,Western印迹检测E-cadherin和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的改变;使用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性检测试剂盒检测SiO2(200μg/mL)处理HBEC(0～8 h)后ERK激活情况。结果:SiO2刺激HBEC后,E-cadherin蛋白表达水平逐渐下调,以300μg/mL时最为明显(P<0.01),α-SMA蛋白表达水平逐渐上调,以200μg/mL时最为明显(P<0.01)。SiO2刺激HBEC后,ERK明显活化,ERK磷酸化水平于30 min开始升高,1 h后逐渐降低。ERK抑...     

α-平滑肌肌动蛋白和β-肌动蛋白在瘢痕组织中的表达

目的 探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和β-肌动蛋白(β-actin)对增生性瘢痕形成的可能作用。方法 采用荧光定量PCR法检测10例增生性瘢痕和10例正常皮肤组织中α-SMA和β-actin的表达水平。结果 增生性瘢痕组织中α-SMA和β-actin表达水平均高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 α-SMA和β-actin在瘢痕增生中起重要作用;由于β-actin在瘢痕组织和正常皮肤中的不恒定性,建议在瘢痕的mRNA定量研究中不作为内参照物。     

哮喘大鼠模型肺组织平滑肌肌动蛋白-αmRNA的表达

目的　探讨平滑肌肌动蛋白 (SMA) -α m RNA的表达 ,以了解其在哮喘发病机制中的作用。方法　以卵蛋白雾化复制哮喘模型 ,在激发后 3d、1周及 2周用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)检测肺部α- SMA m RNA表达 ,同时用图象分析法测量大鼠气道形态学参数。结果　大鼠哮喘激发后 2周开始出现气道平滑肌肌层增厚 ,而α-SMA m RNA在哮喘激发 1周表达升高 ,2周后更加明显 ,α- SMA m RNA表达与气道平滑肌肌层增厚具有一定相关性。结论　哮喘气道重构中既有气道平滑肌的增生肥大 ,又可能有平滑肌表型改变     

α-平滑肌肌动蛋白和β-肌动蛋白在瘢痕组织中的表达

目的探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和β-肌动蛋白(β-actin)对增生性瘢痕形成的可能作用.方法采用荧光定量PCR法检测10例增生性瘢痕和10例正常皮肤组织中α-SMA和β-actin的表达水平.结果增生性瘢痕组织中α-SMA和β-actin表达水平均高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(P＜0.01).结论α-SMA和β-actin在瘢痕增生中起重要作用;由于β-actin在瘢痕组织和正常皮肤中的不恒定性,建议在瘢痕的mRNA定量研究中不作为内参照物.     

平滑肌肌动蛋白在乙型肝炎肝组织中的表达

目的：探讨平滑肌肌动蛋白在乙型肝炎肝组织中的表达及其与肝病变的关系。方法；各型乙肝肝标本２７０例，对照组１０例，ＳＭＡ免疫组化标记。结果；在正常肝组织，ＳＭＡ仅在原有的肝内动静脉及胆管壁表达。在乙肝肝标本中，ＳＭＡ还在血管病变区阳性或强阳性表达，且ＳＭＡ表达的强弱及分布部位与肝病变密切相关。结论：ＳＭＡ在乙肝的病理发生和发展过程中有重要的参考价值。     

基于生物信息学分析哮喘患者鼻黏膜上皮细胞DNA及α肌动蛋白2甲基化差异性表达

目的: 研究哮喘患者鼻黏膜上皮细胞中全基因组甲基化水平及α肌动蛋白2(actin alpha 2, ACTA2)基因启动子区域甲基化水平改变。方法: 利用甲基化850K芯片法检测6例哮喘患者与5例健康者鼻黏膜上皮细胞中全基因组甲基化水平,进行生物功能分析后选择ACTA2为目的基因,以重亚硫酸盐测序法检测12例哮喘患者及12例健康者ACTA2启动子区域甲基化水平。结果： 850K芯片测序结果显示,哮喘患者所有常染色体均存在不同程度的甲基化修饰,大部分发生在基因体及基因间区,10%~20%发生在启动子区,且高甲基化和低甲基化改变可存在于同一染色体上;重亚硫酸盐法测序示与健康对照组相比,哮喘组ACTA2基因启动子区出现明显高甲基化改变(P=0.001)。结论： 哮喘患者鼻黏膜上皮细胞各染色体均出现广泛甲基化修饰,ACTA2基因启动子区域出现高甲基化改变。     

Rho激酶在致石豚鼠胆囊平滑肌中的表达及作用

目的:探讨致石过程中,Rho激酶在豚鼠胆囊平滑肌中表达的变化及其对胆囊平滑肌收缩功能的影响.方法:60只雄性豚鼠随机分为对照组和实验组,实验组建立动物模型分为模型组和Rho激酶抑制剂法舒地尔(fasudil)干预组.采用酶比色法和氧化酶法测定胆汁中胆同醇(TC)和甘油三脂(TG)含量,同时测量空腹胆囊体积(FV)及空腹...     

Rho激酶在缺氧性肺动脉平滑肌细胞中的表达

目的：探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖及其中Rho激酶表达的影响。方法：分别在常氧和缺氧12、24和48h条件下体外培养大鼠PASMC，应用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，流式细胞术测定细胞周期，同时用蛋白印迹杂交（Western blot）检测Rho激酶的表达情况。结果：PASMC比色吸光度A值缺氧12h增大，24h最高，48h下降但仍高于常氧对照组；流式细胞术分析细胞周期，G2／M期细胞缺氧组均显著高于常氧组；Western blot结果分析各缺氧组Rho激酶表达明显高于常氧组。结论：缺氧诱导PASMC增殖，促使细胞进入有丝分裂期，同时，Rho激酶表达的增强可能是缺氧诱导PASMC增殖的重要机制之一。     

α-平滑肌肌动蛋白在小鼠肾小体胚胎发育中的表达

目的 了解α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在小鼠肾小体胚胎发育过程中的表达规律及α-SMA与肾小体发育成熟的关系。方法采用免疫组织化学方法测定不同胚龄小鼠肾小体的α-SMA的表达。结果α-SMA在小鼠肾小体胚胎发育过程中经历了早期肾小体无表达，近成熟肾小体系膜区强阳性表达，成熟肾小体的阴性表达。结论α-SMA在小鼠肾小体胚胎发育中的表达具有一定的时空顺序，肾小体内α-SMA的表达是短暂的发育现象，与肾小体系膜的发育成熟密切相关。     

复方861对人肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达的调节作用

目的 研究复方861对人肝星状细胞(LX-2)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达的调节作用。方法应用基于SYBR-Green Ⅰ的实时定量荧光PCR方法，研究复方861分别作用24、48、72h后，LX-2细胞中α-SMAmRNA含量的变化情况。结果 复方861在48和72h可以显著降低LX-2细胞中α-SMA mRNA含量。结论 复方861可抑制LX-2细胞中α-SMA基因的表达，提示其抗肝纤维化作用可能与其抑制I，X-2细胞的活化有关。     

博莱霉素诱导α平滑肌肌动蛋白Cre重组酶转基因小鼠肺纤维化上皮细胞-间质转分化的研究

目的 探讨在博莱霉素诱导的肺纤维化中是否发生了上皮细胞.间质转分化(EMT)现象,支气管上皮细胞是否参与了这一过程.方法 采用α平滑肌肌动蛋白Cre重组酶转基因小鼠(α-SMA-Cre/R26R双转基因鼠)为实验动物,构建博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型,进行组织x-gaJ染色和α平滑肌肌动蛋白免疫荧光检测.结果 气管内灌注博莱霉素的转基因小鼠支气管上皮下部分x-gal蓝染明显增多,终末小气道周围和肺血管壁蓝染细胞出现或增多,部分地区出现了支气管周围肺泡上皮细胞(ACE)阳性蓝染和浸润.结论 在博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型中可以观察到EMT现象,气道上皮细胞和肺泡上皮细胞能向间充质细胞转化,参与肺纤维化病理过程.     

LPA2受体介导LPA诱导的人支气管肺上皮细胞PAI-1表达

目的研究溶血磷脂酸(LPA)对原代培养人支气管肺上皮细胞(NHBE)表达纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)的调节作用。方法原代培养人支气管上皮细胞培养于6孔板培养板内,经LPA诱导后,收取RNA裂解液并用实时荧光定量RT-PCR技术检测PAI-1 mRNA表达水平;利用RNA干扰技术研究LPA受体的作用。结果 LPA可诱导NHBE细胞PAI-1 mRNA表达上调且呈时间相关性,此效应可被LPA2 siRNA完全阻断。结论 LPA2受体介导LPA诱导NHBE细胞表达PAI-1。     

IKBKE在烟气凝集物诱导人支气管上皮细胞恶性转化过程中的作用

目的 探讨核因子κB抑制蛋白E抗体(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit epsilon,IKBKE)在卷烟烟气凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化中的作用及其分子机制.方法 CSC慢性染毒BEP2D细胞至P70代(0.001支烟/mL),裸鼠皮下成瘤实验观察染毒细胞是否发生恶性转化;采用Western blot检测各代细胞以及CSC急性染毒BEP2D细胞(0.006支烟/mL)4、8、12、24 h和48 h后IKEBE的表达;免疫组化检测烟熏1、3、9个月A/J小鼠外周小气道和瘤体组织IKBKE的表达;慢病毒IKBKE-siRNA感染P70细胞,观察其对细胞增殖、细胞克隆形成和凋亡的影响;观察敲减IKBKE对STAT3信号通路分子表达的影响及STAT3信号通路激活剂IL-6对细胞恶性转化的影响.结果 与P0、P50细胞相比,P70细胞具有恶性转化表型;IKBKE显著高表达于P70细胞(P＜0.05),亦是CSC诱导的早期分子事件;在烟气暴露A/J小鼠肺肿瘤组织中IKBKE表达显著增高(P＜0.01);siRNA沉默IKBKE可显著抑制细胞增殖和细胞克隆形成,诱导细胞凋亡;该作用与抑制STAT3磷酸化有关.结论 IKBKE可能通过调控STAT3通路抑制细胞凋亡,促进其增殖,参与吸烟诱导肺癌发生.     

姜黄素对人支气管上皮细胞MMP-9的影响

【】目的：观察姜黄素(curcumin, cur)对人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells, HBECs)MMP-9表达的影响。方法：体外培养人支气管上皮细胞,分为空白组、LPS组及姜黄素组,其中姜黄素组在相同浓度LPS刺激下又各分为5、10、20、40和80μmol／L 5个浓度组,作用4h后在显微镜下观察cur干预后细胞的形态变化,采用实时荧光定量PCR观察人支气管上皮细胞MMP-9 mRNA的表达变化。结果：显微镜下观察姜黄素干预后的细胞形态良好,细胞无明显损伤。实时PCR结果显示,空白组可见一定量MMP-9 mRNA表达,与空白组比较,LPS组的人支气管上皮细胞MMP-9 mRNA表达量明显增加,80μmol／L cur亦可增加MMP-9 mRNA的表达(p<0.05)。与LPS组比较,10μmol／L cur组人支气管上皮细胞的MMP-9 mRNA表达量显著下降(p<0.05),5μmol／L、20μmol／L、40μmol／L的cur对支气管上皮细胞MMP-9的mRNA表达无明显作用。结论：10μmol／L姜黄素可降低人支气管上皮细胞的MMP-9mRNA的表达。     

脑出血患者脑小动脉壁α-平滑肌肌动蛋白的表达

目的　探讨脑出血时脑小动脉平滑肌肌动蛋白 (α- SMA)表达与动脉粥样硬化的关系。方法　应用免疫组化技术并结合计算机图像分析 ,检测人类高血压脑出血脑小动脉内 α- SMA的表达程度。结果　在脑出血组脑小动脉内 α- SMA的表达明显增加。结论　 α- SMA的表达可作为血管平滑肌细胞 (VSMC)激活的标志 ,它的出现标志着 VSMC被激活并处于增殖 /分泌表型。     

平滑肌肌动蛋白在胆管机械性损伤与电灼伤中的表达

目的 通过研究胆管机械性损伤与电灼伤的早期变化,比较开腹胆囊切除术和腹腔镜胆囊切除术导致担管损伤的差异.方法 选本地健康杂交犬35只,按抽签法随机分为机械性损伤组(n=15),电灼伤组(n=15)和对照组(n＝5),建立动物胆管损伤模型,机械性胆管损伤用手术刀做胆管壁全层锐性损伤,电灼伤组胆管损伤用电刀全层切开胆总管壁,然后均行黏膜对黏膜全层缝合,取正常胆管作为对照.分别于术后1周、2周、1个月取胆管损伤处标本,用免疫组化s-P法检测α-SMA在各组中的表达强度,利用图像分析系统定量分析3组中的阳件细胞数,并进行统计学分析.结果 α-SMA在IF常胆管壁中表达于少量平滑肌组织,在机械性损伤组及电灼伤组胆管损伤模型中表达于MFB细胞质与平滑肌组织中.统计结果 显示:机械性损伤组胆管损伤模型中各时期α-SMA表达强度均强于对照组(P<0.05);电灼伤组胆管损伤模型中各时期α-SMA表达强度均强于对照组(P<0.05);电灼伤组各时期α-SMA表达强度均弱于同期机械件损伤组(P<0.05).结论 在胆管电灼伤组织中的修复反应弱于机械损伤的组织,可能导致电灼伤组的瘢痕愈合周期延长.     

烹调油烟冷凝物诱导永生化人支气管上皮细胞恶性转化的研究

 目的用烹调油烟冷凝物（COFC）诱导正常永生化人支气管上皮细胞（BEP-2D）慢性恶性转化,构建恶性转化的细胞模型,以探讨COFC 的危害。方法通过MTT 法确定诱导物的染毒剂量,以COFC 处理细胞,用血清抗性实验和锚着独立生长实验鉴定细胞恶性转化的倾向和恶性特征,比较对照组和实验组抗血清促分化的能力和集落形成率,并将细胞接种于裸鼠,观察其成瘤情况。结果以50 μg/mL的COFC对细胞进行染毒,传至第20 代细胞,与对照组相比,其抗血清促分化的能力差异均有统计学意义（ P< 0.01）;传至第35 代,转化细胞的锚着独立生长实验克隆形成率差异均有统计学意义（ P< 0.05）,并接种裸鼠成瘤,病理检查结果为低分化鳞癌。结论COFC 可诱导正常永生化人支气管上皮细胞发生恶性转化,提示烹调油烟对人体具有致癌致畸作用。