豚鼠内淋巴囊上皮细胞G蛋白的表达及其意义

目的：检测刺激性G蛋白(Gs)和抑制性G蛋白(Gi)在内淋巴囊上皮的表达,为深入研究G蛋白的功能奠定基础。方法：查阅Gs和Gi的基因序列，自行设计并委托Gibco公司合成引物，应用RT—PCR和原位杂交法检测Gas和GαimRNA在内淋巴囊上皮细胞的表达。结果：扩增的Gas和Gai片段长度分别为340bp和431bp；正常内淋巴囊上皮细胞内可见Gs和Gi的阳性颗粒。结论：正常豚鼠内淋巴囊上皮细胞存在Gas和GaimRNA的表达；G蛋白在内淋巴囊的信号转导和离子通道调节中可能起重要作用。     

前庭学

20010608豚鼠内淋巴囊上皮细胞Na‘,K”一ATP酶不同卜亚基的mRNA表达/牟忠林…//中国耳鼻咽喉颅底外科杂志一2000,6(3)一148~150 目的:进一步研究内淋巴囊上皮细胞Na‘,K卜一ATP酶不同p亚基的表达。方法:采用豚鼠内淋巴囊冰冻切片、原位杂交的方法检测N扩,K’一ATP酶不同俘亚基mRNA在内淋巴囊上皮细胞中的表达。结果:在内淋巴囊上皮细胞胞浆内可见N。十,K一ATP酶不同乒亚基的阳性颗粒,俘:亚基表达较弱,尽。亚基表达较强。结论:结合其他报道,内淋巴囊上皮细胞具有多种亚基异构体组成的Na ,K 一ATP酶的表达,而结肠上皮、肾小管上…     

内淋巴囊上皮细胞透明质酸合成酶mRNA的表达

目的　研究内淋巴囊上皮细胞透明质酸合成酶 (hyaluronansynthase)mRNA的表达及其意义。方法　在查阅核酸序列数据库基础上 ,采用Motif程序分析各物种 (大鼠、小鼠、爪蟾、人类 )透明质酸合成酶的保守序列 ,应用原位杂交技术检测透明质酸合成酶mRNA在内淋巴囊上皮细胞的表达。结果　内淋巴囊近侧端、中间部均有部分上皮细胞胞浆显示透明质酸合成酶mRNA的阳性表达。结论　在分子生物学水平证实了内淋巴囊上皮细胞能合成透明质酸。     

内淋巴囊和肾小管上皮细胞透明质酸合成酶mRNA的表达

目的 用寡聚核苷酸探针检测内淋巴囊和肾小管上皮细胞透明质酸合成酶mRNA表达的异同。方法 通过查阅核酸序列数据库,自行设计并合成了透明质酸合成酶寡聚核苷酸探针,应用原位杂交技术检测透明质酸合成酶mRNA在豚鼠内淋巴囊和肾小管上皮细胞的表达。结果 在内淋巴囊近侧端、中间部和肾小管部分上皮细胞胸浆显示透明质酸合成酶mRNA的阳性表达,但近曲小管的阳性细胞百分数稍多。结论 不但扩大了核酸杂交的应用范围,还为内淋巴囊和肾小管上皮细胞对水电解质平衡可能都具有透明质酸／透明质酸酶的双重调节作用提供了理论依据。     

豚鼠耳蜗和内淋巴囊上皮钠通道的表达

目的 研究豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)α、β、γ亚基的表达及其意义.方法 用兔抗大鼠ENaC α、β和γ亚基的多克隆抗体,采用免疫组化SP法观察豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中α、β、γ-ENaC的表达模式.另用α-ENaC cDNA质粒合成探针,原位杂交法检测豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中α-ENaC mRNA的表达.结果 免疫组化显示,在豚鼠耳蜗中,α-ENaC蛋白强烈表达于螺旋缘,而螺旋韧带、Corti器、Reissner膜等处的表达较弱;β-ENaC蛋白在螺旋韧带、螺旋缘和螺旋神经节、Corti器、Reissner膜等处的表达均呈弱阳性;γ-ENaC蛋白则在螺旋韧带的上半部、螺旋缘和螺旋神经节等处的表达呈强阳性,Corti器、Reissner膜等处也有阳性表达.三个亚基在血管纹中均呈阴性表达.在内淋巴囊中,α、β和γ亚基均较明显地表达于上皮细胞和上皮下纤维组织.原位杂交显示,α-ENaC mRNA除了表达于螺旋缘、螺旋韧带下部外,还表达于血管纹,而在内淋巴囊的上皮细胞和上皮下纤维组织也均呈阳性表达.结论 ENaC的各个亚基以不同的模式分布于豚鼠耳蜗和内淋巴囊的各个区域,形成功能性通道参与内淋巴的调节,从而保持内耳内环境的稳定.     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞Na+,K+-ATP酶不同β亚基的mRNA表达

目的　进一步研究内淋巴囊上皮细胞Na ,K -ATP酶不同 β亚基的表达。方法　采用豚鼠内淋巴囊冰冻切片、原位杂交的方法检测Na ,K -ATP酶不同 β亚基mRNA在内淋巴囊上皮细胞中的表达。结果　在内淋巴囊上皮细胞胞浆内可见Na ,K -ATP酶不同 β亚基的阳性颗粒 ,β1亚基表达较弱 ,β2 亚基表达较强。结论　结合其他报道 ,内淋巴囊上皮细胞具有多种亚基异构体组成的Na ,K -ATP酶的表达 ,而结肠上皮、肾小管上皮的Na ,K -ATP酶几乎仅有α1β1型 ,提示其离子转运过程可能不同。     

水通道蛋白-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊的表达

目的:检测水通道蛋白(AQP)-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊中的表达情况。方法:运用免疫组织化学二步法及免疫荧光染色检测豚鼠耳蜗及内淋巴囊中AQP-1,3的表达。结果:AQP-1主要表达于耳蜗螺旋韧带基底部、Corti器基底膜及鼓阶内侧上皮面及内淋巴囊上皮细胞下的基质组织中;AQP-3主要表达于血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋神经节细胞及内淋巴囊的上皮细胞及其下的基质成分中。结论:AQP-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊中存在广泛表达,但其功能仍未明确。     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞膜的极性

为了研究内淋巴囊上皮细胞多糖蛋白复合物的结构特征,采用具有高电子密度的胶体针和阳离子铁蛋白作为标记物,来显示豚鼠内淋巴囊上皮细胞多糖蛋白复合物的分布;另外,通过神经氨基酸酶及透明质酸酶消化内淋巴囊上皮的酶化学诊断技术,来观察胶体钍在内淋巴囊上皮中各部分多糖蛋白复合物成分的反     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞Na^＋,K^＋—ATP酶不同？…

目的 进一步研究同肉淋巴囊上皮细胞Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶不同β亚基的表达。方法 采用豚鼠内淋巴囊冰冻切片、原位杂交的方法检测Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶不同β亚基ｍＲＮＡ在淋巴囊上皮细胞中的表达。结果 在内淋巴囊上皮细胞胞浆内可见Ｎａ＾＋，Ｋ＾－ＡＴＰ酶不同β亚基的阳性颗粒，β１亚基表达较弱，β２亚基表达较强。结论 结合其他报道，内淋巴囊上皮细胞具有多种亚基异构体组成的Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶     

豚鼠耳蜗和内淋巴囊水通道蛋白的表达

目的 研究豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中水通道蛋白(aquaporin，AQP)不同亚型的定位表达及其意义。方法 用兔抗大鼠AQP1、AQP2、AQP3、AQP4的多克隆抗体，采用免疫组化SP法分别检测相应AQP蛋白亚型在豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中的表达模式。结果 在耳蜗组织中，AQP1、4广泛分布于耳蜗的各个区域，如血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋缘、螺旋神经节等，AQP3除了在血管纹表达呈弱阳性外，其余区域的表达与AQP1和AQP4相似，AQP2则仅表达于Reissner膜。在内淋巴囊组织中，AQP1、AQP3和AQP4在内淋巴囊上皮细胞和上皮下纤维组织均呈强阳性表达，只是AQP3的表达强度稍弱于AQP1和AQP4，而AQP2在内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织均呈阴性表达。结论 水通道蛋白1、3、4以相似的方式广泛分布于豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中，而AQP2则仅表达于Reissner膜，提示不同亚型的AQP可能在不同区域协同作用参与内淋巴的调节，从而保持内耳内环境的稳定。     

Selective amplification and partial sequencing of cDNAs encoding G protein alpha subunits from cochlear tissues.

An approach utilizing the polymerase chain reaction (PCR) was devised to clone members of a family of cDNAs encoding the alpha subunit of G proteins in the cochlea. RNA was extracted from the whole cochlea of the mouse and from the organ of Corti or the lateral wall of the cochlea microdissected from the guinea pig cochlea. The RNA was reverse-transcribed to cDNA which was selectively amplified by PCR using degenerate primers corresponding to two conserved regions of the G protein coding sequence. PCR products were cloned into a plasmid for sequencing. The following seven cDNA clones of particular interest were obtained: three clones putatively coding for part of the alpha-subunit of a stimulatory G protein (Gs), one clone putatively coding for part of the alpha-subunit of an inhibitory G protein (Gi) and three clones putatively coding for part of the alpha-subunit of a transducin (Gi)-like protein. Possible functions in the cochlea of putative G proteins with alpha-subunits partly encoded by these cDNA clones are briefly discussed and future studies are suggested.     

口腔粘膜鳞癌组织中P53和nm23蛋白的表达分析

目的 :研究口腔粘膜鳞癌组织中 P5 3和 nm2 3蛋白的表达及意义。方法 :采用免疫组化方法检测 10 0例口腔粘膜鳞癌组织中 P5 3和 nm2 3蛋白的表达状况。结果 :口腔粘膜鳞癌组织中 P5 3蛋白的阳性表达率为 5 8.0 % ,nm2 3蛋白的阳性表达率为 40 .0 % (P<0 .0 5 )。颈淋巴结有转移者较无转移者 P5 3蛋白阳性表达率高 ,而 nm2 3蛋白阳性表达率低。结论 :P5 3 和 nm2 3蛋白表达状况与口腔粘膜鳞癌颈淋巴结转移有关。     

涎腺腺样囊性癌中PCNA、P16和P27的表达及其临床意义

目的 :研究 PCNA、P1 6、P2 7基因在涎腺腺样囊性癌中的表达及其临床意义。方法 :采用 SP免疫组织化学染色方法检测 5 5例涎腺腺样囊性癌中 PCNA和 P1 6、P2 7基因蛋白的表达 ,使用 SPSS统计软件进行统计分析。结果 :PCNA在所有病例中均有不同程度的表达 ,其表达程度在组织类型、肿瘤部位和肿瘤分期方面存在着显著差异性 (P<0 .0 5 ) ,而在局部复发、转移和累积生存率方面无显著性差异。 P2 7基因阳性表达率为 34.5 % ,其表达程度在肿瘤部位和肿瘤分期方面存在着显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,而在组织类型、局部复发、转移和累积生存率方面无显著性差异。 P1 6 基因阳性表达率为 6 5 .5 % ,其表达程度在所有变量均无显著性差异。结论 :在涎腺腺样囊性癌中 ,PCNA和 P2 7基因作为评估该肿瘤预后的生物学指标需要进一步的研究分析     

3D-real IR MRI detects serendipity of inner ear in enlarged vestibular aqueduct syndrome

Background: Although, the diagnostic criteria for enlarged vestibular aqueduct syndrome (EVAS) were determined by years. On the shoulders of predecessors, we still detected some new discoveries about EVAS by using 3D-real IR MRI.

Aims/objectives: To analyze the signal intensity of membranous and osseous labyrinths of vestibular aqueduct (VA) and endolymphatic sac (ES) in EVAS using three-dimensional real inversion recovery (3D-Real-IR) magnetic resonance imaging (MRI) after intratympanic injection of gadolinium.

Material and methods: The study is a prospective trial, diagnosed EVAS patients (n?=?10) and none- patients (n?=?10) were included. 3D-real-IR MRIs were performed to assess the endolymphatic hydrops (EH) and differentiated the endolymphatic and perilymphatic signal intensities of VA and ES.

Results: Compared to control group, EVAS group had VA osseous labyrinths middle diameter >1.5?mm different from membranous labyrinths. The cochlear EH was correlated with Mondini malformation and irrelation with the level of hearing loss (HL).

Conclusions and significance: Interspace of osseous labyrinths of VA and ES are much larger than their membranous labyrinths, which is not consistance with previous research. And cochlear Mondini malformation may cause endolymphatic fluid malabsorption, inducing cochlear EH. Osteal ampliative of VA and ES and cochlear EH, which are morphogenetic anomalies, may not the direct cause of HL in EVAS.     

豚鼠耳蜗的转基因表达及其意义

目的:探讨耳蜗转基因表达的方法及意义。方法:经圆窗将复制缺陷重组腺病毒(含β-半乳糖苷酶基因,Ad.LacZ)注入豚鼠一侧耳蜗(接种耳)鼓阶,1周后观察接种耳及对侧耳蜗(非接种耳)转基因表达及听力情况。结果:接种耳蜗及对侧耳蜗均有Ad.LacZ表达,其分布相似,但对侧耳蜗中Ad.LacZ基因表达相对较弱,双侧耳接种Ad.LacZ前后听力无明显改变。结论:对侧耳蜗的转基因表达可能对某些内耳疾病的转基因治疗具有重要意义。     

重庆地区鼻咽癌患者血浆EBV-LMP1基因检测及缺失变异分析

目的:研究重庆地区鼻咽癌和非鼻咽癌患者血浆EB病毒潜伏膜蛋白l(EBV-LMP1)基因存在情况及碱基缺失变异状况,探讨其在鼻咽癌发生中的作用.方法:收集重庆籍鼻咽癌患者外周血48例,非鼻咽癌对照者外周血40例,提取DNA后,采用PCR特异性地扩增LMP1基因N端(包含Xho Ⅰ酶切位点)和C端(包含30 bp缺失的区域),N端PCR产物进行Xho Ⅰ酶切.用8%聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离分析酶切及PCR产物,用双脱氧终止法对部分PCR产物进行测序,用DNAssist软件对序列进行碱基缺失变异分析.结果:48例鼻咽癌外周血中,全部扩增出特异性LMP1基因条带,阳性率为100%.40例非鼻咽对照者外周血中,38例扩增出特异性条带,阳性率为95%.与B95-8原型LMP1比较,电泳分离、酶切分析、测序及软件序列分析,48例鼻咽癌患者和38例非鼻咽癌对照者外周血未发现1例存在LMP1基因N端Xho Ⅰ酶切位点和C端30 bp的缺失变异.结论:我国重庆地区鼻咽癌患者和非鼻咽癌对照者血浆携带的EBV为非缺失型(原型);LMPl基因缺失变异与鼻咽癌发病的确切关系还需进一步研究.     

大鼠内淋巴囊与肾脏集合管神经分布研究

目的从形态学上验证内淋巴囊上存在神经分布，并将这些神经纤维的分布与肾脏集合管的神经分布进行比较，为梅尼埃病的病因病理学研究及耳肾相关性研究提供新的思路。方法成年大鼠15只，经活体心脏灌注，取双侧颞骨和肾脏，常规石蜡包埋切片。利用免疫组织化学方法观察神经特异性烯醇化酶（neuronal specific enolase，NSE）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）及神经微丝（neurofilament，NF）蛋白在内淋巴囊和肾脏集合管上的表达，通过图像分析仪对切片阳性染色的分布密度和灰度进行分析，比较二者神经纤维有无类似分布。结果光镜下NSE、GFAP、NF在内淋巴囊上皮及上皮下表达为棕黄色颗粒；肾脏集合管的主细胞胞膜、胞质有稳定、清晰的阳性染色反应，但在肾脏阳性染色并非表现为神经纤维染色，而更像是某种神经物质的染色。内淋巴囊和肾脏集合管在GFAP、NSE、NF的阳性表达上，只有NSE的分布密度差异有统计学意义（P〈0．05），其余指标在灰度和分布密度上差异无统计学意义（P值均〉0．05）。结论内淋巴囊近侧段、中间段和远侧段均有神经纤维分布，以中间段最为丰富；其分布与肾脏集合管上皮主细胞存在的神经染色在灰度和分布密度上并无差别。     

水通道蛋白1在小鼠内淋巴囊的超微结构定位

目的研究水通道蛋白1（aquaporin1，AQP1）在小鼠内淋巴囊表达的精确定位，进一步探讨AQP1在内淋巴囊的作用。方法选取正常昆明小鼠30只，断头分离内耳内淋巴囊，应用冰冻切片免疫荧光染色法研究AQP1在内淋巴囊的组织分布情况，借助免疫电镜观察AQP1在内淋巴囊的超微结构定位。结果AQP1在内淋巴囊上皮下结缔组织层有表达。在纤维细胞胞膜特别是细胞突起的胞膜上可见大量胶体金颗粒标记，而上皮细胞的胞膜未见胶体金颗粒的标记。结论富含AQP1的内淋巴囊上皮下组织可能与内淋巴的吸收及平衡调节密切相关。     

中耳胆脂瘤中热休克蛋白70和细胞周期素依赖蛋白p27的表达及病理意义

目的 探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)和细胞周期素依赖蛋白p~(27)在中耳胆脂瘤中的表达及病理意义。方法 应用免疫组织化学SP法和原位杂交技术,检测40例中耳胆脂瘤上皮中Hsp70、Hsp70mRNA和p~(27)的表达,选用20例正常外耳道皮肤作对照,应用全自动图像分析仪分析各张切片的平均吸光度值。结果Hsp70、Hsp70mRNA和p~(27)在中耳胆脂瘤上皮中表达均明显高于在正常外耳道皮肤中的表达(P<0.05)。而Hsp70和p~(27)二者间在中耳胆脂瘤上皮中表达无相关性(P>0.05)。结论 Hsp70和p~(27)二者可能独自参与了中耳胆脂瘤上皮的增殖、分化及胆脂瘤形成。     

Expressions of aquaporin-2, vasopressin type 2 receptor, transient receptor potential channel vanilloid (TRPV)1, and TRPV4 in the human endolymphatic sac

OBJECTIVE: To localize aquaporin (AQP)2, vasopressin type 2 receptor (V2-R), and transient receptor potential channel vanilloid subfamily 1, 4 (TRPV1, TRPV4) in the human endolymphatic sac (ES). METHODS: Three samples of human ES were sampled during the removal of vestibular schwannoma by way of the translabyrinthine approach. The samples were immediately fixed in 4% paraformaldehyde and embedded in OCT compound; immunohistochemistry was performed with AQP2, V2-R, TRPV1, and TRPV4 polyclonal antibodies. RESULTS: AQP2, V2-R, TRPV1, and TRPV4 proteins were detected in the epithelial layer of the ES but were not observed in connective tissue around the ES. TRPV1 was also expressed in blood vascular endothelial cells of the connective tissue of ES. CONCLUSIONS: AQP2, V2-R, and TRPV4 were expressed in the luminal epithelium of human ES. The same characteristic distribution of water and ion channels is seen in the kidney, where a significant amount of fluid is filtrated and resorbed. ES probably plays an active role in the homeostasis of the endolymph.