视网膜损伤：外泌体转录组学的研究进展

衰老、缺氧、高糖刺激等多种因素导致的视网膜损伤过程中,外泌体发挥着重要作用。外泌体是一种纳米级的细胞外囊泡,包含微小RNA、环状RNA等多种转录产物,广泛参与视网膜色素上皮细胞损伤、新生血管形成、视网膜神经节细胞和光感受器细胞凋亡等过程。通过转录组学分析外泌体对视网膜损伤及修复的调控机制,识别糖尿病视网膜病变、青光眼等眼科疾病相关分子生物标志物,寻找新的治疗靶点,已成为视网膜研究的热点。因此,本文对外泌体转录组学在视网膜损伤中的研究进展进行综述。     

不同细胞来源外泌体对眼表的作用研究进展

外泌体是由细胞分泌的一种膜性囊泡, 可广泛参与细胞间通讯、抗炎、免疫调节等。眼表相关的外泌体来源细胞有间充质干细胞(MSC)、调节性T细胞(Treg)、未成熟树突状细胞(imDC)和髓源性抑制细胞(MDSC)。不同细胞来源的外泌体通过递送不同的生物分子给受体细胞而发挥作用。MSC来源的外泌体通过抑制T细胞增生、转换巨噬细胞表型、调控辅助性T(Th)细胞分化、上调Treg表达等机制对眼表炎症与免疫相关疾病有积极作用, 同时可减少新生血管和炎症反应, 培育了一个可促进角膜损伤修复的微环境。Treg来源外泌体内含微小RNA(miRNA)(miR-503、miR-330和miR-9)和诱导型NO合成酶, 可通过干扰细胞周期进程, 诱导凋亡和其他T细胞分化为Treg表型, 抑制T细胞的同种异体排斥反应从而诱导免疫耐受。imDC来源外泌体通过递送miR-682抑制角膜植片免疫排斥。MDSC来源外泌体在体内外促进Treg扩增, 抑制活化T细胞的增生和细胞毒性反应, 还表达miR-29a-3p和miR-93-5p, 可抑制Th1和Th17细胞分化。鉴于上述外泌体的抗炎及免疫抑制作用, 本文就其对眼表炎...     

外泌体在糖尿病视网膜病变的机制研究进展

外泌体是广泛存在于人体，由机体细胞产生并分泌的纳米级细胞外囊泡，能相对稳定地存在于各种生物组织和体液中，并携带特定的miRNA、蛋白质、转录因子等多种信息分子，参与调控体内多种疾病的病理生理过程。近年来随着外泌体在各学科研究的不断深入，其在眼科学领域的研究也迅速开展，目前发现外泌体在糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、自身免疫性葡萄膜炎、角膜病及青光眼等多种疾病中发挥重要作用。随着生活水平的提高，全世界糖尿病视网膜病变致盲人数逐年增加，而糖尿病视网膜病变机制研究未明，近年许多研究发现外泌体在其中发挥着重要作用，本文对外泌体在糖尿病视网膜病变的发生、发展机制的最新研究进展进行综述。     

间充质干细胞来源的外泌体对糖尿病视网膜病变的作用

外泌体是直径为40-100 nm的细胞外囊泡,其中含有蛋白质、miRNA等多种功能活性物质,并经由不同途径转运至细胞内。研究证实,外泌体能延缓糖尿病视网膜病变的病程进展,通过不同方式,包括直接调控和递送不同的miRNA、长链非编码RNA调控细胞增殖/凋亡因子、抗氧化调控因子、炎症因子、血管内皮生长因子等水平的变化,进而抑制高糖引起的视网膜炎症、新生血管形成、微血管损伤及血管渗漏等视网膜损伤。文章就外泌体的基本特征及其在糖尿病视网膜病变疾病中的研究进展进行系统综述。     

血浆外泌体miR-214-3p作为葡萄膜黑色素瘤诊断及预后评估生物标志物的研究

目的探讨微小RNA(miR)-214-3p在不同类型葡萄膜黑色素瘤(UM)患者血浆外泌体中的差异性表达, 评估其是否可作为UM诊疗的新型分子生物标志物。方法收集2015年12月至2019年10月于北京同仁医院行眼球摘除术并确诊为UM的患者25例, 其中原位梭形细胞型UM组和原位类上皮细胞型UM组各10例, 转移型UM组5例(包括1例梭形细胞型UM患者和4例类上皮细胞型UM患者);同期收集10例健康对照者作为健康对照组, 抽取所有受试者血液样本, 提取血浆外泌体, 透射电子显微镜下观察外泌体形态, 分析外泌体粒径, Western blot法鉴定外泌体标记蛋白, 采用实时荧光定量PCR法测定各组患者血浆外泌体miR-214-3p表达水平。采用差异性检验比较UM患者与健康对照者和不同类型UM患者间的血浆外泌体miR-214-3p的差异表达;通过受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆外泌体miR-214-3p对UM的诊断及分型效能。结果透射电子显微镜下可见, 所提取外泌体呈一侧凹陷的半球形结构, 直径约100 nm。囊泡粒径大小为(82.0±2.7)nm。Western blot结果显示外泌体...     

外泌体在眼底疾病发病及治疗中的作用

外泌体是细胞内的多囊泡体通过与细胞质膜融合后主动分泌到细胞外的小囊泡。外泌体内含有多种活性物质,其在细胞间通讯、疾病进展及作为生物标记物方面的作用已渐被眼底疾病的学者关注。研究显示外泌体参与了湿性年龄相关性黄斑变性病理过程,而间充质干细胞外泌体能够降低湿性年龄相关性黄斑变性患者的血管内皮生长因子转录和翻译;在大鼠糖尿病性视网膜病变血浆中研究发现含有IgG的外泌体可激活视网膜内的经典补体途径促进内皮损伤,应用含有miR-126间充质干细胞衍生的外泌体可限制内皮细胞损伤;在缺血性视网膜病变研究中骨髓间充质干细胞的外泌体可使缺血模型鼠视网膜功能恢复;玻璃体切除联合人脐带组织分离的间充质干细胞外泌体填塞对黄斑裂孔具有辅助治疗作用;视网膜脱离患者使用间充质干细胞分泌的外泌体可抑制光感受器细胞的凋亡;在葡萄膜黑色素瘤患者中外泌体标记物检测有希望成为葡萄膜黑色素瘤的早期诊断手段;在早产儿视网膜病变中小胶质细胞分泌的外泌体具有保护作用等。对外泌体系统的了解及其与眼底疾病中的信号传递机制及疾病转归过程的认识,对优化眼底疾病防治具有重要意义。（国际眼科纵览,2020, 45：442-448）     

miRNA在新生血管性眼病中作用的研究进展

微小RNA( miRNAs)是一类高度保守、非编码的小分子RNA,通过与靶基因转录的mRNA互补配对在转录后水平调节靶基因的表达,人类约有1/3的基因受miRNAs调控.新生血管性眼病是眼科的难治性疾病和重要的致盲原因.最新研究表明,miRNAs在眼内新生血管的发生发展中起到十分重要的调控作用.miRNAs用于治疗新生血管性眼病具有广阔的前景.就miRNAs的功能及其在眼部的表达、miRNAs与眼内新生血管及血管生成因子的关系、miRNAs在糖尿病视网膜病变中的研究现状进行综述.     

微小RNA与眼底疾病

微小RNA (miRNAs)是一类内源性的非编码小分子RNA,广泛存在于真核生物细胞中.miRNAs通过抑制mRNA翻译或降解mRNA的方式下调目的基因的表达水平,被认为是基因转录后表达调控的主要方式,参与调节细胞的增生、分化、死亡等生物学过程.近年来的研究表明,miRNAs的表达水平和/或功能的改变与糖尿病视网膜病变(DR)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、视网膜母细胞瘤(RB)等多种严重致盲性眼底疾病的发生、发展、治疗和预后密切相关.就近年来miRNAs与眼底疾病的研究进展进行综述.     

MicroRNAs在晶状体中的功能

MicroRNAs(miRNAs)是一类包含21～23个碱基的非编码单链小分子RNA。通过与靶基因3'端非翻译区(UTR)不完全碱基配对,使mRNA降解或抑制靶mRNA的翻译,进而发挥基因调控作用。miRNAs广泛参与生物体内的多种生理和病理过程,通过其表达量的上调或下调,影响细胞发育和疾病的进程。近年来许多研究表明,miRNAs在眼部的多种组织,包括晶状体、视网膜和角膜中均有表达,其异常表达可能与某些眼部疾病的发生、发展有密切关系。本文综述近年来miRNAs在晶状体中的表达、功能及研究进展,以期寻求可用于临床诊断、治疗晶状体混浊的新型靶点。     

外泌体在青光眼诊疗中的作用研究进展

外泌体是由各种细胞分泌产生, 广泛存在于生物体液中的纳米级脂质双分子层结构小囊泡, 其内容物复杂, 具有多种生物学功能。外泌体在青光眼的发生和发展中扮演重要作用, 眼内外泌体通过运输青光眼相关蛋白、调节Wnt信号通路、影响细胞外基质周转等参与小梁网细胞调节, 从而影响房水循环;小胶质细胞外泌体介导视网膜神经炎症和相关的炎症信号通路。此外, 眼内液中外泌体稳定存在, 其中差异性表达的蛋白质、RNA等内容物使外泌体具有作为青光眼生物标志物的潜力。在青光眼治疗方面, 干细胞源性外泌体抑制胶质细胞活化及神经炎症, 减少视网膜神经节细胞的损失, 起到神经保护作用。外泌体可通过血-视网膜屏障, 输送神经营养因子、药物或其他治疗分子到靶细胞中, 调节靶细胞的功能, 为青光眼视神经退行性病变提供了新的治疗手段。本文总结国内外青光眼与外泌体领域的研究进展, 并对外泌体在青光眼的发生和发展、诊断及治疗中的作用及机制进行综述, 以期为早期诊断和治疗青光眼提供新思路。     

lncRNA MALAT1通过miR-124-3p/SOX7分子轴促进视网膜血管内皮细胞增殖及迁移和血管生成

目的：探讨lncRNA MALAT1对视网膜血管内皮细胞增殖、迁移及血管生成的影响及其分子机制。

方法：qPCR检测正常对照组、糖尿病患者无视网膜病变组、糖尿病视网膜病变患者组血清中lncRNA MALAT1的表达水平以及葡萄糖培养对lncRNA MALAT1的表达水平的影响。qRT-PCR检测miR-124-3p表达水平; Western blotting检测SOX7表达水平; 双荧光素酶报告系统检测lncRNA MALAT1与miR-124-3p、miR-124-3p与SOX7的靶向作用关系; CCK-8实验检测细胞的增殖活力; Transwell实验检测细胞的迁移能力; 体外成管实验检测hRMECs血管形成能力。

结果：lncRNA MALAT1在糖尿病视网膜病变患者血清中的表达水平显著高于糖尿病患者无视网膜病变组和正常对照组(P<0.001); 体外葡萄糖培养显著促进lncRNA MALAT1在hRMECs细胞的表达,并显著促进hRMECs细胞的增殖、迁移和血管形成(均P<0.05)。敲低lncRNA MALAT1显著抑制hRMECs细胞的增殖、迁移和成管能力(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验表明,lncRNA MALAT1与miR-124-3p、miR-124-3p与SOX7之间存在靶向结合作用。过表达miR-124-3p显著抑制hRMECs细胞的增殖、迁移和成管能力(均P<0.05); 过表达lncRNA MALAT1+miR-124-3p,同时过表达miR-124-3p+SOX7,敲低lncRNA MALAT1+过表达SOX7均显著消除了过表达miR-124-3p对hRMECs细胞增殖、迁移和血管形成的抑制作用(均P<0.05)。

结论：lncRNA MALAT1通过下调miR-124-3p对SOX7的负调控作用促进糖尿病视网膜病变中视网膜内皮细胞增殖、迁移和血管形成。lncRNA MALAT1在糖尿病视网膜病变患者的异常上调可能是微血管功能障碍的潜在生物标志。     

骨髓间充质干细胞来源的外泌体miR-183靶向调控视网膜脱氢酶11对视网膜色素上皮细胞的影响

目的观察骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体上miR-183、视网膜脱氢酶11(RDH11)的表达, 初步探讨两者靶向关系以及对视网膜色素上皮(RPE)细胞的影响。方法分离培养C57BL/6(C57)小鼠BMSC, 鉴定BMSC来源的外泌体。将BMSC分为空白组、模拟空白对照组(mimic-NC组)、miR-183模拟组(miR-183-mimic组)。参照文献方法培养C57小鼠、视网膜变性10(rd10)小鼠RPE细胞。来自rd10小鼠的RPE细胞转染BMSC外泌体并共培养后分为对照组、外泌体组、mimic-NC-外泌体组(mimic-NC-exo组)、miR-183-mimic-外泌体组(miR-183-mimic-exo组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测C57小鼠、rd10小鼠以及各组RPE细胞中miR-183、RDH11 mRNA和蛋白相对表达量。生物信息学网站及双荧光素酶报告分析miR-183与RDH11的靶向关系。细胞计数试剂盒8检测BMSC外泌体上miR-183对RPE细胞增生的影响;原位末端标记法检测RPE细胞凋亡情况。多组间比较采用单因素方差分...     

microRNAs在糖尿病视网膜病变中作用的研究进展

microRNAs(miRNAs)是一种具有调节基因表达功能的非编码小RNA分子,可以在包括血清或血浆在内的许多生物液中由细胞和组织释放.大量研究已经证实不同的miRNAs在糖尿病视网膜病变(DR)中的表达可特异性增高或减少,最近越来越多的证据表明血清和血浆中某些miRNAs在DR中存在特异性表达并参与DR的发生发展,...     

长链非编码RNA中INK4基因座中反义非编码RNA在糖尿病视网膜病变中的研究现状

糖尿病视网膜病变(DR)发病机制复杂。长链非编码RNA(lncRNA)中INK4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)与细胞增生、分化及个体发育过程密切相关,在视网膜血管内皮细胞的异常增生中起重要作用,是DR发病机制研究中的新领域。现有研究发现,ANRIL可能通过核因子-κB、ROS/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶信号通路以及与p300、miR-200b、EZH2协同调节VEGF在DR中的表达和功能,发挥其在DR发生发展中的作用。特异性阻断ANRIL及其相关通路,可能成为未来DR临床治疗中的新靶点。     

非诺贝特对糖尿病小鼠视网膜神经组织中miR-26a-5p/PTEN表达的影响

目的：研究非诺贝特对糖尿病小鼠视网膜神经损伤的保护作用并观察其对miR-26a-5p及其靶基因PTEN的影响。方法：构建糖尿病小鼠模型，并进行非诺贝特灌胃，H&#x0026;E及透射电镜观察视网膜神经损伤情况，Real-time PCR检测视网膜组织中miR-26a-5p的表达，Western blotting检测同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)在视网膜组织中的表达，并观察NF-κB及IL-1β的水平及视网膜神经上皮的结构变化。结果：与糖尿病组相比，非诺贝特治疗组糖尿病小鼠视网膜神经节细胞损伤及神经纤维层萎缩明显减轻，视网膜中miR-26a-5p表达升高，PTEN mRNA和蛋白表达下降，炎性介质NF-κB及IL-1β mRNA表达水平下降(P&#x003C;0.05)。结论：非诺贝特通过上调miR-26a-5p抑制PTEN的表达，降低炎症因子水平，减轻视网膜细胞损伤，发挥糖尿病视网膜神经保护作用。     

MicroRNAs在糖尿病视网膜病变中的相关研究进展

MicroRNAs(miRNAs)是一种小分子非编码RNA,是转录后调节基因表达关键因子,参与调控细胞分化、增殖和新陈代谢等多种生物学过程。在糖尿病视网膜病变(DR)发生发展过程中miRNAs表达差异改变明显,国内外多项研究表明miRNAs调控基因的表达与DR生理病理机制关系密切。部分特异性表达的miRNAs可以通过调控视网膜中氧化应激与炎症反应水平等影响DR发生发展,因此通过增强或抑制这部分miRNAs可以延缓DR病情进展。单个或多个miRNAs的组合可以作为DR新型的转录组学生物标志物,也是未来治疗DR的潜在有效靶点。目前针对血液或体液中特定miRNAs的检测有助于DR的早期干预治疗和病情随访追踪。因此,本文主要对miRNAs及其参与调控DR的分子机制、治疗前景及生物标志物的相关研究进展作一综述。     

外泌体源性miRNA在眼部疾病中的研究进展

外泌体是直径为30～200nm的细胞外泌性囊泡,可由多种细胞释放至细胞外空间。研究证实,外泌体中含有蛋白质、mRNA、microRNA(miRNA)等多种功能活性物质。miRNA是一类短链非编码RNA,可在转录后水平调控基因表达,参与细胞的增殖、迁移、分化等生命活动。外泌体源性miRNA可被选择性组装入外泌体,传递至邻近或远处的细胞,并调节受体细胞的功能。研究表明,外泌体源性miRNA与多种眼科疾病病的发生、发展和转归密切相关,有潜力作为新型生物标志物以指示疾病状态。本文就外泌体源性miRNA的基本特征及其在眼部疾病中的研究进展进行系统综述。     

肿瘤相关成纤维细胞外泌体miR-34c-5p调控喉癌干细胞样生物学特性的体外实验研究

目的 研究喉癌肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)外泌体miR-34c-5p对喉癌细胞体外干细胞样生物学特性的调控作用。方法 喉癌CAFs外泌体中的miR-34c-5p为低表达,将其过表达后收集不同miR-34c-5p表达水平CAFs培养液上清中的外泌体,制备不同外泌体条件培养基（CM）母液,将不同培养基母液加入到喉癌细胞培养液中,观察其对喉癌细胞体外增殖、侵袭、无血清球体形成及平板克隆形成等干细胞样生物学特性的影响,并进一步检测肿瘤干细胞相关基因表达水平的变化。结果 喉癌CAFs外泌体CM能够明显增强喉癌细胞的体外增殖、侵袭、无血清球体形成及平板克隆形成能力,同时上调肿瘤干细胞相关基因表达水平;而将CAFs的miR-34c-5p过表达后,其外泌体CM促进喉癌细胞以上干细胞样生物学特性的作用明显减弱。结论 喉癌CAFs外泌体miR-34c-5p表达下调对于喉癌细胞体外干细胞样生物学特性的维持至关重要,可作为潜在的阻断治疗靶点。     

肿瘤相关成纤维细胞外泌体miRNA-656-3p调控喉癌生长侵袭及丹参酮ⅡA对其调控研究

目的研究喉癌肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)外泌体表达下调的miRNA-656-3p对喉癌细胞生长和侵袭能力的影响以及丹参酮ⅡA对其调控作用。方法将CAFs外泌体miRNA-656-3p表达上调,制备外泌体上清,检测其对喉癌细胞体外增殖、侵袭能力及细胞周期的影响。检测中药提取物丹参酮ⅡA是否具有类似的上调CAFs外泌体miRNA-656-3p表达的作用,其作用后的CAFs外泌体上清是否具有类似的抑制喉癌增殖和侵袭能力的功效。结果过表达miR-656-3p的CAFs外泌体上清能抑制喉癌细胞的体外增殖和侵袭能力,抑制CCND2的表达,并将喉癌细胞阻滞在G0/G1期。而丹参酮ⅡA也可以上调CAFs外泌体中miR-656-3p的表达水平,其作用后的CAFs外泌体能发挥类似的抑制喉癌细胞体外增殖和侵袭的功效。结论喉癌CAFs外泌体miRNA-656-3p的表达下调促进喉癌细胞的生长和侵袭能力,丹参酮ⅡA可上调CAFs外泌体miR-656-3p的表达,通过后者抑制喉癌细胞的生长和侵袭能力。     

微小RNA在糖尿病视网膜病变新生血管生成中的研究进展

微小RNA(miRNA)是一类内生的、长度约20 ～ 24个核苷酸的具有组织特异性和高度保守的RNA,通过与mRNA互补配对在转录后水平降解mRNA或抑制mRNA翻译来负调控靶基因的表达.多项研究已表明miRNA的亚型基因miR-126、miR-31、miR-200b和miR-29等在一定程度上与糖尿病视网膜病变(DR)的新生血管生成有关,通过一系列调控血管内皮生长因子(VEGF)的表达,进而抑制或促进血管新生,而VEGF是一种新生血管的主要促进因子,能够特异性的刺激血管内皮细胞的增生及新生血管生成,破坏血-视网膜屏障,加快DR的进展.因此,揭示miRNA在DR新生血管形成中的作用及其机制是未来DR机制研究的重要方向,并可为DR的防治提供新的策略.现就miRNA在DR新生血管形成的研究进展作一综述.