青蒿琥酯对肿瘤细胞损伤修复基因表达的影响

目的运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术研究青蒿琥酯对肿瘤细胞DNA损伤修复基因表达的影响。方法用青蒿琥酯处理K562细胞72 h,倒置光显微镜下观察细胞形态变化,Trizol法提取总RNA,RT-PCR检测DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)的表达变化。结果倒置光显微镜观察到青蒿琥酯处理的K562细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降,漂浮细胞增多。RT-PCR检测结果显示DNA-PK表达下调。结论青蒿琥酯可通过下调K562细胞DNA-PK表达,诱导K562细胞凋亡发挥其抗癌作用。     

青蒿琥酯对结肠癌HCT116细胞间黏附分子蛋白表达的影响

目的：研究青蒿琥酯对结肠癌细胞锚着不依赖性增殖及其细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）基因蛋白表达的影响。方法：以人结肠癌细胞株HCT116为模型，以软琼脂集落培养试验检测青蒿琥酯对肿瘤细胞的增殖抑制效应；Western blot方法检测青蒿琥酯作用前后细胞ICAM-1蛋白表达的变化。结果：青蒿琥酯能有效地抑制结肠癌细胞HCT116的恶性增殖，且呈剂量依赖性。青蒿琥酯能有效地抑制ICAM-1基因蛋白表达，作用呈时间和浓度依赖性。结论：青蒿琥酯可明显抑制结肠癌HCT116细胞增殖，可能与下调ICAM-1表达有关。     

热疗联合阿霉素对K562/AO2细胞株凋亡及Bcl-2表达的影响

目的：观察热疗联合阿霉素对耐药慢性髓系白血病细胞株K562／AO2的体外增殖抑制作用、凋亡及Bcl-2表达的影响。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT法）确定阿霉素的工作浓度，以该浓度进行化疗或与热疗联合治疗，分别选择温度40，41和42℃，体外作用于K562／AO2。采用MTT法检测对肿瘤细胞增殖的抑制作用；流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2表达。观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果。结果：作用48h后IC50为53μg／ml，以此为实验的工作浓度。单纯热疗60min对K562／AO2细胞有抑制作用（P〈0．01），并随温度增高而增强；单纯化疗对K562／AO2细胞也有抑制作用；各热化疗组对K562／AO2均有明显的抑制作用（P〈0．01），随着温度的增高而增强。流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2的表达，热疗组、化疗组及热化疗组的细胞凋亡率均较对照组显著升高，各组之间差异有统计学意义（P〈0．01）；Bcl-2蛋白的表达下降，各组之间的差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：热疗联合阿霉素能增强对K562／AO2细胞的体外抑制作用，提高肿瘤细胞的凋亡率，下调Bcl-2蛋白的表达。     

青蒿琥酯治疗MRL／lpr狼疮鼠肾炎的病理变化及机制

目的研究青蒿琥酯对MRL／lpr狼疮鼠肾炎的疗效，探讨青蒿琥酯治疗狼疮鼠肾炎的病理变化及机制，为临床用于治疗狼疮患者提供依据。方法MRL／lpr鼠随机分为青蒿琥酯治疗组、环磷酰胺（CTX）治疗组和对照组。16周龄时青蒿琥酯组给予青蒿琥酯125mg／（kg·d）治疗16周，CTX组给予CTX100mg／kg×2d腹腔注射。PAS染色观察病理改变，免疫荧光检测补体G沉积，运用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测小鼠肾脏血管内皮生长因子（VEGF）的mRNA表达水平，用免疫组化法检测肾脏中VEGF的蛋白表达。结果①青蒿琥酯组和CTX组肾脏病理损伤较对照组明显减轻；②青蒿琥酯组和CFX组肾脏内补体C3沉积较对照组明显减少；③青蒿琥酯组肾脏VEGFmRNA表达（0．72±0．11）和CFX组肾脏VEGFmRNA表达（066±0．19）均低于对照组（0．92±0．06）（P〈0．05）；④青蒿琥酯组和CTX组肾脏VEGF表达比对照组明显减少。结论青蒿琥酯治疗MRL／lpr狼疮鼠可以改善。肾脏病理损伤。抑制C3的沉积及VEGF的产生是青蒿琥酯治疗MRL／lpr狼疮鼠肾炎的有效的可能机制。     

青蒿琥酯通过诱导凋亡发挥抗THP-1细胞增殖作用

目的:了解青蒿琥酯(artesunate,ART)是否能抑制THP-1细胞的增殖,并探讨其相关的抗白血病的作用机制。方法:分别用5种浓度的青蒿琥酯处理THP-1细胞24、48和72 h,采用CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot方法检测STAT3、Caspase3和Caspase8蛋白表达水平的变化。结果:与对照组相比,ART能明显抑制THP-1细胞的增殖,其效应呈剂量依赖性(r=0.9829,P0.05);流式细胞术实验结果表明,ART能显著增加THP-1细胞的凋亡,且ART处理THP-1细胞后STAT3蛋白表达显著下降(P0.01),同时Caspase3及裂解的Caspase3和Caspase8表达均增加(P0.01)。结论:青蒿琥酯能抑制THP-1细胞的生长,可能与下调STAT3蛋白的表达,并同时激活Capase3和Caspase8有关。     

人可溶性血管内皮生长因子受体1抑制白血病细胞增殖的研究

本研究通过体外实验探讨人可溶性血管内皮生长因子受体1（sFLT-1）对白血病细胞增殖的抑制作用。用RT—PCR检测白血病细胞株K562、HL-60、U937和骨髓LTC—IC VEGF mRNA、VEGF—R1（FLT-1）mRNA的表达，用流式细胞术检测上述细胞VEGF和VEGF—R1（FLT-1）的表达，ELISA法检测细胞培养上清中VEGF的含量，将sFLT-1加入K562、HL-60白血病细胞株和骨髓LTC—IC培养体系中，应用MTT法计算细胞生长的抑制率。结果显示：白血病细胞株K562、HL-60、U937和骨髓LTC—IC均表达VEGF，以K562表达VEGF量最高。K562和HL-60细胞株还表达FLT-1，U937细胞和骨髓LTC—IC表达的FLT-1表达量很低。sFLT-1明显抑制白血病细胞株K562及HL-60的生长，并且随着sFLT-1浓度的增加，其抑制率增加，以用药后48小时抑制作用最明显。结论：sFLT-1能够抑制某些白血病细胞株的生长，其抑制效应随用药浓度的增加而增加，而sFLT-1对正常骨髓细胞增殖无影响。     

三氧化二砷对K562细胞血管内皮生长因子及受体和MMP-2、9的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对K562细胞的血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）表达水平和基质金属蛋白酶2、9（MMP-2、9）活性的影响。方法用MTT法测定As2O3对K562细胞的毒性，酶联免疫吸附试验测定细胞上清中VEGF含量，流式细胞术检测细胞的VEGFR表达率，明胶酶谱法半定量测定细胞上清中MMP-2、9的活性。结果①Mar法检测K562细胞的，IC50为（2．12±0．11）μmol／L，0．4～6．4μmol／LAs2O3可显著抑制K562细胞的增殖（P＜0．05）。②0．05μmol／L As2O3对VEGF无明显影响（P＞0．05）；0．4和3．2μmol／LAs2O3可明显下调VEGF表达（P＜0．05）；As2O3对VEGFR的表达无明显影响（P＞0．05）。③MMP-2、9经0．05μmol／L As2O3处理72h、0．4和3．2μmol／L As2O3处理24、48和72h均可显著抑制K562细胞MMP-2、9的活性（P＜0．05），这种抑制作用随As2O3浓度增加和作用时间延长而逐渐增强。结论As2O3可下调K562细胞VEGF的表达和抑制MMP-2、9的活性。     

二烯丙基二硫化物对HL-60白血病细胞株VEGF表达及分泌的影响

为了研究二烯丙基二硫化物（diallyl disulfide，DADS）对白血病HL-60细胞株VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白分泌的作用，并从影响VEGF生成的角度探讨DADS的抗白血病机制，应用ELISA法检测药物作用前后白血病HL-60细胞培养上清液中VEGF蛋白的含量；RT-PCR法检测药物作用前后白血病HL-60细胞VEGF mRNA的相对含量。结果表明：HL-60细胞中均有VEGF mRNA的表达和VEGF蛋白的分泌；与空白对照相比，DADS3个浓度组（0，625，1，25，2，5μg／ml）作用HL-60细胞48小时和72小时均能下调HL-60细胞VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌（P〈0.01）。3个浓度组间差异显著（P〈0．01），其下调HL-60细胞VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌效果与浓度相关（r〉0.9，P〈0．01）。结论：DADS可能通过抑制VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌发挥抗白血病效应。     

青蒿琥酯通过下调Rad51增加宫颈癌细胞HeLa对顺铂的敏感性

目的:研究青蒿琥酯和顺铂(cis-platinum,CDDP)对宫颈癌HeLa细胞的增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞,分别用青蒿琥酯(artesunate,ART)、CDDP以及两药联合处理24和48 h,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)、流式细胞仪检测青蒿琥酯和CDDP及两者联合应用对He La细胞的生长增殖和细胞凋亡作用。蛋白质印迹法检测每组细胞中重组蛋白A(recombination protein A,Rad51蛋白)表达水平;RT-PCR检测Rad51 mRNA的表达水平。结果:CCK-8及流式细胞仪结果显示与对照组相比,各给药组均可明显抑制HeLa增殖,促进细胞凋亡,差异均有统计学意义(P0.01),联合给药组的抑制作用更加显著(P0.001),且呈时间浓度依赖性。RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示:与对照组相比,Rad51表达下调,联合给药组的上述相应变化更加显著,但两单独给药组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论:ART及CDDP均可抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,促进凋亡。且ART可能通过下调Rad51来增加宫颈癌HeLa细胞对CDDP的敏感性。     

亚硒酸钠对K562/ADR细胞系VEGF表达的影响

为了探讨亚硒酸钠对K562/ADR细胞VEGF表达的影响,分别以5、10μmol/L的亚硒酸钠对培养的K562及K562/ADR细胞进行处理,应用ELISA法检测亚硒酸钠处理前和处理后不同时间的K562及K562/ADR细胞上清液中VEGF含量,用MTT法检测逆转耐药倍数。结果表明：亚硒酸钠可以增加K562/ADR细胞对阿霉素的敏感性,其逆转耐药的倍数为3.48倍;两种细胞系分泌的VEGF含量随培养时间的延长增加,并且各个时间段的K562/ADR细胞VEGF表达均高于K562细胞（P〈0.05）;5、10μmol/L的亚硒酸钠在72小时内均不能抑制K562细胞VEGF的分泌（P〉0.05）;而作用96小时时K562细胞上清液中VEGF水平虽有下降,但未达统计学意义;5、10μmol/L的亚硒酸钠在48小时内均不能抑制K562/ADR细胞VEGF的分泌（P〉0.05）,10μmol/L的亚硒酸钠在作用72和96小时可以明显抑制VEGF的分泌（P〈0.001）,5μmol/L的亚硒酸钠在作用96小时可以抑制VEGF的分泌（P〈0.001）。结论：VEGF可能与白血病多药耐药有关,而亚硒酸钠则能抑制白血病细胞分泌VEGF。     

血府逐瘀汤影响慢性粒细胞白血病VEGF表达的体外研究

目的:体外研究血府逐瘀汤含药血清对慢性粒细胞白血病细胞VEGF表达的影响。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测20例初治CML患者、20例正常人骨髓细胞以及人慢性粒红白血病急性变K562细胞上清液的VEGF含量,并测定CML原代细胞和K562细胞加入不同浓度血府逐瘀汤含药血清共同培养后上清液的VEGF含量。结果:CML原代细胞上清液VEGF浓度为(389.27±65.77)pg/mL、K562细胞VEGF浓度为(461.24±137.57)pg/mL,均比正常人(125.45±28.24)pg/mL显著增高(P<0.05),加入不同浓度的含药血清,在中、高浓度范围,CML原代细胞、K562细胞VEGF表达均明显下降,分别为(152.43±26.29)pg/mL、(80.31±19.73)pg/mL和(188.86±32.77)pg/mL、(114.81±14.16)pg/mL(P<0.05)。结论:异常血管新生可能参与CML发病,血府逐瘀汤含药血清在体外能显著抑制CML原代细胞和K562白血病细胞表达VEGF,该方有参与抑制CML异常血管形成的作用。     

血管内皮生长因子对人慢性髓性白血病细胞系 K562细胞的抗凋亡作用

为了探讨血管内皮生长因子（VEGF）对人白血病细胞增殖的影响,用形态学、DNA断裂琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪（FCM）DNA倍体分析观察VEGF对As2O3诱导的K562细胞凋亡的影响;采用蛋白印迹法检测不同浓度的VEGF对K562细胞bcl-XL、Bax和caspase-3蛋白表达的影响;用RT-PCR方法检测上述条件下bcl-XL、Bax的mRNA变化.结果表明：VEGF能阻止K562细胞发生凋亡,与细胞周期分布改变无相关性（P＞0.05）;随着VEGF浓度的增加K562细胞bcl-XL的mRNA与蛋白表达上调,Bax的蛋白表达降低;激活pro-caspase-3→caspase-3被阻止或减少.结论：通过影响bcl-XL/Bax表达比率可能是VEGF抑制K562细胞凋亡的机制之一.     

HO-1基因表达对伊马替尼耐药的慢性髓系白血病细胞增殖的影响

目的 通过氯高血红素(Hemin)诱导伊马替尼耐药慢性髓系白血病(CML)细胞株K562/A02-IM 中血红素加氧酶-1(HO-1)基因表达,探讨HO-1基因对伊马替尼耐药CML细胞增殖的影响,为治疗CML多药耐药及新药的开发提供思路和实验依据.方法 采用RT-PCR法检测20例CML伊马替尼耐药患者骨髓细胞中HO-1基因的表达,半定量RT-PCR法和Western blot法分别检测不同剂量Hemin处理K562/A02-IM细胞不同时间后HO-1的表达,通过Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况,采用MTT法检测Hemin诱导及锌原卟啉抑制HO-1表达与细胞存活率的关系.结果 RT-PCR结果显示耐药患者骨髓细胞中HO-1基因阳性表达,半定量RT-PCR和Western blot法显示,不同浓度的Hemin(0、10、20及40 μmol/L)处理K562/A02-IM细胞16 h后,HO-1的表达量随Hemin浓度的升高而增加,存在剂量依赖关系,而20 μmol/L Hemin分别处理K562/A02-IM细胞0、8、16、24 h后,HO-1的表达肇在处理16 h组最高.Annexin V/PI法检测显示,0、10、20及40 μmol/L Hemin作用于K562/A02-IM细胞16 h后细胞凋亡率分别为(17.61±0.01)%、(12.13±0.11)%、(7.94±0.03)%和(4.62±0.15)%,其抗凋亡的作用呈剂量依赖性;20 μmol/L Hemin作用K562/A02-IM细胞8、16及24 h的细胞凋亡率分别为(14.72±0.05)%、(8.15±0.07)%和(16.37±0.13)%.MTT法检测显示与对照组相比,Hemin诱导K562/A02-IM细胞HO-1基因表达促进了细胞的增殖,且作用存在剂量依赖关系;而锌原卟啉抑制HO-1的表达,促进了细胞的凋亡(P<0.05).结论 CML伊马替尼耐药患者骨髓细胞HO-1基因阳性表达,HO-1 是一种可诱导表达型基因,具有抗细胞凋亡及促进细胞增殖的作用,抑制HO-1 表达可能成为治疗CML耐药的新方法.

Abstract：

Objective To investigate the effect of heme oxygenase-1 (HO-1 ) expression on cell growth and apoptosis in imatinib resistant chronic myeloid leukemia (CML) cells ( K562/A02-IM) , and explore the relationship between HO-1 gene and CML. Methods The expression of HO-1 in 20 drug-resistant CML patients was detected by RT-PCR. Different concentrations of hemin were used to induce HO-1 expression of K562/A02-IM, HO-1 expression at different time was detected by RT-PCR and Western blot analysis. Cell apoptosis was detected by Annexin V/PI staining, and MTT assay was used to detect viability of K562/ A02-IM cells after induction or inhibition of HO-1 gene by hemin and zinc protoporphyrin (ZPP). Results RT-PCR showed that HO-1 was expressed in the bone marrow mononuclear cells (BMMNCs). When treated with hemin at different concentrations (0, 10, 20, 40 μmol/L) for 16 h, the expression of HO-1 in K562/ A02-IM was increased in a dose-dependent manner, and peaked at 20 μmol/L of hemin for 16 h. The apoptosis rates were (17.61 ±0.01)%, (12. 13 ±0.11)%, (7.94 ±0.03)% and (4.62 ±0. 15)% at 0,10, 20 and 40 μmol/L of hemin respectively for 16 h and were (14. 7 ± 0.05) % , (8. 1 ± 0. 07) % and (16. 3 ± 0. 13)% at 20 μmol/L of hemin treatment for 8,16, and 24 h respectively. Hemin induced apoptosis of K562/A02-IM cells in a dose-dependent manner. The expression of HO-1 was induced in K562/A02-IM cells in a dose-dependent manner, and the survival of K562/A02-IM cells was significantly increased as compared to that of control group. When HO-1 was inhibited by ZPP, the cells survival was sharply decreased compared to that of the control group (P<0.05). Conclusion HO-1 was expressed in the BMMNCs. It is a kind of molecules whose expression can be induced and can promote the growth of drug-resistant cells. Inhibition of HO-1 expression probably be used for the treatment of drug-resistant CML.     

靶向血管内皮生长因子siRNA对K562细胞凋亡及survivin表达的影响

目的 应用腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF) siRNA沉默K562细胞中VEGF的表达,观察其对K562细胞凋亡及凋亡抑制基因survivin表达的影响.方法 应用成功构建的携带特异性VEGF siRNA的重组腺病毒(Ad5-VEGF siRNA)感染K562细胞,实验分为3组:实验组(K562/Ad5-VEGF siRNA组)、空载体组(K562/Ad5组)、对照组(K562组).通过RT-PCR法检测细胞内VEGF及survivin mRNA的表达,ELISA法检测细胞培养上清中VEGF蛋白表达,Western blot法检测细胞survivin蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 实验组细胞VEGF及survivin mRNA表达水平较对照组均有明显降低(P＜0.01),且细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平[(1121±15)pg/ml]低于空载体组[(1290±28)pg/ml]和对照组[(1303±28)pg/ml](P＜0.01).Western blot法检测结果显示,实验组survivin蛋白表达水平(0.26 ± 0.11)较对照组(0.74±0.10)也显著降低(P＜0.01).实验组细胞凋亡率与对照组比较明显增加(P＜0.01).结论 应用RNA干扰沉默K562细胞中VEGF基因表达后,survivin的表达也随之降低,同时细胞凋亡率相应增加.VEGF可诱导K562细胞中survivin基因表达,可能是survivin基因表达的上游调控因子.     

氯化锂抑制K562白血病细胞增殖及诱导凋亡机理的研究

本研究旨在探讨氯化锂(LiCl)在体外抑制K562白血病细胞增殖和诱导凋亡的机制。在细胞培养体系中加入LiCl(30mmol/L)进行培养;以流式细胞术分析细胞周期;用半定量RTPCR检测bcr/abl融合基因mRNA的表达;用原子吸收光谱仪检测不同时间点细胞内Li 浓度及Na 、K 通道阻断剂TTX、FSK分别对细胞内Li 浓度的影响,并观察了Na 、K 通道阻断剂对LiCl抑制细胞生长的作用。结果显示:LiCl(30mmol/L)导致K562白血病细胞出现G2/M期阻滞,bcr/ablmRNA表达下降,细胞内Li 的浓度从30分钟开始增加,在2小时达高峰,以后逐渐下降,4小时达到平衡;Na 、K 通道阻断剂TTX(3.4×10-7mol/L)与FSK(5×10-5mol/L)分别阻断Na 、K 通道后可升高细胞内Li 的浓度,并增加LiCl对K562白血病细胞增殖的抑制作用。结论:LiCl诱导K562细胞增殖抑制和凋亡的机制可能与K562细胞G2/M期阻滞、下调bcr/ablmRNA的表达及Na 、K 通道被阻断后Li 通道的状态有关。     

RNA特异性干扰bcr-abl融合基因联合p27基因克隆对K562细胞的影响

本研究旨在探讨RNA干扰抑制慢性髓系白血病bcr-abl融合基因表达,以及RNAi和p27基因克隆联合作用对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。以细胞系K562为研究对象,合成并转染针对K562细胞bcr-abl融合基因融合位点的21nt siRNA,应用Northern blot法检测bcr-abl融合基因的表达,Western blot法检测BCR-ABL蛋白及凋亡相关蛋白BCL-xL的表达;同时应用RT-PCR扩增p27基因,构建P27-pcDNA3.1载体,转染p27基因入缺失p27基因的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株;经Western blot证实有P27蛋白表达后,联合应用RNA干扰及p27基因克隆,通过MTT法及流式细胞仪等检测联合作用后对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。结果表明,RNA干扰组K562细胞bcr-abl融合基因的表达水平明显下降,转染24小时时有18.4%的K562细胞发生凋亡,细胞凋亡相关蛋白BCL-xL的表达水平下调,出现明显的G1期阻滞;表达外源性P27蛋白的P27-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株。流式细胞仪检测显示,G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少;RNA干扰与p27基因克隆联合作用于K562细胞后,凋亡细胞比例明显上升(33.4%)。MTT法显示,细胞存活率较单纯p27-K562细胞组及RNA干扰-K562细胞组均明显下降(p0.01和p0.05)。结论:特异性siRNA分子可以抑制bcr-abl融合基因的表达,诱导K562细胞分化或凋亡。RNA干扰联合p27基因克隆对抑制K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用。     

自分泌VEGF对人慢性髓性白血病细胞系K562的作用

血管内皮细胞生长因子（VEGF）是血管内皮细胞特异性的丝裂原,与实体肿瘤的血管生成、生长、转移及不良预后密切相关。最近的报送表明,慢性髓性白血病（CML）病人骨髓过度表达VEGF。然而,VEGF在CML细胞异常增殖中的作用还不清楚。为了探讨自分泌VEGF对CML细胞系K562增殖与凋亡的影响,本研究首次采用正义和反义VEGF121cDNA转染K562细胞,通过RT-PCR及ELISA方法鉴定各转染克隆VEGF mRNA及蛋白的表达。结果显示,转染反义VEGF121 cDNA可以降低K562细胞VEGF的表达,而转染正义VEGF121 cDNA可使VEGF的表达提高3倍以上。MTT,集落形成试验及细胞凋亡检测试验观察：反义VEGF121 cDNA转染可以抑制K562细胞的增殖及其集落形成,而促进其凋亡;正义VEGF121 cDNA转染与其结果相反。本研究结果说明自分泌VEGF在CML细胞系K562的增殖与凋亡起重要作用。     

5-氮杂胞苷可通过降低K562细胞miRNA-17-19b的表达抑制细胞增殖

本研究探讨miRNA-17-19b在不同细胞系的表达差异。用5-氮杂胞苷（5-aza）处理miRNA-17-19b表达水平相对较高的K562细胞系,观察其对miRNA-17-19b表达水平的影响。提取K562细胞系、HL-60细胞系、NB-4细胞系、HeLa细胞系、慢性髓系白血病（CML）病人外周血白细胞及动员后的正常人外周血白细胞总RNA,在多聚腺苷酸（ployA）加尾后进行逆转录,用荧光时实定量PCR的方法检测以上细胞miRNA-17-19b的相对表达水平。分别在24、48、72小时用2.5μmol/L的5-氮杂胞苷处理K562细胞系,在96小时后收集细胞,用荧光时实定量PCR的方法检测处理前后miRNA-17-19b的表达水平变化。抑制miR-19a在K562细胞系的功能,观察其对K562细胞增殖的影响。结果表明：K562细胞系及CML病人外周血白细胞的miRNA-17-19b的表达水平高于动员后的正常人外周血白细胞。对miR-17-19b表达水平相对较高的K562细胞系,5-氮杂胞苷处理可降低其miRNA-17-19b表达水平,通过抑制miR-19a的功能可以抑制K562细胞系的增殖。结论：与正常人外周血白细胞相比较,miRNA-17-19b在K562细胞系及CML病人的外周血白细胞中的表达水平较高,5-氮杂胞苷可抑制miRNA-17-19b在K562细胞系的表达,其中对miR-19a影响尤其显著;体外抑制miRNA-19a的功能可抑制K562细胞系的增殖。     

青黛复方对K562细胞bcr/abl及JWA基因表达的影响

为了研究不同浓度青黛复方对K562细胞株增殖、凋亡及bcr/abl、JWA基因表达水平的影响,为临床治疗提供理论依据,以不同浓度药物（2.5、5、7.5、10和20 mg/ml）处理K562细胞24小时后,光学显微镜下观察形态学改变;采用半定量RT-PCR技术检测各组bcr/abl及JWA基因在mRNA水平表达的变化.结果发现,随药物作用浓度升高,K562细胞逐渐呈典型凋亡形态学改变;bcr/abl及JWA基因表达呈浓度依赖性下降.结论：青黛复方能部分抑制K562 bcr/abl及JWA基因的表达,其对CML的疗效可能是通过促进细胞凋亡而实现的.