丝胶通过影响自噬和氧化应激发挥保护STZ致胰岛素瘤细胞损伤的作用

目的 探讨丝胶是否通过影响自噬和氧化应激发挥保护链脲佐菌素(STZ)致胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)损伤的作用。方法 INS-1细胞随机分为A、B、C、D、E五组。A组(正常组)细胞常规条件培养24h,不做其他处置;B组(STZ致损伤组)细胞中加入10mmol/L的STZ培养24h;C组、D组、E组细胞中分别加入10mmol/L的STZ和不同剂量的丝胶(150μg/mL、300μg/mL、600μg/mL)培养24h。分别采用免疫蛋白印迹法和实时荧光定量PCR法检测细胞自噬相关基因蛋白和mRNA表达,DCFH-DA活性氧(ROS)荧光探针检测细胞ROS的含量。结果 C组、D组、E组LC3B-II/LC3B-I、SIRT1、ATG5、BECLIN1、PINK1蛋白和mRNA的表达均明显高于B组(P<0.05);3组细胞各指标蛋白和mRNA的表达水平依次为E组>D组>C组,差异有统计学意义(P<0.05)。C组、D组、E组INS-1细胞ROS含量明显低于B组(P<0.05);3组细胞ROS含量依次为E组相似文献   

丝胶对STZ改损伤INS-1细胞活性和胰岛素分泌的影响

目的:探讨丝胶对STZ致损伤的大鼠胰岛素瘤INS-1细胞活性和胰岛素分泌的影响.方法:以链脲佐菌素(STZ)诱导INS-1细胞损伤,细胞分为正常组、STZ组和丝胶组(300μg/L).普通光学倒置显微镜观察各组细胞的一般状态;MTT法测定细胞活性;ELISA法检测培养上清中胰岛素的含量.结果:与正常组相比,STZ组细胞活性明显下降,培养上清中胰岛素的含量明显降低(P＜0.05).经300μg/L丝胶处理后,INS-1细胞活性、培养上清中胰岛素的含量均明显升高(P＜0.05).结论:丝胶蛋白可提高STZ致损伤大鼠胰岛素瘤INS-1细胞的活性,以及促进胰岛素的分泌.     

丝胶对大鼠INS-1细胞Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨蚕茧提取物—丝胶对大鼠INS-1细胞Bcl-2蛋白表达的影响.方法:INS-1细胞分为三组,正常对照组、链脲佐菌素(STZ)损伤组和丝胶处理组.正常对照组细胞用不含药物的完全培养基培养;STZ损伤组细胞用完全培养基配制的STZ溶液(10mmol/L)培养24h;丝胶处理组细胞用完全培养基配制的同时含STZ(10mmol/L)和丝胶(300μ g/ml)的溶液培养24h.采用Western Blotting法检测各组INS-1细胞Bcl-2蛋白的表达情况.结果:与正常对照组相比,STZ损伤组INS-1细胞Bcl-2蛋白的表达明显降低(P＜0.05);与STZ损伤组比较,丝胶处理组细胞Bcl-2蛋白的表达明显升高(P＜0.05).结论:丝胶可能通过上调Bcl-2蛋白的表达抑制β细胞凋亡.     

天麻素对STZ损伤INS-1细胞的保护和修复作用

目的研究天麻素（GAS）对大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1）的影响,及其对链脲佐菌素（STZ）损伤INS-1细胞的保护和修复作用。方法实验分正常对照组（NC）,天麻素组（GAS）,STZ损伤组（STZ）,天麻素保护组（GAS＋STZ）和天麻素修复组（STZ＋GAS）。INS-1细胞传代培养后,用四氮唑蓝（MTT）法测定细胞活力,放免法测定胰岛素分泌量,比色法测定丙二醛（MDA）含量和总抗氧化能力（T—AOC）。结果GAS可促进INS-1细胞分泌胰岛素（P〈0．05,P〈0．01）,低浓度GAS可增强INS-1细胞活力（P〈0．01）;GAS可提高STZ损伤的INS-1细胞活力（P〈0．01）,高浓度的GAS对STZ损伤的INS-1细胞具有修复作用,可促进胰岛素的分泌（P〈0．01）;GAS可降低STZ损伤的INS-1细胞的MDA含量（P〈0．01）,提高STZ损伤的INS-1细胞的T．AOC（P〈0．01）。结论GAS能够增强INS-1细胞活力,促进胰岛素分泌,减轻STZ对INS-1细胞的损伤,提高STZ损伤的INS-1细胞的抗氧化能力。     

牛磺熊脱氧胆酸对棕榈酸诱导的INS-1细胞凋亡的保护作用

目的:探讨牛磺熊脱氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)对棕榈酸(palmitate)诱导的INS-1细胞凋亡的保护作用?方法:分别用不同浓度棕榈酸(0.25?0.50?1.00 mmol/L)?棕榈酸(0.50 mmol/L)加TUDCA(100 μmol/L)培养INS-1细胞24 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞早期凋亡,Western blot检测内质网应激相关蛋白GRP78的表达?结果:与对照组相比,棕榈酸组(浓度≥0.5 mmol/L)的INS-1细胞凋亡率显著上升(P < 0.05);加TUDCA培养24 h以后,与棕榈酸组相比,INS-1细胞凋亡率显著下降(P < 0.05)?此外,棕榈酸组(0.5 mmol/L)INS-1细胞内质网应激相关蛋白GRP78的表达显著上升(P < 0.05);加TUDCA培养24 h以后,与棕榈酸组相比,INS-1细胞GRP78蛋白表达显著下降(P < 0.05)?结论:TUDCA能够减少游离脂肪酸引起的INS-l细胞凋亡,对INS-1细胞发挥保护作用?而减少内质网应激蛋白的表达,缓解内质网应激可能是其作用机制之一?     

氯化镉对大鼠胰岛瘤INS-1细胞自噬与凋亡的影响

目的 研究典型持久性有毒污染物氯化镉(CdCl2)对大鼠胰岛瘤INS-1细胞自噬和凋亡的影响及二者的关系,同时探索可能的分子机制和参与因素.方法 ①以免疫印迹法(Western blot)检测细胞自噬和凋亡标志蛋白及自噬调节相关蛋白;②以RNA干扰(RNAi)手段沉默INS-1细胞自噬必需基因即自噬相关基因7(Atg7),以检测CdC12所诱导的细胞自噬对凋亡的影响;③以2′,7′-二氯荧光素二乙酸盐(DCFH-DA)染色法检测胞内活性氧(ROS)水平变化,并用活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)和CdC12联合处理INS-1细胞,以确定ROS是否参与CdCl2所诱导的INS-1细胞自噬和凋亡.结果 CdCl2通过刺激ROS的产生进而诱导INS-1细胞自噬和凋亡;CdCl2所诱导的INS-1细胞自噬为非哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)依赖途径,且可能起到抑制凋亡的作用.结论 CdCl2可能通过刺激活性氧的增加而诱导INS-1细胞自噬和凋亡,且自噬是凋亡的抑制因素.     

槲皮素对糖尿病大鼠胰岛β细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:探究槲皮素对糖尿病大鼠胰岛β细胞损伤的作用及机制.方法:将SD大鼠随机分为4组,即对照组、糖尿病组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组,每组8只.除对照组外,其他3组大鼠予高脂饲料喂养以及一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,剂量为40 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型.比较各组葡萄糖耐量试验的血糖水平.将INS-1细胞分...     

丝胶对高糖所致足细胞损伤和JNK信号通路的影响

目的：探讨丝胶对高糖所致足细胞损伤时c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路相关蛋白的表达及足细胞凋亡的影响,阐明丝胶的保护作用及其可能机制。方法：分化成熟的条件永生化小鼠足细胞随机分为正常对照组(含5.5 mmol·L^-1葡萄糖的培养基)、高渗对照组(含5.5 mmol·L^-1葡萄糖+24.5 mmol·L^-1甘露醇的培养基)、高糖组(含30.0 mmol·L^-1葡萄糖的培养基)、低浓度丝胶组(含30.0 mmol·L^-1葡萄糖+150.0 mg·L^-1丝胶的培养基)、中浓度丝胶组(含30.0 mmol·L^-1葡萄糖+300.0 mg·L^-1丝胶的培养基)和高浓度丝胶组(含30.0 mmol·L^-1葡萄糖+600.0 mg·L^-1丝胶的培养基)。采用光学倒置显微镜观察各组足细胞形态表现,实时荧光定量PCR (RT-q PCR)法检测各组足细胞中裂孔膜蛋白(Nephri...     

不同葡萄糖浓度对INS-1细胞PPARδ表达的影响

目的 研究不同葡萄糖浓度对大鼠INS-1 细胞PPARδ表达的影响,以初步阐明PPARδ在胰岛细胞糖脂代谢关联中的作用.方法 分别用含3、11、20 mmol/L葡萄糖的RPMI1640培养基,培养INS-1细胞24 h后,冻融法裂解细胞,检测INS-1细胞内的甘油三酯水平.提取RNA和核蛋白,RT-PCR半定量检测PPARδ mRNA,Western blot 检测PPARδ蛋白表达.结果 随着葡萄糖浓度的升高INS-1细胞内甘油三酯含量增高,而PPARδ mRNA和蛋白的表达均明显降低.结论 葡萄糖促进,INS-1细胞内甘油三酯沉积,而PPARδ的表达下降可能是高糖条件下胰岛细胞脂质沉积的重要原因.     

石斛合剂对STZ损伤胰岛细胞的保护作用

目的观察石斛合剂对胰岛细胞损伤的影响。方法分别用0%、5%、10%、20%的石斛合剂含药血清和13.3 nmol/L的IGF-1孵育原代培养7 d胰岛细胞24 h后,加入1.0 mmol/L的STZ作用24 h,采用MTT法观察胰岛细胞活性;AO-EB染色法观察各组胰岛细胞的存活情况。Annexin V-PI法检测各组胰岛细胞的凋亡、坏死情况。结果 10%、20%石斛合剂含药血清对胰岛细胞的保护作用显著,细胞活性和存活细胞数均较模型对照组明显增加(P<0.05),凋亡、坏死率较模型组明显下降(P<0.05),其保护作用与IGF-1阳性对照组相似。结论石斛合剂含药血清能保护胰岛细胞,减轻STZ对其所致的损伤。     

小鼠PPARδ腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达

目的 构建含有小鼠过氧化物酶增殖激活受体δ(peroxisome proliferate activated receptor delta,PPARδ)基因的重组腺病毒表达载体.方法 通过Kpn Ⅰ和EcoRⅤ双酶切,从pCDNA3.0-mPPARδ载体中得到含有小鼠PPARδ全长编码序列的片段,将mPPARδ与pAdtrack-CMV相连接并用Pme Ⅰ线性化后,转化含有pAdeasy骨架质粒的细菌BJ5183,在细菌内同源重组后得到pAd-mPPARδ质粒.pAd-mPPARδ经Pac Ⅰ线性化后用LipofectamineTM 2000转染HEK293细胞,包装得到含PPARδ基因的病毒重组子,将病毒重组子在HEK293细胞中扩增后,反复冻融得到滴度较高的含PPARδ的病毒液.将收集的病毒液感染INS-1细胞,绿色荧光观察GFP和Western blot检测PPARδ蛋白的表达.结果 成功构建了含有小鼠PPARδ基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为1.5×1010 pfu/ml.重组腺病毒感染后可使INS-1细胞PPARδ蛋白表达明显增加.结论 该重组腺病毒载体的构建为研究PPARδ基因在胰岛细胞中生物学功能提供了一定的工作基础.     

核转录因子-κB在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用

目的 研究核转录因子(NF-κB)在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用.方法 大鼠胰岛素瘤细胞系(INS-1)细胞以RPMI 1640培养基常规培养.实验分对照组(11.1 mmol/l葡萄糖组)、高糖组(33.3 mmol/l葡萄糖组)、高糖+NF-κB抑制剂组(33.3 mmol/l葡萄糖+NF-κB抑制剂(5 μmol/l)干预组)3组.以荧光定量RT-PCR检测IKKβmRNA水平,Western blot法检测细胞核内NF-κB亚基P65蛋白表达量,Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比较,高糖组IKKβ mRNA水平显著升高(P＜0.01),INS-1细胞胞核内P65蛋白表达显著增多(P＜0.01),细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).与高糖相比较,高糖+NF-κB抑制剂组IKKβ mRNA水平显著下降(P＜0.01),胞核内P65蛋白表达显著减少(P＜0.01),INS-1细胞凋亡率显著下降(P＜0.05).结论 高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞NF-κB活化,抑制NF-κB活化可有效抑制高糖诱导的INS-1细胞凋亡.     

知母醇提物对INS-1胰岛β细胞功能的影响

目的 研究知母醇提物对正常和抵抗INS-1胰岛β细胞的增殖及分泌功能的影响,探讨知母醇提物对正常细胞的毒性影响以及对胰岛素抵抗细胞的改善作用.方法 采用MTT法测定知母醇提物对正常INS-1胰岛B细胞的增殖作用;知母醇提物干预正常细胞及胰岛素抵抗INS-l胰岛β细胞,分为溶媒组(ME)、胰岛素分泌模型组(MC)、胰岛素抵抗组(IR)、阳性药格列本脲组(Gli)和罗格列酮组(ROZ)及知母醇提物组,测定各组基础胰岛素分泌(BIS)和葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)值.结果 知母醇提物质量浓度在0.3～ 30 μg/mL时对正常细胞有明显的增殖作用,与MC组的GSIS比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);与IR组的BIS和GSIS比较,知母醇提物浓度在3～ 30 μg/mL能显著促进细胞的BIS能力,同时其质量浓度在0.3 ～ 30 μg/mL能显著性促进GSIS功能.结论 知母醇提物在一定浓度范围内对正常INS-1胰岛β细胞的毒性较低,同时能通过促进正常细胞的增殖,增强其胰岛素分泌能力,改善细胞自身的胰岛素抵抗.     

内毒素脂多糖对胰岛细胞株INS-1细胞活力及胰岛素分泌的影响

目的 观察Toll样受体4(TLR4)在胰岛细胞株(INS-1)中的表达情况,探讨内毒素脂多糖(LPS)对INS-1细胞活力、胰岛素分泌功能以及TLR4表达的影响.方法 采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测INS-1细胞和经1 mg/L LPS刺激的INS-1细胞中TLR4 mRNA和蛋白的表达变化;分别用不同质量浓度的LPS (0.01、0.1、1、5、10 mg/L)刺激INS-1细胞,CCK8法检测细胞活力,GSIS法测定胰岛素分泌功能.结果 RT-PCR和Western blotting检测结果显示:LPS刺激使INS-1细胞TLR4mRNA和蛋白的表达显著增加(P＜0.05).当LPS在0.1～ 10 mg/L时,INS-1细胞活力受到抑制,且呈剂量时间依赖性(P＜0.05);1 mg/L LPS刺激可使高糖环境下的INS-1细胞的胰岛素分泌量显著减少(P＜0.05).结论 一定浓度范围内的LPS刺激可抑制INS-1细胞活力,并减少高糖培养条件下细胞胰岛素的分泌量.LPS刺激能上调INS-1细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达.内毒素可能通过直接作用损伤胰岛β细胞.     

肝X受体激动剂T0901317对INS-1细胞株凋亡的影响

目的探讨肝X受体激动剂T0901317对软脂酸诱导的大鼠胰岛β细胞瘤株INS-1凋亡的促进作用。方法根据不同干预条件分为空白对照组（对照组）,T0901317干预组（T0901317组）。24h、48h后应用MTT检测各组细胞增殖活性;48h后Western blot检测细胞因子Bax及Bcl-2的表达、细胞凋亡应用Caspase-3活力检测、ROS含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果T0901317组细胞增殖活性较对照组增殖受抑制,细胞Caspase-3活性显著高于对照组。T0901317组较对照组上调Bax、下调Bcl-2表达、ROS含量显著升高。结论T0901317可以促进胰岛β细胞的凋亡。     

BTBD10蛋白在大鼠胰岛和INS-1细胞株的表达

目的观察BTBD10蛋白在大鼠胰岛和INS-1细胞株的表达。方法利用构建好的BTBD10多克隆抗体,采用多重免疫荧光技术和激光共聚焦显微镜观察BTBD10在3月龄Fischer344大鼠的胰腺组织和大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞中的表达。结果 BTBD10蛋白定位在大鼠胰腺组织的胰岛β细胞中,与胰岛素的定位重叠,而在胰腺的外分泌腺和胰岛α细胞中无表达,同时显示BTBD10定位在大鼠胰岛β株INS-1细胞的细胞浆中,表达量高。结论 BTBD10特异性表达于大鼠胰岛β细胞中,提示BTBD10可能与胰岛β细胞功能和胰岛素分泌有关。     

艾塞那肽对高糖诱导INS-1细胞内质网应激及JNK信号通路的影响

目的 探讨艾塞那肽对高糖诱导INS-1细胞的内质网应激(ERS)及对JNK信号通路的影响。方法 小鼠INS-1细胞按不同的处理方式分为4组:对照组(A组,完全培养基)、高糖组(B组,30mmol/L糖培养基)、高糖+100nmol/L艾塞那肽组(C组)、高糖+100nmol/L艾塞那肽+JNK激动剂组(D组)。每天换液前观察各组细胞生存状态,培养7天后,MTT法检测细胞活性;提取细胞总蛋白,Western blot法检测Bip、CHOP、P-SAPK/JNK、caspase-3蛋白的表达水平。结果 培养至第4天B组细胞出现死亡,培养至第6、7天B组及D组细胞出现大量死亡;与A组比较,B组和D组的活性(A值)下降(P<0.05);与A组比较,B组高糖刺激后导致内质网应激上调Bip、CHOP、P-SAPK/JNK、caspase-3的表达量(P<0.05);与B组比较,C组艾塞那肽可通过抑制内质网应激下调Bip、CHOP、P-SAPK/JNK、caspase-3表达量(P<0.05);与C组比较,D组JNK激动剂促进JNK信号通路上调P-SAPK/JNK、caspase-3表达量(P<0.05)。结论 艾塞那肽可以缓解或阻断高糖刺激诱发的INS-1细胞内质网应激(ERS),抑制JNK信号通路,减少细胞凋亡。     

丝胶对2 型糖尿病大鼠海马HO-1 表达的影响

 目的探讨丝胶对2 型糖尿病大鼠海马血红素加氧酶1（HO-1）表达的影响。方法30 只雄性SD 大鼠随机分为正常对
照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组,每组10 只。糖尿病模型组和丝胶治疗组大鼠均采用链脲佐菌素连续腹腔注射建立2 型糖尿
病大鼠模型,以血糖逸16.7 mmol/L 作为成模标准。待模型成功建立后,模型组大鼠不再作任何处理,丝胶治疗组大鼠给予丝胶
（2.4 g·kg^-1·d^-1）灌胃35 d。HE 染色观察海马的形态变化;分别采用Western blot 和RT-PCR 法检测海马HO-1 蛋白及mRNA的
表达。结果糖尿病模型组大鼠海马CA1 区神经细胞出现明显的病理变化,HO-1 蛋白及mRNA的表达明显高于正常对照组
大鼠（ P<0.01）。丝胶治疗组大鼠海马CA1 区神经细胞的病理变化明显减轻,HO-1 蛋白及mRNA的表达明显低于模型组大鼠
（ P<0.01, P<0.05）。结论丝胶可通过下调海马HO-1 的表达,减轻糖尿病时HO-1 高表达对海马神经细胞的毒性损害,发挥
对糖尿病神经系统损伤的保护作用。     

大鼠ACE2腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达

目的构建携带大鼠血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)基因的重组腺病毒表达载体并确定其对INS-1细胞的感染效率。方法采用RT-PCR方法,从大鼠肾脏组织中扩增出ACE2基因的全长cDNA序列,将ACE2基因定向克隆到穿梭质粒载体pShuttle-GFP-CMV,经与腺病毒骨架质粒pAdxsi载体同源重组后得到携带大鼠ACE2基因的重组腺病毒(pAdxsi-GFP-CMV-ACE2),采用PCR的方法对重组腺病毒进行鉴定,转染HEK293细胞进行包装和扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化,半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50)方法测定重组腺病毒的滴度。体外转染INS-1细胞,绿色荧光观察绿色荧光蛋白(GFP)和Western blotting检测ACE2蛋白的表达。结果克隆得到大鼠ACE2基因,经PCR鉴定和测序证实结果正确,成功构建得到高滴度的重组腺病毒,并能高效感染INS-1细胞。结论成功构建了表达ACE2的复制缺陷型重组腺病毒,为深入研究ACE2基因在胰岛细胞中的生物学功能提供了一定的工作基础。