尿苷三磷酸通过PTEN/Vimentin抑制胃癌细胞的侵袭

目的 研究尿苷三磷酸(uridine triphosphate,UTP)对胃癌细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制.方法 采用细胞划痕实验检测UTP对胃癌细胞MKN-45和SGC-7901迁移能力的影响;Transwell检测UTP对正常人胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞MKN-45、SGC-7901侵袭能力的影响;Western blot检测UTP对胃癌细胞MKN-45和SGC-7901 PTEN磷酸化水平及Vimentin表达的影响.结果 细胞划痕实验表明UTP组抑制胃癌细胞MKN-45和SGC-7901迁移(P＜0.05).Transwell实验结果显示UTP组抑制胃癌细胞MKN-45和SGC-7901侵袭(P＜0.01),但对正常人胃黏膜细胞GES-1无影响(P＞0.05).Western blot实验证实UTP组可增强胃癌细胞MKN-45和SGC-7901 PTEN磷酸化水平,同时下调Vimentin的表达.结论 UTP抑制胃癌细胞的迁移和侵袭,可能是与其上调PTEN磷酸化水平,抑制Vimentin表达有关.     

si-RNA介导FGFR1基因沉默对胃癌细胞生长及凋亡的影响

目的探索靶向沉默成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）表达对胃癌细胞SGC-7901生长及凋亡的影响。方法通过Westernblotting法研究FGFR1蛋白在胃癌细胞SGC-7901以及人正常胃黏膜上皮细胞GES-1的表达情况;设计合成特异性针对FGFR1基因的小干扰RNA（siRNA）及阴性对照-siRNA（NC-siRNA）;采用瞬时转染法将siRNA转入胃癌细胞SGC-7901中,Westernblotting法检测转染siRNA-FGFR1后对SGC-7901细胞中FGFR1蛋白表达的影响。通过MTT法检测siRNA-FGFR1对SGC-7901细胞增殖抑制的时间-效应关系,以及克隆集落形成实验检测siRNA-FGFR1对SGC-7901细胞克隆集落形成的影响;采用Hoechst染色法和流式细胞术检测siRNA-FGFR1对胃癌细胞凋亡的影响。结果与人正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901的FGFR1蛋白表达水平明显增高（P＜0.05）;siRNA-FGFR1转染SGC-7901细胞后,FGFR1蛋白表达水平明显下调（P＜0.05）;胃癌细胞增殖生长曲线提示,用siRNA技术沉默胃癌细胞中FGFR1的表达后,相较于空白组和NC-siRNA组,siRNA-FGFR1组细胞增殖明显受抑制,另外胃癌细胞SGC-7901克隆集落形成明显受抑制;流式细胞术结果表明,正常组与NC-siRNA组中胃癌SGC-7901细胞早期凋亡百分比差异无统计学意义（P＞0.05）,而siRNA-FGFR1组细胞早期凋亡百分比显著升高（P＜0.01）。结论siRNA-FGFR1可抑制FGFR1蛋白在人胃癌细胞SGC-7901中的表达,并抑制胃癌细胞的生长,促进其凋亡。以FGFR1为靶点的小RNA干扰技术有望成为胃癌靶向治疗的新方法。     

齐留通对胃癌SGC-7901细胞生长的影响

目的:观察5-脂氧合酶抑制剂齐留通对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨齐留通影响胃癌细胞生长的机制.方法:MTT法测定齐留通对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;TUNEL染色法计数细胞凋亡率;RT-PCR和免疫细胞化学检测齐留通处理前后SGC-7901细胞Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA和其蛋白表达的改变.结果:齐留通以时间剂量依赖的方式抑制SGC-7901细胞生长;TUNEL染色法显示6.2×10-5 mol/L、3.1×10-5 mol/L齐留通作用72 h后细胞凋亡率为19.6%±6.3%和28.9%±2.3%,均显著高于对照组0.6%±0.1%(P＜0.01);RT-PCR和免疫细胞化学显示6.2 × 10-3 mol/L齐留通作用胃癌SGC-7901细胞72h后,可显著促进Bax、caspase-3mRNA和其蛋白的表达(P＜0.05),抑制Bcl-2mRNA及其蛋白的表达(P＜0.05).结论:齐留通能抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,并通过促进Bax和caspase-3的表达,抑制Bcl-2表达,诱导其凋亡,从而抑制胃癌SGC-7901细胞生长.     

1，25-二羟维生素D3联合塞莱昔布对胃癌细胞株SGC-7901凋亡的影响

目的本研究探讨1,25-二羟维生素D3（1 alpha,25-dihydroxy vitamin D3,VitD3）联合塞莱昔布（CELE）对胃癌细胞株SGC-7901凋亡诱导作用及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其联合应用是否具有协同抗胃癌作用,并初步探讨ViD3与CELE联合应用抗胃癌的可能作用机制,为临床制定合理的联合化疔方案,寻求最佳治疗效果提供理论依据。方法体外培养胃癌细胞SGC-7901至指数生长期,加入一定浓度的CELE、VitD3及CELE和VitD3,作用48h后,采用吖啶橙染色观察细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达变化,分析两种药物对胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡及相关基因表达的影响。结果吖啶橙染色观察细胞凋亡从形态学上证实了VitD3和CELE对胃癌细胞的诱导凋亡作用,且两药联合增强诱导凋亡作用;VitD3、CELE及二者联合应用均显著抑制SGC-7901细胞Bcl-2蛋白的表达、促进Bax蛋白的表达（P〈0．05）,联合用药组与单一用药组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论VitD3和CELE可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,其凋亡机制之一可能为通过抑制Bcl-2、并促进Bax的表达,从而改善Bcl-2／Bax的平衡实现的。两者联合应用对胃癌细胞SGC-7901诱导凋亡具有协同作用。     

重组甲硫氨酸酶调控 PI3K/Akt/Glut-1 通路抑制有氧糖酵解促进胃癌细胞凋亡

目的 探讨重组甲硫氨酸酶（rMETase）对胃癌细胞增殖抑制作用及潜在的分子机制。方法 rMETase（终浓度为0.00、1.25、 2.50 mmol/L）处理胃癌SGC-7901细胞72 h,采用CCK-8法检测SGC-7901细胞活力,倒置显微镜下观察SGC-7901细胞形态变化,平板细胞克隆形成实验检测SGC-7901细胞克隆形成率,流式细胞术分析胃癌细胞凋亡情况及细胞周期变化,比色法和荧光酶标仪检测rMETase对胃癌细胞葡萄糖吸收和乳酸、ATP释放的影响,Western blot分析rMETase对SGC-7901细胞PI3K/Akt通 路、GLUT-1、糖酵解相关蛋白及凋亡蛋白的影响。结果 rMETase能够抑制SGC-7901细胞的增殖和克隆形成、诱导胃癌细胞S期周期阻滞、促进细胞凋亡（P<0.05）;随着rMETase的浓度的增加,细胞吸收的葡萄糖降低,并伴随糖酵解产物乳酸和ATP的下降（P<0.001）;Western blot结果显示,rMETase作用SGC-7901细胞后,PI3K、p-Akt/t-Akt、GLUT-1,糖酵解关键酶HK2、PFKM、LDHA、抑凋亡Bcl-2的蛋白表达下调,促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达上调（P<0.01）。结论 rMETase可以通过抑制PI3K/Akt/GLUT-1通路的活性,抑制胃癌细胞有氧糖酵解,诱导胃癌细胞凋亡,抑制SGC-7901细胞增殖,rMETase可能是一种潜在的胃癌治疗药物。     

复方苦参注射液对胃癌细胞SGC-7901凋亡的诱导作用及机制

目的探讨复方苦参注射液对胃癌细胞SGC-7901凋亡的诱导作用及其作用机制。方法采用MTT法观察复方苦参注射液对胃癌细胞SGC-7901增殖抑制作用;应用免疫组织化学法观察复方苦参注射液作用后对凋亡相关蛋白Bak、Caspase-3表达的影响。结果复方苦参注射液作用于SGC-7901细胞增殖的抑制呈时间浓度依赖性。作用24 h后,100μL/mL复方苦参注射液作用于SGC-7901细胞的活力是对照组(不含药的培养液)的81.0%,而300μL/mL时是70.2%;作用48 h后,100μL/mL复方苦参注射液对SGC-7901细胞的活力是对照组的53.3%,而300μL/mL时仅为40.9%。100μL/mL复方苦参注射液作用于SGC-7901细胞48 h后,免疫组化检测示凋亡相关蛋白Bak、Caspase-3表达均增加,且以表达于细胞质中为主。结论复方苦参注射液能诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡,其诱导凋亡的机制可能与Bak、Caspase-3蛋白表达增强有关。     

抑癌基因maspin在胃癌细胞株SGC-7901中的表达及意义

目的探讨抑癌基因maspin在胃癌细胞株SGC-7901生长和凋亡过程中的生物学作用。方法构建重组质粒pCD-NA3.1-maspin,转染胃癌细胞株SGC-7901,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学检测maspin基因表达,MTT法检测细胞增殖,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。结果重组质粒pCDNA3.1-maspin导入SGC-7901细胞株后,maspin的mRNA和蛋白表达明显增强(P<0.05),胃癌细胞株SGC-7901增殖受到抑制,并出现明显的细胞凋亡。结论 maspin基因可以抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

As2O3通过P38微管聚合调节顺铂耐药胃癌细胞凋亡

目的:观察P38磷酸化水平对胃癌细胞微管聚合的影响,探讨三氧化二砷(As2O3)通过P38磷酸化调节胃癌顺铂耐药细胞凋亡的机制?方法:通过对亲本敏感胃癌细胞株SGC7901细胞长期低剂量诱导建立胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP,CCK－8和流式细胞术检测其对As2O3的耐受程度?通过抑制SGC7901细胞内P38的磷酸化水平,观察在As2O3处理下细胞微管蛋白的聚合程度和耐药性的改变?结果:CCK－8和AV－PI结果表明,SGC7901/DDP相对于SGC7901对As2O3具有显著的耐受性?磷酸化P38的表达在SGC7901/DDP细胞经As2O3处理时被显著抑制,这与SGC7901/DDP细胞中微管的稳定性密切相关?As2O3处理细胞时,抑制SGC7901细胞中P38的磷酸化能显著减少细胞中微管的聚合和凋亡?结论:SGC7901/DDP细胞对As2O3的耐受性与细胞内P38磷酸化水平有关,微管聚合是胃癌细胞耐受As2O3的重要机制?     

曲古菌素A对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其DAPK1基因表达的影响

目的探讨曲古菌素A（TSA）体外抑制人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其DAPKl基因表达的影响。方法体外培养的胃癌细胞以不同浓度的TSA（37．5、150、600ng／ml）处理后,Annexin V／PI检测细胞凋亡率,RT—PCR、Western Blot分别检测DAPK1 mRNA和蛋白表达水平。结果不同浓度TSA可显著诱导SGC-7901细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性（P〈0．05）,TSA干预前SGC-7901细胞DAPK1 mRNA和蛋白表达水平低,不同浓度TSA处理SGC-7901细胞后DAPK1 mRNA和蛋白表达水平明显上调,呈浓度及时问依赖性（P〈0．05）。结论TSA诱导SGC-7901细胞凋亡可能与DAPK1基因低乙酰化状态逆转有关。     

NHE1反义基因对胃癌细胞NHE1蛋白表达及裸鼠成瘤力的影响

目的:探讨人NHEl反义基因转染对SGC-7901胃癌细胞NHE1蛋白表达及裸鼠成瘤力的影响.方法:构建人NHE1反义基因真核表达载体,采用脂质体法将其转染至SGC-7901胃癌细胞中,通过免疫组织细胞化学SP法检测NHE1蛋白表达情况,流式细胞仪检测对细胞增殖和凋亡的影响,从电镜水平比较观察转染与未转染细胞形态学的变化,并观察裸鼠成瘤能力的改变.结果:转染NHE1反义基因的SGC-7901胃癌细胞NHEl蛋白表达降低;细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加;透射电镜下细胞线粒体数量增多、体积增大,内质网扩张,核偏向一侧,极性增强;裸鼠成瘤能力下降.结论:NHE1反义基因能使SGC-7901胃癌细胞的NHE1蛋白表达明显下调,裸鼠成瘤能力降低,NHEI蛋白在胃癌细胞生长中起重要作用.     

Toll样受体7在人胃癌细胞株中的表达及其激动剂诱导SGC-7901细胞发生凋亡的实验研究

目的探讨Toll 样受体7（TLR7）在不同人胃癌细胞株中的表达及其激动剂咪喹莫特对SGC-7901 细胞增殖和凋亡的影
响。方法Western blot法检测3种胃癌细胞株（SGC-7901、HGC-27和MKN-28）中TLR7蛋白表达差异,选取高表达TLR7的胃
癌细胞作为主要研究对象;MTT法考察不同浓度咪喹莫特处理TLR7高表达胃癌细胞12~72 h后细胞增殖活性的改变;流式细
胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色法观察100 μg/ml咪喹莫特干预12及24 h后细胞早期凋亡比率的改变;透射电镜下观察细胞凋
亡形态学改变;实时定量PCR法分析Bcl-2及Bax mRNA在咪喹莫特作用前后表达差异。结果TLR7蛋白在SGC-7901中表
达水平高于其他两种胃癌细胞,其激动剂咪喹莫特能够明显抑制SGC-7901细胞增殖并且呈现出浓度及时间依赖性;100 μg/ml
咪喹莫特干预24 h 后SGC-7901 细胞早期凋亡比率明显上升,透射电镜下可观察到典型的凋亡形态学改变;咪喹莫特处理后
SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA表达呈浓度依赖性下降,Bax mRNA呈浓度依赖性上升。结论TLR7在3种不同分化程度的胃癌
细胞中均有表达,其激动剂咪喹莫特能够明显抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡。
     

HES1对胃癌细胞株增殖､凋亡及迁移能力的影响

目的:探讨siRNA靶向HES1对胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901增殖?凋亡及迁移能力的影响?方法:采用荧光实时定量PCR(qPCR)法检测胃癌组织及胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901的HES1水平,采用脂质体法将2条靶向HES1的siRNA片段(siHES1-1和siHES1-2)高效转染至BGC-823和SGC-7901细胞,经qPCR法检测后选取抑制效率最高的siRNA进行后续功能学研究;分别采用MTT?流式细胞术及Transwell法检测转染后BGC-823和SGC-7901细胞的增殖?凋亡及迁移能力的改变?结果:71例胃癌组织的HES1 mRNA水平高于59例癌旁组织,BGC-823和SGC-7901细胞的HES1 mRNA水平明显高于正常胃黏膜细胞株GES-1(P < 0.05);转染HES1 siRNA可降低BGC-823和SGC-7901细胞的HES1水平,此外,较转染对照组细胞,其存活率及穿膜细胞数目明显降低,凋亡率明显升高(P < 0.05)?结论:胃癌组织及细胞株中的HES1高表达,靶向沉默HES1可抑制胃癌细胞增殖及迁移并诱导细胞凋亡?     

苦参素对胃癌SGC-7901细胞凋亡及细胞骨架改变的研究

目的 探讨苦参素对胃癌细胞株SGC-7901的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法 用苦参素处理SGC-7901细胞,采用MTT法检测苦参素对细胞的抑制作用,透射电镜观察微丝的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果 苦参素使SGC-7901细胞呈凋亡改变,细胞的活力下降,微丝几近消失,不同浓度的苦参素均可导致细胞凋亡和细胞周期阻抑。结论 苦参素能抑制胃癌细胞增殖,能诱导胃癌细胞凋亡。     

LAT1及CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中的表达及LAT1对其细胞生物学行为的影响

目的观察L型氨基酸转运载体1(LAT1)与其异二聚体CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中的表达及LAT1对细胞增殖与迁移能力的影响。方法将胃癌细胞SGC-7901分为1、10、100μmol/L BCH干预和空白对照共4组,RT-PCR、IF与Western blot检测胃癌细胞SGC-7901中LAT1与CD98hc mRNA、蛋白的表达。不同浓度的BCH作用于胃癌细胞SGC-7901 48 h后,新型四唑氮盐(MTS)比色法检测各组细胞生长情况,流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况,Transwell细胞迁移小室检测各组细胞迁移能力的变化。结果 LAT1及其异二聚体CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中呈高表达。与空白对照组相比,随着BCH浓度的提高,胃癌细胞SGC-7901的增殖能力与迁移能力逐渐降低。细胞周期分析发现,BCH处理的胃癌细胞组S期细胞减少,而G0/G1期细胞增加(P<0.05)。结论 LAT1及其异二聚体CD98hc在SGC-7901细胞中有表达,LAT1可能促进SGC-7901细胞的增殖,加快细胞周期进程,增强SGC-7901细胞的迁移能力。     

Expression of L amino acid transporter 1 and its heterodimer CD98hc in gastric cancer SGC-7901 cells and effect of the former on biological behaviors of the cells

[目的]观察L型氨基酸转运载体1(LAT1)与其异二聚体CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中的表达及LAT1对细胞增殖与迁移能力的影响.[方法]将胃癌细胞SGC-7901分为1、10、100μmol/L BCH干预和空白对照共4组,RT-PCR、1F与Western blot检测胃癌细胞SGC-7901中LAT1与CD98hc mRNA、蛋白的表达.不同浓度的BCH作用于胃癌细胞SGC-790148h后,新型四唑氮盐(MTS)比色法检测各组细胞生长情况,流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况,Transwell细胞迁移小室检测各组细胞迁移能力的变化.[结果]LAT1及其异二聚体CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中呈高表达.与空白对照组相比,随着BCH浓度的提高,胃癌细胞SGC-7901的增殖能力与迁移能力逐渐降低.细胞周期分析发现,BCH处理的胃癌细胞组S期细胞减少,而G0/G1期细胞增加(P＜0.05).[结论]LAT1及其异二聚体CD98hc在SGC-7901细胞中有表达,LAT1可能促进SCC-7901细胞的增殖,加快细胞周期进程,增强SGC-7901细胞的迁移能力.     

双氢青蒿素促胃癌细胞凋亡的作用

目的 研究双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人胃癌细胞(SGC-7901、HGC-27)生长抑制和促凋亡的作用.方法 用WST-1方法检测DHA处理后的胃癌细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力.结果 不同浓度的DHA可以抑制胃癌细胞(SGC-7901、HGC-27)的增殖,且呈现浓度依赖性增长趋势.DHA作用48 h后,胃癌细胞的周期阻滞在S期,同时有诱导胃癌细胞凋亡的作用;DHA作用24 h和48 h后,对胃癌细胞的迁移能力有抑制作用.结论 DHA可有效地抑制胃癌细胞的增殖,并促进其凋亡.     

P-P38MAPK、COX-2在胃癌细胞株中的表达及二者关系的研究

目的 研究磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(P-P38 mitogen-activated protein kinase,P-P38MAPK)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在胃癌细胞株中的表达及二者的关系,探讨非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)的抑癌机制.方法 体外常规培养胃癌细胞株SGC7901.实验分为空白对照组(CON组)、NS398组(NS组)、SB203580组(SB组)、SB203580和NS398共同作用组(SBNS组)以及溶剂对照组(DMSO组).用四甲基偶氮唑盐比色法检测药物对SGC7901细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞定量检测技术(flow cytometry,FCM)检测SGC7901细胞凋亡和细胞周期;应用FCM和蛋白免疫印迹(Western blot)检测SGC7901细胞中COX-2、P-P38MAPK蛋白的表达.结果 各组药物作用于SGC-7901细胞均可诱导细胞凋亡,细胞凋亡率与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);抑制细胞增殖.COX-2蛋白表达SB组、NS组和SBNS组明显低于CON组(P＜0.01);SBNS组明显低于NS组和SB组(P＜0.01或P＜0.05).P-P38MAPK蛋白表达SB组明显低于CON组(P＜0.05);而NS组和SBNS组明显高于CON组(P＜0.05).结论 胃癌细胞株SGC7901中,P-P38MAPK是COX-2的上游激酶,可上调COX-2的表达,COX-2可能对P-P38MAPK有负反馈调节作用.P-P38MAPK活化后在胃癌细胞株SGC7901中的终效应是促进肿瘤细胞增殖.     

重组人白细胞介素24蛋白的纯化及其对胃癌细胞凋亡的影响

目的 纯化人白细胞介素24的原核重组表达质粒pET-21a（＋）-IL-24在大肠杆菌BL（DE3）中的表达产物rhIL-24，并观察重组表达蛋白rhIL-24在体外对胃癌细胞株SGC-7901凋亡的影响。方法IPTG诱导原核表达载体pET-21a（＋）-IL-24在大肠杆菌中表达rhIL-24，经纯化、复性后作用于人胃癌细胞株SGC-7901。MTT法检测rhIL-24对细胞生长的影响。流式细胞仪检测凋亡峰，荧光染色观察细胞凋亡形态。结果rhIL-24对体外培养的胃癌细胞SGC-7901有明显的生长抑制作用，且呈时间、剂量依赖性。rhIL-24蛋白30μg／ml作用于SGC-7901细胞24h后。流式细胞仪检测结果显示有明显的凋亡峰出现，荧光染色后显示染色质固缩。细胞核呈致密浓染或呈碎块状致密浓染。结论本实验成功纯化IL-24原核表达产物rhIL-24．对体外培养的胃癌细胞株SGC-7901有明显的生长抑制、诱导凋亡作用。     

苦参素诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的 探讨苦参素对胃癌细胞株SGC-7901的抑制增殖效应及凋亡诱导作用.方法 用苦参素处理SGC-7901细胞,采用MTT法检测苦参素对细胞的抑制作用,透射电镜观察微丝的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期.结果 在苦参素作用下,SGC-7901细胞呈凋亡改变.细胞凋亡的同时,细胞的活力下降,微丝几近消失,不同浓度的苦参素均可导致细胞凋亡和细胞周期阻抑.结论 苦参素能抑制胃癌细胞增殖,能诱导胃癌细胞凋亡.