银屑病患者骨髓CD34+细胞定向分化的T细胞对角质形成细胞增殖的影响

目的:探讨家族史阳性的银屑病患者骨髓CD34 细胞体外定向分化的T细胞对表皮角质形成细胞(KC)增殖调控蛋白表达的影响.方法:将银屑病患者骨髓CD34 细胞体外定向分化的T细胞经链球菌超抗原活化后与KC共培养,分别采用免疫组化法及ELISA法检测KC C-myc、bcl-xL、p53及Ki67蛋白表达及培养上清白介素(IL)-8、干扰素(IFN)-γ水平.结果:①受银屑病患者CD34 细胞定向分化T细胞作用的KC C-mye及Ki67蛋白表达与自然增殖组及正常人CD34 细胞定向分化的T细胞作用组相比显著增强(P＜0.05),而bcl-xL及p53蛋白表达3组间的差异无统计学意义(P＞0.05);②受正常人CD34 细胞定向分化T细胞作用的Kc C-myc、bcl-xL、p53及Ki67蛋白表达与自然增殖组比较差异亦无统计学意义(P＞0.05);③银屑病CD34 细胞定向分化的T细胞作用组培养上清IL-8及IFN-γ水平显著高于正常对照组(P＜0.01).结论:银屑病患者骨髓造血细胞定向分化的T细胞可影响KC增殖状态,显示类似银屑病外周血T细胞的活性特点.     

CD69+T细胞在银屑病皮损中的表达及其临床意义

目的 探讨银屑病患者皮肤CD69+T细胞的表达及其与疾病活动性的关系.方法 免疫组化检测31例银屑病患者皮损和非皮损中CD69+T细胞在皮肤中的表达,与6例健康人进行对照.结果 CD69+T细胞主要分布于皮肤真皮.31例银屑病患者皮损和非皮损的真皮中,CD69+T细胞分别为(35.16±12.67)％和(8.70±3.29)％,皮损明显高于非皮损(t=12.5,P＜0.01).6例健康人对照皮肤中CD69+T细胞(8.71±2.55)％,明显低于银屑病皮损(t=5.03,P＜ 0.01),与非皮损相比,差异无统计学意义(t=0.05,P＞ 0.05).20例急性期与1 1例稳定期银屑病患者皮损中CD69+T细胞分别为(40.89±10.31)％和(24.46±9.49)％,急性期明显高于稳定期(t=0.36,P＜ 0.01).结论 银屑病患者皮损中CD69+T细胞表达增高,与疾病的活动性有关.     

寻常性银屑病患者外周血T淋巴细胞CD25和CD69的表达

目的探讨寻常性银屑病患者外周血T淋巴细胞激活状态在发病中的作用。方法采用免疫荧光双标记流式细胞术检测32例寻常性银屑病患者外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞CD25和CD69的表达,分析其表达水平与疾病严重程度的关系。并对比6例患者进行期和消退期时CD8+T细胞CD25和CD69的表达。结果银屑病患者外周血CD4+T细胞上CD25和CD69的表达水平与正常人对照组差异无显著性(P >0.05);患者组CD8+T细胞表达CD25和CD69的水平(16.30%±5.97%和32.61%±6.36%)明显高于正常人对照组(9.21%±2.14%和10.03%±2.35%),差异有显著性(P<0.01);且与疾病严重程度呈正相关(r值分别为0.75和0.76;P<0.01);进行期与消退期比较CD4+T细胞表达CD25和CD69的水平差异无显著性(P>0.05),但CD8+T细胞CD25和CD69的表达在进行期时(17.37%±4.01%和35.48%±7.72%)明显高于消退期(6.32%±1.29%和8.10%±1.52%),差异有显著性(P<0.01)。结论银屑病患者T细胞的激活以CD8+T细胞为主,其激活状态可作为疾病严重程度的一个指标。     

寻常性银屑病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的功能研究

目的 测定银屑病患者外周血中的CD4+CD25+调节性T细胞功能的改变,探讨调节性T细胞在其发病中的作用。方法 寻常性银屑病患者12例,银屑病面积和严重度指数（PASI）评分15 ～ 34.5分,均为慢性斑块状。健康对照组6例,为健康献血者。通过免疫磁珠体外分离外周血中的CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25- T细胞,纯度达90％以上。采用［3H］-脱氧胸腺嘧啶苷方法检测CD4+CD25+ T细胞的增殖和抑制功能,ELISA法测定细胞因子和RT-PCR检测Foxp3 mRNA的表达。结果 多克隆刺激后CD4+CD25+ T细胞无明显增殖,IL-2可逆转此无反应状态。健康对照组CD4+CD25+ T细胞对CD4＋CD25－ T细胞增殖的抑制率可达60％,而银屑病组抑制率仅为19.5％（P < 0.01）。银屑病患者CD4＋CD25－ T细胞单独培养及与CD4＋CD25+ T细胞共培养后,分泌IFN-γ水平分别为（179.66 ± 48.97） ng/L和（109.55 ± 48.04） ng/L,健康对照组分别为（87.36 ± 33.36） ng/L和（32.55 ± 15.69） ng/L,两组比较,P值均 < 0.05;对IFN-γ分泌的抑制率银屑病患者组为40％,健康对照组为63％（P < 0.05）;健康对照组CD4＋CD25+ T细胞和CD4＋CD25－ T细胞单独培养,TGF-β分泌分别为（3025 ± 769） ng/L和（2450 ± 431） ng/L（P < 0.05）。两组之间,无论单独培养或两种细胞共培养,IL-10、TGF-β的分泌差异均无统计学意义（P > 0.05）。CD4+CD25+ T细胞表达高水平的Foxp3, 银屑病患者和健康人对照调节性T细胞和效应T细胞的Foxp3表达相似。结论 银屑病患者外周血中调节性T细胞抑制功能的减弱导致效应T细胞增殖失控,可能参与了银屑病的发病。     

尖锐湿疣皮损活化抗原CD69,CD38,HLA-DR的表达及其意义

目的 探讨活化抗原CD69，CD38，HLA—DR在尖锐湿疣（CA）皮损角质形成细胞（KC）和真皮浸润单核细胞（MNC）表达的变化。方法 免疫组化方法检测CA30例初发患者、20例复发患者皮损和15例正常人包皮KC和真皮浸润MNC上CD69，CD38，HLA—DR的表达并进行对比。结果 CA患者初发组和复发组皮损KC的CD69，CD38，HLA—DR阳性表达率分别为93.3％和90％、93．3％和90％、100％和100％，真皮浸润MNC的CD69，CD38，HLA—DR阳性表达率分别为0和0、66．7％和40％、76．7％和70％，正常人对照组均不表达。初发组和复发组皮损KC和真皮浸润MNC的CD69，CD38，HLA—DR表达强度比较显示，初发组明显高于复发组（P〈0.05）。结论 CA患者局部细胞免疫处于高水平的激活状态，这种免疫激活状态在抗病毒感染中有着一定的作用。     

CD103+T细胞在银屑病皮损中的表达

目的：明确银屑病患者皮肤CD103+T细胞的表达及其与银屑病严重程度的关系。方法：免疫组化检测29例银屑病患者皮损和非皮损皮肤及6名健康对照皮肤中表皮及真皮CD103+T细胞的表达。计算银屑病患者PASI值。结果：CD103+T细胞主要在真皮表达。银屑病患者皮损和非皮损真皮中每个高倍视野CD103+T细胞百分率分别为（26.06%±11.72）%和（12.82±4.5）%（P<0.05）;健康人对照皮肤真皮内CD103+T细胞百分率为（7.47±1.3）%,明显低于银屑病非皮损区（P<0.05）。银屑病患者皮损中,CD103+T的表达与PASI值正相关（P<0.05）。 结论：真皮中CD103+T细胞可能与银屑病的发病及严重程度有关。     

银屑病和白癜风患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测

目的: 检测CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在白癜风和银屑病患者外周血中的表达.方法: 用流式细胞术检测19例白癜风患者、18例银屑病患者及19名正常人外周血中CD4+CD25+Treg的表达水平.结果: 白癜风患者的CD4+CD25+Treg表达率为(1.056±0.662)%,低于正常对照组(2.022±0.98)%,差异有统计学意义(P＜0.05);银屑病患者的CD4+CD25+Treg为(1.761±1.396)%,与正常人无显著性差异(P＝0.177).结论: CD4+CD25+Treg细胞在白癜风患者外周血中数量明显减少.     

银屑病皮损CD8αα+ T细胞表型鉴定

目的 探究银屑病皮损局部浸润的CD8+ T细胞表型及其在银屑病发病中的作用。方法 收集2017年1 - 12月第四军医大学西京皮肤医院明确诊断的8例进行期斑块状银屑病患者皮损,男女各4例,年龄24 ~ 50岁。8例健康对照皮肤来源于整形外科手术剩余皮肤,男女各4例,年龄23 ~ 46岁。采用免疫荧光技术检测皮损CD8+ T细胞的分布及亚群比例,鉴定其免疫学表型及炎症因子白细胞介素（IL）17A的表达。结果 8例银屑病皮损真、表皮均可见CD8+ T细胞浸润,其中CD8αα+ T细胞表型占88.48% ± 7.39%,8例健康人皮肤局部仅有个别CD8+ T细胞浸润,其中CD8αα+ T细胞表型占14.43% ± 13.14%,两组比较,t = 11.5,P < 0.01。银屑病皮损表皮CD8αα+ T细胞表达组织局部定植标志CD103,真皮CD8αα+ T细胞不表达CD103。银屑病皮损CD8αα+ T细胞表达CD45RA-CCR7-效应记忆性T细胞表型,不表达CD8+ 调节性T细胞标志Foxp3、CD25和CD122。银屑病皮损CD8αα+ T细胞中分泌IL?17A的细胞比例为24.85% ± 4.25%,对照组CD8αα+ T细胞不分泌IL?17A,两组差异有统计学意义（t = 5.853,P < 0.01）。结论 银屑病皮损浸润的CD8αα+ T细胞是效应记忆性T细胞,可能通过分泌IL?17A参与银屑病的发生发展。     

银屑病患者骨髓CD34+细胞体外定向分化的T细胞活性研究

目的 研究有家族发病倾向的银屑病患者骨髓CD34⁺细胞体外定向发育的T细胞活性.方法 免疫磁珠法分离家族史阳性银屑病患者及正常对照骨髓CD34⁺细胞,在骨髓基质细胞条件培养液构建的微环境下,在胸腺基质细胞的支持下,使其在体外向T细胞定向分化,免疫磁珠法收集CD3⁺T细胞,流式细胞仪检测CD4⁺CD8^-细胞及CD4^-CD8⁺细胞比例.分别采用MTT法及ELISA法检测自然增殖组及链球菌超抗原刺激后T细胞增殖活性及分泌细胞因子水平.结果 ①经骨髓CD34⁺细胞定向分化并扩增的CD3⁺T细胞中可检测到CD4⁺CD8^-、CD4^-CD8⁺T细胞,且银屑病患者组与正常对照组CD4⁺CD8^-及CD4^-CD8⁺T细胞比例无显著差异.②银屑病患者骨髓CD34⁺细胞定向分化的T细胞自然增殖组及链球菌超抗原刺激组增殖活性均显著高于正常人对照组.③银屑病患者T细胞自然增殖组培养上清白介素4、白介素8及干扰素γ与正常对照组差异无统计学意义,链球菌超抗原刺激后白介素4表达水平无显著改变,而白介素8及干扰素γ水平却显著高于正常人.结论 有家族发病倾向的银屑病患者外周血T细胞活性异常可能与骨髓造血细胞相关.     

寻常型银屑病患者外周血CD4~+CD25~+及CD8~+CD25~+细胞的检测

目的研究进展期寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+调节性T细胞的数量变化及其在银屑病免疫病理学发病机制中的作用。方法应用流式细胞术对进展期寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+调节性T细胞进行检测。结果进展期寻常型银屑病外周血CD4+CD25+细胞及CD8+CD25+调节性T细胞数量与正常对照组相比,均显著降低(P<0.05,P<0.005),而CD4+CD25+/CD8+CD25+比值无显著性差异(P>0.05)。结论寻常型银屑病的发病与CD4+CD25+和CD8+CD25+调节性T细胞的同步降低有关,与二者的比值无关。     

银屑病患者角质形成细胞VEGF表达的研究

目的　研究银屑病发病与血管内皮生长因子 (VEGF)的关系 ,探讨银屑病可能的发病机制。方法　①用免疫组化法检测银屑病患者皮损和非皮损处皮肤、正常健康人皮肤及体外培养的银屑病患者和正常人角质形成细胞(KC)VEGF的表达 ;②用双抗体夹心ELISA法检测银屑病患者及正常人KC培养上清液中VEGF含量。结果　①银屑病皮损处VEGF表达明显高于非皮损处和正常人皮肤 (P均 <0 .0 0 1) ,非皮损处与正常人皮肤VEGF表达也有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;②体外培养的银屑病皮损处和非皮损处KCVEGF表达明显高于正常人 (P均 <0 .0 0 1) ;银屑病皮损处KC与非皮损处KC相比VEGF表达也有显著性差异 (P <0 .0 5 ) )。结论　VEGF可能参与银屑病的发病。     

银屑病表皮热休克蛋白27、70、60的表达

目的：探讨热休克蛋白（HSP）在银屑病发病中的作用。方法：通过免疫组化和图像分析检测了25例银屑病患者治疗前后皮损、非皮损区表皮组织中HSP27、HSP70和HSP60的表达，并与6例正常人作对照。结果：HSP27、HSP70在非皮损、正常人表皮中呈基础表达，在银屑病患者皮损中的表达很弱，治愈后表皮后HSP27、HSP70的表达又恢复；HSP60的表达在银屑病皮损组表皮中均为阳性，而银屑病非皮损组、治愈后组表皮中及正常人对照表皮组织中HSP60的表达均阴性。结论：热休克蛋白在银屑病应激保护机制中可能发挥一定的作用。     

银屑病皮损及非皮损中垂体腺苷酸环化酶激活肽及其受体的研究

目的 探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)及其受体(PACAP-R)在银屑病发病中的意义。方法 采用免疫组化的方法研究寻常性银屑病患者皮损及非皮损部位PACAP及PACAP-R的原位表达情况。结果 银屑病患者皮损部位PACAP及PACAP-R的原位表达均明显低于非皮损部位,表现为皮损组PACAP及PACAP-R的面积密度及平均吸光度值显著低于正常人对照组(均为P<0.01);与正常人相比,非皮损部位PACAP及PACAP-R的原位表达也呈下调表达,即非皮损组的PACAP及PACAP-R的面积密度及平均吸光度值明显低于正常人对照组(P<0.05)。结论 PACAP及PACAP-R在银屑病皮损中下调表达,提示PACAP可能与银屑病表皮细胞的过度增殖有关。     

过氧化物酶增殖物激活受体β/δ在银屑病角质形成细胞中的表达

【摘要】 目的 探讨过氧化物酶增殖物激活受体β/δ（PPARβ/δ）在银屑病患者表皮角质形成细胞（KC）中的表达和调节因素。 方法 免疫组化方法检测PPARβ/δ在银屑病患者皮损及非皮损表皮中的表达。分离、培养银屑病患者非皮损区和皮损区的KC,以RT-PCR和Western印迹法分别检测银屑病患者皮损区和非皮损区KC中PPARβ/δ mRNA和蛋白质的表达水平。利用PPARβ/δ外源性激动剂GW501516及Ca2+刺激银屑病非皮损区KC,观察其对PPARβ/δ表达的调节影响。 结果 免疫组化显示,银屑病皮损区PPARβ/δ的表达强度显著高于正常对照组（t = 19.28,P < 0.01）和非皮损区（t = 23.26,P < 0.01）。银屑病皮损区PPARβ/δ mRNA和蛋白质的表达水平均高于正常对照组（P < 0.01）和非皮损区（P < 0.01）。10 ng/ml GW501516最大效能促进PPARβ/δ的表达（P < 0.01）;1.0 mmol/L Ca2+对KC中PPARβ/δ的表达促进效应最明显（P < 0.01）。 结论 PPARβ/δ在银屑病患者皮损区表达显著升高,GW501516 和Ca2+能够促进角质形成细胞PPARβ/δ表达水平。     

Intraepidermal lymphocytes in psoriatic lesions are activated GMP-17(TIA-1)+CD8+CD3+ CTLs as determined by phenotypic analysis

The onset and persistence of psoriatic lesions are linked to the presence of an inflammatory infiltrate of CD3+ lymphocytes that includes CD4+ and CD8+ subsets. Since a primary susceptibility factor for psoriasis is the Class I HLA-Cw6 molecule, we set out to learn more about the features of the epidermal CD8+ lymphocytes. The markers tested were GMP-17, a cytotoxic granule protein found in activated cytotoxic lymphocytes (CTLs), and the alpha chain of the IL-2 receptor (CD25), a plasma membrane molecule found on activated T cells. Lymphocytes in lesional skin expressed the GMP-17 protein, whereas lymphocytes in non-lesional skin, resolving lesional skin and normal skin had little or no GMP-17. By flow cytometry analysis, lesional epidermal GMP-17+ cells were CD8+CD3+, with a subpopulation expressing the activation marker CD25+. Due to the abundance of activated GMP-17+CD8+CD3+ lymphocytes (the phenotype of activated cytotoxic cells) in psoriatic lesions compared to non-lesional and normal skin, we hypothesize that they are contributing directly to the psoriatic phenotype.     

寻常型银屑病患者血管内皮生长因子及单核细胞趋化因子-1表达的研究

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)在银屑病患者皮肤中的表达及其意义。方法 用免疫组化法检测银屑病患者皮损、非皮损及正常人皮肤中VEGF、MCP-1的表达与分布。用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测患者血清中VEGF、MCP-1水平。结果 ①银屑病患者皮损及非皮损中VEGF表达较正常人皮肤明显增强(P<0.05).皮损中MCP-1表达较非皮损及正常人皮肤明显增强(P<0.05).②患者血清中VEGF水平明显高于正常人(P<0.05),MCP-1水平与正常人比较差异无显着性(P>0.05).③皮损角质形成细胞中VEGF、MCP-1的表达与PASI评分无显着相关性(P>0.05)。结论 VEGF、MCP-1的表达增强在银屑病的发病机制中可能起重要作用。     

Alterations of glucosylceramide-beta-glucosidase levels in the skin of patients with psoriasis vulgaris

Hydrolysis of glucosylceramides by the enzyme glucosylceramide-beta-glucosidase (GlcCer'ase) results in ceramide, a critical component of the intercellular lamellae that mediates the epidermal permeability barrier. A disturbance of ceramide formation is supposed to influence the transepidermal water loss in common skin diseases like atopic eczema or psoriasis. The aim of this study was to investigate whether GlcCer'ase levels were altered in the skin of subjects with psoriasis vulgaris. Skin punch biopsies were taken from lesional and non-lesional psoriatic skin and GlcCer'ase was evaluated both at the RNA and at the protein level. Normal skin from surgical patients provided the baseline GlcCer'ase expression in healthy subjects. Our results show that GlcCer'ase mRNA expression was decreased in psoriatic non-lesional skin compared to normal controls in all cases. Interestingly, in lesional psoriatic skin the level of GlcCer'ase was increased compared to non-lesional skin in all cases. For the immunohistochemical analysis, we used a newly synthesized monoclonal antibody anti-human GBC (GlcCer'ase-GST fusion protein). The results confirmed that GlcCer'ase, mainly present in the upper epidermis, was decreased in psoriatic skin compared to normal control and was increased in lesional compared to non-lesional psoriatic skin. Our findings support the concept that alteration in water permeability barrier in lesional psoriatic skin can serve as a trigger for the upregulation of the expression of enzymes like GlcCer'ase with consequent stimulation of ceramide generation.