氨氯地平对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达的影响

目的观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（hUVEC-12）单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）mRNA表达的影响,以进一步探讨氨氯地平抗动脉粥样硬化的作用机制。方法筛选ox—LDL与hUVEC-12细胞孵育合适的处理浓度与时间,然后用不同浓度氨氯地平（0、0．1、1．0、10．0μmol／L）预孵育hUVEC-12后,与ox—LDL共同孵育,RT—PCR检测细胞MCP-1 mRNA表达的变化情况。结果筛选出ox—LDL与hUVEC-12共同孵育的合适浓度为50mg／L,时间为24h。氨氯地平可下调MCP-1 mRNA的表达,并且对其表达的影响呈现浓度依赖性。结论氨氯地平可下调ox—LDL诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA的表达。     

Ox-LDL对PLGF作用内皮细胞释放炎症因子的影响

目的探讨ox—LDL对胎盘生长因子-1作用人脐静脉内皮细胞ECV-304释放炎症因子IL-6、MMP-2表达的影响。方法在ox—LDL（25μg／mL）条件下,应用不同浓度的胎盘生长因子-1（20、40、80ng／mL）孵育ECV-304。对照组为单用ox—LDL孵育ECV-304。3h、6h、12h、24h后收集细胞上清液,ELISA法检测内皮细胞相关炎症因子IL-6、MMP-2的表达。结果在氧化损伤条件下,胎盘生长因子-1诱导炎症因子的表达呈时间、浓度依赖关系。结论氧化损伤是动脉粥样硬化的独立危险因素,而PLGF可上调炎症因子的表达,进一步促使疾病的恶化。     

脱氢表雄酮对氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞表达VCAM-1的影响

目的探讨雄激素脱氢表雄酮（DHEA）对氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的影响。方法体外培养HUVECs，采用免疫细胞化学、Western blot、原位杂交等方法，观察不同浓度DHEA（1，5，50μmol／L）对ox—LDL诱导的HUVECs表达VCAM-1的影响。结果ox—LDL诱导培养HUVECs后，HUVECs VCAM-1表达明显升高，预先用DHEA处理HUVECs可使VCAM-1的表达降低（P〈0．01），且这种降低呈浓度依赖性。结论DHEA能浓度依赖性地抑制ox-LDL诱导的HUVECs VCAM-1的表达。     

Ox-LDL诱导血管内皮细胞表达LOX-1

【目的】探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）作为氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）的特异性受体在摄取ox-LDL后对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）表达LOX-1的影响以及LOX-1在ox-LDL诱导其自身表达中所起的作用。【方法】用天然低密度脂蛋白（n—LDL）、LOX-1的受体阻断剂聚肌苷酸[poly（I）250μg／mL和爱兰苔胶carrageenan）以及不同质量浓度的ox—LDL（0，10，20，50，100μg／mL）与HUVECs作用于不同的时间（0，6，12，24，36h），用Realtime RT—PCR测定LOX-1 mRNA的表达水平，用Western blot测定LOX-1蛋白表达水平，并比较加入LOX-1阻断剂前后LOX-1表达的变化。【结果】在HUVECs中加入不同质量浓度的ox—LDL（0，10，20，50，100μg／mL），各组剂量的ox—LDL都可以增加LOX-1 mRNA和蛋白的表达（P〈0．01），在10—50μg/mL的剂量范围内有明显的剂量-效应关系。但n—LDL对LOX-1的表达无影响。随着ox—LDL与HUVECs作用时间的延长，LOX-1 mRNA和蛋白的表达显著升高（P〈0．01），在6～24h内呈明显的时间-效应关系（P〈0．01）。HUVECs预先与250μg/mL的poly（I）或carrageenan作用2h，然后再加入50μg／mL的ox—LDL作用24h。poly（I）和carrageenan都可以显著抑制ox—LDL诱导的LOX-1 mRNA和蛋白的表达（P〈0．01）。【结论】Ox—LDL可以诱导HUVECs LOX-1的表达，该诱导作用可被LOX-1的阻断剂部分拮抗。表明LOX-1不仅特异性地结合ox—LDL，而且介导ox—LDL对LOX-1表达的上调作用。     

氧化LDL对人脐静脉内皮细胞Connexin37表达的影响

目的研究氧化低密度脂蛋白（Ox—LDL）对体外培养的人脐静脉内皮细胞缝隙连接蛋白Connexin37基因表达的影响。方法常规人脐静脉内皮细胞体外培养并传代。根据Ox—LDL的不同浓度分为对照组（不加Ox—LDL）及50、100、200mg／L干预组,干预24h后通过RT-PCR方法检测并比较各组内皮细胞Connexin37mRNA的表达。根据Ox—LDL干预的不同时间分为对照组（不加Ox—LDL）以及50mg／LOx—LDL干预6、12、24、48、72h组,检测比较各组Connexin37mRNA的表达情况;并检测比较对照组和100mg／L Ox-LDL干预组间Connexin37蛋白的表达水平。结果50、100、200mg／L的Ox—LDL干预24h后均能引起内皮细胞Connexin37mRNA表达的显著减少（P〈0.01）,以50mg／L的Ox—LDL干预效果最明显（P〈0.01）.50mg／L的Ox-LDL干预12h后Connexin37mRNA的表达开始显著下降（P〈0．01）,24h下降最明显（P〈0．01）,48h仍下降（P〈0．05）,至72h时恢复到刺激前水平。100mg／L的Ox—LDL干预24h后内皮细胞Connexin37蛋白表达水平显著降低（P〈0.01）。结论Ox-LDL可以抑制人脐静脉内皮细胞Connexin37mRNA和Connexin37蛋白的表达。     

终末糖基化产物、高脂诱导内皮细胞凋亡的作用途径及葛根素的保护作用*

[目的]探讨葡萄糖和高脂诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用途径及葛根素的保护作用。[方法]采用终末糖基化产物、高脂共同诱导内皮细胞凋亡建立模型,并用葛根素进行干预。采用免疫细胞化学法检测Gaspase3阳性细胞数。流式细胞分析仪检测终末糖基化产物及高脂预处理后内皮细胞凋亡百分率。[结果]中浓度终末糖基化产物（AGE50ug／mol）以及氧化低密度脂蛋白（ox—LDL50mg／L）36h作用于人脐静脉内皮细胞与正常水平的内皮细胞相比,凋亡细胞数量显著增加P〈0．05,葛根素预处理12h后显著降低高糖诱导的凋亡率P〈0．05。[结论]葛根素可以抑制高糖高脂诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,这在防治糖尿病及动脉粥样硬化并发症的过程中起到一定作用。     

终末糖基化产物、高脂诱导内皮细胞凋亡的作用途径及葛根素的保护作用

[目的]探讨葡萄糖和高脂诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用途径及葛根素的保护作用。[方法]采用终末糖基化产物、高脂共同诱导内皮细胞凋亡建立模型，并用葛根素进行干预。采用免疫细胞化学法检测Gaspase3阳性细胞数。流式细胞分析仪检测终末糖基化产物及高脂预处理后内皮细胞凋亡百分率。[结果]中浓度终末糖基化产物（AGE50ug／mol）以及氧化低密度脂蛋白（ox—LDL50mg／L）36h作用于人脐静脉内皮细胞与正常水平的内皮细胞相比，凋亡细胞数量显著增加P〈0．05，葛根素预处理12h后显著降低高糖诱导的凋亡率P〈0．05。[结论]葛根素可以抑制高糖高脂诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡，这在防治糖尿病及动脉粥样硬化并发症的过程中起到一定作用。     

高糖和氧化型低密度脂蛋白对THP-1源性巨噬细胞转化的影响

目的探讨高糖和氧化型低密度脂蛋白（ox—LDL）对THP-1源性巨噬细胞转化的影响。方法体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯作用使其转化为巨噬细胞,并随机分为四组（n=6）：对照组、高糖组（30mmol／L葡萄糖）、ox—LDL组（100μg／mL ox—LDL）和高糖／ox—LDL（G—ox—LDL）组（30mmol／L葡萄糖＋100μg／mL ox—LDL）。应用高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量;透射电镜和油红O染色光镜观察细胞内脂质。结果ox—LDL组和G—ox—LDL组细胞胞质内出现大量的红染颗粒或脂质空泡,总胆固醇和胆固醇酯均较对照组增加,差异有统计学意义（P〈0．05）;且两组胆固醇酯含量均大于总胆固醇含量的50％。对照组和高糖组细胞胞质内可见少量红染颗粒或脂质空泡,两组细胞内总胆固醇和胆固醇酯比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组胆固醇酯含量均小于总胆固醇含量的50％。结论ox—LDL能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞,而高糖不能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞。提示ox—LDL可能是THP-1源性巨噬细胞转化为泡沫细胞的必要条件。     

低密度脂蛋白对大鼠主动脉内皮细胞一氧化氮释放的影响

低密度脂蛋白（LDL）和氧化低密度脂蛋白（ox－LDL）是动脉粥样硬化（AS）形成的重要危险因素。血管内皮细胞衍生的一氧化氮（NO）是体内重要的动脉硬化分子。近年来的研究表明［1,2］，动脉粥样硬化高血脂状态下血管内皮依赖性舒张功能下降，提示血管内皮细胞产生和释放NO的能力下降。本文采用离体血管功能实验方法探讨了LDL和ox－LDL血管内皮细胞NO释放的影响。l材料与方法1．1LDL与ox－LDL的制备：取健康人新鲜空腹血浆，采用顺序超离心法，先以30000rpm离心18小时除去极低密度脂蛋白（vLDL），再以40000rmp离心24小时分离L…     

一种新的2型糖尿病血管并发症细胞研究模型:葡萄糖、胰岛素、低密度脂蛋白联合诱导血管内皮细胞损伤的研究

目的观察不同浓度的葡萄糖、胰岛素和氧化型低密度脂蛋白（ox—LDL）对内皮细胞的协同损伤作用，建立一种2型糖尿病血管并发症体外内皮细胞损伤模型。方法采用L9（3^4）正交设计方法，将生长融合状的血管内皮细胞（ECV-304）随机分为9组，分别施加不同浓度的葡萄糖、胰岛素和ox—LDL条件液，培养24h后观测细胞活性、细胞一般形态学和超微结构改变以及细胞凋亡情况。结果显微镜下见模型组细胞回缩变圆，轮廓分明，细胞内出现粗糙颗粒样变化；线粒体肿胀，嵴丢失，内质网结构模糊、肿胀，呈小泡状；琼脂糖凝胶电泳可见模型组有明显的细胞凋亡典型的阶梯状区带电泳图谱（DNA Ladder）。结论三因素对细胞有协同损伤作用，可以诱导细胞发生凋亡和细胞器结构发生变化，含100mg／L ox—LDL、20mmol／L葡萄糖和100mU／L胰岛素的混合条件培养液对细胞的损伤最显著，可作为糖尿病血管并发症体外内皮细胞损伤模型的合适诱导条件液。     

抗ApoB抗体对LDL代谢的影响

１３１Ⅰ标记的人血清低密度脂蛋白（ＬＤＬ）与羊抗人ＡｐｏＢ抗体形成的ＬＤＬ－抗体复合物以及１３１Ⅰ－ＬＤＬ，进行由静脉注入正常家兔体内和小鼠腹腔巨噬细胞培养两项实验。结果显示，抗ＡｐｏＢ抗体的加入加快了ＬＤＬ在家兔血浆中的清除率；增加了网状内皮系统（如肝、脾组织）和巨噬细胞对ＬＤＬ的摄取；２４ｈ细胞培养可见巨噬细胞内有大量脂滴堆积。结果表明，抗ＡｐｏＢ抗体增加组织和巨噬细胞对ＬＤＬ的大量摄取，这可能在动脉粥样硬化形成中起重要作用。     

棕榈酸诱发的肝细胞脂质沉积和炎症机制中AMPKα2的作用研究

目的:探讨AMP活化蛋白激酶(AMPK)α2在棕榈酸(PA)诱发的肝细胞脂质沉积和脂多糖(LPS)诱导的炎症中的作用和机制.方法:分离小鼠原代肝细胞,将一部分细胞分为非特异性小干扰RNA(siRNA)对照组(siNR)和敲除AMPKα2(siAMPKα2)组,每组细胞再分别用10％牛血清白蛋白(BSA)、200 μmo...     

姜黄素对铜绿假单胞菌诱导人肺上皮细胞产生细胞因子的影响及其分子机制研究

目的 探讨姜黄素对铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,Pa）感染的肺上皮细胞的体外抗炎效应.方法 体外培养肺上皮细胞系NCI-H292,加入姜黄素和培养的Pa感染不同时间.Western blot检测和实时定量PCR分别检测NCI-H292细胞中红素氧合酶1（Heme oxygenase-1,HO-1）mRNA和蛋白表达情况;ELISA检测IL-1β和IL-8的产生.同时采用RNA干扰HO-1表达后,观察对Pa诱导IL-1β和IL-8产生的影响.结果 Pa感染NCI-H292细胞后,IL-1β和IL-8含量分别为（87.52±7.96）pg/mL和（205.63 ±34.25） pg/mL,50 μg/mL姜黄素孵育8h后,其含量分别降至（15.78±10.74）pg/mL和（49.82±14.28）pg/mL,处理前后差异有统计学意义（P＜0.05）.同时,姜黄素能在转录翻译水平分别调控HO-1 mRNA和蛋白表达,其中50 μg/mL姜黄素能将HO-1 mRNA增高19倍,蛋白表达水平提高4.8倍（P＜0.05）.HO-1 siRNA沉默HO-1表达后,与Pa组相比,IL-1β和IL-8分泌进一步增高.结论 姜黄素可能通过上调HO-1的表达而发挥对肺上皮细胞的抗炎作用.     

云芝多糖对受O－LDL攻击的小鼠巨噬细胞的保护作用及其免疫调节作用

氧化低密度脂蛋白（Ｏ－ＬＤＬ）对巨噬细胞（Ｍｐｈ）有很强的细胞毒作用，能抑制Ｍｐｈ的免疫反应能力，造成脂肪堆积，使Ｍｐｈ泡沫样变性。云芝多糖（ＰＳＫ）能提高机体免疫反应能力。我们研究发现Ｍｐｈ在体外与Ｏ－ＬＤＬ共同培养一段时间后形态有很大改变，如正常梭形伪足消失，细胞变大变园，周边有颗粒沉积，并出现空泡，同时受Ｏ－ＬＤＬ攻击的Ｍｐｈ用ＬＰＳ刺激，ＴＮＦ和ＮＯ产生量都较未受Ｏ－ＬＤＬ攻击的要少（Ｐ＜０．０１），而腹腔注射ＰＳＫ的小鼠Ｍｐｈ在体外与Ｏ－ＬＤＬ共同培养２４ｈ后细胞形态未见有较大改变，并且受ＬＰＳ刺激受ＴＮＰ和ＮＤ产生量都较注射生理盐水对照组要高。因此ＰＳＫ能提高Ｍｐｈ免疫反应能力和抑制其泡沫样变性，这对抑制动脉粥样硬化的进程有益处。     

C反应蛋白调节bcl-2/bax蛋白表达诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的观察不同浓度C反应蛋白对体外培养的人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,hUVEC）凋亡的影响及其分子机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用吖啶橙/溴化已啶荧光染色观察凋亡细胞形态。四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）分别测定与不同浓度C反应蛋白（5mg/L、10mg/L、20mg/L）作用12、24、48h后hUVEC的增殖率,流式细胞仪和Western blotting分别检测与不同浓度C反应蛋白作用24h后的细胞早期凋亡率及bcl-2/bax蛋白表达水平。结果随着C反应蛋白浓度的增加,hUVEC的MTT值逐渐降低,而细胞早期凋亡率则逐渐升高。与对照组相比,24h后高C反应蛋白组MTT值明显下降（P〈0.05）,而细胞早期凋亡率显著增加（P〈0.01）。内皮细胞在高C反应蛋白作用24h后,bcl-2蛋白表达减弱,bax蛋白表达增强,它们的表达量与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 C反应蛋白可能通过调节bcl-2/bax蛋白表达诱导人内皮细胞凋亡。     

Rho在二氧化硅诱导的人支气管上皮细胞α平滑肌肌动蛋白表达中的作用（英文）

目的：探讨Rho在二氧化硅（SiO2）诱导人支气管上皮细胞（HBECs）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达中的作用。方法：以SiO2处理的HBE细胞为研究对象,免疫细胞化学及Western印迹检测α-SMA表达;GST pull down分析Rho的活化情况;干预实验中用Rho抑制剂Y27632处理细胞后,West-ern印迹检测SiO2对α-SMA表达的影响。结果：SiO2（0,50,100,200,300μg/mL）分别作用HBECs细胞72h后,α-SMA表达增强,其中以200μg/mL SiO2组α-SMA表达最强,为对照组的（5.09±1.98）倍（P〈0.01）;用200μg/mL SiO2分别作用HBECs细胞1,2,6,12,24h后,Rho明显活化（P〈0.01）;Rho抑制剂Y27632明显抑制了SiO2诱导的α-SMA表达,20和30μmol/L的Y27632抑制率分别为68%和75%（P〈0.01）。结论：Rho参与介导SiO2诱导的HBECs中α-SMA的表达。     

姜黄素抗As2O3诱变作用的实验研究

目的：研究姜黄素抗三氧化二砷（As2O3）的诱变作用。方法：分别采用小鼠骨髓细胞和人外周血淋巴细胞微核（MN）实验,计数含有MN的嗜多染红细胞和淋巴细胞数,计算MN率。观察As2O3细胞诱变性及不同浓度姜黄素对As2O3诱变性作用的影响。结果：①小鼠骨髓MN试验：与As2O3组比较,As2O3＋1.2mg/mL,2.4mg/mL,4.8mg/mL姜黄素组小鼠骨髓细胞MN率显著降低（P〈0.05,P〈0.01）。②人外周血淋巴细胞MN试验：与空白对照组比较,1μg/mL、2μg/mL、4mg/mLAs2O3组人外周血淋巴细胞MN率升高（P〈0.01）;与1μg/mL（2μg/mL、4μg/mL）As2O3组比较,5μg/mL,10μg/mL,20μg/mL姜黄素＋1μg/mL（2μg/mL,4μg/mL）As2O3组MN率降低（P〈0.05,P〈0.01）。结论：As2O3具有剂量相关的致突变作用,姜黄素具有明确的抗As2O3诱变性作用。     

甲基莲心碱对增生性瘢痕成纤维细胞整合素β1和整合素α3亚型mRNA表达的影响

目的探讨甲基莲心碱（Nef）对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞（HSFBs）整合素（integrin）β1和integrinα3亚型mRNA表达的影响。方法进行HSFBs体外培养,选取3～6代对数生长期的HSFBs,以2×10^6个/瓶分别接种于细胞培养瓶中,随机分为5μg/mLNef组、10μg/mL Nef组、20μg/mLNef组、20μg/mL盐酸维拉帕米注射液（Ver）组和对照组共5组,每组各6瓶细胞。进行条件培养基培养24h后,收集各组细胞,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法测定各组HSFBs integrin β1和integrin α3亚型mRNA的表达。结果10μg/mLNef组、20μg/mLNef组和20μg/mLVer组HSFBsintegrinβ1 mRNA表达水平均明显低于对照组（均P〈0.01）,20μg/mLVer组HSFBsintegrinβ1 mRNA表达水平与10μg/mLNef组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,5μg/mLNef组HSFBsintegrinβ1mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。10μg/mLNef组、20μg/mLNef组HSFBs integrinα3 mRNA表达水平均明显低于对照组（均P〈0.01）,5μg/mLNef组、20μg/mLVer组HSFBs integrinα3 mRNA表达水平与对照组比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）,10μg/mLNef组HSFBs integrinα3 mRNA表达水平与20μg/mLNef组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论Nef以浓度依赖方式抑制HSFBs integrinβ1 mRNA和integrinα3 mRNA的表达。