凋亡相关基因在眼眶腺样囊性癌组织中的表达意义

目的:分析凋亡相关基因p53和bcl-2在眼眶腺样囊性癌组织中的表达,分析其关系及临床意义。方法:免疫组化法检测51例眼眶腺样囊性癌临床标本和10例正常眼眶组织中P53和Bcl-2蛋白的表达状况。结果:P53和Bcl-2在眼眶腺样囊性癌组织中的表达阳性率分别为53%和65%,显著高于眼眶正常组织(53%,65%vs10%,P<0.01)。实性型腺样囊性癌中P53的表达率显著高于其在腺样-管状型中的表达率(86%vs30%,P<0.01);P53和Bcl-2在复发组中的表达率显著高于其在初发组中的表达率(85%vs42%,P<0.01),(100%vs53%,P<0.01);P53和Bcl-2二者在表达上具有相关性(χ2=1.461,P>0.05)。结论:P53和Bcl-2蛋白的检测对于判断肿瘤对化疗的敏感性和预后有参考价值。     

多药耐药相关基因在眼眶腺样囊性癌中的表达

目的 了解P53、GST-π、P170和鼠抗人MDR相关蛋白（MRP）在眼眶腺样囊性癌（ACC）组织中的表达情况.方法 免疫组织化学法检测51例眼眶ACC标本和10例正常眼眶组织中P53、GST-π、P170和MRP的表达状况.结果 P53、GST-π和P170在眼眶ACC组织中表达阳性率分别为52.94%、100%和82.35%,与眼眶正常组织相比差异有统计学意义.P53和P170在实体型ACC中的表达率明显高于其在腺样-管状型中的表达率;P53在复发组中的表达率明显高于其在初发组中的表达率;各指标之间在表达上无相关性.结论 眼眶ACC的多药耐药性与P53、GST-π和P170的过表达有关,但作用机制不尽相同,各指标的检测对于判断预后有参考价值.     

视网膜母细胞瘤多药耐药相关蛋白的研究

目的 检测P-糖蛋白(P-Gp)、多药耐药基因相关蛋白(MRP)及肺耐药相关蛋白(LRP)在视网膜母细胞瘤(Rb)中的表达及临床意义;初步分析Rb患者临床病理指标与MRP间的关系;探讨Rb多药耐药现象的可能机制.方法 实验研究.应用免疫组织化学染色方法检测P-gp、MRP、LRP在75例Rb肿瘤标本中的表达情况.分析3种蛋白表达的相关性及其与患者年龄、性别、眼别、临床表现、组织病理分化程度等临床病理指标的相关性.各蛋白表达情况与一般临床特点、组织病理学特征的比较采用卡方检验,各蛋白间的相关性采用多元相关分析.结果 P-Gp、LRP、MRP蛋自在Rb中阳性表达率分别为64.0%、25.3%、36.0%.P-gp与LRP、P-gp与MRP、LRP与MRP的共表达阳性率分别为18.7%、32.0%、20.0%.P-gp、LRP、MRP在分化型Rb组织中的阳性表达率均高于杀分化型,且组间差异具有统计学意义(χ2=8.002,χ2=17.327,χ2=28.421;P<0.05).3种蛋白的表达均与年龄、性别、眼别无关(χ2=0.003～3.385,P>0.05).P-gp、LRP的表达分别与MRP的表达其有相关性(r=0.389,r=0.521;P<0.05).结论 Rb原发性多药耐药的形成是一个多因素、多步弱的复杂过程,与包括P-gp、LRP、MRP等在内的多项因素的参与有关.P-gp、LRP、MRP蛋白可以作为反映Rb耐药的分子基础,耐药相关标志的联合检测更有利于准确判断Rb的多药耐药状态,为Rb化学治疗提供科学的理论依据.     

PTEN和p53在视网膜母细胞瘤中的表达及临床意义

目的检测视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)组织中PTEN基因和p53基因的蛋白表达水平并探讨二者在RB发生发展中的作用以及相关性。方法采用PV-9000免疫组织化学二步法,检测40例RB组织和16例正常视网膜组织中PTEN和p53蛋白的表达,统计分析不同临床和病理阶段RB表达PTEN和p53的差异及其相关性。结果(1)PTEN在正常视网膜组织中的阳性表达率为100%,显著高于RB55%(P<0.01);PTEN蛋白的阳性表达率与临床分期、病理分型以及是否伴有视神经浸润有关(P<0·05);与性别差异无关(P>0.05)。(2)p53在正常视网膜组织中不表达,在RB组织中阳性表达率为57.5%,差异有统计学意义(P<0·05);p53蛋白的阳性表达率与临床分期、病理分型以及是否伴有视神经浸润有关(P<0.05);与性别差异无关(P>0·05)。(3)PTEN和p53在RB中的蛋白表达呈负相关(r=-0.3710,P<0.05)。结论PTEN和p53可作为判断RB恶性程度和预后的指标。PTEN可作为RB早期诊断的分子标记物之一。     

HXO-Rb44视网膜母细胞瘤株多药耐药现象的基因研究

目的 研究视网膜母细胞瘤（retinoblastoma,Rb)细胞系HXO－Rb44细胞多药耐药基因（multidrug resistance gene,MDR1)和多药耐药相关蛋白（multidrug associated protein,MRP）基因的表达,探讨Rb多药耐药现象的发生机制。方法 用逆转聚合酶链反应检测HXO－Rb44细胞的MDR1和MRP基因的表达,并用免疫组织化学方法对其蛋白产物P－gp和P190进行检测。结果 HXO－Rb44系同时存在MDR1和MRP基因,并呈现P-gp和P190的过度表达（96％和97％）。结论 MDR1和MDRP基因的过度表达是Rb多药耐药现象发生的重要机制。     

原代视网膜母细胞瘤耐药基因及耐药蛋白表达的研究

目的 研究视网膜母细胞瘤(Rb)瘤细胞多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白(MRP)基因以及相应耐药蛋白P-gp和MRP的表达水平.方法 共35例Rb患儿,行眼球摘除术时取新鲜的肿瘤细胞,用RT-PCR的方法 检测Rb瘤细胞是否有耐药基因MDR1和MRP基因的表达,用免疫组织化学的方法 检测相应耐药蛋白P-gp和MRP的表达.结果 34例Rb瘤细胞进行了耐药基因的检测,MDR1基因平均表达水平为0.41±0.38,MRP基因平均表达水平为0.73±0.92;35例Rb进行了耐药蛋白的检测,P-gp有15例阳性(42.9%),MRP有23例阳性(65.7%);34例Rb两种基因和蛋白两种方法 的检验结果 呈一致性;两种耐药基因及两种耐药蛋白的表达相互间有一定的联系.结论 原代Rb瘤细胞中一部分个体有不同程度的耐药基因MDR1和MRP基因及其产物耐药蛋白P-gp和MRP的表达,提示Rb可能存在原发耐药性.     

survivin在眼眶横纹肌肉瘤中的表达及其与细胞增殖的关系

survivin是近年发现的一种凋亡抑制蛋白。本文采用免疫组织化学方法检测了survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)在眼眶横纹肌肉瘤中的表达,旨在探讨survivin表达的临床意义及与细胞增殖的关系。1材料与方法1.1材料收集天津市眼眶病研究所1987~2000年确诊的眼眶横纹肌肉瘤42例,其中男     

老年性及先天性白内障晶状体上皮细胞凋亡及相关基因的表达

目的探讨老年性及先天性白内障患者晶状体上皮细胞(LECs)凋亡及其相关基因表达的关系。方法采用原位末端标记及免疫组织化学的方法,对30例老年性白内障患者、15例先天性白内障患者及15例正常人LECs中的凋亡细胞及c-fos、c-jun等相关基因蛋白的表达进行检测。结果30例老年性白内障患者LECs凋亡率为15·10%±7·83%,正常对照组为0(P<0·01),先天性白内障组0·01%±0·028%(P>0·05)。老年性白内障组中c-fos及c-jun阳性表达的细胞率均明显高于对照组(P<0·01),与凋亡细胞率呈正相关(r=0·8660,0.4021);先天性白内障及正常组中均极少或未见相关基因的表达。结论LECs凋亡与老年性白内障密切相关,c-fos与c-jun蛋白的表达可能与LECs凋亡有关。     

多药耐药蛋白1和多药耐药相关蛋白5、7在糖尿病小鼠视网膜中表达的变化

目的 观察多药耐药蛋白1(muhidrug resistance 1,MDR1)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)5和MRP7在不同时期糖尿病小鼠视网膜中的表达变化.方法 通过腹腔注射链脲佐菌素诱导C57 BL/6小鼠建立糖尿病模型,伊文思蓝灌注检测血-视网膜内屏障变化.分别于糖尿病造模成功后的4周、12周和24周取小鼠视网膜,进行实时定量-PCR、免疫荧光、Western blotting等实验,检测各组小鼠视网膜中MDR1、MRP5和MRP7的表达变化.结果 伊文思蓝灌注结果显示在糖尿病12周就出现视网膜渗漏;实时定量-PCR结果发现与对照组相比,随糖尿病进展,MDR1、MRP5和MRP7在4周、12周和24周的表达均呈下降趋势(MDR1:P4周=0.028,P12周=0.003,P24周＜0.001;MRP5:P4周=0.045,P12周=0.009,P24周＜0.001;MRPy7:P4周=0.019,P12周＜0.001,P24周 =0.001),在糖尿病不同时期其变化也呈下降趋势(均为P＜0.05);免疫荧光观察到MDR1、MRP5和MRP7的荧光强度随糖尿病发展逐渐减弱;Western blotting检测可见在4周、12周、24周糖尿病小鼠视网膜中MDR1、MRP5和MRP7的表达均呈下降趋势.结论 在DR早期血-视网膜内屏障会受到破坏,视网膜中外排转运蛋白的表达也会受糖尿病的影响导致不同程度的下降.     

眼眶横纹肌肉瘤细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2,Bax,p53的蛋白表达

目的 分析眼眶横纹肌肉瘤中的细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2，Bax和p53的表达状态。方法 对31例标本，利用TUNEL技术显示凋亡细胞，用免疫组织化学方法检测Bcl-2，Bax及p53蛋白表达。结果 凋亡细胞检测率90．3％，肿瘤增生活跃区多见。Bcl－2阳性率29％，Bax阳性率54．5％，p53阳性率64．5％。Bcl-2与Bax表达呈正相关（P＜0．01）。Bcl-2阳性细胞与凋亡细胞分布区域明显不同。Bax与p53表达与细胞凋亡无相关关系（P＞0．05）。结论 眼眶横纹瘤中存在细胞凋亡与肿瘤增生有关。Bcl－2抑制Bax的功能进而抑制肿瘤细胞凋亡。p53在该肿瘤中可能不是调控细胞凋亡的主要因素。     

葡萄膜黑色素瘤多药耐药基因的表达与患者预后因素的分析

目的 探讨葡萄膜黑色素瘤多药耐药基因的表达与患者预后的相关关系。 方法选择石蜡包埋葡萄膜黑色素瘤组织96例，通过脱色素免疫组织化学检测细胞周期素D1(cyclin D1)、上皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor, EGFR)、转移抑制基因23(non-metastasis gene 23, nm 23)、P糖蛋白(P glucose protein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance relation protein,MRP)、肺耐药蛋白(lung-resistance-protein,LRP)基因表达。选择病例资料较完整者，进行随访，随访结果分类统计。 结果 96例葡萄膜黑色素瘤中类上皮细胞型21例、混合细胞型56 例和梭形细胞型19例，其中眼内期76例，眼外期20例。随着转移抑制基因nm 23表达的减低和Cyclin D1、EGFR表达的增高，耐药相关基因表达有增高趋势，其中MRP和LRP的表达与nm 23的表达呈明显负相关关系，与Cyclin D1、EGFR的表达呈明显正相关关系。随访结果显示，回访人数58例，生存超过 5年者26例，5年内死亡者19例。 结论 葡萄膜黑色素瘤多药耐药基因尤其LRP的表达与患者预后具有明显的相关性。 （中华眼底病杂志，2003，19：1-4）     

原癌基因mdm2及p53基因与眼眶横纹肌肉瘤生物学特性研究

目的　探讨原癌基因mdm2、p5 3基因在眼眶横纹肌肉瘤 (ORMS)发病机制中的可能作用 ,初步论证mdm2、p5 3作为ORMS生物学特性标记物和预后指标的可行性。方法　应用免疫组化法检测 31例ORMS标本中mdm2、p5 3、Ki 6 7蛋白的表达 ,Ki 6 7蛋白表达作为增殖指标反映肿瘤细胞的增殖状态。应用原位杂交方法检测 31例ORMS标本中mdm2、p5 3基因在mRNA水平的表达。分析mdm2、p5 3蛋白表达与年龄、性别、病理类型、分化程度、增殖程度等临床组织病理学指标之间的关系。结果　 31例ORMS中 ,mdm2、p5 3蛋白水平表达阳性率分别为 77 4 % (2 4 / 31)和 71 0 % (2 2 / 31) ,mdm2与p5 3蛋白共同表达阳性率是 6 1 3%。mdm2、p5 3在蛋白水平表达与其各自的mRNA水平表达之间具有较好一致性。 (1)按肿瘤细胞分化程度分为高、中、低 3个组 :中、低分化组mdm2蛋白阳性率和mdm2与p5 3蛋白共同表达阳性率均较高分化组高 ,差异有显著意义 (P =0 0 0 7、0 0 0 9)。 (2 )按Ki 6 7表达与否分为高、低增殖组 :高增殖组p5 3蛋白表达阳性率较低增殖组高 ,差异有显著意义 (P =0 0 4 4 )。mdm2、p5 3蛋白表达与其他临床病理学指标之间无显著相关性 (P >0 0 5 )。结论　mdm2和p5 3与ORMS的分化和增殖密切相关 ,mdm2与p5 3共同表达提示mdm     

眼睑基底细胞癌中p16、CD44V6蛋白的表达及意义

目的　探讨眼睑基底细胞癌中肿瘤抑制基因p16和细胞黏附分子变异体 6(CD44V6 )表达及临床病理学意义。方法　应用SABC(链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物)免疫组织化学法对 48例眼睑基底细胞癌中p16、CD44V6蛋白表达进行检测。 结果　48例眼睑基底细胞癌中p16、CD44V6蛋白阳性表达率分别为 66 7% (32 /48)和 39 6% (19 /48),分化型与未分化型p16、CD44V6蛋白阳性表达率差异有显著性 (P<0 05),CD44V6蛋白阳性表达率与肿瘤复发有关 (P<0 05)。结论　p16、CD44V6蛋白表达与眼睑基底细胞癌的分化程度有关,CD44V6分子可能与眼睑基底细胞癌的复发有关。     

翼状胬肉中核糖体S6蛋白磷酸化、细胞周期蛋白D1的表达及意义

目的　研究核糖体Ｓ６蛋白磷酸化（ｒｉｂｏｓｏｍａｌＳ６ｐｒｏｔｅｉｎｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ,Ｐ-Ｓ６）和细胞周期蛋白Ｄ１（ＣｙｃｌｉｎＤ１）在翼状胬肉中的表达及相关性,探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物１（ｍａｍｍａｌｉａｎｔａｒｇｅｔｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎｃｏｍｐｌｅｘ１,ｍＴＯＲＣ１）信号通路在翼状胬肉发病机制中的作用。方法　收集翼状胬肉组织３１例,正常结膜组织１７例,利用免疫组织化学和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ进行Ｐ-Ｓ６和ＣｙｃｌｉｎＤ１的检测及比较。结果　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测６例翼状胬肉组织中Ｐ-Ｓ６蛋白／Ｓ６蛋白表达（１．１９６±０．１０１）显著高于正常结膜组织（０．２９５±０．０５６）,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。免疫组织化学染色结果显示:翼状胬肉中Ｐ-Ｓ６、ＣｙｃｌｉｎＤ１的阳性表达率均为１００％（２５／２５）,正常结膜组织中Ｐ-Ｓ６阳性表达率为１８．２％（２／１１）、ＣｙｃｌｉｎＤ１阳性表达率为９．１％（１／１１）,正常结膜组织与翼状胬肉组织中Ｐ-Ｓ６与ＣｙｃｌｉｎＤ１表达差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。翼状胬肉组织中Ｐ-Ｓ６与ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达呈正相关（ｒ＝０．７５２,Ｐ＜０．０５）。结论　ｍＴＯＲＣ１信号通路在翼状胬肉发病过程中起重要作用,并可能通过调控ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达来实现。     

脂多糖诱导炎症反应对甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞分化的影响

目的 观察脂多糖诱导炎症反应对甲状腺相关眼病( TAO)眼眶前脂肪细胞分化的影响,探讨TAO眼眶脂肪增殖的发病机制。方法 实验研究。眼眶组织取TAO行开眶减压术的患者。将体外培养的TAO眼眶成纤维细胞,分为A组与B组,A组采用1 mg/L的脂多糖作用8h,然后常规用诱导分化液Ⅰ和Ⅱ诱导直至分化结束,B组仅用诱导分化液Ⅰ和Ⅱ诱导至分化结束。采用油红O染色法测定分化后脂肪细胞相对含量,逆转录聚合酶链反应法与Western blot法检测环氧化酶2( COX2)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) mRNA与蛋白的表达,酶联免疫吸附实验检测上清液中前列腺素E2( PG E2)的表达。两样本均数比较采用t检验,多样本比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK检验。结果 分化后油红O染色显示两组细胞形态上无明显差异。A组细胞吸光度(A)值(1.02±0.08)较B组(0.74±0.06)明显升高,差异具有统计学意义(t=8.502,P=0.000)。A组细胞分化后PPARγ mRNA( 1.74±0.19)与蛋白(0.47 ±0.04)的表达分别较分化前PPARγ mRNA(0.30±0.07)与蛋白(0.08±0.02)的表达明显增强(P＜0.05);B组细胞分化后PPARγ mRNA(1.15 ±0.18)与蛋白(0.35±0.03)的表达分别较分化前PPARγ mRNA(0.13 ±0.04)与蛋白(0.03 ±0.01)的表达明显增强(P＜0.05);A组细胞分化后COX2 mRNA (0.28±0.07)与蛋白(0.24±0.03)的表达分别较分化前COX2 mRNA( 1.54 ±0.10)与蛋白(0.49±0.03)的表达明显减弱(P＜0.05);B组细胞分化后COX2 mRNA的表达（0.08±0.03）较分化前(0.19±0.07)明显减弱(P＜0.05),而COX2蛋白的表达(0.01±0.01)与分化前(0.03±0.01)比较差异无统计学意义(P＞0.05)。分化后A组细胞上清液中PGE2分泌水平(208.43±15.06)ng/L较分化前(898.75±21.09)ng/L显著降低(P＜0.05);分化后B组细胞上清液中PGE2分泌水平(30.61±5.75) ng/L与分化前（35.75±4.09）ng/L比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。诱导分化前A组细胞COX2 mRNA与蛋白的表达及PGE2的分泌较B组明显增强(P＜0.05),而PPARγ mRNA与蛋白的表达亦强于B组(P＜0.05),分化后A组细胞COX2及PPARγmRNA与蛋白的表达、PGE2的分泌均强于B组(P＜0.05)。结论 脂多糖可诱导TAO眼眶前脂肪细胞产生炎症反应,使其炎症标志物COX2及其控制合成的PGE2表达增强,并使脂肪生成关键转录因子PPARγ表达上调,分化后PPARγ表达显著增强,而COX2与PGE2的表达明显降低。     

去整合素金属蛋白酶9和血管内皮生长因子蛋白在眼部恶性黑色素瘤中的表达

目的探讨去整合素金属蛋白酶9(A disintegrin and metallo-proteinase9,ADAM9)及血管内皮生长因子蛋白(vascular endothelial growth factor,VEGF)在眼部恶性黑色素瘤组织中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学SP法检测49例眼部恶性黑色素瘤和9例正常眼组织中ADAM9与VEGF蛋白的表达,并观察ADAM9和VEGF蛋白表达的相关性。结果 ADAM9蛋白在眼部恶性黑色素瘤中的阳性表达率为77.6%(38/49),而在正常脉络膜组织中完全没有表达(0/9),组间比较差异有统计学意义(P=0.000);VEGF蛋白在眼部恶性黑色素瘤中的阳性表达率为73.5%(36/49),而在正常脉络膜组织中完全没有表达(0/9),组间比较差异有统计学意义(P=0.000)。ADAM9和VEGF蛋白表达均与眼部恶性黑色素瘤组织是否侵犯巩膜密切相关(均为P<0.05),而在不同性别、年龄、肿瘤大小及最大基底径间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。相关性分析表明,ADAM9和VEGF蛋白在眼部恶性黑色素瘤中的表达呈显著正相关(r=0.341,P<0.05)。结论 ADAM9和VEGF蛋白表达与眼部恶性黑色素瘤的发生、发展和转移密切相关,联合检测ADAM9和VEGF蛋白有望成为眼部恶性黑色素瘤早期诊断和判断预后的分子指标之一。