外源性表皮生长因子与端侧吻合后的神经再生

背景研究证实通过端侧吻合方式可诱导神经侧芽再生,但再生效果达不到神经端端吻合的水平,应用外源性表皮生长因子具有促进体外神经元存活及神经再生的效果,可否提高端侧周围神经吻合的再生率?目的评价外源性表皮生长因子对端侧吻合后神经远段再生的影响.设计随机对照实验.单位解放军总医院骨科研究所.对象实验于2001-09/2002-02在解放军总医院骨研所完成.雄性Wister大白鼠32只,体质量200～250 g,随机分成表皮生长因子组和对照组,每组16只.方法表皮生长因子组切断右侧腓神经,在邻近的胫神经干外膜上开一1 mm小窗,将腓神经远端吻合到胫神经干侧方开窗处.右小腿外侧肌肉注入用生理盐水稀释为2 g/L的表皮生长因子注射液0.1 mL/d,共用2周;对照组吻合方法同表皮生长因子组,术后注射等量的生理盐水2周.两组分别于术后4周和8周进行大体、组织学、形态定量学和电生理检测.主要观察指标两组术后有髓神经纤维再生率,运动神经传导速度,超微结构变化.结果32只大鼠均进入结果分析.①有髓神经纤维再生率术后4,8周时,表皮生长因子组优于对照组[(52.42±1.45)%,(61.41±1.54)%,(34.60±1.52)%,(38.64±1.89)%,P＜0.05].②运动神经传导速度术后4,8周表皮生长因子组明显比对照组加快[(30.33±0.88)m/s,(34.36±1.09)m/s,(21.06±0.93)m/s,(23.31±0.58)m/s,P＜0.05].③超微结构观察表皮生长因子组再生神经的有髓纤维数、髓鞘厚度,髓鞘的成熟度明显好于对照组.结论外源性表皮生长因子可以提高运动神经传导速度和有髓神经再生率,促进端侧吻合后神经远段的再生.提高端侧吻合周围神经的再生率.     

神经电刺激对面神经端侧吻合后神经再生的影响

目的:探讨神经电刺激对周围面神经端侧吻合后促神经再生的作用。方法:将24只成年家兔随机分为3组，兔双侧面神经颊支切断后与同侧外膜开窗的颈支作端侧吻合。右侧为实验侧，术后给予神经电刺激，共5周；左侧不给电刺激，作为对照侧。分别于术后3，5，15周取材，进行神经组织学、电生理和透射电镜等检查。结果各组实验侧颊支有髓神经数[术后3，5，15周组分别为(65．32&;#177;6．36)，(71．53&;#177;7．89)，(81．62&;#177;8．63)个／高倍视野]均高于对照侧[术后3，5，15周组分别为(45．28&;#177;5.13)，(59．68&;#177;4.26)，(65.87&;#177;3．84)个／高倍视野]，检测术后15周组颊神经的运动神经传导速度，结果实验侧神经传导速度为(28．6&;#177;1．4)m／s，而对照侧为(17．2&;#177;2．6)m／s，两者差异有显著意义(t=2.852，P&;lt;0．05)；实验侧颊支神经成熟程度优于对照侧。结论神经电刺激在提高神经端侧吻合后侧支萌出率和减轻失神经肌肉萎缩方面有积极作用。     

神经生长因子对周围神经端侧吻合靶器官功能恢复影响的实验研究

目的：研究周围神经损伤以后，神经远端与健康神经行端侧吻合，靶器官定期注射神经生长因子(NGF)，对神经再生及靶器官功能恢复的影响。方法：30只雌性Wistar大白鼠，随机分为NGF组，NS组及正常组。前两组切断右下肢腓神经，远端同健康胫神经行端侧吻合，手术当天开始右小腿外侧注射NGF200U，1次／d，持续两周，对照组注射等量生理盐水(NS)，分别于12周后行胫前肌湿重、电生理、再生神经、靶肌肉组织学检查。结果：胫前肌湿重NGF组为(0．80&;#177;0．14）g，高于NS组（0．59&;#177;0．12)g(T=5．60，P&;lt;0．01)术后12周NGF组复合肌肉动作电位振幅[（3.77&;#177;0．35)mV]，潜伏期[(5.595&;#177;0．893)ms]和运动神经传导速度[(26．50&;#177;2．53)m／s]，均优于NS组[(2．53&;#177;0.74）mV，[8．327&;#177;0．802)ms，(19.62&;#177;1.71)m／s，T=9.91，8.04，10.43，P&;lt;0．01]。结论：周围神经端侧吻合后靶器官内注射NGF，能促进神经侧支再生，靶器官功能恢复。     

嗅鞘细胞移植对周围神经端侧吻合后侧支轴突再生的修复作用

目的：观察大鼠腓神经轴突数目、神经纤维直径、髓鞘厚度、神经电生理和胫前肌湿重恢复率，探讨大鼠周围神经损伤行嗅鞘细胞移植对端侧吻合后轴突再生的作用。方法：实验于2004—03／11在广东医学院实验动物中心完成。Wistar大鼠72只，随机分为3组，每组24只。端端吻合组：行左腓总神经端端吻合；端侧吻合组：行左胫腓神经端侧吻合；嗅鞘细胞组：行左胫腓神经端侧吻合后再生室内注嗅鞘细胞悬液。术后30和60d进行各项指标检测。①再生腓神经的神经电生理检测：应用VikingⅡ型肌电图仪检测大鼠胫前肌的肌电图和运动神经传导速度。②胫前肌湿重：胫前肌肌湿重恢复率=实验侧肌湿重／正常侧肌湿重&;#215;100％。⑧组织学检查：腓总神经轴突数目。④超微结构：透射电镜下观察。结果：纳入72只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠再生腓神经电生理检查结果：术侧胫前肌M波，术后30d，端端吻合组出现M波，波幅〉5mV，端侧吻合组和嗅鞘细胞组75％出现M波，术后60d，端侧吻合组和嗅鞘细胞组100％出现M波，其中嗅鞘细胞组的波幅大部分〉5mV。随时间的延长各组手术侧运动神经传导速度增加，潜伏期缩短，30d，端端吻合组与正常侧差异无显著性（P〉0．05），60d时嗅鞘细胞组与端端吻合组之间差异无显著性（P〉0．05），与端侧吻合组比较差异仍有显著性（P〈0．05）。②大鼠胫前肌湿重恢复率：30d，嗅鞘细胞组明显优于端侧吻合组[（56．57&;#177;1．89）％，（50．21&;#177;3．68）％，P〈0．05]，在60d时已与端端吻合组无显著性差异[（91．34&;#177;1．76）％，（97．11&;#177;3．41）％，P〉0．05]。③大鼠腓总神经组织学检查：60d，嗅鞘细胞组神经轴突数目优于端侧吻合组[（997．00&;#177;123．34），（710．00&;#177;102．01）个／mm^2，P〈0．05]。④大鼠再生神经组织透射电镜观察结果：60d嗅鞘细胞组再生纤维增厚，髓鞘内板层变致密，轴浆内富含神经微丝，微管排列规则，分布均匀，电镜下观察同端端吻合组类似。结论：嗅鞘细胞移植可以促进周围神经端侧吻合后侧支轴突再生，改善端侧吻合质量。     

感觉神经端侧吻合后再生纤维的功能

目的：应用两种电生理技术，评价感觉神经端侧吻合后再生神经的功能。方法：取兔(新西兰兔15只，雌雄不拘，随机分为实验组、对照组和正常组，每组5只)耳大神经移植体作为受神经。与对侧耳大神经端侧吻合并植入皮瓣。用神经单纤维放电引导电生理技术检测皮瓣内再生放电纤维数量、分布、感觉类型。同时以免(新西兰兔16只，雌雄不拘。随机分为10，20，30周实验组和正常对照组，每组4只)2条耳大神经作端侧吻合模型，用RM-6280多道智能生理记录及分析处理系统测定再生纤维动作电位幅值恢复率和神经传导速度。结果：植入皮瓣的受神经在术后4个月可再生触、压、痛、温冷觉末梢，使皮瓣初步建立神经再支配。受神经内再生纤维的动作电位幅值恢复率10，20，30周时分别为(53．0&;#177;3．7)％，(66．8&;#177;5．5)％，(88．8&;#177;2．3)％；神经传导速度10，20，30周时分别为(42．4&;#177;1．6)，(55．6&;#177;1．2)，(57．2&;#177;1．6)m／s，随时间延长逐步增加。术后30周受神经近端再生纤维幅值恢复率和传导速度分别达到正常的88．8％和94．38％。结论：感觉神经端侧吻合后能再生有功能的神经纤维。再生速度稍慢。     

面神经端侧吻合与端端吻合后神经再生质量的比较

目的：比较面神经损伤后端侧吻合与端端吻合方法效果。方法：在解放军总医院动物中心．用24只新西兰大耳白兔进行实验。左侧上颊神经切断后作端端吻合。右侧上颊神经切断后，远断端与下颊支侧方，外膜开窗处作支间端侧吻合。分别于术后1，2，3个月时作肌电图后取材，作组织学检查。结果：术后1，2个月时，端侧吻合肌电图神经传导速度慢于端端吻合[1个月时(10．6&;#177;2、20)，(15．7&;#177;2．13)m／s．2个月时(14.4&;#177;1.80)．(20．80&;#177;3．10)m／s,P&;lt;0．05]，术后3个月时端侧吻合肌电图神经传导速度与端端吻合差异无显著性意义[(22．8&;#177;2．40)．(23．20&;#177;2．14)m／s，P&;gt;0．05]。术后1，2个月时，端侧吻合有髓神经纤维数少于端端吻合[1个月时(34．16&;#177;4．24)，(44．28&;#177;3．04)个／高倍视野，2个月时(43．64&;#177;3．20)，(52．84&;#177;2．16)个／高倍视野，P&;lt;0．05]，术后3个月时端侧吻合有髓神经纤维数与端端吻合差异无显著性意义[(64．66&;#177;2．48)，(66．12&;#177;1．96)个／高倍视野，P&;gt;0．05]。结论：面神经断伤作端侧吻合后，早期神经再生质量不及端端吻合优良，晚期效果比较接近。     

感觉神经端侧吻合后再生纤维的功能

目的:应用两种电生理技术,评价感觉神经端侧吻合后再生神经的功能。方法:取兔(新西兰兔15只,雌雄不拘,随机分为实验组、对照组和正常组,每组5只)耳大神经移植体作为受神经,与对侧耳大神经端侧吻合并植入皮瓣。用神经单纤维放电引导电生理技术检测皮瓣内再生放电纤维数量、分布、感觉类型。同时以免(新西兰兔16只,雌雄不拘,随机分为10,20,30周实验组和正常对照组,每组4只)2条耳大神经作端侧吻合模型,用RM-6280多道智能生理记录及分析处理系统测定再生纤维动作电位幅值恢复率和神经传导速度。结果:植入皮瓣的受神经在术后4个月可再生触、压、痛、温冷觉末梢,使皮瓣初步建立神经再支配。受神经内再生纤维的动作电位幅值恢复率10,20,30周时分别为(53.0±3.7)%,(66.8±5.5)%,(88.8±2.3)%;神经传导速度10,20,30周时分别为(42.4±1.6),(55.6±1.2),(57.2±1.6)m/s,随时间延长逐步增加。术后30周受神经近端再生纤维幅值恢复率和传导速度分别达到正常的88.8%和94.38%。结论:感觉神经端侧吻合后能再生有功能的神经纤维,再生速度稍慢。     

面神经端侧与端端吻合的修复效果比较：肌电图评估

目的：比较面神经端侧吻合和端端吻合的效果，探索修复面神经缺损的新方法。方法：实验于2004-04／08在咸宁学院医学院神经组化研究室进行。取日本成年大耳白兔14只，随机分为术后1，3个月组两组各7只。所有兔右侧面区切断面神经上颊支，其远心端吻合到外膜开窗的下颊支侧壁，行端侧神经吻合；左侧面区也切断面神经上颊支，断端间行端端神经吻合。分别于术后1和3个月时做肌电图诱发电位检测神经功能恢复情况，并取材作组织学检测评估其神经再生情况。结果：12只兔进入结果分析。①诱发电位潜伏期：术后3个月组左侧和右侧均短于术后1个月[（1．93&;#177;0．11），（2．68&;#177;0．35）ms；（2．35&;#177;0．07），（4．65&;#177;0．78）ms，P〈0．05]。②波幅：术后3个月组左侧和右侧均高于术后1个月[（9．95&;#177;1．27），（7．12&;#177;1．16）mV；（5．41&;#177;1．40），（1．99&;#177;0．41）mV，P〈0．051。③神经传导速度：术后3个月组左侧和右侧均快于术后1个月[（40．93&;#177;6．19），（29．56&;#177;4．16）m／s；（34．27&;#177;7．23）（20．86&;#177;5．21）m／s，P〈0．051。④再生神经纤维的直径：术后1，3个月组兔左侧均大于右侧[（3．78&;#177;0．52），（2．33&;#177;0．28）μm；（6．25&;#177;0．69），（4．06&;#177;0．73）μm，P〈0．05]。⑤再生神经纤维：术后l，3个月组兔左侧均多于右侧[（637．05&;#177;94．06），（216．33&;#177;35．20）根；（1442．33&;#177;86．34）。（605．83&;#177;143．58）根，P〈0．051。结论：正常神经能发出侧芽通过端侧吻合长入缺损面神经的远残端、使失神经支配面肌再神经化，面神经端侧吻合的效果比端端吻合的效果差，但行端侧吻合修复面神经缺损仍具有一定的临床应用价值。     

神经生长因子对周围神经端侧吻合靶器官功能恢复影响的实验研究

目的研究周围神经损伤以后,神经远端与健康神经行端侧吻合,靶器官定期注射神经生长因子( NGF),对神经再生及靶器官功能恢复的影响. 方法 30只雌性 Wistar大白鼠,随机分为 NGF组, NS组及正常组.前两组切断右下肢腓神经,远端同健康胫神经行端侧吻合,手术当天开始右小腿外侧注射 NGF 200 U, 1次 /d,持续两周,对照组注射等量生理盐水( NS),分别于 12周后行胫前肌湿重、电生理、再生神经、靶肌肉组织学检查. 结果胫前肌湿重 NGF组为 (0.80± 0.14) g,高于 NS组 (0.59± 0.12) g(T=5.60,P< 0.01)术后 12 周 NGF组复合肌肉动作电位振幅 [(3.77± 0.35) mV],潜伏期 [(5.595± 0.893) ms] 和运动神经传导速度 [(26.50± 2.53) m/s],均优于 NS组 [(2.53 ± 0.74) mV,(8.327± 0.802) ms,(19.62± 1.71) m/s,T=9.91,8.04,10.43,P< 0.01]. 结论周围神经端侧吻合后靶器官内注射 NGF,能促进神经侧支再生,靶器官功能恢复.     

外源性转化生长因子β1抗体对胶原瘢痕及神经再生的修复作用

目的：通过神经吻合口局部应用外源性转化生长因子β1的特异性抗体，阻断其诱导局部炎症反应和细胞外基质沉积的作用，以期达到预防或减少神经瘢痕的产生，提高神经修复。方法：实验于2003—04／2005—04在山西医科大学外科实验室完成。选用SD大鼠48只，随机分为转化生长因子β1抗体组和生理盐水对照组，各24只。两组大鼠坐骨神经切断后行神经外膜小间隙缝合，转化生长因子β1抗体组采用微量加样器于神经吻合口间隙内注射质量浓度为50mg／L的Anti-外源性转化生长因子β1溶液0．1mL；生理盐水对照组注射等量生理盐水，逐层缝合伤口。分别于术后4，12周取材，按照Petersen分级标准对皮肤、肌肉、筋膜和神经组织与周围组织粘连的程度进行评估。结果：实验纳入大鼠48只，全部进入结果分析。瘢痕成分的评估：①两组术后大体观察：术后两组大鼠皮肤及肌肉、筋膜愈合良好，均未发生伤口进开、进裂、感染现象。转化生长因子β1抗体组术后12周神经吻合口与周围组织粘连明显减轻，优于生理盐水对照组。②两组术后12周神经组织切片Masson染色结果：转化生长因子B1抗体组神经吻合口远端神经轴索增生活跃．胶原纤维形成较少．以神经外膜为主；生理盐水对照组神经吻合口远端神经纤维生长排列紊乱，连续性差，被胶原纤维包裹，胶原沉积较多，神经外膜肥厚。④术后12周两组Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量灰度值测量结果比较：转化生长因子β1抗体组Ⅰ型胶原纤维含量明显低于生理盐水对照组[（41．112&;#177;11．065），（49．561&;#177;8．097），P〈0．05]，而Ⅲ型胶原纤维含量基本相似[（34．223&;#177;7．130）．（32．284&;#177;5．497），P〉0．05]。神经再生功能的评估：①术后12周两组坐骨神经功能指数比较：转化生长因子β1抗体组明显高于生理盐水对照组[（-19．090&;#177;22．493），（-28．660&;#177;22．649），P〈0．05]。②两组术后12周电生理学检查结果：转化生长因子β1抗体组神经传导速度明显优于生理盐水对照组[（29．603&;#177;3．972），（16．215&;#177;4．619）m／s，P〈0．05]。③两组术后周围神经纤维的镀银染色及周围神经髓鞘染色结果：转化生长因子β1抗体组髓鞘厚度和再生神经纤维的直径均优于生理盐水对照组[（1．36&;#177;0．23），（0．93&;#177;0．48）；（9．40&;#177;0．86），（7．99&;#177;0．36）μm；P均〈0．05]。结论：周围神经损伤后神经端或对端的吻合治疗中，局部应用外源性转化生长因子β1抗体，能够抑制或减少局部神经胶原瘢痕的产生，从而有效促进大鼠周围神经功能的恢复。     

应用透明质酸钠凝胶和自体静脉血管包绕减少吻合口局部瘢痕增生

目的：应用透明质酸钠凝胶和自体静脉血管包绕在缝合口处观察吻合口处瘢痕增生的情况.方法：实验于2002-05/2003-05在青岛大学医学院附属医院骨科创伤中心完成.健康SD大鼠60只,随机分为透明质酸钠凝胶组和血管组,每组30只.透明质酸钠凝胶组大鼠,分别切断两侧坐骨神经,并切去2 mm神经段造成缺损,一侧单纯行常规外膜缝合做为对照侧,另一侧常规外膜缝合后,吻合口及局部用透明质酸钠凝胶均匀涂抹,做为实验侧;血管组同法切断大鼠坐骨神经,一侧单纯外膜缝合做为对照侧,另一侧常规外膜缝合后,吻合口及局部用自体静脉血管包绕,做为实验侧.两组标记后分笼喂养.术后4,8,12周分别对每组中10只大鼠神经修复处,进行局部观察,电生理检测,并切取神经组织进行组织学观察和有髓神经纤维再生分析.结果：实验大鼠60只均进入结果分析.①术后4,8,12周时透明质酸钠凝胶组和血管组肉眼形态学、组织学观察瘢痕明显少于单纯缝合组.②术后4,8,12周时电生理测试两组运动电位的潜伏期实验侧明显短于对照侧[透明质酸钠凝胶组：实验侧（2.41&;#177;0.32）,（1.54&;#177;0.15）,（1.31&;#177;0.25）ms,对照侧（3.96&;#177;0.72）,（2.63&;#177;0.65）,（2.0&;#177;0.72）ms;血管组：实验侧（2.20&;#177;0.51）,（1.60&;#177;0.17）,（1.15&;#177;0.75）ms,对照侧（4.02&;#177;0.51）,（3.01&;#177;0.72）,（2.7&;#177;0.65）ms,P＜0.01],而透明质酸钠凝胶组和血管组的动作电位的波幅实验侧明显高于对照侧[透明质酸钠凝胶组：实验侧（11.62&;#177;0.76）,（15.7&;#177;0.88）,（16.22&;#177;0.38）mV,对照侧（9.65&;#177;0.65）,（12.3&;#177;0.65）,（14.2&;#177;0.55）ms;血管组：实验侧（10.59&;#177;0.66）,（15.91&;#177;0.72）,（16.10&;#177;0.12）mV,对照侧（8.65&;#177;0.65）,（13.0&;#177;0.55）,（14.1&;#177;0.75）ms,P＜0.01].③组织图像分析系统显示两组的有髓神经纤维再生率及有髓神经纤维所占面积比例实验侧明显优于对照侧[透明质酸钠凝胶组：（53.22&;#177;1.89）%,（76.55&;#177;1.32）%,（89.62&;#177;2.18）%和（45.36&;#177;1.69）%,（78.56&;#177;1.56）%,（87.61&;#177;0.52）血管组：（54.21&;#177;1.37）%,（75.21&;#177;1.56）%,（89.95&;#177;1.35）%和（46.67&;#177;1.56）%,（77.67&;#177;1.67）%,（87.72&;#177;1.96）%,P＜0.01].④透明质酸钠凝胶组和血管组各项检查均无明显差异（P＞0.05）.结论：周围神经损伤修复术中,局部应用透明质酸钠凝胶或局部缝合口用自体静脉血管包绕,可明显减少缝合口处瘢痕组织的形成.     

嗅鞘细胞移植对周围神经端侧吻合后侧支轴突再生的修复作用

目的:观察大鼠腓神经轴突数目、神经纤维直径、髓鞘厚度、神经电生理和胫前肌湿重恢复率,探讨大鼠周围神经损伤行嗅鞘细胞移植对端侧吻合后轴突再生的作用。方法:实验于2004-03/11在广东医学院实验动物中心完成。Wistar大鼠72只,随机分为3组,每组24只。端端吻合组:行左腓总神经端端吻合;端侧吻合组:行左胫腓神经端侧吻合;嗅鞘细胞组:行左胫腓神经端侧吻合后再生室内注嗅鞘细胞悬液。术后30和60d进行各项指标检测。①再生腓神经的神经电生理检测:应用VikingⅡ型肌电图仪检测大鼠胫前肌的肌电图和运动神经传导速度。②胫前肌湿重:胫前肌肌湿重恢复率=实验侧肌湿重/正常侧肌湿重×100%。③组织学检查:腓总神经轴突数目。④超微结构:透射电镜下观察。结果:纳入72只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠再生腓神经电生理检查结果:术侧胫前肌M波,术后30d,端端吻合组出现M波,波幅>5mV,端侧吻合组和嗅鞘细胞组75%出现M波,术后60d,端侧吻合组和嗅鞘细胞组100%出现M波,其中嗅鞘细胞组的波幅大部分>5mV。随时间的延长各组手术侧运动神经传导速度增加,潜伏期缩短,30d,端端吻合组与正常侧差异无显著性(P>0.05),60d时嗅鞘细胞组与端端吻合组之间差异无显著性(P>0.05),与端侧吻合组比较差异仍有显著性(P<0.05)。②大鼠胫前肌湿重恢复率:30d,嗅鞘细胞组明显优于端侧吻合组犤(56.57±1.89)%,(50.21±3.68)%,P<0.05犦,在60d时已与端端吻合组无显著性差异犤(91.34±1.76)%,(97.11±3.41)%,P>0.05犦。③大鼠腓总神经组织学检查:60d,嗅鞘细胞组神经轴突数目优于端侧吻合组犤(997.00±123.34),(710.00±102.01)个/mm2,P<0.05犦。④大鼠再生神经组织透射电镜观察结果:60d嗅鞘细胞组再生纤维增厚,髓鞘内板层变致密,轴浆内富含神经微丝,微管排列规则,分布均匀,电镜下观察同端端吻合组类似。结论:嗅鞘细胞移植可以促进周围神经端侧吻合后侧支轴突再生,改善端侧吻合质量。     

神经电刺激对面神经端侧吻合后神经再生的影响

目的探讨神经电刺激对周围面神经端侧吻合后促神经再生的作用。方法将24只成年家兔随机分为3组,兔双侧面神经颊支切断后与同侧外膜开窗的颈支作端侧吻合。右侧为实验侧,术后给予神经电刺激,共5周;左侧不给电刺激,作为对照侧。分别于术后3,5,15周取材,进行神经组织学、电生理和透射电镜等检查。结果各组实验侧颊支有髓神经数犤术后3,5,15周组分别为(65.32±6.36),(71.53±7.89),(81.62±8.63)个/高倍视野犦均高于对照侧犤术后3,5,15周组分别为(45.28±5.13),(59.68±4.26),(65.87±3.84)个/高倍视野犦,检测术后15周组颊神经的运动神经传导速度,结果实验侧神经传导速度为(28.6±1.4)m/s,而对照侧为(17.2±2.6)m/s,两者差异有显著意义(t=2.852,P<0.05);实验侧颊支神经成熟程度优于对照侧。结论神经电刺激在提高神经端侧吻合后侧支萌出率和减轻失神经肌肉萎缩方面有积极作用。     

周围神经端侧吻合后侧支发芽过程中睫状神经营养因子和S-100蛋白的表达

目的：观察与许旺细胞关系密切的睫状神经营养因子和S-100蛋白在周围神经端侧吻合后神经再生过程中的表达。 方法：实验于2002-10／2004-05在上海海军医学研究所完成。选取3月龄SD大鼠16只，随机分为吻合近端组、吻合远端组，8只／组。右侧为吻合组，左侧为正常对照组，于术后1，2，4，8周从吻合近端组及吻合远端组各取1只，共8只。全部大鼠右侧自腓神经切断，胫神经外膜开窗，腓神经远端行外膜端侧吻合于胫神经开窗处。吻合近端组与吻合远端组分别切取吻合近端、远端神经，制备纵切片标本，睫状神经营养因子和S-100蛋白采用免疫组织化学反应并结合计算机进行反应强度的半定量分析。阳性反应染色强的部位透光弱，其灰度值就低，反之灰度值高。 结果：实验纳入大鼠16只，均进入结果分析。①各组术后不同时间睫状神经营养因子免疫反应灰度值的比较：与正常对照组比较，吻合近端组术后1，2，4，8周均基本相近（P〉0．05）；吻合远端组术后1，2，4周均明显升高（117．83&;#177;10．44，155．57&;#177;10．76，186．42&;#177;5．23．142．83&;#177;6．99，P均〈0．01），8周时降至正常水平（P〉0．05）。②各组术后不同时间S-100蛋白的表达：术后1，2，4，8周与正常对照组比较．吻合近端组均无明显差异（P〉0．05）；吻合远端组均呈下降趋势（98．80&;#177;3．43，37．21&;#177;11．44．56．01&;#177;5．77。65．13&;#177;12．36．68．17＋9．35．P〈0．01或0．05）。 结论：在端侧吻合中，由于供体神经轴突的完整性，无法得到近端的因子调节，侧支发芽主要依赖于远端许旺细胞和靶器官。吻合远端睫状神经营养因子呈先下降后上升的趋势，而S-100蛋白呈上升趋势．两者均随神经的修复逐步上调，表明睫状神经营养因子与神经轴突的再生密切相关。提示许旺细胞在端侧吻合轴突侧支发芽中有着必不可少的作用。     

面神经端侧吻合与端端吻合后神经再生质量的比较

目的:比较面神经损伤后端侧吻合与端端吻合方法效果。方法:在解放军总医院动物中心,用24只新西兰大耳白兔进行实验。左侧上颊神经切断后作端端吻合。右侧上颊神经切断后,远断端与下颊支侧方,外膜开窗处作支间端侧吻合。分别于术后1,2,3个月时作肌电图后取材,作组织学检查。结果:术后1,2个月时,端侧吻合肌电图神经传导速度慢于端端吻合犤1个月时(10.6±2.20),(15.7±2.13)m/s,2个月时(14.4±1.80),(20.80±3.10)m/s,P<0.05犦,术后3个月时端侧吻合肌电图神经传导速度与端端吻合差异无显著性意义犤(22.8±2.40),(23.20±2.14)m/s,P>0.05犦。术后1,2个月时,端侧吻合有髓神经纤维数少于端端吻合犤1个月时(34.16±4.24),(44.28±3.04)个/高倍视野,2个月时(43.64±3.20),(52.84±2.16)个/高倍视野,P<0.05犦,术后3个月时端侧吻合有髓神经纤维数与端端吻合差异无显著性意义犤(64.66±2.48),(66.12±1.96)个/高倍视野,P>0.05犦。结论:面神经断伤作端侧吻合后,早期神经再生质量不及端端吻合优良,晚期效果比较接近。     

副神经移位修复第5颈椎神经根和臂丛神经上干的可行性

目的：应用小间隙的方法行副神经移位修复C5、臂丛神经上干，以了解副神经移位后的效果及节省动力神经源的可行性。方法：实验于2004-09／12在吉林省外科研究所实验室进行，取40只雄性Wistar大鼠，随机分成两组，每组20只：A组：自体颈静脉桥接行副神经小间隙（2mm）移位于C5神经根，B组：自体颈静脉桥接行副神经小间隙（2mm）吻合于臂丛神经上干，两组均是左侧为正常侧，右侧为实验侧。术中测量副神经、C5神经根和臂丛神经上干的直径；术后12周行电生理学观察两组大鼠肱二头肌、三角肌肌电图波幅和潜伏期；神经组织学和图像观察再生神经纤维数目、轴突直径和髓鞘厚度；透射电镜观察再生神经纤维形态。结果：两组40只大鼠均进入结果分析。①神经直径：副神经主干为（0．45&;#177;0．05）mm，C5神经根为（0．66&;#177;0．11）mm，臂丛神经上干为（1．16＋0．14）mm。②肌电图波幅和潜伏期：术后12周A组肱二头肌、三角肌实验侧和正常侧比较无差异（P〉0．05）；B组肱二头肌实验侧和正常侧比较无差异，三角肌实验侧较正常侧潜伏期长，波幅低（P〈0．05）。③再生神经纤维数目：术后12周A组实验侧和正常侧比较无差异（P〉005），B组实验侧明显少于正常侧[（99.60&;#177;22.61），（134．40&;#177;30．62）个，t=8.26, P〈0．01]。④轴突直径：术后12周A组实验侧和正常侧比较无差异（P〉0．05），B组实验侧明显小于正常侧[（1．38&;#177;0．40），（2．88&;#177;0．62）μm，t=19．35, P〈0．01]。⑤髓鞘厚度：术后12周A组实验侧和正常侧无差异（P〉0.05），B组实验侧明显小于正常侧[（0．92&;#177;0．22），（1．75&;#177;0．61）μm，t=5．98, P〈0．01]。⑥再生神经纤维形态：A组再生的有髓神经纤维数多，有髓神经纤维髓鞘厚度厚，神经束膜结构完整。B组有髓神经纤维数目明显少，束膜结构不完整，有髓神经纤维鞘可见板层样分离。结论：①应用副神经移位可以修复C5神经根损伤，由于副神经直径相当于C5神经根直径的68％，可以节省动力神经源。②而副神经移位修复臂丛神经上干因两者直径差异明显，副神经只相当于臂丛神经上干直径的39％而不能修复上干。     

外源性转化生长因子β1抗体对胶原瘢痕及神经再生的修复作用

目的:通过神经吻合口局部应用外源性转化生长因子β1的特异性抗体,阻断其诱导局部炎症反应和细胞外基质沉积的作用,以期达到预防或减少神经瘢痕的产生,提高神经修复。方法:实验于2003-04/2005-04在山西医科大学外科实验室完成。选用SD大鼠48只,随机分为转化生长因子β1抗体组和生理盐水对照组,各24只。两组大鼠坐骨神经切断后行神经外膜小间隙缝合,转化生长因子β1抗体组采用微量加样器于神经吻合口间隙内注射质量浓度为50mg/L的Anti-外源性转化生长因子β1溶液0.1mL;生理盐水对照组注射等量生理盐水,逐层缝合伤口。分别于术后4,12周取材,按照Petersen分级标准对皮肤、肌肉、筋膜和神经组织与周围组织粘连的程度进行评估。结果:实验纳入大鼠48只,全部进入结果分析。瘢痕成分的评估:①两组术后大体观察:术后两组大鼠皮肤及肌肉、筋膜愈合良好,均未发生伤口迸开、迸裂、感染现象。转化生长因子β1抗体组术后12周神经吻合口与周围组织粘连明显减轻,优于生理盐水对照组。②两组术后12周神经组织切片Masson染色结果:转化生长因子β1抗体组神经吻合口远端神经轴索增生活跃,胶原纤维形成较少,以神经外膜为主;生理盐水对照组神经吻合口远端神经纤维生长排列紊乱,连续性差,被胶原纤维包裹,胶原沉积较多,神经外膜肥厚。③术后12周两组Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量灰度值测量结果比较:转化生长因子β1抗体组Ⅰ型胶原纤维含量明显低于生理盐水对照组[(41.112±11.065),(49.561±8.097),P<0.05],而Ⅲ型胶原纤维含量基本相似[(34.223±7.130),(32.284±5.497),P>0.05]。神经再生功能的评估:①术后12周两组坐骨神经功能指数比较:转化生长因子β1抗体组明显高于生理盐水对照组[(-19.090±22.493),(-28.660±22.649),P<0.05]。②两组术后12周电生理学检查结果:转化生长因子β1抗体组神经传导速度明显优于生理盐水对照组[(29.603±3.972),(16.215±4.619)m/s,P<0.05]。③两组术后周围神经纤维的镀银染色及周围神经髓鞘染色结果:转化生长因子β1抗体组髓鞘厚度和再生神经纤维的直径均优于生理盐水对照组[(1.36±0.23),(0.93±0.48);(9.40±0.86),(7.99±0.36)μm;P均<0.05]。结论:周围神经损伤后神经端或对端的吻合治疗中,局部应用外源性转化生长因子β1抗体,能够抑制或减少局部神经胶原瘢痕的产生,从而有效促进大鼠周围神经功能的恢复。     

肌筋膜管桥接修复面神经缺损的作用

目的：观察肌筋膜管替代神经材料对面神经缺损的修复作用，为进一步提高面神经功能提供理论依据。 方法：实验于2005-02／07在咸宁医学院神经组化研究室进行，选择日本大耳白兔24只，切去其双侧面神经上颊支0．5cm作为动物模型。肌筋膜管桥接组：以肌筋膜管桥接右侧面神经颊支的缺损：外膜直接缝合组：左侧面神经颊支被直接缝合，分别于术后5和8周进行大体观察，神经传导速度检测，组织学观察等，以比较两组（侧）面神经颊支的再生情况。 结果：实验白兔24只均纳入结果分析。①术后5和8周形态及组织学观察显示肌筋膜管桥接组瘢痕明显少于神经直接缝合的对照组。②术后5周时组织图像分析显示桥接段再生有髓轴突数目和再生（恢复）率，肌筋膜管桥接组明显优于神经直接缝合组[肌筋膜管桥接组：（1032&;#177;234）根／片和（23．72&;#177;7．26）％，外膜直接缝合组：（678&;#177;193）根／片和（15．70&;#177;5．23）％，t=2．52，P〈0．01]。③术后8周时电生理检测两组桥接段再生轴突的电传导速度显示肌筋膜管桥接组明显快于神经直接缝合组[肌筋膜管桥接组：（17．69&;#177;0．14）m／s；外膜直接缝合组：（14．82&;#177;0．12）m／s，t=2．390．P〈0．01]。 结论：在面神经损伤修复术中，肌筋膜管桥接治疗神经缺损的效果好于神经张力下直接缝合。     

电针对大鼠损伤坐骨神经再生的影响

目的：探讨电针对受损伤的周围神经功能恢复的影响。方法：Wistar大鼠60只切断左侧坐骨神经并缝合，随机分成电针组与模型组。电针组每天穴位电针20min。分别于术后2，4及8周动态观察髓纤维形态学变化、坐骨神经动作电位幅值的变化。模型组不作任何处理。结果：电针组坐骨神经动作电位幅值恢复率2，4及8周时分别为(11.98&;#177;4.12)％，(45．03&;#177;7.21)％，(82．41&;#177;15．97)％时优于模型组(9．46&;#177;4．17)％，(15．02&;#177;16.98)％，(33．97&;#177;7．46)％(P(0．05)；有髓神经纤维数、有髓神经纤维直径及截面积在术后各观察点电针组明显多于模型组(P&;lt;0．01)。结论：穴位电针对损伤神经的再生和功能恢复有促进作用。     

外用中药联合表皮细胞生长因子促进骨外露创面的愈合

目的:表皮细胞生长因子具有参与和促进创伤后组织修复的功能,但单独使用效果不理想,通过使用肤疾骨宁膏联合表皮细胞生长因子方法观察创面愈合情况及应用免疫组织化学技术检测表皮细胞生长因子/表皮细胞生长因子受体的表达,分析促进骨外露创面愈合的机制.方法实验于2004-03/09在武汉大学人民医院骨科实验室及武汉大学医学院病理实验室完成.将45只家兔随机分为3组:①肤疾骨宁膏+表皮细胞生长因子组.②肤疾骨宁膏组.③生理盐水组.实验观察60 d.结果:肤疾骨宁膏联合表皮细胞生长因子组创面愈合最快,生理盐水组创面愈合最慢(P＜0.01).创面在应用肤疾骨宁膏后,表皮细胞生长因子/表皮细胞生长因子受体表达量逐渐增高,肤疾骨宁膏+表皮细胞生长因子组和肤疾骨宁膏组表皮细胞生长因子表达量在15 d分别为0.585&;#177;0.028和0.583&;#177;0.024,达到高峰,表皮细胞生长因子受体表达量15,22 d分别0.434&;#177;0.026,0.427&;#177;0.022和0.583&;#177;0.024,0.425&;#177;0.026,为高峰期,较对照组明显增高,并且高峰提前(P＜0.01).结论:肤疾骨宁膏联合表皮细胞生长因子可有效促进骨外露创面的愈合.