二氢杨梅素对异丙肾上腺素诱导小鼠心肌纤维化的影响及机制研究

目的：初探二氢杨梅素（DMY）对异丙肾上腺素（ISO）诱导的小鼠心肌纤维化的作用及机制。方法：将C57BL/6小鼠随机分成正常对照组、模型组、DMY高、低剂量组、阳性对照药美托洛尔组。模型组小鼠背部皮下注射ISO,首次剂量为5 mg·kg-1·d-1,之后以2.5 mg·kg-1·d-1维持至30天,诱导心肌纤维化模型。给药组造模同时给与药物灌胃治疗。30天后,小鼠处死取心脏;检测血清中LDH、CK、TNF-α、IL-6含量;心室肌组织行Masson染色;检测心肌组织羟脯氨酸、丙二醛（MDA）含量、抗氧化物酶SOD和GSH-Px活性。检测心肌组织中TNF-α和IL-6 mRNA表达,Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、Nrf2、p65-NF-κB及TGF-β1信号通路蛋白表达。结果：与正常组相比,模型组小鼠血清LDH和CK含量、心重指数均显著增加,心肌出现明显纤维化,心肌组织中羟脯氨酸含量显著增加;Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-SMA蛋白表达显著增高。与模型组相比,DMY能减轻心肌损伤及纤维化程度。同时,DMY降低心肌组织中TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达,减少心肌中MDA含量,增强抗氧化物酶SOD和GSH-Px活性,增加Nrf2的入核。此外,DMY减少TNF-α、IL-6在血清中含量和在心肌中mRNA表达,减少p65-NF-κB入核。结论：本研究表明,二氢杨梅素能显著减轻ISO诱导的小鼠心肌纤维化,其机制可能与其干预TGF-β1信号通路、抗氧化及抗炎作用有关。     

依那普利抗异丙肾上腺素诱导的心肌纤维化作用及机制

目的观察依那普利(enalapril,Ena)抗异丙肾上腺素(Isoprenaline,Iso)诱导的心肌纤维化作用并探讨其作用机制。方法异丙肾上腺素皮下注射致心肌纤维化模型,经Ena低、中、高(2.5、5.0、10.0 mg.kg-1)3个剂量组和阳性对照药卡托普利(100.0 mg.kg-1)治疗后观察其对心肌组织胶原变化、心室重量(HW/BW)和心室重量指数(LVI)、羟脯氨酸含量及免疫组化和Western blot检测TGF-β1表达的影响。结果Ena不同剂量组均能够降低心肌组织胶原含量(P<0.05或P<0.01),降低HW/BW和LVI(P<0.05或P<0.01),降低羟脯氨酸含量(P<0.05或P<0.01),减少TGF-β1在心肌组织中的表达(P<0.05或P<0.01),减轻心肌纤维化。结论Ena通过抑制TGF-β1表达抗Iso诱导的心肌纤维化。     

心肌自噬在异丙肾上腺素诱导心肌肥厚中的作用

目的 探讨心肌自噬在异丙肾上腺素（ISO）诱导大鼠心肌肥厚中的作用。方法 将 29只大鼠随机分为 3组：皮下联合腹腔注射生理盐水（Con）组 9只、腹腔注射生理盐水联合皮下注射异丙肾上腺（ISO）组 10只、腹腔注射雷帕霉素（RAP）联合皮下注射 ISO（ISO+RAP）组 10 只。连续干预 14 d 后,将 Con 组和 ISO 组存活大鼠（Con,n=9;ISO,n=8）行心脏超声检查左室壁厚度及左室射血分数（LVEF）,再将各组大鼠腹腔注射过量的 10%水合氯醛处死,摘除心脏,计算心脏体质量指数（HWI）。心肌组织病理切片行 HE染色和 Masson染色,Western blot检测 p62表达和LC3Ⅱ/Ⅰ比值,透射电镜观察心肌组织自噬泡数量。结果 与 Con组比较,ISO组左室壁厚度和 LVEF明显增加（P＜0.01）。与 Con组比较,ISO组和 ISO+RAP组的 HWI增大（P＜0.01）,且 ISO+RAP组的 HWI小于 ISO组（P＜0.01）。与Con组比较,ISO组心肌病理切片显示心肌组织病理性肥厚改变明显;而与 ISO组比较,ISO+RAP组心肌组织病理性肥厚明显改善。与 Con 组比较,ISO 组心肌组织 LC3Ⅱ/Ⅰ比值下调,而 p62 表达上调,自噬泡数量明显减少（P＜0.05）;与 ISO组比较,ISO+RAP组心肌组织 LC3Ⅱ/Ⅰ比值上调,而 p62表达下调,自噬泡数量明显增多（P＜0.01）。结论 上调心肌自噬活性可以逆转 ISO诱导的病理性心肌肥厚。     

黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对异丙肾上腺素(isoprot-erenol,Iso)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法以原代培养乳鼠心肌细胞为模型,应用Iso 10μmol.L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度的黄芪多糖及L型钙通道阻滞剂维拉帕米(Verapamil,VER)对心肌肥厚的影响。用Lowry法测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;RT-PCR法检测心肌细胞ANP的mR-NA表达;以Fluo-3/AM为荧光探针,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内[Ca2+]i的变化。结果 APS和VER均能够有效抑制Iso诱导的心肌细胞肥大,表现为蛋白质含量降低,体积减小,ANP mRNA表达降低和细胞内钙离子浓度降低,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对Iso诱导乳大鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与降低[Ca2+]i有关。     

PNU282987对异丙肾上腺素所致小鼠心脏重塑的保护作用

目的通过建立异丙肾上腺素所致小鼠心脏重塑模型,观察PNU282987保护心脏的作用。方法连续7 d皮下注射异丙肾上腺素(ISO),诱导小鼠心脏重塑模型,同时腹腔给予PNU282987,检测小鼠心脏重量指数、血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性,观察心肌病理形态学的改变;检测心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,通过Western blot测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果与正常对照组相比,异丙肾上腺素组心脏重量指数增加,血清LDH和CK水平显著升高,心肌SOD活性下降,MDA含量增加,心肌组织中iNOS蛋白表达增加;与模型组比较,PNU282987可显著降低心脏重量指数、血清LDH和CK水平,增加心肌SOD活性,降低心肌MDA含量,下调iNOS表达。结论 PNU282987可能通过清除氧自由基,降低iNOS的表达,保护异丙肾上腺素导致的小鼠心脏重塑。     

叶黄素对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化的抑制作用

目的研究叶黄素对大鼠心肌纤维化的抑制作用及其机制。方法根据体重将Wistar大鼠随机分为5组,每组10只:正常组,模型组与低、中、高3个剂量实验组(叶黄素:20,40,80 mg·kg^-1·d^-1)。除正常组,其余各组均皮下注射异丙肾上腺素(Iso:5 mg·kg^-1·d^-1)7 d,构建大鼠心肌纤维化(MF)模型。造模后第2天,实验组开始灌胃不同剂量的叶黄素,正常组和模型组每日给予等剂量蒸馏水,每日1次,共28 d。用分析天平测量大鼠心重指数(HMI)和左心室质量指数(LVMI);以酶联免疫吸附法检测大鼠血清中Ⅰ型前胶原羧基末端肽(PICP)和Ⅲ型原胶原N端前肽(PⅢNP)含量,用酶标仪检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸磷酸激酶(CK)含量及一氧化氮(NO)的水平;以紫外分光法检测大鼠心肌组织中钙调神经磷酸酶(Ca N)活性和丙二醛(MDA)含量。结果模型组大鼠血清的HMI(mg·g^-1)和LVMI(mg·g^-1)分别为3.73±0.58,2.57±0.43;PICP(ng·m L^-1)和PⅢNP(ng·m L^-1)的含量分别是7.27±0.33,24.86±1.88;LDH(U·L^-1)和CK(U·L^-1)的含量分别为465.42±47.05,489.21±27.70;NO(μmol·L^-1)含量为2.06±0.34,MDA(nmol·mg^-1)含量为2.93±0.51,Ca N(U·mg^-1)活性为0.14±0.02,模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。低、中、高3个剂量实验组(以下所有单位与模型组相同)的HMI和LVMI分别是3.13±0.40,3.02±0.28,2.82±0.22;2.19±0.27,2.09±0.27,1.99±0.12;这3组的PICP和PⅢNP含量分别是6.44±0.69,6.23±0.29,6.14±0.75;22.17±2.10,21.88±1.93,21.76±1.09;这3组的LDH和CK的含量分别为442.13±33.72,390.19±41.31,344.89±50.25;442.89±37.40,369.30±28.46,346.57±28.56;这3组的NO水平分别是3.07±0.45,4.59±0.64,5.16±0.52;这3组的Ca N活性和MDA含量分别为0.07±0.01,0.06±0.00,0.04±0.01;2.48±0.27,2.44±0.17,2.25±0.11,3个剂量实验组(除了小剂量实验组的LDH与MDA以外)与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论叶黄素可通过提高NO水平、降低MDA含量和Ca N活性等抗氧化、阻止钙离子通道的作用,从而抑制胶原的合成,抑制大鼠MF,对心肌有一定的保护作用。     

异丙肾上腺素对大鼠心肌纤维化和相关细胞因子的影响

目的：探讨异丙肾上腺素（isoproterenol,Iso）对大鼠心肌纤维化和相关细胞因子的影响.方法：20只SD大鼠随机分成正常对照组（空白组）、异丙肾上腺素组（Iso组）,每组10只.Iso组经皮下注射Iso后,对两组行组织学观察,心功能、胶原容积分数（CVF）、胶原蛋白含量和血浆中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、一氧化氮（NO）浓度的测定.结果：与空白组相比,Iso组心肌细胞间有大量胶原增生,心功能有所降低,CVF、胶原蛋白含量和AngII 含量增加,NO含量降低,最大上升速率（＋dp/dtmax）和心室收缩压（LVSP）未见明显改变.结论：Iso能促进大鼠心肌纤维化和相关细胞因子浓度的变化.     

洛泰对异丙肾上腺素诱导大鼠急性心肌缺血的保护作用

目的观察三七总皂甙的新剂型———洛泰 (血塞通粉针剂 ,主要成分为三七总皂甙 )对大鼠急性心肌缺血的保护作用。方法采用微量异丙肾上腺素 (ISO)恒速静注造成大鼠急性心肌缺血的模型 ,动态观测Ⅱ导联心电图S_T段的变化 ,以ST段降低及∑ST为指标反映缺血程度。结果静脉注射洛泰50,100mg·kg-1,对ISO诱导大鼠急性心肌缺血有一定程度的保护作用,呈剂量依赖性 ,其中以100mg·kg-1组对心电图的改善作用较明显。灌胃给予洛泰对ISO诱导大鼠实验性急性心肌缺血也有一定程度的减轻作用 ,但没有统计学差异。结论采用改进的大鼠急性心肌缺血模型具有稳定性和重复性好、快捷有效、易掌握、耗费药品少等优点 ,适宜于初筛药物。同时实验结果提示静脉和灌胃两种途径给予洛泰对大鼠急性心肌缺血均具有一定程度的保护作用。     

氧化苦参碱对异丙肾上腺素致心肌肥厚大鼠心脏重构的保护作用研究

目的:研究氧化苦参碱对异丙肾上腺素致心肌肥厚大鼠心脏重构的保护作用,并探讨其作用机制。方法:给予Spraguedawley大鼠连续7 d皮下注射异丙肾上腺素5 mg/(kg·d),以建立大鼠心肌肥厚模型,观察氧化苦参碱对模型大鼠体质量,心肌肥厚指数,心肌组织形态学改变,超氧化物歧化酶、丙二醛及血清一氧化氮含量,一氧化氮合酶活性的影响。结果:氧化苦参碱可明显降低模型大鼠心肌肥厚指数、心肌细胞直径与横截面积、心肌间质胶原纤维含量;增强了血清及心肌组织中超氧化物歧化酶的活力,并相应地降低了脂质过氧化物丙二醛的含量;增强了血清中总一氧化氮合酶的活性,增加了血清一氧化氮的含量,但降低了诱导型一氧化氮合酶的活性。结论:氧化苦参碱对异丙肾上腺素致心肌肥厚大鼠有明显的心脏重构保护作用,其作用机制可能与提高机体抗氧化酶活性和调节血清一氧化氮含量/一氧化氮合酶活性有关。     

二苯乙烯苷抑制异丙肾上腺素诱导小鼠心肌纤维化及其机制研究

目的观察二苯乙烯苷(2,3,4',5-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D glucoside,TSG)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的小鼠心肌纤维化的作用及其相关机制。方法采用连续皮下注射异丙肾上腺素14 d诱导小鼠心肌纤维化模型,同时以TSG(120、60、30 mg·kg-1)和阳性对照卡托普利(40 mg·kg-1)灌胃给药。末次给药12 h后,取心室肌进行苏木精伊红(hematoxylineosin,HE)染色和Masson染色,观察纤维化的程度;测定心肌羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量;检测心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原,转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的蛋白表达水平;测定心肌组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase-Px,GSH-Px)活性。结果与正常对照组相比,模型组心肌出现明显纤维化,心肌组织HYP水平明显增高,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达明显增加。与模型组相比,TSG能减轻心肌纤维化程度,降低心肌组织HYP水平及心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达。同时,TSG降低心肌组织中TGF-β1的蛋白表达,且能升高损伤心肌组织中SOD和GSH-Px的活性。结论 TSG可抑制ISO诱导的小鼠心肌纤维化,其机制可能与调节TGF-β1蛋白表达及其抗氧化有关。     

Telmisartan attenuates isoproterenol-induced cardiac remodeling in rats via regulation of cardiac adiponectin expression

Aim:

To investigate whether telmisartan (Telm) pretreatment attenuates isoproterenol (Iso)-induced postinfarction remodeling (PIR) in rats, and whether the effect of Telm is associated with cardiac expression of adiponectin.

Methods:

PIR was induced in male Wistar rats with two consecutive injections of Iso (80 mg/kg, sc) at an interval of 24 h. Primary culture of ventricular myocytes from neonatal rats was prepared. Iso-induced cardiomyocyte injury was assessed based on cell growth and lactate dehydrogenase (LDH) activity. Cardiac adiponectin expression was measured using qRT-PCR and immunoblot analysis.

Results:

In the rats with PIR, Telm (10 mg·kg⁻¹·d⁻¹, po for 65 d) suppressed Iso-induced increases in gravimetric parameters, cardiomyocyte diameter and collagen volume fraction, but had no effect on Iso-induced myocardial hypertrophy and interstitial fibrosis. The protective effect of Telm was associated with enhanced protein expression of cardiac adiponectin. In cultured cardiomyocytes, Telm (5–20 μmol/L) inhibited the cell death and LDH release induced by Iso (10 μmol/L), and reversed Iso-induced reduction in adiponectin protein expression. In cardiomyocytes exposed to Iso (20 μmol/L), GW9662 (30 μmol/L), a selective antagonist of PPAR-γ, blocked the effects of Telm pretreatment on adiponectin protein expression, as well as the protective effects of Telm on Iso-induced cell injury.

Conclusion:

Telm attenuates Iso-induced cardiac remodeling and cell injury, which is associated with induction of cardiac adiponectin expression.     

低聚葡萄籽原花青素对异丙肾上腺素诱导大鼠心室重构的影响

研究低聚葡萄籽原花青素(oligomeric grape seed proanthoc yanidins,GSP)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)致大鼠心室重构的保护作用并初步探讨其机制。采用皮下注射ISO致大鼠心室重构模型,以GSP(50,100及150mg·kg-1)灌胃给药,PowerLab监测大鼠心功能,计算大鼠全心重量指数(HW/BW)和左心重量指数(LVW/BW),观察心肌病理学改变,测定左心室心肌组织中羟脯氨酸(Hyp)含量、血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果表明,与空白对照组相比,ISO组大鼠心功能明显受损,心脏重量指数HW/BW和LVW/BW、心肌细胞横截面积(CSA)、心肌间质胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)、心肌组织Hyp含量明显升高,血清SOD活性下降,MDA含量升高。与ISO组相比,GSP能明显改善心功能,降低心脏HW/BW和LVW/BW、CSA、CVF、PVCA和左心室心肌组织中Hyp含量,增加血清SOD活性,降低血清MDA含量。GSP对ISO诱导的大鼠心室重构具有明显的逆转作用,其机制可能与抗氧化应激,提高机...     

海藻多糖对博来霉素诱导的大鼠肺间质纤维化模型的干预作用研究

目的观察海藻多糖对博来霉素(BLM)诱导的大鼠肺间质纤维化的影响。方法气管注射博来霉素制作大鼠肺纤维化模型,通过海藻多糖不同浓度(50、100mg.mL-1)灌胃给药,在造模的第0、7、14、28天测肺羟脯氨酸(HYP)含量。结果博来霉素造模第7、28天时,海藻多糖两个剂量组大鼠肺羟脯氨酸含量与模型组比较均有明显降低(P<0.05),第14天时与模型组比较,高剂量组有明显降低(P<0.05)。结论海藻多糖对博来霉素诱导的大鼠肺间质纤维化有抑制作用。     

Ghrelin protects myocardium from isoproterenol-induced injury in rats

AIM: To investigate the cardiac protective effects of ghrelin in rat with myocardial injury induced by isoproterenol (ISO). METHODS: Rats were subcutaneously injected ISO 40 mg·kg-1·d-1 with or without ghrelin 1 or 10 nmol·kg-1·d-1 for 2 d. Hemodynamic parameters including mean arterial blood pressure and left ventricular pressure were measured at 12 h after the last injection     

螺内酯对冠心病患者心肌纤维化及心功能的影响

目的探讨螺内酯对冠心病患者的心肌纤维化及心功能的影响.方法将61例冠心病心功能Ⅰ～Ⅳ级患者随机分为2组,对照组常规治疗即予扩冠、降压、逆转心肌重构及强心、利尿等处理,如有心功能Ⅲ～Ⅳ级需用利尿剂者可用双克 氨苯喋啶,治疗组在常规治疗基础上加用安体舒通20 mg,1次·d-1,服用3个月,同时在用药前与3个月时测血Ⅰ型前胶原末端肽(PⅠP)、Ⅲ型前胶原末端肽(PⅢP)及心脏超声测量了左室射血分数(LVEF),并在2周、3个月时测肝肾功能及血电解质.结果治疗组血(PⅠP)、(PⅢP)较对照组明显降低,P＜0.001.治疗组LVEF较对照组改善,P＜0.05.且肝、肾功能和血电解质无明显影响.结论螺内酯能改善冠心病患者的心肌纤维化及心功能.     

Salvianolic acid B inhibits autophagy and protects starving cardiac myocytes

Aim:

To investigate the protective or lethal role of autophagy and the effects of Salvianolic acid B (Sal B) on autophagy in starving myocytes.

Methods:

Cardiac myocytes were incubated under starvation conditions (GD) for 0, 1, 2, 3, and 6 h. Autophagic flux in starving cells was measured via chloroquine (3 μmol/L). After myocytes were treated with Sal B (50 μmol/L) in the presence or absence of chloroquine (3 μmol/L) under GD 3 h, the amount of LC3-II, the abundance of LC3-positive fluorescent dots in cells, cell viability and cellular ATP levels were determined using immunoblotting, immunofluorescence microscopy, MTT assay and luminometer, respectively. Moreover, electron microscopy (EM) and immunofluorescent duel labeling of LC3 and Caspase-8 were used to examine the characteristics of autophagy and apoptosis.

Results:

Immunoblot analysis showed that the amount of LC3-II in starving cells increased in a time-dependent manner accompanied by increased LC3-positive fluorescence and decreased cell viability and ATP content. Sal B (50 μmol/L) inhibited the increase in LC3-II, reduced the abundance of LC3 immunofluorescence and intensity of Caspase-8 fluorescence, and enhanced cellular viability and ATP levels in myocytes under GD 3 h, regardless of whether chloroquine was present.

Conclusion:

Autophagy induced by starvation for 3 h led to cell injury. Sal B protected starving cells by blocking the early stage of autophagic flux and inhibiting apoptosis that occurred during autophagy.     

大蒜多糖对阿霉素所致心肌细胞损伤的保护作用

目的观察大蒜多糖(GP)对阿霉素(ADR)中毒心肌细胞的保护作用并探讨其机制。方法采用0~2 d SD乳鼠心肌细胞做原代培养,复制ADR损伤心肌细胞模型,测定上清液及细胞中多项生化指标,并运用MTT比色法、流式细胞仪检测凋亡细胞。结果ADR(终浓度为1 mg.L-1)可致上清液肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(GOT)释放量增加(P<0.01),同时细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力下降而丙二醛(MDA)含量升高(P<0.01),GP(25~100 mg.L-1)可呈浓度依赖性地降低CK、LDH、GOT活力,增加细胞SOD活力和降低MDA含量,尤其以GP大剂量组作用明显(P<0.05或P<0.01)。流式细胞仪检测GP能降低心肌细胞凋亡率,证实了GP的保护作用。结论GP能够拮抗ADR引起的自由基脂质过氧化,从而保护心肌细胞。     

Exogenous pancreatic kininogenase protects against renal fibrosis in rat model of unilateral ureteral obstruction

Tissue kallikrein has protective function against various types of injury. In this study, we investigated whether exogenous pancreatic kininogenase (PK) conferred renoprotection in a rat model of unilateral ureteral obstruction (UUO) and H₂O₂-treated HK-2 cells in vitro. SD rats were subjected to UUO surgery, then PK (7.2 U/g per day, ip) was administered for 7 or 14 days. After the treatment, rats were euthanized; the obstructed kidneys were harvested for further examination. We found that PK administration significantly attenuated interstitial inflammation and fibrosis, and downregulated the expression of proinflammatory (MCP-1, TLR-2, and OPN) and profibrotic (TGF-β1 and CTGF) cytokines in obstructed kidney. UUO-induced oxidative stress, closely associated with excessive apoptotic cell death and autophagy via PI3K/AKT/FoxO1a signaling, which were abolished by PK administration. We further showed that PK administration increased the expression of bradykinin receptors 1 and 2 (B1R and B2R) mRNA and the production of NO and cAMP in kidney tissues. Coadministration with either B1R antagonist (des-Arg9-[Leu8]-bradykinin) or B2R antagonist (icatibant) abrogated the renoprotective effects of PK, and reduced the levels of NO and cAMP in obstructed kidney. In H₂O₂-treated HK-2 cells, addition of PK (6 pg/mL) significantly decreased ROS production, regulated the expression of oxidant and antioxidant enzymes, suppressed the expression of TGF-β1 and MCP-1, and inhibited cell apoptosis. Our data demonstrate that PK treatment protects against the progression of renal fibrosis in obstructed kidneys.