地高辛特异性单克隆抗体制备的研究(摘要)

研究了应用淋巴细胞杂交瘤技术制备地高辛特异性单克隆抗体(MAb),并对抗体特性进行了分析,以探讨该抗体用于监测地高辛血药浓度及治疗严重中毒的可能性。作者用过碘酸钠法将地高辛分别偶联于牛血清白蛋白(Dig—BSA)和卵白蛋白(Dig—OVA);用Dig—OVA加Freund完全佐剂腹腔注射,免疫8周龄雌性BALB/c小鼠获取牌细胞与SP2/O骨髓细胞。以ELISA间接法筛选地高辛特异性抗体分泌阳性的杂交瘤克隆,并用有限稀释法进行克隆化。所获杂交瘤细胞系经扩大培养、液氮冻存、注入BALB/c小鼠腹腔制备MAb腹水,并测定MAb的特异性、MAb与地高辛、洋地黄毒甙、毛花强心丙、毒毛旋花子甙K和     

破伤风毒素单克隆抗体的制备及鉴定

目的 一株抗破伤风毒素鼠源单克隆抗体的制备与鉴定.方法 从实验室前期以破伤风类毒素为抗原筛选得到的6株稳定细胞株中选取4E12进行制备及鉴定,首先将4E12细胞株扩大培养后腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水,经Protein G柱和PD10脱盐柱两步纯化鼠源单抗;其次通过SDS-PAGE电泳检测抗体纯度并通过分型试剂盒鉴定抗体轻重链亚型,免疫印迹法鉴定抗体结合区域及表位类型,非竞争ELISA法测定抗体亲和力常数以及小鼠中和实验评价抗体中和活性.结果 获得能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株4E12,其细胞培养上清效价为4×103,抗体轻重链分别为κ型和IgG1型,CDR3序列分别为SQSTHVPPT和ARKGTGTGFNY;4E12腹水抗体效价为3.2×104,抗体经纯化后纯度＞95％,以线性表位与TeNT/Hc结构域特异性结合,两者的亲和力常数为3.6×10-10 mol/L,小鼠中和实验结果显示,4E12抗体可部分中和破伤风毒素.结论 筛选到一株高亲和力的鼠源单抗,为破伤风毒素检测及中和抗体研发奠定了基础.     

盐酸克仑特罗单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗盐酸克仑特罗(clenbuterol ,CL)的单克隆抗体并进行免疫学特性鉴定.方法:用重氮化法将盐酸克仑特罗偶联于载体牛血清白蛋白(BSA),形成的结合抗原BSA-CL作为免疫原免疫BALB/c小鼠,同时将CL与卵清白蛋白(OVA)偶联制备检测原(OVA-CL).应用杂交瘤技术建立分泌抗盐酸克仑特罗单克隆抗体的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水并进行纯化.用竞争性ELISA法测定抗体的亲和常数及交叉反应性.结果及结论:获得了18株稳定分泌抗盐酸克仑特罗单克隆抗体的杂交瘤细胞株,挑选其中E9-C11、C11-E3、E7-G8三株高亲和力的细胞株进行免疫学特性鉴定.三株抗体的亚类均为IgG1.细胞上清的间接ELISA效价分别为1:1 280、1:1 000、1:800,三株腹水效价都约为1×10-6.亲和常数分别为2.4×10-8mol/L、2.83×10 -8 mol/L 、3.28×10-8 mol/L .E9-C11单抗对CL的IC50为6.1035μg/L;对沙丁胺醇的IC50大于781.25 μg/L,交叉反应性小于0.78%;对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素、莱克多巴胺及部分维生素和抗生素均无交叉反应性.蛋白免疫印迹分析证明三株单抗特异性均很高,可用于与其相关的免疫检测或应用研究.     

抗牛心肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

血清肌酸激酶(CK)及其同工酶在诊断急性心肌梗塞及骨胳肌损伤有重要的临床价值。近年来国内外已广泛应用,其方法有离子交换柱层析法,电泳法和定量的动力学法(DTT对CK-MB选择活性作用)以及免疫学方法等。前三种方法均较繁琐且有的特异性差。免疫学方法较为省时省力,尤其特异性、敏感性均较高,但目前使用的均为多克隆抗体。为进一步提高CK检测中特异性和敏感性,且由于人心CK-MM抗原来源较困难,我们制备了抗牛心CK-MM单克隆抗体。     

抗Erbin特异性单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗Erbin单克隆抗体.方法:应用基因工程技术构建含Erbin PDZ序列的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)以获得重组蛋白的表达;采用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白;通过质谱鉴定重组蛋白;利用纯化的重组蛋白免疫小鼠,通过细胞融合技术制备单克隆抗体.结果:构建了原核表达载体pET-28a(+)-Erbin PDZ,获得了重组蛋白在工程菌中的高效表达.通过对以包涵体形式存在的重组蛋白进行洗涤、溶解、复性和纯化,获得了纯度在90%以上的重组蛋白.经质谱鉴定确证表达的重组蛋白为Erbin PDZ.用重组蛋白免疫小鼠后,经细胞融合、筛选及鉴定,获得了高效价的单克隆抗体.讨论:该抗体可识别天然状态下的Erbin蛋白,可用于ELISA、免疫荧光和免疫沉淀实验.抗Erbin单克隆抗体的制备为研究Erbin的功能奠定了基础.     

心功能不全时血浆心钠素浓度的变化(摘要)

作者利用心钠素放射免疫测定方法,测定比较了正常人26名和心功能不全患者16例血浆心钠素含量的变化,并对它在心功能不全发病中的意义进行了初步讨论。发现:(1)心功能不全患者血浆心钠素含量明显低于正常人,而且心功能Ⅳ级比Ⅲ级者更低,两组有极显著差异(P<0.001);(2)心功能不全患者血、     

分泌抗心脏肌凝蛋白及其轻链单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定(摘要)

心脏肌凝蛋白(Cardiac myosin,简称CM)及其轻链(CM-LC)是心肌特有的收缩蛋白质,其化学结构及免疫学性质均与其它组织来源不同。当急性心肌梗塞造成心肌细胞缺血坏死时,血清CM-LC水平升高,故可用于临床诊断。若将放射性核素标记的特异性抗CM抗体进行活体急性心肌梗塞显象,可检验梗塞灶位置及大小。第四军医大学微生物学教研室和附属二院内二科协作,应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了分泌CM及GM-LC单克隆抗体(McAb)的小鼠杂交瘤细胞系,并对4个McAb作了鉴定,小鼠免疫腹水效     

抗PEA受体结合区单克隆抗体的制备及鉴定

目的探讨绿脓杆菌外毒素A(PEA)中和性单克隆抗体在预防和治疗绿脓杆菌感染中的免疫保护作用.方法以重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法筛选细胞培养上清,采用有限稀释法对阳性孔进行克隆,3次克隆后获得4株能稳定分泌抗PEA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1C4,1D4,2E12和3C6.结果细胞培养上清ELISA效价为4000～8000,腹水ELISA效价可达25600～51200,其中3C6抗体在细胞上的中和试验显示具有较高的中和效价,其亲和常数为8.93×108.结论获得的单克隆抗体可在抗烧伤绿脓杆菌感染中发挥重要作用.     

白念珠菌烯醇化酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备并鉴定抗白念珠菌烯醇化酶单克隆抗体杂交瘤细胞株。方法：提取白念珠菌标准株ATCC-9002胞内烯醇化酶做抗原,再用细胞融合技术制备单克隆抗体,采用间接ELISA法对单克隆抗体进行筛选和鉴定。结果：建立了1株持续分泌抗白念珠菌烯醇化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中Mab07．4G6-F3-C7小鼠腹水单克隆抗体的最高稀释度达1：12800,单克隆抗体的重链属IgG1亚类,轻链属K型;Western blot证实单抗能与自念珠菌烯醇化酶抗原特异性地结合。结论：本研究建立了抗白念珠菌烯醇化酶杂交瘤细胞株单克隆抗体,为快速诊断白念珠菌感染奠定了实验基础。     

森林脑炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

用森林脑炎病毒森张株免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞在融合剂PEG-1000的作用下进行融合,用间接免疫荧光法筛选,获得了6株分泌抗森林脑炎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株.通过免疫荧光交叉鉴定,6份单克隆抗体均与黄病毒属的登革4型病毒、流行性乙型脑炎病毒无属间交叉.与森林脑炎病毒COφ株、国内的森候株、森董株有交叉反应,属森林脑炎病毒种特异.6份单克隆抗体均无血凝抑制活性和补体结合活性.3株杂交瘤细胞培养上清浓缩物经抗鼠Ig免疫血清双扩鉴定为IgM.染色体数的检查为89～110条.6株杂交瘤细胞连续传代3～6个月,冻存复苏后仍能稳定地分泌特异的单克隆抗体.     

HLA-B27抗血清的制备及临床应用(摘要)

本文报道了在国内首次使用从中国人种得到的HLA-B27抗血清测定B27抗原,对腰腿痛病因及强直性脊椎炎(AS)早期诊断或排除等方面具实用价值。本组AS患者54例中,B27阳性51例(94.4％);而     

35例急性脑卒中患者血浆心钠素含量变化的观察(摘要)

作者测定了35例急性脑卒中患者的血浆心钠素样物质(ANP)含量的变化,并观察其与EKG,意识状态以及预后的关系,对部分患者进行了发病后连续2周的动态观察,35例中除1例有典型的蛛网膜下腔出血症候及腰穿CSF血性,未作CT外,余均经CT证实。选择同期神经内科住院非脑卒中患者24例作对照组,年龄相仿,无心、肺、肾、肝等疾病,无高血压病。两组均为清晨、空腹、卧位采血,取血后10min内,低温离心,分离血浆。经检测发现,急性脑卒中患者     

单克隆抗体初步用在淋巴细胞白血病的免疫分型(摘要)

用本试验室制备的5个抗人白细胞分化抗原的单克隆抗体,并结合使用E-玫瑰花试验及细胞表面Ig测定,将26例急性淋巴细胞白血病分为普通型、T细胞     

抗人肺炎支原体单克隆抗体的制备与鉴定

肺炎支原体是侵犯人呼吸道的重要病原体,其感染广泛存在于世界各地。能引起咽炎、支气管炎,尤以婴幼儿肺炎较常见,有时也可引起其他系统的并发症,如脑膜脑炎、心肌炎、心包炎、肾炎和免疫性溶血性贫血等。目前病原学诊断主要用分离培养和常规血清学试验、这些方法费时、敏感性也不高。研制抗人肺炎支原体单克隆抗体,将有助于对支原体感染进行早期快速诊断,对临床合理用药有重要意义。     

抗PSMA7单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的制备抗蛋白酶体α7亚基(PSMA7)的单克隆抗体,为PSMA7的功能研究奠定基础。方法以纯化的重组蛋白PSMA7为抗原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备PSMA7单克隆抗体,并用间接ELISA法和Western blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定。结果成功建立两株稳定分泌抗PSMA7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为B013和B001。检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1∶128和1∶256,腹水效价为1∶25600和1∶32000。两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。Westernblot及免疫组化实验证实,两株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性PSMA7蛋白。结论成功建立了两株效价高、特异性好的抗PSMA7单克隆抗体杂交瘤细胞,制备的单克隆抗体可用于PSMA7蛋白的鉴定,为其生物学功能研究奠定了基础。     

抗鸡蛋黄IgY单克隆抗体的制备和初步鉴定

以纯化的鸡蛋黄IgG(IgY)为免疫原,免疫BACB/c小鼠.取其脾细胞与小鼠Sp/o骨髓瘤细胞融合,经间接EIISA筛选,3次克隆化后,获得2株能稳定分泌抗IgY单克隆抗体的杂交瘤细胞IGII和3A6.用琼脂双扩散法鉴定,两者均为IgG_1亚类.特异性鉴定表明,IGII和3A6两株单克隆抗体均与鸡血清IgG及鸡蛋黄IgG起强反应,而不与鸭蛋黄、鹌鹑蛋黄、小鼠血清、大鼠血清、兔血清、羊血清、马血清,以及人血清的IgG起反应.IGII与3A6的腹水效价分别为3.1×10~(-6)和6.4×10~(-6).     

抗人红细胞膜血型糖蛋白A单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗人红细胞膜血型糖蛋白Ａ（ＧＰＡ）的特异单克隆抗体,对研究ＧＰＡ基因突变和ＧＰＡ蛋白糖基化变异有重要意义。方法;分别用ＯＭ和纯化Ｍ－ＧＰＡ蛋白以及ＯＮ红细胞和纯化Ｎ－ＧＰＡ蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓细胞Ｓｐ２／０融合,经正常和酶处理人细胞凝集筛选,间接免疫荧光,酶联免疫分析及蛋白质印迹鉴定。制备了鼠抗人ＧＰＡ的单克隆抗体。结果;获得抗ＧＰＡ蛋白１～３９位肽投入及相关糖链     

抗人白细胞单克隆抗体(1C34-5)产生及鉴定

用人外周血单个核细胞免疫小鼠,经细胞融合后,获得分泌IgG_1单克隆抗体(1C34-5)杂交细胞瘤株。用免疫荧光法观察,此抗体与90％左右T、B淋巴细胞、单核细胞、多核细胞、骨髓细胞、以及5种不同白细胞系细胞反应,但不与红细胞、血小板及红系、上皮及纤维母细胞系细胞反应。用免疫酶法检查此抗体与人多种正常组织反应性时,也发现它仅限于与白细胞反应,因此1C34-5是一种识别人白细胞表面抗原的单克隆抗体。