严重烫伤小鼠肠黏膜相关淋巴细胞变化与肠道细菌移位

目的探讨小鼠烫伤后肠黏膜相关淋巴细胞变化与肠道细菌移位的关系。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组及烫伤后12、24、72 h组,每组10只。正常对照组不致伤, 其余各组小鼠背部造成20％TBSAⅢ度烫伤后,按时相点处死并留取标本。计数全段小肠集合淋巴结 (PP结)个数及淋巴细胞总数。应用流式细胞仪检测小鼠PP结CD3+、CD4+、CD19+淋巴细胞比例和绝对数,并检测主要脏器肠道细菌移位率。结果烫伤后12、24、72 h组PP结淋巴细胞总数分别为 (4．05±0．28)×106、(2．64±0．39)×106、(2．83±0．46)×106个,均少于正常对照组的(4．54±0．58)× 106个(P<0．05或0．01)。与正常对照组比较,烫伤后72 h组PP结淋巴细胞悬液中CD3+、CD4+百分比明显降低(P<0．05)。伤后各组小鼠CD3+、CD4+、CD19+淋巴细胞绝对数明显减少。各烫伤组肠道细菌移位率分别为16％、52％、30％,均高于正常对照组(4％),其中烫伤后24、72 h组与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0．05)。结论烫伤后肠黏膜相关淋巴细胞减少是肠源性感染的重要因素。     

严重烧伤大鼠肾脏细胞凋亡及其机制的研究

目的探讨严重烧伤大鼠肾脏细胞凋亡的分子机制。方法将50只雄性Wistar大鼠随机分为烧伤组和对照组,每组25只。烧伤组造成30％TBSAⅢ度烫伤(以下称烧伤),伤后创面涂碘伏抗感染,并于伤后6 h抽取大鼠静脉血后处死,留取肾脏标本。对照组除不烫伤外,其余处理同烧伤组。采用原位缺口末端标记法检测两组大鼠肾脏细胞凋亡率。流式细胞术检测肾脏细胞中肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)各受体的mRNA及蛋白表达水平。同时检测大鼠血浆尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量。结果烧伤组大鼠肾脏细胞的凋亡率为(32．4±1．1)％,明显高于对照组[(1．0±0．6)％,P<0．05];而大鼠肾脏组织中TRAIL诱骗受体DcR1的mRNA及蛋白表达水平显著低于正常对照组(P<0．05)。伤后6 h,烧伤组大鼠BUN值[(13．3±2．0)nmol/L]及Cr值 [(76．4±2．0)μmol/L]均明显高于对照组[(5．2±0．7)mmol/L、(40．2±2．8)μmol/L,P<0．05]。结论 TRAIL凋亡通路可能参与介导了严重烧伤大鼠肾脏细胞的凋亡。     

氧自由基对烫伤大鼠延迟复苏后肠上皮细胞凋亡的影响

目的:观察烫伤延迟复苏后肠粘膜上皮细胞凋亡的发生规律及与氧自由基损伤的关系.方法:150只雄性Wistar大鼠随机分为A组(烫伤立即复苏组,n=60)、B组(烫伤延迟复苏组,n=50)、C组(N-乙酰半胱氨酸(NAC)治疗组,n=20)和D组(别嘌呤醇治疗组,n=20).30%TBSA三度烫伤大鼠伤后6小时进行复苏;采用DNA断裂百分率(ap%)、琼脂糖凝胶电泳和DNA片段原位末端标记(TUNEL)法观察伤后肠粘膜上皮细胞凋亡发生规律;并测定了A组、B组伤后3、6、12、24、48小时和C组、D组伤后12、24小时肠粘膜丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XO)、总巯基(TSH)和非蛋白巯基(NPSH)的变化.结果:A组和B组伤后肠上皮均发生严重的细胞凋亡,高峰期在伤后12和24小时,但B组凋亡发生早且更严重;烫伤后肠粘膜MDA、XO均呈上升之势,而TSH和NPSH则呈逐渐下降之势.C组伤后肠粘膜ap%、MDA显著低于B组,而NPSH含量则显著高于B组.D组肠粘膜XO水平显著下降,但其ap%无显著变化.B组肠粘膜ap%与MDA和XO变化成显著正相关(P＜0.05或0.01);而与NPSH的变化则成显著的负相关(P＜0.05).结论:延迟复苏可使烫伤后肠上皮细胞凋亡率显著上升;肠粘膜上皮细胞凋亡发生与其氧化应激关系密切;抗氧化剂NAC可有效降低肠上皮细胞凋亡,提供一定的保护作用.     

烫伤大鼠肠屏障功能损伤与肠粘膜细胞凋亡的关系

本研究采用大鼠30%烫伤模型,于伤后3、6、12、48h取血和回肠组织检测内毒素浓度,血和肠粘膜二胺氧化酶(DAO)活性,肠粘膜丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平、肠粘膜DNA片段百分率(ap%)、DNA电泳以及凋亡细胞数.观察烫伤大鼠肠粘膜细胞凋亡的规律与肠粘膜屏障功能变化的关系,探讨细胞凋亡在肠屏障损伤中的作用.实验结果显示,血浆DAO活性于伤后6h开始升高,伤后12h和24h为伤前值的2.5倍和3倍;肠粘膜DAO活性则呈反向变化,表现为活性降低,并与肠粘膜ap%呈高度负相关(P＜0.01);伤后3h血浆内毒素、肠粘膜MDA含量、NO活性及肠粘膜ap%均开始升高,其峰值在伤后12h;相关分析表明,各项指标与ap%均呈高度正相关(P＜0.01);肠粘膜DNA电泳和病理学结果显示,伤后12hDNA电泳出现明确的DNA梯度,肠粘膜顶端和肠腺中可见凋亡细胞.研究结果提示,大鼠烫伤后肠屏障功能损伤,肠源性内毒素血症的形成与肠粘膜上皮细胞的病理性凋亡密切相关,而烫伤后氧化应激可能是加速肠粘膜上皮调亡的重要原因.     

抗内毒素单抗下调脓毒症小鼠肠上皮细胞白细胞介素-1转换酶基因表达及逆转肠上皮细胞凋亡的作用

目的观察抗内毒素单抗对脓毒症小鼠肠上皮细胞内诱导细胞凋亡的白细胞介素-1-转换酶(ICE)基因及细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、细胞介素(IL)-1β、IL-6基因表达的影响,判断其对防治脓毒症小鼠肠上皮细胞异常凋亡的功效。方法用盲肠结扎穿孔(CLP)造成小鼠脓毒症,动物分3组:实验组、对照组(假手术组)和治疗组。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法定量检测ICE基因及细胞因子基因表达,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测肠上皮细胞凋亡。结果抗内毒素单抗明显下调细胞因子TNF-αa、IL-1β、IL-6基因的表达并抑制了ICE基因表达,减少了肠上皮细胞凋亡数量,改善了动物的存活率。数据为ICE基因(0.37±0.08)、TNF-α(0.34±0.05)、IL-1β(0.49±0.17)、IL-6(0.43±0.14),与实验组相比差异有显著性(P<0.05)。结论抗内毒素单抗对脓毒症小鼠肠上皮细胞凋亡相关基因(ICE)及细胞因子基因表达具有明确的抑制作用,对脓毒症小鼠肠上皮完整性(机械屏障)有保护作用。     

γ-干扰素加强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抑制胆管癌细胞的作用

目的　探讨肿瘤坏死因子 (TNF)相关凋亡诱导配体 (TRAIL)对人胆管癌的作用及γ 干扰素 (IFN γ)对TRAIL抗瘤活性的影响。方法　应用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪 (FCM ) ,研究TRAIL对人胆管癌细胞的抑制作用及IFN γ对TRAIL抗瘤活性的影响。结果　透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳可见到典型细胞凋亡特征。FCM分析显示 :浓度为 0、1、10、10 0、10 0 0 μg/L的TRAIL 2 4h引起QBC93 9细胞的凋亡率分别为 (1.66± 0 .73 ) %、(8.83± 0 .5 4) %、(2 2 .3 0± 0 .64 ) %、(4 2 .5 0± 0 .47) %、(4 9.0 6± 0 .72 ) % ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。IFN γ与TRAIL 10 0 μg/L联合应用 ,当IFN γ浓度大于 5 0U /ml或 10 0U /ml时 ,IFN γ作用时间超过 2 4h分别与单用TRAIL组比较 ,明显加强QBC93 9细胞凋亡 (P <0 .0 1)。结论　TRAIL通过诱导胆管癌细胞凋亡而起到抑癌作用 ,IFN γ能加强TRAIL诱导胆管癌细胞的凋亡。     

生长激素对急性坏死性胰腺炎大鼠肠粘膜上皮细胞凋亡的影响

目的观察生长激素 (GH)对急性坏死性胰腺炎 (ANP)大鼠早期肠粘膜上皮细胞凋亡的调节作用。方法ANP模型大鼠分ANP组和ANP加GH治疗组 ,假手术组 (SO组 )作为对照。分别用DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪分析和dUTP缺口末端标记法研究肠粘膜细胞凋亡 ,免疫组织化学方法检测肠粘膜凋亡相关蛋白FasL及Bax表达。结果ANP大鼠各时点肠粘膜DNA电泳均可见典型的凋亡“梯形”条带 ,而GH治疗组仅于 3h出现“梯形”条带。术后 3h、6h、12h、2 4h肠粘膜脱落细胞凋亡比例分别为 :SO组为 (5 4± 4) %、(2 8± 6 ) %、(39± 5 ) %、(2 9± 11) % ,ANP组为 (5 0± 11) %、(80± 9) %、(4 8± 17) %、(5 0± 10 ) % ,术后 6h较SO组明显增高 (P <0 0 1) ;GH治疗组 ,(4 8± 11) %、(2 7± 15 ) %、(4 2± 7) %、(30± 10 ) % ,与SO组各时点比较差异无显著意义 ,且术后 6h较ANP组降低(P <0 0 1)。术后 3h、6h、12h、2 4h各时点肠粘膜细胞凋亡指数分别为 :SO组为 (6± 2 )、(8± 2 )、(11±1)、(5± 1) ,ANP组为 (18± 4)、(2 0± 3)、(15± 2 )、(14± 2 ) ,较SO组明显增高 (P <0 0 1) ;GH治疗组为(10± 2 )、(10± 2 )、(13± 2 )、(14± 4) ,其中术后 3h、6h较ANP组降低 (P <0 0 1)。FasL及Bax蛋白在假手术组呈弱表达 ,AN     

STAT3在急性重症胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能障碍中的作用

目的　研究重症胰腺炎(SAP)时大鼠肠上皮细胞凋亡、氧化损伤及凋亡相关蛋白的激活情况。方法　Wistar大鼠4 8只,分为S(假手术)组、C(对照)组、A(急性胰腺炎)组、N(抗氧化剂)组,A组、N组采用胆胰管内逆行注入5 %牛磺胆酸钠诱导大鼠SAP模型,C组注入生理盐水。术后3h、2 4h分批处死大鼠,取胰腺组织行HE染色明确胰腺炎程度;留取血浆检测D 乳酸水平;刮取小肠黏膜检测丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XO)水平;小肠组织增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色;小肠组织TUNEL染色及黏膜DNA琼脂糖凝胶电泳;提取小肠黏膜蛋白行Westernblot检测Bcl 2、Bax、p STAT3表达水平。结果　A组术后3h血浆D 乳酸含量、肠上皮细胞凋亡增加,2 4h最显著(P <0 . 0 1) ,D 乳酸含量、凋亡指数分别为(3 6. 1±0 . 98) μg/ml、(4 5. 3±1. 95 ) % ,二者正相关(r =0 . 5 74 ,P <0 . 0 1) ;A组术后3h氧化应激水平高于其他各组,小肠黏膜MDA含量及XO活力分别为(4 .85±1 .0 5 )nmol/mg、(18. 1±3 .0 3)U/g ;A组术后3h肠黏膜Bax、p STAT3表达增加,2 4h最明显,二者存在相关性(r=0 . 5 91,P <0 .0 1)。结论　急性重症胰腺炎大鼠肠上皮氧化应激导致的细胞凋亡是肠黏膜通透性增加的机制之一;氧化应激可能通过激活STAT3信号传导通路调控凋亡相关蛋白的     

硫喷妥钠引起的淋巴细胞凋亡不依赖CD95的激活

背景:当脑外伤病人颅内压升高对其他治疗措施 反应不佳时,常常应用巴比妥酸盐。然而,巴比妥酸盐 介导的神经保护作用可能会导致淋巴细胞减少,使发 生感染的危险性增加。巴比妥酸盐引起淋巴细胞减少 的机制还不清楚。 方法:新鲜分离的人淋巴细胞和Jurkat细胞与硫 喷妥钠共孵育24 h和48 h。用荧光素(FTTC)标记的 Annexin和罗丹明标记的碘化丙啶(PI)双染技术和脱 氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(ter- minal deoxynucleotidyhransferase mediated nick end la- beling,TUNEL)检测细胞凋亡。用Western blot和裂解 底物分析法检测caspase-3活性。 结果:硫喷妥钠剂量依赖性地(5 mg／L-500 ms／ L)增加Jurkat细胞凋亡(其基础水平为4．4％±1．9％, 24 h后为29．7％±2．8％,48 h后为39．7％±3．2％), 对淋巴细胞则引起其坏死。硫喷妥钠剂量依赖性增加 Jurkat细胞caspase-3样活性。 caspase抑制剂z- VAD—fmk(20 μmol／L)仅轻度减轻250 mg/L硫喷妥 钠引起的Jurkat细胞凋亡(从20．2％±2．5％到17．2％ ±2．5％)和淋巴细胞坏死(从39．2％±7．5％到30． 7％±14％)。与此相反,抗CD95引起的Jurkat细胞凋 亡可被z—VAD—fmk完全抑制(从27．0％±2．0％到 8．1％±1．8％)。Jurkat细胞上CD95的表达和预先应 用抗CD95的中和抗体都未能影响硫喷妥钠引起的细 胞凋亡,提示硫喷妥钠引起的细胞凋亡不依赖CD05系 统。NF—κB抑制剂gliotoxin增加硫喷妥钠和CD95介 导的细胞凋亡,提示硫喷妥钠和CD95引起的细胞凋亡 存在相互调节。 结论:硫喷妥钠可不依赖CD95机制直接引起淋巴 细胞和Jurkat细胞凋亡。     

休克期切痂对烫伤大鼠外周血淋巴细胞凋亡及单核细胞抗原呈递功能的影响

目的观察不同时相点切痂对烫伤大鼠外周血淋巴细胞凋亡及单核细胞抗原呈递功能的影响。方法将136只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(8只)、单纯烫伤组(64只)、休克期切痂组(40只)、非休克期切痂组(24只)。对照组不作烫伤处理;其他组均造成30％TBSAⅢ度烫伤,其中后两组分别于伤后36、120 h行切痂植皮术。单纯烫伤组分别于伤后6、12、24、72、120、168、216、288 h处死;两个切痂组分别于伤后72～288 h、168～288 h(时间间隔同上)处死,留取血液标本检测淋巴细胞凋亡率、单核细胞主要组织相容性抗原(MHC)Ⅱ类分子阳性表达率、干扰素(IFN)γ及白细胞介素(IL)4浓度的变化,并行相关性分析。结果伤后6 h开始,单纯烫伤组淋巴细胞凋亡率迅速升高,24 h达峰值(18．19±1．42)％,之后迅速回落,于伤后72 h降至低谷(8．25±0．56)％,随着时间延长又逐渐升高,288 h时(17．81±1．99)％接近峰值,均明显高于对照组(P<0．05);伤后168～288 h两个切痂组淋巴细胞凋亡率明显低于单纯烫伤组(P<0．01)。单纯烫伤组伤后6 h单核细胞MHC-Ⅱ类分子阳性表达率急剧下降,伤后24 h已低于对照组[(37．2±2．4)％]的20％,之后逐渐升高,伤后288 h为(18．8±2．8)％,明显低于两个切痂组(P<0．01)。伤后6 h开始,单纯烫伤组血浆IFN-γ浓度迅速上升,24 h时达峰值(440．8±25．1)ng／L,之后逐渐回落,288 h降至低谷(51．3±37．0)ng／L;而IL-4水平则呈线性上升,于伤后288 h达峰值(78．1±2．8)ng／L;伤后72～288 h单纯烫伤组单核细胞MHC-Ⅱ类分子阳性表达率与休克期切痂组IFN-γ／IL-4比值呈明显的负相关(r= -0．96,P<0．05)。结论大鼠烫伤后切痂能明显抑制淋巴细胞凋亡,减缓IFN-γ／IL-4倒置的趋势,改善单核细胞抗原呈递功能。其中在单核细胞免疫功能恢复方面,休克期切痂较非休克期切痂效果显著。     

细胞信号转导调控剂对严重烫伤小鼠T淋巴细胞分泌功能的影响及机制

目的观察不同信号转导调控剂对严重烫伤小鼠脾脏T淋巴细胞分泌白细胞介素(IL)2、IL-10功能的影响,并探讨其机制。方法分离正常小鼠及高压热蒸气烫伤小鼠(烧伤面积18％TBSA,Ⅲ度)伤后12、96 h的脾脏T淋巴细胞。分为正常对照组(不加T淋巴细胞活化相关信号转导分子调控剂)、调控剂组[正常细胞分别加入以下调控剂:膜蛋白激酶C(PKC)抑制剂H-7(50μmol／L,1 ml)、PKC激活剂佛波酯(TPA,30μmol／L,1 ml)、非受体型蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制剂Herbimycin(10μmol／L,1 ml)、丝裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK)抑制剂PD098059(25μg／ml,1 ml)和Ca2 导入剂A23187(100 nmol/L,1 ml)]、烫伤组(不加调控剂)、烫伤 调控剂组(加入上述调控剂)。检测各组细胞IL-2、IL-10的分泌水平。结果伤后各组细胞中IL-2、IL-10含量均低于正常对照组(P<0．05或0．01);烫伤12 h H-7组、烫伤96 h H-7组分别低于烫伤12 h组和烫伤96 h组(P<0．01)。TPA能使IL-2、IL-10分泌明显升高,但对IL-2升高效能更显著。加入PD098059的各组IL-2、IL-10值均低于正常对照组(P<0．05或0．01)。Herbimycin能显著降低烫伤12 h Herbi- mycin组及烫伤96 h Herbimycin组IL-2的分泌,对IL-10亦有明显抑制。烫伤12 h A21387组中IL-2、IL-10含量为(2417±39)、(2793±25)pg／ml,烫伤96 h A21387组为(921±50)、(2633±35) pg／ml均明显高于烫伤12 h组[(1542±40)、(2390±15)pg／ml]和烫伤96 h组[(328±19)、(1618±21)pg／ml(P<0．05或0．01)]。结论PKC、Ca2 、MAPKK和PTK在严重烫伤小鼠脾脏T淋巴细胞分泌IL-2、IL-10的功能紊乱中起重要作用,其中PKC和PTK主要作用于IL-2的分泌而MAPKK影响IL-10的分泌。TPA和A21387均能显著提高烫伤后IL-2的分泌,并明显纠正伤后IL-2／IL-10分泌比值的失调。     

烫伤大鼠复苏前后小肠组织凋亡基因表达的变化

目的观察烫伤大鼠复苏前后小肠组织中原癌基因cfos、增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡促进基因Bax蛋白等表达的变化规律。方法采用Wistar大鼠30%TBSAⅢ度烫伤模型,根据伤后观察时间分为复苏前(伤后2.0h,未补液)、复苏后0.5h(伤后2.5h)、2.0h(伤后4.0h)、4.0h(伤后6.0h)组,每组8只。伤后2.0h开始,后3组大鼠常规补液抗休克。4组大鼠于不同时相点放血致死,留取小肠组织标本用以检测cfos、PCNA及Bax的表达。结果cfos、PCNA及Bax在烫伤大鼠复苏前的表达水平分别为(65.8±4.2)%、(74.5±2.4)%、(26.3±5.7)%;复苏后0.5、2.0h3种基因表达均有明显增加,其中0.5h达高峰,分别为(92.4±5.7)%、(85.6±4.5)%、(67.1±66)%,与复苏前比较,差异有统计学意义(P<0.01);复苏后4.0h各基因表达与复苏前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论严重烫伤复苏早期,大鼠小肠组织凋亡基因表达显著增加。     

海水浸泡对烫伤大鼠创面炎性反应与愈合的影响

目的观察海水浸泡对烫伤大鼠创面炎性反应及愈合的影响。方法将144只雄性Wistar大鼠随机分为烫伤对照组和海水浸泡组,每组72只,均造成背部10%TBSA浅Ⅱ度烫伤。海水浸泡组大鼠伤后固定四肢,立即用盛海水的方盆浸泡双前肢以下部分,持续4h；烫伤对照组大鼠则用空方盆模拟浸泡过程。于伤后0(即刻,下同)、6、12、24h采用电解质分析仪测定血清中K~+、Na~+、Cl~-的浓度。于伤前及伤后0、6、12h采用酶联免疫吸附测定法检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)α及白细胞介索(IL)6的含量。对两组大鼠创面行大体和组织病理学观察,并记录创面愈合时间。结果海水浸泡组大鼠血清中K~+、Na~+、Cl~-的浓度大多高于烫伤对照组。伤后6h海水浸泡组大鼠血清TNF-α、IL-6含量分别为(140±22)、(160±41)ng/L,均明显高于伤前值(29±15)、(62±17)ng/L及烫伤对照组(120±12)、(124±22)ng/L(P＜0．05)。与烫伤对照组比较,海水浸泡组大鼠创面水肿及局部组织炎性反应加重,创面再上皮化和表皮各层的分化延迟；海水浸泡组创面愈合时间为(16．3±1．6)d,明显迟于烫伤对照组(14．1±1．8)d(P＜0．05)。结论大鼠烫伤后经海水浸泡,可加重创面炎性反应,使创面愈合延迟。     

烫伤对大鼠结肠平滑肌细胞骨架的影响

目的观察烫伤后早期大鼠结肠平滑肌细胞骨架(CSL)含量及形态学的改变,初步探讨烧伤后胃肠动力障碍的发生机制及其临床意义。方法将70只成年健康Wistar大鼠随机分为正常对照组(10只,不烫伤);烫伤组(60只,于背部造成10 cm×7 cm的深Ⅱ度创面)。烫伤组大鼠于伤后1、3、6、12、24、48 h处死,另处死正常对照组大鼠,取结肠起始段组织,分作2份,一份于透射电镜下观察CSL的形态学变化;一份经急性酶分离法获得平滑肌细胞悬液,加入异硫氰酸荧光素标记的抗大鼠肠道平滑肌CSL微丝肌动蛋白抗体,采用流式细胞仪检测荧光强度以反映平滑肌细胞内CSL含量的变化。结果透射电镜显示:烫伤组大鼠伤后1-3 h结肠平滑肌细胞内丝状纤维分布混乱、稀疏,密斑分布不均,6-12 h CSL形态、分布等逐步趋于平稳,24 h则逐步恢复正常,48 h时与正常对照组相似。烫伤组大鼠肠道平滑肌CSL含量于伤后1 h明显升高(610±23),此后逐渐降低, 3 h已明显低于正常对照组(92±17),约12 h开始逐渐回升,24 h已超过正常对照组,且呈上升趋势持续至48 h,组间比较差异有统计学意义(P<0．05或0．01)。结论烫伤后早期可出现明显的肠道平滑肌CSL含量及形态学的改变,此过程体现了机体的修复与损伤力量抗衡的动态变化。此外,肠道平滑肌CSL含量的变化可能是导致伤后其细胞动力功能出现异常、肠道功能紊乱、肠壁结构受损的重要机制之一。     

胰岛素对烫伤大鼠肝脏氧自由基损伤的保护作用

目的 了解大鼠严重烫伤后早期应用胰岛素对肝脏氧自由基损伤的保护作用.方法 雄性SD大鼠84只,随机分为正常组、盐水组、胰岛素组,每组各28只.后2组大鼠在背部造成30%TBSAⅢ度烫伤,伤后立即腹腔注射等渗盐水40 ml/kg或皮下注射胰岛素3 U/kg.伤后6、12、24、48 h,检测盐水组和胰岛素组大鼠肝脏总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)及血清丙氨酸转氨酶(ALT)含量,同时检测肝脏胞间黏附分子1(ICAM-1),光学显微镜下观察肝细胞形态学改变.正常组大鼠亦作相应检测.结果 与正常组比较,盐水组大鼠伤后6 h肝脏T-AOC、SOD明显降低,ROS明显升高(P＜0.05或P＜0.01);伤后12～48 h血清ALT及ICAM-1均高于正常组(P＜0.01).伤后24 h,胰岛素组大鼠肝脏T-AOC、SOD分别为(386±75)、(210±39)U/g,较盐水组(124±18)、(111±9)U/g明显升高(P＜0.01);ROS为(154±29)U/g,较盐水组(351±41)U/g明显降低(P＜0.01).伤后48 h,胰岛素组大鼠血清ALT及肝脏ICAM-1与盐水组比较呈下降趋势(P＜0.01).组织病理学结果显示,胰岛素可减轻烫伤后肝细胞损伤程度.结论 严重烫伤后早期用胰岛素干预,可增强大鼠肝脏抗氧化损伤能力,对肝脏有保护作用.     

烫伤大鼠肠粘膜下调蛋白质组的分离及鉴定

目的 对烫伤后大鼠肠粘膜下调蛋白质组进行分离鉴定，探讨其在严重烫伤后肠粘膜损害发生中的作用。方法 采用大鼠Ⅲ度烫伤模型，利用高分辨双向电泳(2-DE)对肠粘膜组织进行蛋白质分离，用Image Master 2D Elite图像分析软件对差异蛋白质中的下调蛋白质组进行鉴定。结果 烧伤后6、12h两组明确下凋的蛋白质点数为34，进行鉴定及分析的蛋白质22个；与线粒体有关的下调蛋白质有线粒体乌头酸酶、丙酰辅酶A羧化酶、肝脏F-ATP酶重链A、肌钙蛋白-l、短链羟酰基辅酶A脱氢酶、P-电子转移[传递]黄素蛋白α亚基等6种；参与代谢的下调蛋白质有磷酸丙糖异构酶l和细胞溶质环氧化物水解酶；与细胞骨架蛋白及基质蛋白有关的下调蛋白质有纤维单元素、类动力蛋白-5、肌钙蛋白-2和碱性肌浆球蛋白轻链3共4种；参与调控的下调蛋白质有糖皮质激素诱导蛋白、核因子l-B2、BRCAl、雌二醇安息香酸盐转录因子、G-蛋白β-2亚基、N-甲基-D-天门冬氨酸受体l等6种；与免疫调控有关的下调蛋白质有T细胞受体-V-δ6和Ig重链V区蛋白l。结论 在大鼠烫伤后肠粘膜表达下调蛋白质中，以与线粒体有关及参与激素和细胞因子调控的蛋白质数量居多，说明大鼠烫伤后早期损伤发生机制与线粒体功能改变以及激素、细胞因子表达调控紊乱关系密切。     

高原地区烧伤后延迟复苏氧化应激对大鼠肠上皮细胞凋亡及bax和bcl-2基因表达的影响

Objective To explore influence of oxidative stress reaction on apoptosis rate and expres-sion of apoptosis-related genes bax and bcl-2 of enterocytes in severely burned rats with delayed resuscitation on the plateau. Methods One hundred and twenty rats subjected to 30% TBSA full-thickness scald on the back were derided into plateau experimental group (PE, altitude 3840 m) and Lanzhou experimental group (LE, altitude 1517 m). Then LE and PE groups were subdivided into Lanzhou immediate fluid resus-citation group (LIFR, with immediate intraperitoneal injection of isotonic saline after scald, 40 mL/kg), Lanzhou delayed fluid resuscitation group [LDFR, with intraperitoneal injection of isotonic saline at 6 post scald hour (PSH), 40 mL/kg], and plateau immediate fluid resuscitation group (PIFR, with immediate in-traperitoneal injection of isotonic saline after scald, 40 mL/kg), plateau delayed fluid resuscitation group (PDFR, with intraperitoneal injection of isotonic saline at 6 PSH, 40 mL/kg). Another 12 rats were divided into Lanzhou sham scald group (LS) and plateau sham scald group (PS), with 6 rats in each group. Rats in LS and PS groups were sham scalded in a water bath for 15 s without fluid infusion. Rats were sacrificed at 6, 12, 24, 48, 72 PSH for collection of small intestine samples to determine the contents of malonaldehyde (MDA) and total hydrosulfide (TSH). The apoptosis of enterocytes was determined by TUNEL, and the ex-pression of bax and bcl-2 in epithelial cells were observed by immunohistochemical method. Intestinal sample of LS and PS groups were collected to determine the contents of MDA and TSH. Results After being scal-ded, content of MDA in intestinal tissue of rats in LDFR group and PDFR group was respectively greater than that in LIFR group and PIFR group (P<0.05 or P<0.01). Intestinal tissue content of MDA of rats in LDFR group (9.8±4.0 nmol/mg) and PDFR group (10.2±1.3 nmol/mg) was respectively greater than that in LIFR group (9.5±2.7 nmol/mg) and PIFR group (9.6±1.1 nmol/mg) (P<0.05) at 24 PSH. After being scalded, intestinal content of TSH of rats in PE group and PDFR group was respectively smaller than that in LE group and LIFR group (P<0.05). A multitude of brown positive apoptotic cells were ob-served in PDFR at 6 and 12 PSH. Absorbance values in LDFR group, PIFR group, and PDFR group were higher than that in LIFR group at each time point (P<0.05 or P<0.01). A multitude of bax positive cells were observed in intestinal mucous membrane in PDFR at 6 and 12 PSH. Expression of bal-2 was nega-tive in PE group, and LIFR and LDFR groups at 6, 12 PSH, and it was weakly positive in LIFR and LDFR groups at 24, 48, 72 PSH. Conclusions Enhancement of bax expression and weakening of bcl-2 expres-sion in enterocytes are induced by the severe oxidative stress reaction in intestinal mucous membrane after burn with delayed resuscitation on the plateau, which may be one of the important reasons in inducing an in-crease in apoptosis of enterocytes.     

早期应用冬眠合剂对严重烫伤大鼠小肠的保护作用

目的 了解早期应用冬眠合剂对严重烫伤大鼠小肠的保护作用.方法 将66只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假伤组6只、烫伤组30只、烫伤+冬眠合剂组30只.麻醉后,将后2组大鼠造成30%TBSAⅢ度烫伤,假伤组37℃水浴模拟烫伤.3组大鼠伤后均立即腹腔注射乳酸钠林格液(2 mL·kg-1·%TBSA-1)复苏;同时烫伤+冬眠合剂组皮下注射冬眠合剂(50 mg/mL哌替啶、25 mg/mL氯丙嗪、25 mg/mL异丙嗪各1 mL加入125 mL生理盐水中)12 mL/kg,假伤组和烫伤组注射生理盐水12 mL/kg.分别于伤后3、6、12、24、48 h取烫伤组与烫伤+冬眠合剂组大鼠各6只(假伤组伤后3 h取材),采集血液和小肠组织标本.观察烫伤组与烫伤+冬眠合剂组大鼠伤后24 h、假伤组伤后3 h小肠组织病理变化,并用免疫组织化学法检测小肠组织胞间黏附分子1(ICAM-1)和CD68的表达.采用ELISA法测定各组大鼠血浆D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)、IL-1β、TNF-α、IL-10水平.数据行单因素方差分析.结果 (1)伤后24 h,烫伤组大鼠小肠黏膜轻度出血,炎症细胞浸润、上皮细胞脱落;烫伤+冬眠合剂组较烫伤组肠绒毛排列规则,无明显充血、水肿表现.(2)烫伤组小肠ICAM-1和CD68阳性表达率分别为(1.69±0.27)%和(0.80±0.09)%,均显著高于假伤组的(0.77±0.10)%和(0.30±0.05)%(F值分别为77.303、66.933,P<0.05或P<0.01)与烫伤+冬眠合剂组的(0.53±0.09)%和(0.32±0.06)%(F值同前,P值均小于0.01).(3)烫伤+冬眠合剂组大鼠伤后12、24 h D-乳酸水平明显低于烫伤组(F值分别为20.936、19.854,P值均小于0.01).烫伤+冬眠合剂组DAO水平于伤后3、12 h显著低于烫伤组(F值分别为21.930、11.342,P值均小于0.05).(4)烫伤组各时相点IL-1β、TNF-α水平均明显高于假伤组(P值均小于0.01),烫伤+冬眠合剂组伤后6、12、24 h IL-1β、TNF-α水平均低于烫伤组(F值分别为96.517、17.365、79.715与21.328、17.682、28.424,P<0.05或P<0.01);烫伤+冬眠合剂组各时相点IL-10水平均高于烫伤组,并在6、24 h时差异具有统计学意义(F值分别为8.668、19.634,P<0.05或P<0.01).结论 早期应用冬眠合剂可减轻严重烫伤大鼠小肠黏膜水肿和损害,该机制可能与其降低肠道ICAM-1的表达和血液炎症介质水平、减少肠道局部炎症细胞数量有关.     

胰岛素强化治疗对烫伤大鼠心肌保护作用的研究

目的 了解胰岛素强化治疗对重度烫伤大鼠心肌的保护作用，并探讨其作用机制。方法 将18只SD大鼠分为3组，每组6只。强化组及烫伤组大鼠背部脱毛造成30％TBSA的Ⅲ度烫伤。强化组伤后即输注胰岛素等渗盐水（含胰岛素0．12U／m1）及100g／L葡萄糖，使大鼠血糖水平控制在4．0～6．6 mmol／L之间，补液总量为2ml·kg^-1。·％TBSA^-1·8h^-1；烫伤组伤后仅给予等渗盐水，总量同前。假伤组模拟烫伤，伤后补充生理量的液体。于伤前及伤后1、2、3、4、5、6 h 抽取大鼠静脉血测定其血糖值。各组大鼠伤后均经右颈动脉插管人左心室并连接生理记录仪，观察左心室收缩压（LVSP）及左心室舒张末期压（LVEDP）。伤后6h，处死各组大鼠，留取左心室组织标本用于心肌细胞肌钙蛋白T的检测。结果 烫伤组大鼠伤后1～6h的血糖值为（7．6±1．7）～（8．4±4．7）mmol／L，均高于强化组[（4．5±0．9）～（5．2±1．3）mmol／L，P〈0．01]。伤后1h，烫伤组LVSP[（60±11）mmHg（1mmHg=0．133kPa）]降低、LVEDP[（21．3±11．3）mmHg]升高，与强化组[（72±8）、（11．7±5．2）mmHg]比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。烫伤后各组大鼠肌钙蛋白T在心肌细胞内大量缺失，而强化组缺失程度明显低于烫伤组（P〈0．05）。结论 胰岛素强化治疗对重度烫伤大鼠左心室功能具有明显的保护作用，此作用可能与抑制心肌细胞蛋白的缺失有关。