白芨甘露聚糖的毒性研究

本研究用简化机率单位法求出白芨甘露聚糖静脉注射与腹腔注射的LD_50分别为595和804mg/Kg;给小鼠灌胃,白芨甘露聚糖的最小致死量>2000mg/Kg在狗身上进行的局部毒性实验表明,白芨甘露聚糖对狗的肝、脑、皮下组织均无明显刺激反应,其局部吸收较明胶海绵快,且局部毒性反应明显低于明胶海绵。     

人CpG-寡脱氧核苷酸对质粒DNA免疫刺激活性的影响

目的：研究人CpG寡脱氧核苷酸（CpG-ODN)对DNA疫苗质粒骨架免疫刺激活性的影响。方法：将多拷贝对人和小鼠均有免疫刺激活性的CpG2006序列导入质粒骨架,并在小鼠模型体内外评价重组质粒DNA的免疫刺激活性。结果：首先构建了质粒pMini,仅含有卡那抗性基因和pUC18复制起点,然后向pMini中导入了多拷贝对小鼠具有交叉免疫刺激活性的人CpG2006拷贝数的增加,质粒DNA在体外活化小鼠脾细胞分泌IgM的能力逐步增强,但诱生IFN－γ的能力却依次降低,用重组质粒DNA作为HBsAg疫苗佐剂,免疫BALB／c小鼠,pMini和pCpG11对特异性总抗体以及IgG1亚型抗体水平无明显影响（P＞0．05）,但pCpG26能够使两类抗体水平分别提高3倍（P＜0．001）和2倍（P＜0．02）,所有质粒DNA均能够使IgG2a亚型抗体水平提高5－10倍,但三者之间差异无显著意义（P＞0．05）,结论：向质粒骨架中导入一定数量的人CpG-ODN能够增强质粒DNA的免疫刺激活性。     

重庆地区人群血清甘露聚糖结合凝集素水平测定及意义

目的建立重庆地区人群血清甘露聚糖凝集素水平正常值参考范围.方法用ELISA方法检测重庆地区91例新生婴儿脐血MBL水平,274例学龄前儿童、87例成人血清MBL水平,比较各年龄组及不同地区人群血清MBL水平.结果新生儿脐血MBL水平(1.71±1.60)μg/ml,成人外周血(3.09±1.58)μg/ml,两组比较呈显著性差异(P＜0.005),学龄前各年龄组MBL水平分别为(3.16±2.00)μg/ml、(3.19±1.88)μg/ml、(3.30±2.05)μg/ml、(3.69±2.22)μg/ml、(3.02±1.38)μg/ml与新生儿比较明显增高(P＜0.005),但学龄前期各组间比较无显著性差异(P＞0.05),与香港地区足月儿比较无显著性差异(P＞0.05),成人血清MBL水平比较有明显增高(P＜0.05).结论新生儿期MBL水平明显低于学龄前各年龄组儿童,学龄前儿童组间比较没有显著差异,重庆成人MBL水平高于香港成人.     

甘露聚糖肽对ROU患者淋巴细胞免疫活性的影响

目的 观察免疫增强剂甘露聚糖肤对口腔粘膜病患者淋巴细胞免疫活性的影响。方法 采用^3H-TdR及^14C-UR渗入淋巴细胞标记法,体外培养,观察甘露聚糖肽对淋巴细胞DNA及RNA合成功能的影响。结果 低浓度甘露聚糖肤（1．10mg／L）可使口腔粘膜病（ROU）患者淋巴细胞合成DNA及RNA功能增强;高浓度（30-100mg／L）作用相反。结论 甘露聚糖肤对ROU患者淋巴细胞的免疫功能的影响与剂量有关,随剂量增加而出现抑制性影响。     

甘露聚糖肽胶囊治疗慢性咽炎的疗效观察

目的:观察甘露聚糖肽胶囊治疗慢性咽炎的临床效果。方法:选择笔者所在医院2007年2月~2012年12月期间收治的慢性咽炎患者90例,随机分为治疗组和对照组,各45例,两组均给予常规治疗,同时对照组加服匹多莫德胶囊,治疗组加服甘露聚糖肽胶囊。结果:治疗组临床总有效率为91.11%,约高于对照组的84.44%,但两组总有效率比较差异无统计学意义(P>0.05)。但治疗组T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+值较对照组显著提高(P<0.01),平均发作持续间、感染复发次数较对照组显著降低(P<0.05)。结论:甘露聚糖肽通过提高慢性咽炎患者免疫功能,能显著降低患者反复发作次数,缩短复发感染持续时间。     

阿拉伯—甘露聚糖制剂对小鼠巨噬细胞活性的影响

用化学发光方法测定了阿拉伯—甘露聚糖制剂对小鼠巨噬细胞活性的影响.发现制剂不仅可增强小鼠巨噬细胞的活性,而且可增强小鼠巨噬细胞杀伤小鼠 S180肿瘤细胞的作用.提示制剂有可能作为一种非特异性免疫增强剂提高巨噬细胞杀伤病原微生物和肿瘤细胞的活性.     

阿拉伯—甘露聚糖制剂对小鼠巨噬细胞活性的影响

用化学发光方法测定了阿拉伯—甘露聚糖制剂对小鼠巨噬细胞活性的影响.发现制剂不仅可增强小鼠巨噬细胞的活性,而且可增强小鼠巨噬细胞杀伤小鼠S₁₈₀肿瘤细胞的作用.提示制剂有可能作为一种非特异性免疫增强剂提高巨噬细胞杀伤病原微生物和肿瘤细胞的活性.     

甘露聚糖肽辅助治疗尖锐湿疣的系统评价

目的系统评价甘露聚糖肽辅助治疗尖锐湿疣的有效性及安全性。方法电子检索Co-chrane图书馆、MEDLINE、EMBASE、CNKI、CBM,手工检索相关杂志、会议论文、学位论文,收集甘露聚糖肽治疗尖锐湿疣的随机对照试验(RCT)。由两名研究者独立选择试验、评价质量、提取数据,并交叉核对。使用RevMan 5.0软件进行Meta分析。结果纳入10个RCT,结果显示痊愈率及总有效率均优于对照组;甘露聚糖肽能显著降低尖锐湿疣的复发;甘露聚糖肽可能会引起一过性低、中度发热。结论甘露聚糖肽可提高尖锐湿疣的临床疗效,降低复发率。     

甘露聚糖肽对急性盆腔炎腹腔镜手术疗效及免疫的影响

目的 探讨免疫增强剂甘露聚糖肽注射液对用腹腔镜手术治疗的急性盆腔炎患者的临床疗效和免疫功能的影响。方法 60例急性盆腔炎抗感染治疗疗效差行腹腔镜治疗的患者随机分为治疗组和对照组,每组各30例,对照组给予环丙沙星、甲硝唑等抗感染药物治疗;治疗组在对照组基础上给予甘露聚糖肽注射液10 mg/d静脉滴注。术后10 d根据症状及体征评价临床疗效,根据T细胞亚群及NK细胞比率的变化评价对免疫功能的影响,并随访1年。计量资料进行组间比较时采用t检验,计数资料进行率的比较时采用χ2检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果 治疗组总有效率96.67%(29/30),虽略高于对照组的90.00%(27/30),但2组比较差异无统计学意义(χ2=2.706,P>0.05)。治疗组T细胞亚群中的CD3+、CD4+比率,CD4+/CD8+比值,NK细胞比率,均较对照组显著提高(P<0.05)。随访1年,治疗组无复发病例,对照组有2例复发,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 腹腔镜手术治疗急性盆腔炎加用甘露聚糖肽能提高患者免疫功能,减少术后复发。     

甘露聚糖肽皮试液浓度的临床观察与探讨

目的:探讨甘露聚糖肽皮试溶液的最适宜浓度。方法:对753例住院患者,采用单盲随机对照法,使用三种浓度的皮试液进行皮内注射,随后,高浓度、中浓度皮试阳性者再用低浓度做皮试。结果:高浓度、中浓度、低浓度皮试溶液皮试结果配对比较,两两之间均存在显著性差异(P<0.01),高浓度、中浓度皮试阳性者再用低浓度做皮试,其假阳性率分别为20.72%、5.58%,且经低浓度筛选出的阴性患者,静脉滴注后,无一例发生速发型变态反应。结论:科学、准确的甘露聚糖肽皮溶液试浓度有利于降低皮试结果的假阳性率,将甘露聚糖肽注射液稀释100倍进行皮试,安全可靠,为较佳的甘露聚糖肽皮试液。     

碱裂解法提取质粒DNA的研究

目的对碱裂解法提取质粒DNA中主要试剂的作用进行研究.方法采用不同的溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ分别进行质粒DNA的提取.结果方法3得到质粒DNA的量明显偏少,方法4得到的质粒DNA含蛋白质较多.结论溶液Ⅰ对实验结果影响不大,溶液Ⅱ中的NaOH关系到所提取质粒DNA量的多少,溶液Ⅲ中的醋酸钾是蛋白质能否去除的一个重要因素.     

肌内注射质粒DNA对蟾蜍骨骼肌收缩能力的影响

目的：应用蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本，观察肌内注射质粒DNA后不同时间对肌肉收缩功能的影响。方法：重组DNA制备pcDNA3/ANP。分别将任氏液、pcDNA3／ANP及载体pcDNA3注入对照组、pcDNA3／ANP及组pcDNA3组蟾蜍腓肠肌，间隔1h,2h,4h,8h,24h及48h后，处死动物，制备坐骨神经腓肠肌样本，利用BL－410计算机生物机能实验系统测肌肉的单收缩力和强直收缩力。结果：质粒pcDNA3及pcDNA3／ANP肌内注射后，肌肉的单收缩力及强直收缩力与对照组相比均呈现先降氏后升高的趋势（P均＜0．01）；而pcDNA3和pcDNA3／ANP2者对肌肉的作用差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：质粒DNA注射入骨骼肌细胞之后除目的基因的表达之外，还可以影响肌肉的收缩功能。     

一种制备质粒DNA的改良碱裂解法

目的介绍一种快速获取高纯度质粒DNA的方法。方法使用替代试剂，建立改良的碱裂解法进行质粒DNA提取，并用琼脂糖电泳验证所得的质粒的质量，紫外测量估算产量及纯度。限制性酶切验证其用度。结果琼脂糖电泳显示质粒DNA条带明亮，以超螺旋方式为主。A260／280为1．903，含量为320μg／mL，酶切后得到约500bp的目的片段。结论改良碱裂解法操作简单、实用，所得样品纯度高，达到了分子生物学常规实验的要求。     

重组质粒DNA中插入子的核苷酸序列分析

探讨由乙酰胆碱受体抗体可变区基因与载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ构建的重组质粒中插入子进行核苷酸序列分析的条件及对结果的影响．     

大量提取质粒的简便方法

0　引言　质粒提取是分子生物学实验室一项最基本的工作 .我们介绍一种非常简便的大量提取质粒方法 ,此法提取的质粒可直接用于酶切鉴定、转化、探针标记等 .菌种为转化了重组 p U C19质粒的 DH5α E.coli.重组 p UC19质粒为在 H inc II位点插入不同的 PCR产物连接而成 .1　方法　挑一个单菌落接种于 5 m L L B/ Amp(含氨苄青霉素0 .1g· L-1 )培养液中 ,37℃振荡过夜 (A=0 .6 ) ,转 1m L菌液于 10 0 m L L B/ Amp培养液中 ,37℃振荡过夜 (A=0 .6 ) ,将菌液倒入两个 5 0 m L离心管 ,10 0 0 0 g离心 2 min,弃去上清 ,沉淀中加入 4…     

Construction of a recombinant plasmid harbouring the rhoptry protein 1 gene of Toxoplasma gondii and preliminary observations on DNA immunity

Objective To observe the immune responses elicited in BALB/c mice by a DNA vaccine. A ge ne encoding rhoptry protein 1 (ROP1) from Toxoplasma gondii (T. gondii) was cloned into vector pcDNA3.Methods Amplifyied gene fragments coding for ROP1 from the genomic DNA of T.gondii ZS2 were inserted into cloning vector, pUC18, and sub-cloned into pcDNA3. Mice wer e injected at a dosage of 100 μg recombinant plasmid DNA by intramuscular inje ction and boosted after 2 weeks. pcDNA3 and normal saline were used as control . 30, 50 and 70 days after the second immunization, NK cell activity, T lympho cyte proliferation and sub-clusters and serum IgG antibody were assayed.Results The specific gene fragment coding for ROP1 was amplified and a pcROP1 recombinan t was constructed. At 30 days after immunization, the spleens of the mice were obviously enlarged evidently. NKC activity and the proliferation of spleen T ly mphocytes seen on MTT assay were higher in pcROP1 group than in the controls. T he number of CD4(+) T cells exhibited no obvious increase compared with that of the control, but CD8(+) T cells were obviously increased (P&lt;0.05). At 90 d ays after vaccination, the titer of IgG antibody in the serum of vaccinated mice was positive (1∶100).Conclusion pcROP1 was constructed and it could elicit both cellular and humoral immune r esponses in immunized mice.     

TCR Vβ8/pcDNA3.1重组质粒的构建

目的：构建重组质粒TCRVβ8／pcDNA3．1。方法：从人淋巴瘤Jurkat细胞中提取mRNA，经RT－PCR法获取TCRVβ基因；将表达质粒pcDNA3．1和TCRβ基因行BamHI和HindⅢ双酶切、低熔点胶纯化、连接酶切产物、转化DH5a感受态细菌、筛选菌落和测序鉴定。结果：电泳获得523bp的TCRVβ8预期条带，测序证实为正确的TCRVβ目的基因序列。结论：测是构建TCRVβ8／pcDNA3．1重组质粒的重要步骤。     

人大肠癌线粒体DNA重组质粒的构建

目的了解大肠癌细胞株（SW480，LoVo，HT29）线粒体DNA的突变，克隆突变的大肠癌线粒体DNA（mtDNA）基因，构建pcDNA3．1（＋）-mtDNA真核表达重组体，并导入NIH3T3细胞，以探讨线粒体基因突变与肿瘤发生的关系。方法提取大肠癌细胞株（SW480，LoVo，HT29）mtDNA，扩增D-LOOP区，产物用DNA自动测序法进行序列分析。利用DNA重组技术将其定向插人真核表达质粒pcDNA3．1（＋），并用脂质体法导人NIH3T3细胞。结果检测出大肠癌细胞株SW480、LoVo、HT29细胞mtDNAD—LOOP分别有10、9、8个突变位点。成功克隆1119bp的mtDNAD—LOOP区至表达质粒pcDNA3．1（＋），并导入NIH3T3细胞中。结论线粒体DNAD-LOOP区是一个具有高度多态性和突变性的区域，在大肠癌细胞株中突变率较高。     

氯化锂用于质粒DNA的提纯

在分子生物学实验中常常涉及到小量质粒 DNA的提取和纯化。用质粒 DNA提纯试剂盒 ,虽然能得到高纯度的质粒DNA,但成本过高 ,不适合大量使用。用常规的苯酚氯仿提纯法 ,步骤繁琐 ,而且得到的产物中常残留有苯酚或其它杂质而影响后续的酶切分析等工作。再者 ,苯酚有害人体健康 ,而且废弃的苯酚又可造成环境污染。在本实验中 ,已摸索出一种可用于替代苯酚氯仿提纯质粒 DNA的氯化锂质粒 DNA提纯法。该方法简便易行 ,安全经济 ,所获结果稳定性好。1　材料与方法1.1　材料1.1.1　菌株　 p BR32 2 / C6 0 0 ,RP4/ 1485为本室保存的菌株 ;p …     

一种简捷的质粒DNA提取及纯化方法

介绍一种快速获取高纯度质粒ＤＮＡ方法,在碱裂解法快速获取质粒ＤＮＡ粗制品的基础上,利用一种不溶解蛋白质而溶解ＤＮＡ的溶液ＴＥＳ纯化质粒ＤＮＡ,同时对本法所提取的质粒的ＤＮＡ的回收率、纯度及可能的用途进行验证。此法简易,所得样品纯度高,可以直接用于转化、酶切和基因克隆。