一种改良NaIO_4标记法应用于HRP-IgG及其在GSH-Px研究

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是体内一种重要的抗脂质过氧化物酶,近年来,免疫酶技术在研究GSH-Px细胞内分布、代谢等方面得到广泛应用。这种技术需要重复性好,效果优良的标记法和高效稳定的酶标抗体。传统的辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体的过碘酸钠法(Nakane法),酶活性显著下降和IgG-HRP大分子聚合物的形成,影响了GSH-Px抗原抗体反应的敏感性,为克服这一缺陷,木文采用一种新的HRP标记IgG过碘酸钠法,将标记物用于GSH-Px的酶联免疫吸附测定(ELISA)法、免疫组化及免疫电镜研究,取得满意结果。     

生物素—亲和素酶复合物系统及其在病毒学诊断中的应用

40年代Coon′s等用荧光抗体法为免疫病理学的研究开辟了道路。60年代酶免疫技术的使用,特别是70年代Sternberger等建立的过氧化物酶-抗过氧化物酶法(PAP),极大地推动了免疫病理学的发展。70年代后期Guesdon等首先将亲和素-生物素系统(avidin-biotin systems)     

简化的免疫过氧化物酶方法

<正> 在肾脏疾病的免疫组织化学诊断中,福尔马林液固定、石腊包埋组织的免疫过氧化物酶染色比冰冻切片免疫荧光染色有许多优点,如能很好地显示组织结构,标本可长期保存和适用于穿刺活检材料。免疫过氧化物酶技术的缺点是操作费时间。作者报道一种简化的间接免疫过氧化物酶方法。此法不包括脱腊和对比染色,全部过程仅需85分     

辣根过氧化物酶与A蛋白结合物的制备

A蛋白与辣根过氧化物酶交联,可为酶联免疫试验提供大量的酶结合物,对推广ELISA的广泛应用很有意义。我们参照丁宗武等的报导进行了辣根过氧化物酶与A蛋白的酶联试验,简报如下。 材料和方法 辣根过氧化物酶与A蛋白的交联: A蛋白购自上海生物制品研究所,每安瓶6mg冻干纯品,批号81—9—1500。与酶交联前将6mgA蛋白溶于1ml 0.015M pH9.6的Na_2CO_3/NaHCO_3缓冲液中,平衡24小时。     

应用酶免疫分析法检测甲胎蛋白的研究

近年来国外广泛应用酶免疫分析技术(ELISA)对多种抗原、抗体及生物活性物质进行定量测定。认为酶免疫分析法结合免疫萤光技术和放射免疫测定两法的优点,而克服了它们的很多缺点。酶标记试剂制备的费用少,稳定性高,有效期长,所用仪器较放射免疫法简单,而敏感性两者又接近。国外近年开展ELISA检测甲胎蛋白用于临床诊断,国内有关这方面方法学研究的报导尚少见。我们借鉴于R.Hevey等人报导的方法建立了检测甲胎蛋白的ELISA方法,并应用于临床。本文着重介绍我们建立的检测甲胎蛋白的ELISA双抗体夹心法(Double-antibody Sandwish ELISA)。     

用于石腊切片的简便免疫酶标方法

<正> 利用特异抗体与过氧化物酶结合的免疫酶标方法,可以检查组织、细胞内存在的多种物质、如激素、抗体、病原体、甲胎蛋白和某些酶等。这种方法特异性高,能较为精确地确定所要检查物质的部位和性质,所以已经广泛应用于各种研究工作中。免疫酶标技术也常用来研究淋巴系细胞表面或/和胞浆内的免疫球蛋白,以及检查单     

抗HIV-2 gp36基因工程抗原单克隆抗体的制备和鉴定

目的 制备稳定产抗人类免疫缺陷病毒-2gp36基因工程抗原单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb,单抗)的杂交瘤细胞株及相应单抗,鉴定细胞株的生物学特性和单抗的免疫学特性及理化特性;初步探索用所制单抗构建检测gp36酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的适用性.方法 分别用杂交瘤技术和常规免疫制备抗gp36的单抗和多抗(polyclonal antibody,PcAb,多抗).纯化单抗和多抗,并标记辣根过氧化物酶.分别用纯化的单个单抗-单个单抗或单个单抗-多抗建立夹心ELISA.结果 获得9株稳定分泌抗gp36单抗的杂交瘤细胞株.用纯化的8E5单抗和辣根过氧化物酶标记的多抗建立的夹心ELISA可以检测到低至50 μg/L的gp36.结论 为人类免疫缺陷病毒-2感染的检测和研究初步提供了可资应用的单抗.     

ELISA法检测乙肝标志物出现错误结果的分析及应对

酶联免疫吸附试验技术(ELISA)以免疫过氧化物E技术为基础,敏感性高,特异性强,操作简便,易于观察,便于大规模检查[1].由于其自身方法学上的限制,检测结果易受其它血清物质变化及实验室因素的干扰.本文分析ELISA法检测乙肝标志物的干扰因素及控制方法.     

应用化学发光自显影技术检测甲型肝炎病毒和人IgM

运用化学发光自显影技术和化学发光酶免疫分析法,可检出15.60pg辣根过氧化物酶;在甲型肝炎病毒和人1gM的免疫测定中,检出限分别为1:128(滴度)和6.4×10~4(人标准血清稀释倍数),较酶连接免疫     

应用免疫过氧化物酶定位对细胞和组织内抗原的研究(摘要)

<正> 应用免疫酶技术,在光学和电镜下对以3型和7型腺病毒感染的人胚肾培养细胞、实验性免疫复合物引起的兔心肌血管炎的心肌组织、腺病毒肺炎尸检的肺组织为研究材料,进行了免疫酶标定位抗原的研究。在技术上进行了试验和改进,提出了光学镜和电镜免疫酶定位材料的处理方法及免疫酶染色的操作程序,几个影响试验成败的关键性问题进行了探讨。这些问题是:(1)辣根过氧化物酶标抗体的保存及测量问对题:我们采用Nakane的过碘酸钠氧化法制备的酶标抗体,为使其活性不致丧失,将其以每小瓶0.1ml或     

181例婴儿肝炎综合征患儿血清中抗巨细胞病毒IgM抗体的检测

为了给临床巨细胞病毒(CMV)感染的早期诊断提供依据,本文采用间接免疫荧光法(IFA)检测了181例婴儿肝炎综合征患儿血清中抗CMV-IgM抗体。实验结果:检出抗CMV-IgMAb阳性占32.59%(59/181)。在排除RF因子干扰后,阻断试验证明所测的Ab确为IgM,同时,将含抗CMV-IgMAb阳性血清与EB病毒抗原做交叉反应试验,其抗EBV-IgMAb阳性占5.08%(3/59),提示用IFA法检测抗CMV-IgMAb可做为婴儿肝炎综合征早期诊断的参考指标,但不能排除其中少数阳性结果可能来自其它病毒具有相似抗原的交叉反应或混合感染。     

非标记抗体技术在流行性出血热病毒抗原研究中的应用

将非标记抗体技术应用于流行性出血热病毒抗原研究,对感染细胞内病毒抗原及经免疫转印到硝酸纤维膜上的病毒多肽抗原进行了检测,并分别与间接免疫荧光和间接酶标抗体方法进行了比较。结果表明,非标记抗体技术敏感性高,背景浅,可用于流行性出血热病毒抗原检测与分析。用非标记抗体技术及间接免疫荧光法对流行性出血热单克隆抗体培养上清液进行筛选,两种方法阳性检出率相同(7.29％,7/96),但前者滴度(1:16～256)高于后者(1:4～32)。     

沈阳地区呼吸道合胞病毒肺炎的病原学及临床探讨

本文对沈阳地区婴幼儿病毒性肺炎进行了呼吸道合胞病毒(RSV)的病原学研究。结果表明:RSV是该地区婴幼儿病毒性肺炎的重要病原。并对其临床进行了探讨。     

间接免疫荧光技术对毛细支气管炎合胞病毒病原快速诊断的研究

应用间接免疫荧光技术对50例毛细支气管炎患儿鼻咽分泌物脱落细胞进行合胞病毒抗原检查,与病毒分离和/或补体结合试验比较,敏感性为74.2％,特异性为68.4％。间接免疫荧光技术敏感、特异、快速、简便,能够为RSV感染的早期快速诊断提供依据,具有临床应用价值。     

HRP-SPA染色法检测流行性出血热病毒特异性抗体的流行病学评价

应用HRP-SPA染色法与免疫荧光抗体技术,对比检测了252份住院患者和一般人群的血清EHFV IgG抗体。结果表明,在住院患者中,两种方法的总符合率达98.6％,其灵敏度,特异度与可靠性基本一致。而在一般人群中,HRP-SPA染色法灵敏度较低。故此法可以作为临床实验诊断,但不适用于隐性感染的调查。     

1起家庭聚集性肺炎病原学检测及基因特征分析

目的：分离鉴定引起家庭聚集性肺炎的病原体,并进行基因特征分析。方法采集该家庭每个成员的血清、咽拭子和肺炎患者的肺泡灌洗液,通过 PCR 方法、病毒分离、hexon 测序、BLAST 比对和血清 IgG 酶联免疫方法检测病原,并对 hexon 序列进行进化树分析。对阳性病毒分离物进行全基因组扩增。结果父母咽拭子2份、孩子肺泡灌洗液2份经 PCR 检测均为腺病毒(AdV)阳性,肺泡灌洗液病毒分离阳性,4份标本 hexon 区域 PCR 扩增测序,核苷酸同源性为99.5%～100.0%,病毒全序扩增拼接分析,BLAST 比对与腺病毒7型核苷酸同源性97.0%,基因进化树分析显示 hexon 基因分型与腺病毒7 d 位于同一分支。ELISA 方法检测一家4口均出现恢复期与急性期血清腺病毒 IgG 4倍增高现象。结论腺病毒7型是该起家庭聚集性肺炎的病因。     

婴幼儿肺炎混合感染的病原学研究

婴幼儿肺炎中,肺炎支原体感染及支原体与病毒混合感染也占重要地位。     

ELISA检测NPS中RSV抗原早期快速诊断RSV感染

作者建立了一种早期诊断呼吸道合胞病毒(RSV)感染的方法-ELI-SA双抗体夹心法检测鼻咽分泌物中RSV抗原(NPS-ELISA)。应用本法与检测鼻咽脱落细胞内RSV抗原的NPS-IF法对165例临床诊断为病毒性下呼吸道感染的患婴进行诊断,结果本法证明RSV感染阳性者为68例(41.21％),NPS-IF法为61例(36.97％)。二者阳性诊断符合率和总诊断符合率分别是100％和95.67％。本文说明NPS-ELISA法特异,敏感简便,是早期诊断RSV感染的较理想方法。     

病例选择和标本保存对流感病毒分离率的影响

目的 研究流感病毒分离率的影响因素.方法 收集周浦医院2008年采集的流感样病例咽拭子标本的相关资料,进行logistic回归分析.结果 2008年周浦医院流感样病例病毒分离率为53.27％.经logistic回归分析,发病季节和接种时间是流感病毒分离率的影响因素,咳嗽或咽痛、送样时间(48小时之内)对流感病毒分离率影响在统计学上无意义.结论 样品收集48小时内进行检测;一季度和三季度是流感病毒活跃期,尽量多采集样本.有无咳嗽或咽痛在统计学上无意义.加强流感病例发病特点及我国ILI评估的研究.     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体,特别是IgM抗体,对辅助临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT )和免疫酶染色法,虽已被广泛用于上述目的,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验测出的则主要是IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和lgG抗体,并与IFAT进行了比较。