基于生物转化的附子减毒增效研究

目的：通过微生物发酵筛选能使附子减毒增效的微生物并初步探讨其生物转化机理。方法：采用附子粉为原料,通过固态发酵的方式,根据菌种生长情况、双酯型生物碱含量变化以及物质成分变化作为评价指标,筛选适合附子生物转化菌种。采用HPLC-MS法初步鉴定新增物质的结构,为附子生物转化的可行性提供理论依据。结果：采用黑曲霉对附子进行生物转化,可使乌头碱含量减少,新增一种毒性较小的苯甲酰乌头原碱。结论：黑曲霉发酵附子实现了减毒增效的目的,为附子炮制新方法的深入研究提供了理论依据和可行性。     

附子减毒增效略谈

《神农本草经》谓:附子,味辛温,主风寒咳逆邪气,温中,金疮,破癥坚积聚,血瘕,寒湿踒躄,拘挛膝痛,不能行步。在古今的药典中,附子性味的记载基本上都是辛温、大热等。《伤寒论》用附子21方,《金匮要略》用附子11方。张景岳将附子与人参、熟地黄、大黄列为药中四维,足见对     

附子增效减毒配伍的研究进展

附子为毛莨科植物乌头Aconitum Carmicadi Debx的子根加工品.附子性辛、甘,大热,有毒,具回阳救逆,补火助阳,散寒止痛之功效,用于亡阳虚脱及阳虚诸证,其入药首载于<神农本草经>.历代医家用之均精研其不同配伍,或解其毒,或增其效.如<食疗本草>有云:"黑豆煮食之,杀乌头、附子毒."<本草经集注>云:"俗方每用附子,须甘草、人参、生姜相配者,正制其毒故也."本文将就附子用药的增效减毒配伍方面的研究作一综述.     

附子配伍甘草减毒增效的研究

附子是临床上常用药,有较强的生物活性,但有大毒,多复方入药,常与甘草配伍应用,附子与甘草的组方是中医减毒增效配伍规律运用的高级形式。综述了附子与甘草减毒增效的合理配伍理论,可为经方方药研究开拓思路,为中药现代化研究提供切入点。     

附子配伍减毒增效及其相关的研究进展

回顾文献,本文就近年来附子配伍减毒增效及其相关的研究进展,从以下五个方面作一简介。内容有：附子的现代基础研究;四逆汤全方或拆方的减毒增效系列研究;附子多药配伍方剂中药对的减毒增效研究;利用复杂生物网络研究附子方剂的疗效;深入研究附子的领域及展望     

附子甘草配伍减毒增效机理探析

以附子甘草为例，试从组分合和的角度阐述其配伍后减毒增效的机理。认为甘草酸、甘草黄酮为甘草对附子减毒增效的物质基础，其减毒机理主要表现为甘草中的酸性物质与附子中的酯型生物碱的沉淀反应，以及甘草的肾上腺皮质激素样作用；增效机理主要表现为附子与甘草中各成分间的相互作用。     

附子与甘草配伍减毒增效的物质基础初探

目的探寻附子甘草配伍减毒增效的物质基础。方法采用急性毒性实验、离体蛙心实验,观察附子生物碱与甘草有效部位（甘草三萜皂苷和黄酮）组合对毒性、强心功能的影响。结果附子生物碱与甘草有效部位配伍能明显降低毒性,同时协同增加附子的强心作用。结论附子生物碱和甘草有效部位（甘草三萜皂苷和黄酮）是附子甘草配伍减毒增效重要的物质基础。     

雷公藤配伍减毒增效研究进展

从雷公藤配伍减毒增效两方面分析,总结了五年来雷公藤中药配伍治疗类风湿性关节炎、肾病、红斑狼疮等难治性疾病的增效作用,及中药配伍对抗雷公藤治疗时的毒副反应。阐述了雷公藤治疗疾病的作用机理,毒副反应原因,从传统中药配伍和西药药理结合筛选中药组成复方,对雷公藤减毒增效给予分析。     

药性理论指导的附子配伍减毒试验研究

目的:以附子为研究对象,试验研究基于药性理论的附子配伍减毒的科学性,以探讨附子配伍减毒的新途径。方法:对以寒制热、以甘缓毒、以柔克刚、调正抑毒等四种附子配伍减毒理论进行验证性的毒理学试验,在试验中采用急性毒性和心脏毒性相结合的试验方法。结果:附子配伍寒性药物具有配伍减毒作用,和其他三种配伍减毒相比较,以寒制热的配伍减毒作用最强。结论:以药性理论为指导的配伍减毒可以使有毒中药配伍减毒一种新的思路和方法。     

附子配伍文献的系统性评价研究

目的:探讨附子配伍的研究方法和研究结果,为今后开展研究工作提供参考。方法:从中国学术文献网络出版总库检索附子配伍的相关文献进行系统性评价和分析。结果:文献类型以药理学(39.60%)、临床研究(30.20%)及药物分析学(14.09%)为多,配伍类型中补虚药(31.58%)和清热药(21.05%)较多,药对研究以配伍甘草(25.00%)、干姜(21.15%)及大黄(14.42%)居多,溶媒比例多用8倍和10倍,煎煮时间以1 h及30 min为常见,所治疾病以关节炎、疼痛及心衰为重点。结论:通过分析附子配伍研究的倾向、特点及减毒增效机理的研究,为将来进行相关研究奠定扎实的基础。     

花叶型与艾叶型乌头叶片基因组DNA甲基化修饰的MSAP分析

建立乌头叶片DNA甲基化MSAP分析方法,并对不同形状的乌头叶片DNA甲基化修饰位点进行MSAP分析。以花叶型、艾叶型乌头不同部位叶片为实验材料,考察乌头叶片MSAP双酶切反应时间,筛选适宜的选择性扩增引物,并通过计算6%丙烯酰胺凝胶电泳图泳道和条带统计分析叶片甲基化修饰差异。结果 150 ng乌头叶片DNA MSAP双酶切反应体系在37℃条件下,酶切16 h较充分;使用25对筛选出的适宜性引物进行乌头基因组的MSAP选择性扩增,总共获得273个电泳条带,其中无甲基化或单链内甲基化228条,双链内甲基化条带27条,单链外甲基化条带18条,总甲基化率达16.48%;花叶型与艾叶型乌头总甲基化率稍有差异,分别为15.36%,14.34%,并各自获得8条、6条基因组甲基化修饰差异的核苷酸片段,占其总条带数的3.00%,2.26%。通过研究可为乌头植株的分子鉴定、良种选育与栽培,以及乌头的遗传演化等提供新思路。     

乌头叶面微生物菌群变化特征及其与乌头霜霉病相关性

目的:以四川江油栽培乌头为研究对象,探索乌头叶面微生物菌群动态变化特征及其与乌头霜霉病的相关性。方法:收集不同病害等级的乌头霜霉病叶片,摇床震荡与超声结合的方法提取乌头叶面微生物,稀释平板计数法测定乌头叶面细菌,真菌数量。结果:乌头霜霉病发病情况与环境温度相关,患病乌头叶面细菌,真菌数量相较于健康乌头都有所增加,且叶面其他真菌数量随着病害程度的逐渐加重而呈现出较有规律的逐渐增加趋势。结论:乌头霜霉病在其生长期的3月末至5月末发病迅速,且日平均气温15~20℃比较适宜乌头霜霉病病原菌的生长繁殖。乌头叶面真菌数量的变化与乌头霜霉病病害程度呈正相关。     

烘箱烘烤对附子中酯型生物碱的影响

目的:探讨烘箱烘烤对附子中双、单酯型生物碱含量的影响.方法:采用切片→护色→烫漂→烘烤的方式对附子进行加工,以双、单酯型生物碱含量作为检测指标,通过正交设计考察烫漂时间、烘烤温度、烘烤时间对附子中两类生物碱含量的影响.结果:随各因素强度的增加,双酯型生物碱含量减少,单酯型生物碱含量增加.10个加工品中单酯型生物碱含量均满足2010年版《中国药典》中对白附片、黑顺片、淡附片的限量要求,其中6个加工品中双酯型生物碱含量满足2010年版《中国药典》中对白附片、黑顺片的要求.结论:烘箱烘烤加工附子能满足2010年版《中国药典》对双、单酯型生物碱限量的要求.     

乌头块根浸提液对3种牧草的化感效应

乌头Aconitum carmichaeli是传统的大宗中药材之一,广泛种植于四川省江油市,所释放的化感物质严重影响周围和后茬作物的生长发育。试验以当地种植乌头的后茬牧草白三叶、黑麦草和紫花苜蓿为材料,研究了乌头块根浸提液(ETR)浸种对种子萌发和幼苗生长的化感效应。结果表明,牧草品种不同,种子发芽和幼苗生长对ETR浓度的响应也不一样。低浓度的ETR(0.01 g·L^-1)促进紫花苜蓿种子发芽,ETR 1.00 g·L^-1对3种牧草的种子发芽率均有抑制作用。用高浓度的ETR (1.00 g·L^-1)浸种,苗高的最大降幅为:紫花苜蓿(42.05%) ≥白三叶(40.21%)>黑麦草(10.64%)。因此,在乌头-牧草种植体系中,选择对ETR相对不敏感的黑麦草有益于减轻乌头产生的化感效应,提高土地整体生产力。随ETR浸种浓度提高,抑制牧草种子中的蛋白质、淀粉和肌醇磷酸盐水解,降低游离氨基酸、可溶性糖和可溶性磷含量,进而影响种子发芽。此外,高浓度的ETR还显著降低牧草幼苗的根系活力、硝酸还原酶活性和叶绿素含量,说明ETR中的化感成分可抑制养分吸收,硝酸盐同化和光合作用,妨碍幼苗生长。     

乌头叶面细菌、真菌DGGE分析条件的建立与优化

目的:筛选并优化适用于分析乌头叶面细菌、真菌多样性的变性梯度凝胶电泳(DGGE)实验条件。方法:采用Touch Down-PCR技术扩增乌头叶面细菌16 S r DNA V3区域和真菌18 S r DNA~5.8 S r DNA序列,利用该扩增产物对乌头叶面细菌、真菌DGGE电泳条件进行优化。采用DGGE垂直电泳法筛选凝胶变性梯度,时间间隔法优化电泳时间。结果:乌头叶面细菌DGGE最佳分析条件为变性剂梯度30%~65%(Gel 10%),电泳温度60℃,电压120 V,电泳时间7 h。乌头叶面真菌DGGE最佳分析条件为变性剂梯度25%~45%(Gel 8%),电泳温度60℃,电压120 V,电泳时间10 h。结论:利用以上优化条件能有效分离乌头叶面细菌16 S r DNA V3区及真菌18 S r DNA~5.8 S r DNA序列,为乌头叶面细菌,真菌的群落结构PCR-DGGE分析提供可靠的技术支撑。     

乌头全植株各组织部位粗多糖含量的动态差异性考察

目的:比较不同采收期乌头不同组织部位中粗多糖的含量.方法:采用苯酚-硫酸分光光度法测定粗多糖的含量,比较不同采收期乌头母根、子根、须根、茎、叶的粗多糖含量.结果:乌头全植株各组织部位粗多糖含量顺序为子根＞母根＞须根＞叶＞茎,地下部分含量＞地上部分,6月4日子根粗多糖含量最高,6月18日茎、叶、须根粗多糖含量较其他采收期高,6月18日与7月3日母根粗多糖含量接近.结论:该研究初步探索了乌头各组织部位粗多糖的动态变化,为乌头资源的综合利用提供科学依据.     

附子的化学和生物活性研究进展

通过系统查阅附子近40年化学成分和药理作用研究研究文献,对其现代研究进行了综述。分析结果显示附子主要含有生物碱类成分,其中以乌头碱（aconitine）骨架的C-19型二萜生物碱为主,其次为具有海替生碱（hetisan）、维替碱（veatchine）、纳哌啉（napelline）、光翠雀碱（denudatine）等骨架的C-20型二萜生物碱;除生物碱外,附子还含有黄酮、皂苷、多糖、脂肪酸等其他成分。附子的生物活性主要表现为强心、降压、镇痛、抗炎、增强免疫、杀虫、降血糖及毒性等作用。附子现代研究尽管取得了巨大进展,但在阐明其传统药效作用及机制方面,仍存在诸多问题,仍需要进行深入研究。     

先秦至唐对附子的认识和使用——兼论中药材发展演变规律

先秦至唐对附子的认识和使用经历了种种嬗变。从"凶毒之药"到"百药之长",人们对附子的认识不断深入和具体化。附子的药用价值不断被发掘出来。此外,附子还被广泛运用于酿酒技术、农业生产、佛教道教和节日习俗中,其功用日益多样化和日常化。借此可以窥见中药材发展演变的一些规律,如药物与毒物、药与非药之关系;医书记载之传承与整合;中药材功用泛化、日常化等等。     

乌头霜霉病病原菌rDNA-ITS和28S rDNA D1/D2区序列分析

目的明确四川江油地区栽培乌头霜霉病病原菌乌头霜霉Peronospora aconiti rDNA-ITS和28 S rDNA D1/D2区序列,为病害诊断和防治提供理论基础。方法从病株收集病原菌分生孢子及菌丝,提取DNA,扩增rDNA-ITS和28 S rDNA D1/D2片段序列,进行测序分析,并构建邻接(neighbor-joining,NJ)发育树分析病原菌种类。结果检测出的病原菌rDNA-ITS序列与NCBI数据库中霜霉属P.pulveracea、P.aparines相似度为94%,28 S rDNA D1/D2区序列与霜霉属P.pulveracea、P.ficariae、P.bulbocapni相似度达97%。结论分子rDNA-ITS和28 S rDNA D1/D2区序列鉴定的结论和形态学鉴定的结论一致,乌头霜霉病病原菌为霜霉科霜霉属乌头霜霉Peronospora aconiti Yu,其rDNA-ITS和28 S rDNA D1/D2区序列可用于该病原物的鉴定。     

炮天雄质量标准研究

目的: 建立炮天雄的质量标准。 方法: 采用薄层色谱法对苯甲酰新乌头原碱进行定性研究;采用高效液相色谱方法,选用Eclipse XDB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,柱温35℃,流动相A为0.1 mol·L^-1醋酸铵溶液（每1 000 mL加冰醋酸0.5 mL）,B为四氢呋喃-乙腈（15∶25）,梯度洗脱,体积流量1 mL·min^-1,检测波长235 nm。 结果: 炮天雄中水分为10.1%~12.3%;定性鉴别专属性强;苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱分别在0.049 4~1.976,0.023 32~0.932 8,0.049 95~1.998,0.024 46~0.978 56,0.024 91~0.996 48,0.022 02~0.880 8 μg进样量呈良好线性关系,r均为0.999 9;平均回收率分别为98.79%,100.66%,97.06%,97.91%,103.58%,102.77%;RSD分别为1.90%,2.23%,1.91%,1.96%,1.08%,2.19%。 结论: 该方法操作简便,结果准确,可作为炮天雄的质量控制方法。