薄层色谱扫描法测定黄连吴茱萸药对中黄连生物碱的含量

目的:比较黄连中主要生物碱成分在黄连-吴茱萸药对配伍前后的差异.方法:采用TLCS法对黄连单煎液、黄连吴茱萸合煎液、黄连吴茱萸单煎混合液中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的含量进行测定.结果:黄连与吴茱萸配伍后,盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的含量均显著降低,以盐酸小檗碱的减少较为明显.结论:两药合用,黄连生物碱含量均有不同程度降低,说明吴茱萸可制约黄连苦寒之性,为临床两药配伍使用提供了实验依据.     

附子与甘草配伍前后乌头碱和甘草次酸在大鼠体内的药动学比较

目的考察附子与甘草配伍对乌头碱和甘草次酸在大鼠体内药动学的影响。方法雄性SD大鼠156只,按体质量分层随机分为3个药物组,分别单次按25 mL/kg灌胃给予已知乌头碱和甘草次酸含量的附子单煎液、甘草单煎液、附子甘草合煎液。各药物组设给药前和给药后共13个采血时间点,每个时间点4只大鼠,按时间点断头处死动物并采血。血浆样本中乌头碱采用液相色谱-质谱串联(LC-MS/MS)法检测,甘草次酸采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)法检测。血药浓度-时间数据经DAS2.1软件处理计算药动学参数。结果甘草与附子配伍对乌头碱和甘草次酸的溶出无明显影响。大鼠单次灌胃给予单煎液和合煎液后,乌头碱的主要药动学参数:药时曲线下面积(AUC0-t)分别为730.66、538.97 pg.h/L,峰浓度(Cmax)分别为91.43 pg/L、42.47 pg/L,达峰时间(Tmax)分别为1.0 h、7.25 h,半衰期(t1/2)分别为14.69 h、7.81 h;甘草次酸的主要药动学参数:AUC0-t分别为8 159.83 ng.h/L、7 035.89 ng.h/L,Cmax分别为526.5 ng/L、458.25 ng/L,Tmax分别为8 h、12 h,t1/2分别为11.99 h、9.57 h。结论附子配伍甘草后乌头碱和甘草次酸在大鼠体内Tmax推迟,Cmax降低,吸收减少,t1/2缩短。     

交泰丸中肉桂对黄连小檗碱在大鼠体内药动学的影响

目的 考察肉桂挥发油和水提液对黄连小檗碱在大鼠体内药动学的影响.方法 将20只大鼠随机分为4组,分别灌服黄连提取物、黄连提取物加肉桂总提物、黄连提取物加肉桂挥发油、黄连提取物加肉桂水提液,采用HPLC测定大鼠血浆中小檗碱的质量浓度.结果 黄连配伍肉桂总提物后小檗碱的Cmax和AUC均明显增大,达蜂时间提前;肉桂水提液对黄连小檗碱的药动学参数影响不显著,而肉桂挥发油使小檗碱的Cmax和AUC显著增大,但增加的幅度小于肉桂总提物.结论 交泰丸中黄连、肉桂配伍,肉桂能提高黄连小檗碱的的生物利用度,其中肉桂挥发油是小檗碱药动学参数变化的影响因素之一.     

LC-MS/MS 比较研究附子配伍甘草对大鼠体内次乌头碱药动学影响

目的:建立大鼠血浆中次乌头碱的LC-MS/MS检测方法,用于研究附子配伍甘草后次乌头碱在大鼠体内药动学的变化。方法:大鼠分别灌服附子单煎液、附子甘草合煎液,其中次乌头碱含量分别为73.29μg.kg-1、34.85μg.kg-1,LC-MS/MS测定次乌头碱血药浓度,采用3P97药动学软件分别计算其药动学参数。结果:血浆中次乌头碱在1.98～198 ng.mL-1范围内呈现良好的线性关系。附子配伍甘草后次乌头碱在大鼠体内Tmax显著延长,CL显著减小,AUC/dosage显著增大(P<0.05)。结论:附子配伍甘草后次乌头碱在大鼠体内药动学行为发生显著改变。     

LC-MS-MS测定黄连解毒汤中3种生物碱在大鼠血清的含量及其药代动力学研究

目的:建立灵敏、特异、准确、可靠的药根碱、巴马汀、小檗碱在大鼠血清中液质联用(LC-MS-MS)分析方法,用于黄连解毒汤中3种生物碱在正常大鼠体内药代动力学研究.方法:优化药根碱、巴马汀、小檗碱及内标延胡索乙素质谱检测条件,确定相关条件并开展方法学考察.正常大鼠灌胃给予黄连解毒汤,经时取血,样品经处理后将该方法用于3种成分的测定.DAS药代动力学软件拟合房室模型,计算药动参数.结果:在ESI(+)离子化条件下采用MRM工作模式,用,m/z 338～322,351.9～308,336-319.8来分别检测药根碱、巴马汀、小檗碱,同时以m/z 356.1～192.1来检测内标延胡索乙素.药根碱在0.2～25μg·L~(-1)、巴马汀、小檗碱在O.4～50μg·L~(-1)呈良好线性关系.3种生物碱在高、中、低3个浓度的准确度、精密度、稳定性等均符合要求.药根碱、巴马汀、小檗碱在正常大鼠体内药动学过程符合一室开放模型.结论:应用LC-Ms-s技术建立了测定药根碱、巴马汀、小檗碱血药浓度的方法,并成功应用于黄连解毒汤正常大鼠体内这3个成分的药动学研究,为中药复方药动学研究提供了可以借鉴的分析方法.     

甘草与附子配伍对乌头碱、新乌头碱、次乌头碱大鼠药动学的影响

目的:建立HPLC-MS同时测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的方法,并用于研究大鼠口服3种含附子煎液后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的药动学变化。方法:3组大鼠分别灌胃附子煎液(A液)、甘草附子单煎合并液(B液)、甘草附子合煎液(C液),附子剂量均为1.5 g/kg,HPLC-MS法测定乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的血药浓度,用DAS 2.0数理统计软件分别计算其药动学参数。结果:甘草与附子配伍后,三种乌头碱的Cmax、AUC均降低,MRT、t1/2均延长,Tmax无明显变化。甘草附子合煎液相比于甘草附子单煎合并液,Cmax、AUC更低,MRT、t1/2更长。结论:甘草能够显著影响附子中三种乌头碱的药动学。     

大黄与黄连配伍对黄连生物碱类成分的溶出影响研究

目的 分析大黄-黄连不同比例合煎时生物碱类成分的溶出变化,研究配伍对成分溶出的影响.方法 采用反相HPLC方法,用加离子对试剂的乙腈-水流动相洗脱,分析配伍合煎液、黄连单煎液和大黄单煎液.结果 大黄-黄连1∶2～2∶1之间的5个配伍量中小檗碱溶出随大黄所占比例增大而降低;且黄连中4个主要生物碱成分溶出随大黄所占比例增加有相似的降低趋势.结论 本实验分析了大黄-黄连配伍合煎液中4个主要生物碱类成分溶出的变化,对临床应用和含有大黄-黄连配伍的新药开发有一定的指导意义.     

黄连与人参配伍后生物碱的含量变化

目的:探讨黄连与人参不同配伍剂量对水煎液中盐酸小檗碱、盐酸药根碱含量的影响。方法:人参黄连分别按1∶0,2∶1,1.5∶1,0.5∶1比例配伍,煎煮制备水煎液,采用HPLC测定不同配伍剂量水煎液中黄连生物碱的含量。结果:人参-黄连不同配伍样品中盐酸小檗碱质量分数分别为36.68,39.41,44.33 mg·g-1,盐酸药根碱分别为8.607,8.349,10.790 mg·g-1,二者含量随人参用量的减少而增加。结论:黄连-人参配伍后不利于盐酸小檗碱和盐酸药根碱的溶出,按0.5∶1配伍时黄连中2种生物碱含量均最高。     

吴茱萸对黄连有效成分在大鼠体内组织分布的影响

目的:考察吴茱萸对左金丸中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱在大鼠组织中分布动力学的影响,探讨吴茱萸的引经作用机制。方法:大鼠分别灌胃给予黄连、黄连吴茱萸合煎液,于给药后不同时间点采集组织样本,利用UPLCMS/MS测定组织中3种黄连生物碱类成分的经时变化,采用DAS 2.0软件计算组织分布动力学参数、相对摄取率(Re)和峰浓度比(Ce)。结果:左金丸组大鼠肝组织中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的药-时曲线下面积分别为(7 051.268±518.354),(2 179.139±195.617)ng·g-1·h,药峰浓度分别为(1 645.961±129.862),(383.889±19.526)ng·g-1,与黄连组比较显著增加。3种生物碱类成分的在肝中Re分别为1.338,1.475和1.065,Ce分别为1.548,1.751和1.369;肺中Re分别为0.985,0.780和0.930,Ce分别为0.834,1.051和0.905。结论:吴茱萸可能是通过增加黄连生物碱类成分在大鼠肝中分布和减少其在肺中分布来发挥引经作用。     

栀子、黄连、地骨皮合煎对生物碱和栀子苷含量的影响

目的：研究含有黄连、栀子、地骨皮三味药合煎和分煎对煎液中总生物碱、小檗碱、栀子苷含量影响。方法：采用高效液相色谱法测定。结果：小檗碱、总生物碱含量以黄连单煎为最高，栀子苷含量以栀子单煎最高。结论：在黄连、栀子、地骨皮三药共存时，不宜采用合煎的方法。     

黄连提取工艺的研究

目的：通过绘制黄连在不同溶剂中的总碱浸出-时间曲线,确定其正交优选试验中的因素及水平。方法：以黄连总碱浸出量为指标,绘制总碱浸出-时间曲线,以总碱浸出率,盐酸小檗碱浸出量、浸膏得率为评价指标,用正交试验法优选黄连提取工艺。结果：表明黄连总碱的浸出量与溶剂量、溶剂种类、浸提时间等因素有关;黄连最佳提取工艺：50%乙醇回流提取3次,每次10倍量溶剂,提取2h。结论：总碱浸出一时间关系的考察对正交试验设计具有指导意义;黄连提取工艺优选为其工业化制剂生产提供了实验依据。     

黄连药性研究

对黄连药性研究进行了归纳、总结、分析和讨论,为以后黄连药性的研究提供新思路。采用不同的受试对象研究黄连药性各有优缺点,很难找到一个合适的受试对象。这些研究在某种程度上能论证黄连为寒药,但是建立寒性药物的评判标准仍是一条漫长之路。交叉学科的融入可能为未来研究黄连药性开启新的探索之门。DNA甲基化/去甲基化、染色质重塑、组蛋白修饰是应答机体内外环境条件变化而进行的表观遗传修饰方式。黄连作为一种干扰机体内环境变化的因素,可能反向调节机体内环境所引起的表观遗传修饰。因此,从表观遗传学角度研究黄连药性可能是未来研究的方向之一。     

基于尿液代谢组学研究黄连和胆黄连对热证药效作用机制的差异性

利用超高效液相色谱与LTQ-Orbitrap-MS串联质谱仪的尿液代谢组学方法,研究黄连、胆黄连对热证模型大鼠药效作用机制的差异性,探讨胆黄连炮制的科学性。采用大鼠灌胃附子、干姜、肉桂水煎液15 d并皮下注射干酵母混悬液致热证模型,给药15 d后采集各组大鼠造模后0~6,6~12,12~24 h的尿样;采用主成分分析(PCA)、偏最小二乘-判别分析(PLSDA)法等技术进行数据处理。正常组与模型组在0~6,6~12 h达到分离,12~24 h出现重叠,分离趋势不明显;黄连组和胆黄连组0~6 h大鼠尿样与模型组分离,接近于正常组;黄连组和胆黄连组在0~6,6~12 h大鼠尿样有分离趋势。鉴定30个与热证相关的差异代谢物,结果表明,黄连经猪胆汁炮制后对热证模型大鼠的整体药效作用发生改变,胆黄连解热作用具有多靶点、起效快、作用强度较强的特点,主要通过对胆碱能神经递质、氨基酸代谢、嘌呤代谢的调节发挥解热作用。     

石柱黄连指纹图谱研究

目的：建立石柱道地药材黄连的HPLC指纹图谱，为科学评价与有效控制黄连质量提供新方法。方法：RP-HPLC法测定石柱GAP基地10批黄连样品。色谱条件：迪马Diamonsil C18色谱柱，乙腈-0．05mol／L磷酸二氢钾（磷酸调pH值3）为流动相进行梯度洗脱，检测波长270nm，流速0．8ml／min，柱温25％。结果：10批黄连样品得到的指纹图谱有16个共有峰，通过与对照品的保留时间及紫外光谱比较，11，12，13，14，15号峰分别为伪小檗碱、药根碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱。结论：建立的HPLC指纹图谱分析法能较好反映黄连中的主要生物碱成分，可用于黄连的质量控制。     

复方黄连软膏的质量研究

本文用薄层层析方法对复方黄连软膏进行了定性研究。并依据酸性染料比色法的原理,于波长420nm处测定了该制剂中黄连总生物碱的含量。本法简单易行,重现性好,可用于该制剂的质量控制。     

黄连总生物碱纯化工艺研究

目的优选黄连最佳纯化工艺。方法对影响总生物碱纯化效果的因素进行了系统考察。结果黄连总生物碱的最佳纯化工艺为10倍量0.5%稀硫酸,用石灰乳调pH 9,静置2h,滤过,滤液用盐酸调pH1,加氯化钠使含盐量达10%,静置24h,滤过,沉淀水洗至pH 5。结论优选的黄连总生物碱纯化工艺稳定可行。     

Subchronic toxicity study of Coptidis Rhizoma in rats

Ethnopharmacological relevance

Coptidis Rhizoma (CR) is a medical herb from the family Ranunculacease that has been used to treat gastroenteritis, dysentery, diabetes mellitus, and severe skin diseases.

Aim of the study

To evaluate the no-observed-adverse-effect level (NOAEL) and the toxicity of CR, following repeat oral administration to rats for 13 weeks.

Materials and methods

CR was administered by oral gavage to groups of rats (n=10/group, each sex) at dose levels of 0 (control), 25, 74, 222, 667 or 2000 mg/kg/day 5 times per week for 13 weeks. Mortality, clinical signs, body weights, food consumption, hematology, serum chemistry, urinalysis, vaginal cytology and sperm morphology, organ weights, gross and histopathological findings were compared between control and CR groups.

Results

Urinalysis showed a significant increase in N-acety1-β-glucosaminidase in males in the 2000 mg/kg/day group (P<0.01). However, no mortality or remarkable clinical signs were observed during this 13-week study. No adverse effects on body weight, food consumption, hematology, serum chemistry, organ weights, gross lesion, histopathology, vaginal cytology, sperm motility, or deformity were observed in the males or female rats treated with CR.

Conclusions

On the basis of these results, the NOAEL of CR is determined to be 667 mg/kg/day for males and 2000 mg/kg/day for females.     

药用黄连的原植物研究

作者通过对全国商品黄连主产区及野生黄连的调查研究、标本采集、分类整理,确定我国药用黄连的原植物有8个种、2个变种,其中发现2个新种及一个新变种;编制了黄连属植物分种检索表;并对各种黄连根茎厚壁细胞的有无及存在部位以及生长环境进行了讨论.     

4种黄连生物碱的抑菌作用

目的小檗碱,药根碱,黄连碱和巴马亭是黄连中4种主要的生物碱,为深入研究4种黄连生物碱成分的抑菌特性差异,本实验对它们的抑菌谱和抑菌活性进行了实验研究。方法以从石柱黄连中提取的4种生物碱为实验药物,采用抑菌圈实验法,在2 000μg/mL药液浓度下对常见的19种微生物进行了药物敏感性试验,并通过比浊法对敏感菌的最小抑菌浓度(MIC)进行了检测。结果4种生物碱成分的敏感菌范围相同但抑菌活性不同,其中小檗碱的抑菌活性最大,黄连碱和巴马亭次之,药根碱最小;4种黄连生物碱对革兰氏阳性菌的抑制活性大于革兰氏阴性菌和酵母菌;每种生物碱对耐药金葡菌(MR)和金葡菌的抑菌能力基本相同。结论4种黄连生物碱均为黄连的抗菌活性成分,抑菌谱相同,但抑菌活性有较大差异;4种黄连生物碱对耐药金葡菌的耐药性具有消除作用。     

雅连HPLC指纹图谱的初步研究

目的建立雅连的HPLC指纹图谱鉴定方法。方法用RP-HPLC(DAD)法,梯度洗脱,测定雅连的指纹图谱,并作相似度比较分析。结果初步建立了雅连的指纹图谱。结论HPLC指纹图谱法重现性好,可作为黄连的一项质控指标。