归芪多糖对早衰WI-38细胞端粒酶活性的影响

目的观察归芪多糖对过氧化氢(H2O2)诱导的WI-38早衰细胞端粒酶活性的影响,并探讨其作用机制。方法 H2O2诱导建立早衰WI-38细胞模型,MTT法检测不同浓度H2O2对WI-38细胞活力的影响,筛选出用于诱导细胞早衰的H2O2浓度。实验细胞分为正常组、模型组和归芪多糖组,化学染色法和ELISA检测归芪多糖对衰老细胞β-半乳糖苷酶和端粒酶活性的影响。结果 200μmol/L H2O2可诱导18代WI-38细胞出现早衰。归芪多糖干预后早衰细胞β-半乳糖苷酶和端粒酶活性均未呈现出衰老样变化,与模型组比较差异有统计学意义(P0.01),与正常组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论归芪多糖可明显增强衰老细胞的端粒酶活性并显著抑制衰老相关β-半乳糖苷酶活性。     

黄芪和当归配伍对小鼠造血干细胞衰老模型细胞增殖的影响

研究黄芪和当归配伍对小鼠造血干细胞衰老模型细胞增殖能力的影响及其作用机制。大鼠灌胃给药制备含药血浆后,体外培养小鼠造血干细胞,实验设空白对照组、模型组、空白血浆组、芪归1∶1血浆组、芪归10∶1血浆组、单用当归血浆组、单用黄芪血浆组,以三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导小鼠造血干细胞衰老,以含药血浆作用于造血干细胞衰老模型。SA-β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老率,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测Cyclin D1,P21,P53 mRNA表达,Western blot检测Cyclin D1蛋白表达。结果显示,t-BHP作用于造血干细胞后,可使衰老细胞增加,细胞增殖能力降低,G0/G1期细胞增多,G2/M+S期细胞减少,同时伴Cyclin D1表达降低,P53,P21表达增强。黄芪、当归、芪归1∶1配伍、芪归10∶1配伍含药血浆可降低衰老细胞阳性率,使G0/G1期细胞减少,G2/M+S期细胞增加,细胞增殖能力增强,并使Cyclin D1基因和蛋白表达增强,P53,P21基因表达降低。以上效应以芪归1∶1配伍的作用为强。结果表明,t-BHP可使造血干细胞衰老,细胞增殖能力降低。黄芪、当归及其配伍可抑制造血干细胞衰老,促进造血干细胞增殖和细胞周期转换,以芪归1∶1配伍的作用为强。其作用机制可能与其上调细胞周期正性调节因子表达,下调细胞周期负性调节因子表达,从而促进细胞由静止期进入增殖期有关。     

红芪多糖影响实验性脾虚大鼠胃黏膜中p53基因蛋白表达的实验研究

目的:研究红芪多糖对实验性脾虚大鼠胃黏膜组织中p53基因蛋白的表达是否有影响.方法:将SPF级Wistar大鼠60只随机分为空白对照组,模型对照组,黄芪多糖高、中剂量组和红芪多糖高、中剂量组6组,每组10只.空白对照组大鼠正常饲养,其余5组采用苦寒泻下法制备脾虚证模型.造模成功后,药物组分别用黄芪多糖、红芪多糖灌胃30d.处死大鼠,取胃标本,免疫组化染色,光镜观察,计算大鼠胃黏膜组织中p53基因蛋白表达率.结果:模型对照组p53阳性表达率较空白对照组升高,差别有统计学意义(P＜0.01),红蓖多糖高、中剂量组及黄芪多糖高剂量组p53阳性表达率较模型对照组降低,差别有统计学意义(P＜0.01).结论:红芪多糖对p53基因蛋白表达有一定的调控作用.     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞p16基因表达的影响

为探明树舌多糖GF对小鼠HepA瘤细胞 p16基因表达的影响。本实验用链霉菌抗生素蛋白 -过氧化酶免疫组化法来测定细胞中p16蛋白含量 ,通过多媒体图像分析系统分析实验结果。结果表明 :树舌多糖GF组、猪苓多糖组与荷瘤对照组比较 ,p16表达增加均非常显著 (P <0 .0 1) ,树舌多糖组与猪苓多糖组比较 ,差异非常显著 (P <0 .0 1)。因此可初步认为使抑癌基因p16表达增强 ,是树舌多糖GF抗瘤作用机制之一。树舌多糖GF作用后小鼠HepA瘤细胞中 p16、Rb基因表达增强 ,共同作用可启动细胞周期的负反馈调节 ,细胞周期的负调节增强 ,从而阻止无限制从G1期进入S期 ,抑制细胞增殖失控 ,起到抗肿瘤作用。     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞p16基因表达的影响

为探明树舌多糖GF对小鼠HepA瘤细胞p16基因表达的影响，本实验用链霉菌抗生素蛋白－过氧化酶免疫组化法来测定细胞中p16蛋白含量，通过多媒体图像分析系统分析实验结果，结果表明，树舌多糖GF组，猪苓多糖组与荷瘤对照组比较，p16表达增加均非常显著（P＜0．01），树舌多糖组与猪苓多糖组比较，差异非常显著（P＜0．01），因此可初步认为使抑癌基因p16表达增强，是树舌多糖GF抗瘤作用机制之一，树舌多糖GF作用后小鼠HepA瘤细胞中p16，Rb基因表达增强，共同作用可启动细胞周期的负反馈调节，细胞周期的负调节增强，从而阻止无限制从G1期进入S期，抑制细胞增殖失控，起到抗肿瘤作用。     

哈蟆油对雌性衰老大鼠肝脏组织p16，p21和细胞周期蛋白D1蛋白表达的影响

 目的 探讨哈蟆油(OR)对D-半乳糖所致雌性衰老大鼠肝脏组织p16、p21和细胞周期蛋白D1蛋白表达的影响,进一步探讨哈蟆油延缓雌性大鼠机体衰老机制。方法 SPF级SD雌性青年大鼠40只随机分为D-半乳糖组、维生素E组、哈蟆油高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组8只,D-半乳糖颈背部皮下注射42 d,建立亚急性衰老模型。另取雌性青年大鼠8只,同样部位每日注射生理盐水,作为空白对照组。第15天开始灌胃给药,给药时间28 d。给药结束后,免疫组化法检测衰老大鼠肝脏组织p16和p21蛋白的表达情况,蛋白免疫印迹法检测哈蟆油对雌性衰老大鼠肝脏组织细胞周期蛋白D1表达的影响。结果 雌性衰老大鼠肝脏组织免疫组化结果表明,p16和p21 多为胞浆表达,弥漫性、灶性分布均有。D-半乳糖组p16和p21阳性细胞积分与空白组比较升高,差异有显著性(P＜0.01)。与D-半乳糖组相比,哈蟆油中、低剂量组,p16阳性细胞积分降低,差异有显著性(P值均＜0.01),哈蟆油各剂量组p21阳性细胞积分降低,差异有显著性(P值均＜0.01)。肝脏组织蛋白免疫印迹法结果表明,D-半乳糖组肝脏组织细胞周期蛋白 D1蛋白表达与空白组比较降低,差异有显著性(P＜0.01)。哈蟆油各剂量组细胞周期蛋白 D1蛋白表达与D-半乳糖组比较,表达均升高(P值均＜0.01),哈蟆油高剂量组尤为明显。结论 哈蟆油可降低肝脏组织p16、p21蛋白的高表达。同时显著提高细胞增殖正性调控因子细胞周期蛋白 D1蛋白的表达,促进衰老雌性大鼠肝细胞增殖。哈蟆油延缓雌性衰老作用可能通过调控肝脏p16,p21,细胞周期蛋白 D1信号通路来促进有关增殖调控蛋白表达发挥延缓衰老作用。     

人参三七川芎提取物抑制p53基因表达促进衰老内皮细胞增殖的研究

目的:探讨益气活血中药对血管内皮细胞衰老和p53基因表达的干预作用。方法:分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC),传代培养至第4代,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ,10-6mol/L,48h)诱导其衰老;分为空白对照组、AngⅡ组、中药提取物组和替米沙坦组;观察各组不同时间点β-半乳糖苷酶染色、CCK-8细胞计数、细胞周期分析、p53 m RNA及蛋白表达。结果:AngⅡ组较空白对照组β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数增加(P<0.05);CCK-8检测活细胞数减少(P<0.05);细胞大量停滞于G0/G1期,而S期和G2/M期逐渐消失(P<0.05)。中药提取物组和替米沙坦组β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数下降(P<0.05),CCK-8活细胞数增加(P<0.05),细胞周期阻滞改善(P<0.05)。中药早期作用更加明显(P<0.05)。AngⅡ呈时间依赖性上调p53 m RNA和蛋白表达;中药提取物和替米沙坦两组p53表达均明显下调(P<0.05);中药早期作用更加明显(P<0.05)。结论:益气活血中药能够有效地延缓血管内皮细胞衰老,其机制可能与抑制p53基因表达有关。     

辣椒素对胰腺癌SW1990细胞作用的研究

目的:探讨辣椒素对胰腺癌细胞株SW1990细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法:不同浓度的辣椒素(0,100,150,200,250,300μmol·L-1)作用胰腺癌SW1990细胞12,24,48 h后,CCK-8法检测胰腺癌细胞株SW1990细胞的增殖作用;辣椒素(0,150,200,250μmol·L-1)作用胰腺癌SW1990细胞24 h后,采用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡细胞的比率,分光光度法检测Caspase-3(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3)酶活性,Western blot方法检测SW1990细胞中p38和p53蛋白水平表达。结果:辣椒素对胰腺癌细胞SW1990具有明显的生长抑制作用,并呈现时间、剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,细胞周期被阻滞在G1/G0期,细胞凋亡率随药物浓度的增加而增加;磷酸化的p38,p53蛋白的表达量增加。结论:辣椒素可通过阻滞G1/G0细胞周期和诱导凋亡抑制胰腺癌细胞SW1990的生长,其分子机制可能是通过上调p38及其下游p53的表达,并进一步激活Caspase-3,从而促进SW1990细胞发生凋亡。     

当归多糖对衰老模型小鼠抗氧化作用及p16蛋白表达水平的影响

目的:观察当归多糖对衰老模型小鼠脑组织p16蛋白表达及不同组织中单胺氧化酶(MAO)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响,探讨当归多糖治疗衰老的作用机制.方法:将昆明种小鼠60只随机分为空白对照组、模型对照组、脑复康组和当归多糖高、中、低剂量组,每组10只;腹腔联合注射D-半乳糖和亚硝酸钠(NaNO2)建立衰老小鼠模型;脑复康组灌胃脑复康(200 μg/g),当归多耱低、中、高剂量组灌胃当归多糖(依次为100,200,400 μg/g),空白对照组和模型对照组灌胃等体积的生理盐水,连续8周;眼球采血处死小鼠,采用ELISA法检测脑组织p16蛋白的含量,比色分析法测定脑、肝、肾组织MAO活性及肝、肾组织CAT活性.结果:与空白对照组对比,模型对照组小鼠p16蛋白的表达升高,MAO活性升高,CAT活性降低,差别有统计学意义(P＜0.01);当归多糖各剂量组小鼠脑组织p16蛋白表达减少、MAO活性降低,肝组织CAT活性升高,肾组织MAO活性降低、CAT活性升高,与模型对照组对比,差别有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);而与脑复康组对比,当归多糖各剂量组的上述指标均无统计学意义(P＞0.05).结论:当归多糖可以降低衰老小鼠脑组织p16蛋白的表达,降低脑及肾组织MAO的活性,增强肝组织和肾组织CAT的活性,其机制可能是通过抑制衰老细胞的增殖而起到延缓衰老的作用.     

基于microRNA-34a/SIRT1/p53通路探讨三七皂苷R_1对血管内皮细胞衰老的影响

该研究旨在探讨三七皂苷R_1能否通过调控miRNA-34a/SIRT1/p53通路发挥延缓H_2O_2诱导的血管内皮细胞衰老的作用。以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为研究对象,建立H_2O_2诱导的衰老模型,以白藜芦醇作为阳性对照药,实验分为青年组、H_2O_2模型组、三七皂苷R1组、白藜芦醇组。药物组提前加入三七皂苷R1(30μmo L·L~(-1))或白藜芦醇(10μmo L·L~(-1))干预24 h,然后用H_2O_2(100μmo L·L~(-1))造模4 h,最后换成完全培养基培养24 h。采用衰老特异性β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法鉴定细胞衰老程度,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,WST-1法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,QRT-PCR检测miRNA-34a,SIRT1和p53的核酸表达,Western-blot技术检测SIRT1,p53和衰老相关蛋白p21,p16的蛋白表达。结果发现,与模型组相比,三七皂苷R1组和白藜芦醇组可有效减低衰老内皮细胞的β-半乳糖苷酶染色阳性率,增强细胞增殖能力和SOD活力,减少G0/G1期细胞比例,增加S期细胞比例,抑制了miRNA-34a和p53的核酸表达,促进了SIRT1的核酸表达,此外抑制了p53,p21和p16的蛋白表达,促进了SIRT1的蛋白表达,差异均有统计意义(P0.05)。该研究表明,H_2O_2诱导的衰老的内皮细胞可以作为衰老研究的模型,三七皂苷R1延缓血管内皮细胞衰老的效果明显,其机制可能是通过调控miRNA-34a/SIRT1/p53通路延缓了血管内皮细胞衰老的进程。     

癌痛消胶囊调节小鼠荷H22移植性肝癌细胞VEGF,p53和p21ras表达的实验研究

目的:通过观察癌痛消胶囊调节小鼠荷H22 移植性肝癌细胞中血管内皮生长因子(Vascularen dothelialgrowthfactor,VEGF)、p53和p21ras的表达作用,以探讨该药抑制肿瘤的作用机理。方法:昆明种雄性小白鼠60只,按随机区组分为6组(A -F组) ;A -E组每鼠均于前肢右腋皮下接种0 2mlH22 肿瘤细胞悬液(浓度为1×107/ml) ,接种24h后按体重给药。A组、B组、C组分别给予大、中、小剂量的癌痛消胶囊,D组予康赛迪胶囊,E组予生理盐水,均灌胃给药,每日1次。连续用药10天,停药24h ,称重并处死动物,剥取瘤块称重,计算出肿瘤生长抑制率,用免疫组化法检测癌细胞中VEGF ,p53 ,p21ras ,VHL的表达程度。F组予饲料及水分正常饲养。结果:A ,B ,C ,D组均有明显的抑瘤作用,其中以A组的抑瘤作用最明显(P<0 05或P<0 01)。造模各组动物的肝癌细胞中均见VEGF ,p53和p21ras的阳性染色,但阳性表达程度不同,与B ,C ,E组比较,癌痛消胶囊大剂量组和康赛迪胶囊组均可明显降低肝癌细胞中VEGF ,p53和p21ras的阳性表达(P<0 05或P<0 01)。结论:癌痛消胶囊对小鼠H22 移植性肝癌有抑瘤作用,抑制肿瘤生长的机理可能与下调VEGF ,p53和p21ras的水平有关。     

p27和p21在血管平滑肌细胞增殖信号传导中的作用机制研究

目的　研究p2 7及p2 1在血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法　分离SD大鼠主动脉中层平滑肌,培养平滑肌细胞。实验前无血清培养基培养4 8h ,使细胞进入静止期。以无血清组为对照组,培养基中分别加入血小板源性生长因子-BB(PDGF -BB) 2 0 μg/L和AngⅡ10 -6M ,分别在刺激6 ,12 ,2 4h收集细胞。采用Western蛋白印记法,检测平滑肌细胞内p2 7和p2 1蛋白表达量。结果　与AngⅡ组比较,PDGF -BB组p2 7蛋白表达量明显下降,刺激2 4hp2 7蛋白表达量下降幅度最大,较对照组降低5 9.32 % ;AngⅡ组p2 7光密度值与对照组相近,比较无显著性差异。PDGF -BB组p2 1蛋白表达量则升高,刺激2 4h时PDGF -BB组光密度值较对照组增加了6 6 .95 % ,较AngⅡ组增加了10 1.14 % ,PDGF -BB组与对照组和AngⅡ组比较均有显著性差异(P <0 .0 1) ;AngⅡ组较对照组减少17% ,2组比较无显著性差异。结论　p2 7蛋白表达量在血管平滑肌细胞增殖中降低,而p2 1蛋白表达量升高,两者在血管平滑肌细胞增殖中的作用不同。     

艾灸对亚急性衰老大鼠肝组织羰基毒化及p19ARF、p53 mRNA表达的影响

目的：研究温和灸对亚急性衰老大鼠肝组织羰基毒化及p19ARF、p53 mRNA表达的影响。方法：SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸治疗组和维生素E治疗组。连续大剂量腹腔注射D-半乳糖制备亚急性衰老大鼠模型,艾灸治疗组采用温和灸“肾俞”穴进行治疗。采用生物化学比色法检测各组大鼠肝组织蛋白质羰基含量,应用荧光定量PCR技术检测大鼠肝组织p19ARF、p53 mRNA的表达。结果：与正常组比较,模型组大鼠肝组织蛋白质羰基含量显著升高（P<0.01）,p19ARF、p53 mRNA表达均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,艾灸治疗组、维生素E治疗组肝组织蛋白质羰基含量显著下降(P<0.01,P<0.05),p19ARF、p53 mRNA表达均显著降低（P<0.01,P<0.05）。结论：温和灸“肾俞”穴能降低亚急性衰老大鼠肝组织蛋白质羰基含量,下调肝组织p19ARF、p53 mRNA的表达。     

自拟善胃方对萎缩性胃炎癌前病变患者p16、p21的影响

目的　观察自拟善胃方对慢性萎缩性胃炎 (CAG)伴有胃粘膜异型增生 (Dys)和 (或 )肠上皮化生 (IM)的治疗效果 ,并观察抑癌基因蛋白p16 (p16 )以及癌基因蛋白 p2 1(p2 1)在治疗前后的表达情况。 方法　将内镜和病理确诊为CAG且伴有Dys和 (或 )IM的患者 6 0例 ,随机分为治疗组和对照组。治疗组 30例 ,给予善胃方 ;对照组 30例 ,给予猴头菌片 ,两组均用药 12周。结果　 1)善胃方在总体疗效方面(90 .0 0 % )优于猴头菌片对照组 (5 6 .6 7% ) ,P <0 .0 5 ;2 )中药治疗组患者治疗前后腺体萎缩程度缓解明显优于对照组 ,P <0 .0 5 ;3)中药治疗组患者治疗前后粘膜Dys、IM改善显著优于对照组 ,P <0 .0 5 ;4 )中药治疗组中 ,粘膜p16表达经治疗显著提高 ,P <0 .0 5 ,而对照组治疗前后 p16表达水平无显著变化 ;5 )中药治疗组中 ,粘膜 p2 1表达经治疗显著降低P <0 .0 1,而对照组治疗前后p2 1表达水平无显著变化。 结论　中药善胃方对萎缩性胃炎有良好的治疗作用 ,并在一定程度上可使粘膜Dys、IM改善 ,提高 p16的表达 ,降低 p2 1的表达。     

自拟善胃方对萎缩性胃炎癌前病变患者p16、 p21的影响

目的观察自拟善胃方对慢性萎缩性胃炎(CAG)伴有胃粘膜异型增生(Dys)和(或)肠上皮化生(IM)的治疗效果,并观察抑癌基因蛋白p16(p16)以及癌基因蛋白p21(p21)在治疗前后的表达情况.方法将内镜和病理确诊为CAG且伴有Dys和(或)IM的患者60例,随机分为治疗组和对照组.治疗组30例,给予善胃方;对照组30例,给予猴头菌片,两组均用药12周.结果 1)善胃方在总体疗效方面(90.00%)优于猴头菌片对照组(56.67%),P<0.05;2)中药治疗组患者治疗前后腺体萎缩程度缓解明显优于对照组,P<0.05;3)中药治疗组患者治疗前后粘膜Dys、IM改善显著优于对照组,P<0.05;4)中药治疗组中,粘膜p16表达经治疗显著提高,P<0.05,而对照组治疗前后p16表达水平无显著变化;5)中药治疗组中,粘膜p21表达经治疗显著降低P<0.01,而对照组治疗前后p21表达水平无显著变化.结论中药善胃方对萎缩性胃炎有良好的治疗作用,并在一定程度上可使粘膜Dys、IM改善,提高p16的表达,降低p21的表达.     

肾康注射液对系膜细胞肥大及p21~(CIP1/WAF1)、p27~(KIP1)表达的影响

目的观察肾康注射液对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞肥大及p21~(CIP1/WAF1)(p21)、p27~(KIP1)(p27) mRNA及蛋白质表达的影响。方法将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为6组,分别为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加肾康注射液高、中、低剂量组,用[~3H]胸腺嘧啶核苷([~3H]TdR)及[~3H]亮氨酸([~3H] Leu)掺入法反应细胞DNA及蛋白质的合成情况,RT-PCR、Western blot检测p21mRNA及p21、p27蛋白质表达情况。结果高糖培养肾小球系膜细胞蛋白质合成增加,DNA合成减少,p21mRNA及蛋白质、p27蛋白质表达增加；肾康注射液组与高糖组比较,蛋白质合成减少,DNA合成增加,p21mRNA及蛋白质、p27蛋白质表达降低。结论肾康注射液可能部分通过降低p21、p27过表达来阻止高糖诱导肾小球系膜细胞的肥大反应。     

甘草与白术配伍对IEC-6细胞p53,p21基因表达的影响

通过研究不同剂量甘草与白术配伍对DFMO模型小肠上皮细胞(IEC-6)增殖及p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,探讨甘草与白术配伍对细胞增殖影响的分子基础.采用流式细胞术分别检测药物对IEC-6细胞分裂速度及细胞周期的影响,qRT-PCR检测药物对IEC-6增殖相关基因p53,p21 mRNA的影响,Western blot检测药物对IEC-6细胞p53,p21蛋白表达的影响.白术颗粒可上调DFMO模型IEC-6细胞内p53,p21 mRNA和蛋白的表达水平;而甘草颗粒与白术颗粒不同比例配伍均能显著下调单独白术颗粒作用对DFMO模型IEC-6细胞p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,促进IEC-6细胞的增殖.对于DFMO模型IEC-6细胞,配伍用药甘草能调和白术对小肠上皮细胞的影响.     

连黛胶囊对胃肠肿瘤p21ras和突变型p53蛋白表达调节作用的临床研究

目的研究连黛胶囊对胃肠肿瘤p21ras和突变型p53蛋白表达的调节作用.方法选择临床中晚期胃肠肿瘤患者45例,随机分为治疗组和对照组,治疗组30例,在对症支持疗法的基础上口服连黛胶囊,对照组15例仅用对症支持疗法,观察治疗前后血清p21ras和突变型p53蛋白含量变化,同时观察生存质量的变化.结果治疗组治疗后血清p21ras和突变型p53蛋白含量显著降低(P＜0.01,P＜0.05),生存质量评分明显提高(P＜0.05).对照组各指标治疗前后差异无显著性意义.结论连黛胶囊具有调节胃肠肿瘤p21ras和突变型p53蛋白表达的作用.     

Caesalpinia sappan induces cell death by increasing the expression of p53 and p21WAF1/CIP1 in head and neck cancer cells

Caesalpinia sappan L. (C. sappan) has been used in Oriental medicine as an antitumor agent. The present study shows the effects of the chloroform extract of C. sappan on cell death in head and neck cancer cell lines. The viability of HNSCC4 and HNSCC31 cells (head and neck cancer cell lines) was noticeably decreased compared to that of HaCaT cells (control group) in the presence of chloroform extract. No significant difference was observed in the viability of HNSCC4 and HNSCC31 cells when compared with HaCaT cells in the presence of n-butanol, methanol, and water extracts. Exposure to the chloroform extract of C. sappan resulted in an increase in the Sub-G1 phase of the cell cycle and condensation and shrinkage of nuclei in the HNSCC4 and HNSCC31 cells. The levels of p53 and p21WAF1/CIP1 were also increased in the HNSCC4 and HNSCC31 cells. The results suggest that the chloroform extract of C. sappan may increase cell death in the HNSCC4 and HNSCC31 cells, which is linked to increased cellular levels of p53 and p21WAF1/CIP1.