大黄虫丸对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖和凋亡的影响

目的从细胞增殖和凋亡角度探讨大黄虫丸治疗慢性粒细胞白血病的可能机理。方法 16只裸鼠随机分为空白组和中药高、中、低剂量组,每组4只。中药高、中、低剂量组分别给予浓度为1.97、0.9、0.45 g/ml的大黄虫丸溶液灌胃,每组0.2 ml/(10 g·d),每日1次,连续7天,空白组给予等量生理盐水。停药次日,分离血清制备大黄虫丸含药血清。应用MTT法检测大黄虫丸含药血清对慢性粒细胞白血病系K562细胞增殖的影响,细胞克隆形成实验检测对细胞克隆形成的影响,用Annexin V FITC/PI法检测对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果中药高剂量组在72 h时生长抑制率明显高于中药中、低剂量组(P0.01)。中药各剂量组克隆形成率较空白组明显下降(P0.01),中药中、高剂量组克隆形成率明显低于中药低剂量组(P0.01)。中药高剂量组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率及合计凋亡率均较中药低、中剂量组升高明显(P0.05或P0.01)。中药低、中、高剂量组G0/G1期细胞显著高于空白组,G2/M期细胞下降(P0.01),并且以中药高剂量组明显。结论大黄虫丸能抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡,将其阻滞于G0/G1期,并且高剂量的大黄虫丸效果最好。     

大黄、虫对药对雌孕激素负荷大鼠子宫肌瘤模型孕激素及其受体的影响

目的 研究大黄、(庶虫)虫对大鼠子宫肌瘤模型孕激素及其受体的影响.方法 将70只SD大鼠随机分为7组:正常对照组、模型组、大黄(庶虫)虫小剂量组、大黄(庶虫)虫中剂量组、大黄(庶虫)虫大剂量组、大黄(庶虫)虫丸组、桂枝茯苓胶囊组,采用雌孕激素负荷法建立大鼠子宫肌瘤模型,放射免疫法测定大鼠血清孕激素(P)水平,免疫组织化学染色观察大鼠子宫平滑肌细胞孕激素受体(PR)的表达.结果 模型大鼠血清中P水平,子宫平滑肌细胞PR的表达明显高于正常大鼠,大黄(庶虫)虫可降低血清中P水平,抑制平滑肌细胞PR的表达.结论 P及PR在子宫肌瘤生长中起重要作用,这可能是大黄(庶虫)虫治疗子宫肌瘤的机理之一.     

大黄虫丸对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖凋亡及PI3K/AKT信号传导通路的影响

目的观察大黄虫丸对慢性粒细胞性白血病K562细胞抑制增殖、诱导凋亡及对PI3K/AKT表达的影响,进而探讨其治疗慢性粒细胞性白血病的作用机制。方法制备大黄虫丸含药血清,应用MTT法检测对K562细胞增殖的影响,细胞克隆形成实验检测对细胞克隆形成的影响,用Annexin V FITC/PI法检测对细胞凋亡和细胞周期的影响,免疫印迹法检测PI3K/AKT信号通路重要蛋白Akt及其磷酸化形式p-Akt的蛋白水平。相关实验数据用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。结果大黄虫丸含药血清能显著抑制白血病K562细胞的增殖,且呈浓度、时间依赖性;能抑制K562细胞克隆的形成;能诱导K562细胞的凋亡,且将细胞阻滞于G0/G1期,呈浓度依赖性。随着浓度升高,p-Akt/Akt值呈降低趋势,差异有统计学意义(P0.05)。结论大黄虫丸能够体外抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡,可能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活实现。     

大黄(庶虫)虫丸抗血小板活化的机制研究

目的:探讨大黄(庶虫)虫丸抗血小板活化的作用.方法:用大黄(庶虫)虫丸含药血浆孵育血小板,然后用ADP诱导活化,血小板膜糖蛋白GPⅡ/b/Ⅲa复合物纤维蛋白原受体(PAC-1)单克隆抗体标记,流式细胞术分析血小板的活化.同时,冠心病及脑梗死患者服用大黄(庶虫)虫丸,治疗1疗程(30d)后,取患者血小板,采用流式细胞术分析患者血小板的活化.结果:大黄(庶虫)虫丸药物体外血浆组血小板活化率为20.82%,阿司匹林组血小板活化率为51.71%,大黄(庶虫)虫丸组血小板活化明显低于阿司匹林组(P<0.01).在临床治疗冠心病试验中,服用大黄(庶虫)虫丸患者血小板活化率为14.78%,明显低于服用阿司匹林患者血小板活化率67.74%(P<0.01);对于脑梗塞患者,服用大黄(庶虫)虫丸患者血小板活化率为5.65%,低于阿司匹林患者组77.91%(P<0.01).结论:大黄(庶虫)虫丸能较好的抑制血小板活化,可能是理想的抗动脉血栓形成药物.     

大黄廑虫丸对荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的影响

摘要:目的 选用荷瘤小鼠作为研究对象,观察大黄麈虫丸对肿瘤细胞的抑瘤和诱导凋亡作用,旨在探讨大黄(庶虫)虫丸抗肿瘤效应机制,为其临床应用和创制新药提供理论依据.方法 建立小鼠克洛氏(S180)肉瘤动物模型,将荷瘤小鼠分为大黄(庶虫)虫丸方高、中、低剂量组,以大黄(庶虫)虫丸方82g/kg,41g/kg,20...     

大黄[庶虫]虫丸对S180肿瘤细胞中Survinvin表达的影响

目的：选用荷瘤小鼠作为研究对象,观察大黄[庶虫]虫丸对肿瘤细胞的抑瘤和诱导凋亡作用,旨在探讨大黄[庶虫]虫丸抗肿瘤效应机制,为其临床应用和创制新药提供理论依据。方法：建立小鼠克洛氏（S180）肉瘤动物模型,以大黄虫丸方82g/kg剂量连续灌胃10天,同时设模型对照组、正常组和西药（环磷酰胺）对照组,取治疗组、对照组及模型组实体瘤分别涂片观察肿瘤细胞中Survinvin的表达。结果：与模型对照组及西药（环磷酰胺）对照组比较,大黄[庶虫]虫丸治疗组肿瘤组织中Survinvin的表达明显降低。结论：大黄[庶虫]虫丸能够调低肿瘤细胞中Survinvin的表达,诱导肿瘤的凋亡。     

大黄(庶虫)虫丸加减方对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的 探讨大黄(庶虫)虫丸加减方对克洛氏(S180)荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响.方法 建立小鼠S180肉瘤动物模型,将荷瘤小鼠分为大黄磨虫丸加减方高、中、低剂量组及模型组,同时设正常组,流式细胞术检测荷瘤鼠T淋巴细胞亚群.结果 大黄(庶虫)虫丸加减方能调节CD4/CD8细胞比例,尤以高剂量组最为明显.结论 大黄(庶虫)虫丸加减方能缓解和改善S180荷瘤小鼠免疫力的低下和免疫紊乱状态,其中高剂量组疗效最佳.     

大黄(庶虫)虫丸对大鼠两种肝纤维化模型的影响

目的:观察大黄(庶虫)虫丸抗肝纤维化作用.方法:采用四氯化碳(CCl4)和免疫损伤(BSA)模型,观察大黄(庶虫)虫丸对大鼠肝功能及肝组织病理学影响.结果:大黄(庶虫)虫丸组肝功能明显改善,肝纤维化程度明显低于模型组(P＜0.05).结论:提示大黄(庶虫)虫丸有抗肝纤维化的作用.     

大黄(庶虫)虫丸对阿霉素肾硬化大鼠系膜基质增生抑制作用的实验研究

目的:探讨大黄<庶虫>虫丸对阿霉素肾硬化大鼠系膜基质增生的抑制作用.方法:通过单侧肾切除、分次尾静脉注射阿霉素、高脂饲料喂养的方法,制作弥漫性系膜增生伴局灶节段性肾小球硬化动物模型,并应用大黄<庶虫>虫丸进行干预.同时设立假手术组、空白组作阴性对照,观察时间为12周.分别留取各组第4、8、12周末24h尿样标本测定尿蛋白含量.第12周末,处死大鼠,光镜观察肾组织病理形态学变化.计算系膜基质指数;应用免疫组化方法检测纤维连接蛋白(FN)、胶原Ⅳ(CoLⅣ)含量.结果:大黄<庶,虫>虫丸可降低阿霉素肾硬化大鼠尿白含量,抑制FN、CoLⅣ的过度表达,减少细胞外基质在肾小球中的积聚.结论:大黄<庶虫>虫丸防治肾小球硬化进展的机制与其减少蛋白尿,抑制系膜细胞、系膜基质增生扩张的功能有关.     

大黄[庶虫]虫丸抑制趋化因子配体17表达对CT26小鼠结肠癌的影响

目的观察大黄[庶虫]虫丸对趋化因子配体17(CCL17)在CT26结肠癌小鼠模型中表达的影响,研究其可能的抗肿瘤作用机制。方法复制CT26结肠癌小鼠模型,将模型小鼠随机分为模型组,大黄[庶虫]虫丸高、中、低剂量组(48、24、12 g·kg^-1·d-1),另设正常组。计算各组小鼠结肠癌的抑瘤率;用流式细胞术和免疫荧光法分别检测外周血、肿瘤归巢淋巴结和肿瘤组织细胞中调节性T细胞(Tregs)百分比,肿瘤组织中CCL17的表达,趋化因子受体4(CCR4)在外周血和肿瘤组织细胞表面的表达百分比和肿瘤组织细胞核转录因子κB(NF-κB)p65的表达。结果大黄[庶虫]虫丸能明显抑制小鼠结肠癌的生长,且呈剂量依赖性;大黄[庶虫]虫丸各剂量组肿瘤组织中Tregs明显减少(P<0.05),肿瘤组织中CCL17的荧光强度明显下降(P<0.05);模型组的CCR4+Tregs百分比和CCL17荧光强度最高,大黄[庶虫]虫丸各剂量组随着用药浓度增加,CCR4+Tregs百分比和CCL17荧光强度均表现为依次降低(P<0.05);大黄[庶虫]虫丸能显著抑制结肠癌细胞NF-κB的活化(P<0.05),NF-κB p65的荧光比例显著降低。结论大黄[庶虫]虫丸可通过减少肿瘤组织中Tregs的聚集,降低肿瘤组织中CCL17的表达,下调CCR4在Treg细胞表面的表达比率,降低结肠癌细胞NF-κB p65在细胞内的表达,从而抑制CT26小鼠结肠癌细胞的生长。     

4’-甲醚-黄芩素对绒毛膜癌JAR细胞c-myc表达的影响

目的 探讨4’-甲醚-黄芩素(4-MS)诱导人绒毛膜癌JAR细胞凋亡的分子机制.方法应用透射电镜、流式细胞术、实时定量PCR法和Western blotting方法,体外观察4-MS对JAR细胞的影响.结果 电镜下可见用药后JAR细胞凋亡的形态学改变;流式细胞术显示,随着作用时间和药物剂量的增加,早期凋亡细胞和坏死细胞增加,明显高于对照组(P＜0.01).20、40 mg·L-1 4-MS作用48 h后c-myc mRNA的表达量为0.87±0.12和0.45±0.08;c-myc蛋白的表达量是0.37+0.02和0.25±0.02,均低于对照组(P＜0.01).结论4-MS诱导JAR细胞凋亡,其机制与降低c-myc的表达有关.     

离线紫外照射和高效液相荧光法测定他莫昔芬及代谢物在人血浆中的浓度

 目的 建立高效液相荧光法测定人血浆中他莫昔芬及主要代谢物浓度。 方法 血浆样品经正己烷 - 正丁醇 (98 ∶ 2) 提取后,以甲醇 -1% 三乙胺水溶液 (82 ∶ 18) 为流动相,流速为 1 mL ? min^-1 ,色谱柱为 Agilent Extend C₁₈(4.6 mm × 150 mm, 5 m m) ,柱温为 50 ℃,离线紫外照射 (254 nm)10.5 min ,使目标化合物转变成强荧光性的菲衍生物,荧光 检测波长： 激发波长 ( λ ex)260 nm , 发射波长 ( λ _em )375 nm 。 结果 血浆内源性杂质不干扰待测物测定,线性范围分别为：他莫昔芬为 0.5~200 m g ? L^-1 ; <> N - 去甲 他莫昔芬为 0.5~300 m g ? L^-1 ; 4- 羟基 他莫昔芬为 0.1~10 m g ? L^-1 。日内、日间精密度 (RSD) 均小于 10 % 。样品 4 次冻融,以及在提取后, 4 ℃下 12 h 内稳定性良好。 结论 该法灵敏、快速、准确,操作简便、线性范围宽,可用于他莫昔芬的药动学研究及常规治疗药物监测。     

六种苦豆子生物碱对炎症介质白三烯的影响

目的：研究苦参碱(matrine MT)、氧化苦参碱(oxymatrine OMT)、槐果碱(sophocarpine SC)、氧化槐果碱(oxysophocarpine OSC)、槐定碱(sophoridine SRI)、氧化槐定碱(oxysophoridine OSRI)6种苦豆子类生物碱对炎症介质白三烯巴和白三烯134的影响，来研究其抗炎作用机制。方法：以大鼠腹腔白细胞为材料，采用高效液相色谱法(HPLC)测定白细胞内白三烯C4和白三烯B4水平。结果：SRI对LTC4的生物合成影响很小，但对LTB4的生物合成有明显的抑制作用。其余5种生物碱对LTC4和LTB4的生物合成均有明显的抑制作用，且有良好的剂量-效应关系。结论：6种苦豆子生物碱对白三烯(LTC4和LTB4)的生物合成均具有不同程度的抑制作用，这可能是它们抗炎作用的机制之一。     

养阴舒肝颗粒对VCD诱导卵巢功能下降大鼠Bcl-2,Bax及Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨养阴舒肝颗粒对卵巢功能下降模型大鼠卵巢功能及;B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的影响。方法:选取动情周期规则的雌性SD大鼠,取10只作为正常组,其余大鼠均采用160 mg·kg~(-1)去氧乙烯基环己烯(VCD)腹腔注射诱导卵巢功能下降模型,取造模成功的56只大鼠按体质量随机分为模型组,养阴舒肝颗粒低(2.1 g·kg~(-1)),中(4.2 g·kg~(-1)),高剂量组(8.4 g·kg~(-1))和坤泰胶囊组,每组11只(模型组12只)。采用养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊进行灌胃给药,干预治疗4周后进行卵巢称质量,计算各级卵泡的数目,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清性激素水平卵泡刺激素(FSH),雌二醇(E_2),抗缪勒氏管激素(AMH),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织Bcl-2,Bax,Caspase-3的表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠的卵巢质量和卵巢指数下降(P0.01),闭锁卵泡数目增多(P0.01),FSH水平升高(P0.01),E_2和AMH水平下降(P0.05),卵巢组织Bcl-2蛋白的表达减少(P0.01),Bax,Caspase-3蛋白的表达(P0.01);与模型组比较,养阴舒肝颗粒可以增加模型大鼠的双侧卵巢质量(P0.05,P0.01);养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊可以增加卵巢指数(P0.05,P0.01);养阴舒肝颗粒可以减少闭锁卵泡的数目(P0.05);养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊均可以降低FSH水平(P0.05),升高E_2和AMH水平(P0.05),增加卵巢组织Bcl-2的表达(P0.01),同时抑制Bax,Caspase-3的表达(P0.01)。结论:养阴舒肝颗粒可以提高卵巢功能下降模型大鼠的卵巢功能,其机制可能与抗细胞凋亡有关。     

4’-甲醚-黄芩素诱导人绒毛膜癌细胞凋亡的信号转导机理研究

目的:探讨4’-甲醚-黄芩素(4’-methyl ether-scutellarein,4-MS)诱导人绒毛膜癌JAR细胞凋亡的信号传导机制。方法:光镜、电镜观察细胞形态、超微结构,RT-PCR技术检测Survivin、Caspase 9、Caspase 3、p38 MAPK基因的表达,Western blot检测Survivin、Caspase 9、Caspase 3、p38 MAPK、Bax和cytochrome C蛋白水平的表达差异。结果:光镜和电镜下可见凋亡细胞的形态学改变;RT-PCR结果显示,不同质量浓度(20、40μg/ml)的4-MS作用24h后,JAR细胞中Survivin mRNA表达显著下降,而Caspase 9、Caspase 3及p38 MAPK mRNA表达显著上升。Western blot证实,JAR细胞的Survivin蛋白表达量显著下降,Bax、cytochrome C蛋白表达量及p38磷酸化水平升高,Caspase 3与Caspase 9被明显激活。结论:4-MS通过上调Bax、cytochrome C、Caspase 9、Caspase 3表达,激活p38 MAPK信号通路及抑制Survivin表达,对JAR细胞内源性细胞凋亡信号转导通路进行正向调节而诱导细胞凋亡。     

基于RNA-seq技术的活血化瘀法治疗乳腺癌关键基因的筛选和验证

目的:研究活血化瘀治法(the medicine group of promoting blood circulation and removing stasis,PBCRS)对7,12-二甲基苯蒽[7,12-dimethylbenz(a) anthracene,DMBA]诱发性大鼠乳腺癌的抑制作用,及运用转录组测序技术(RNA sequencing,RNA-seq)和信号网络分析(ingenuity pathway analysis,IPA)软件筛选关键基因和验证。方法:将96只SD大鼠随机分为空白组,DMBA模型组,枸橼酸他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)组(1.9 mg·kg~(-1)·d-1),PBCRS高、中、低剂量组(12.96,6.48,3.24 g·kg~(-1)·d-1)。药物干预1周后,除空白组外,采用DMBA诱导大鼠乳腺癌模型(灌服2次,间隔1周,剂量100 mg·kg~(-1))。给药10周后,观察大鼠荷瘤重、荷瘤体积变化,用总RNA提取试剂盒提取总RNA,从DMBA模型组和PBCRS中剂量组各取3个RNA样品进行基因检测,筛选出关键差异基因,用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)验证关键基因。结果:与DMBA模型组比较,PBCRS中剂量组荷瘤重和荷瘤体积均明显降低(P0.05),PBCRS高、低剂量组荷瘤重和荷瘤体积虽有降低,但与DMBA模型组比较差异均无统计学意义;基于RNA-seq技术及IPA分析软件筛选出果糖1,6二磷酸酶1 (fructose-1,6-bisphosphatase1,FBP1),浦肯野细胞蛋白4(purkinje cell protein 4,PCP4),肌红蛋白(myoglobin,MB) 3个关键基因;与DMBA模型组比较,PBCRS高、中剂量组FBP1 mRNA表达均明显升高(P0.05),PBCRS低剂量组FBP1 mRNA表达升高,但差异无统计学意义,PBCRS高、中、低剂量组PCP4 mRNA的表达增高,但无统计学差异,PBCRS低剂量组MB mRNA的表达虽降低,差异无统计学意义。结论:PBCRS可能通过干预乳腺癌组织中FBP1的表达,抑制乳腺癌的发生。     

菟丝子提取物对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的:建立1-甲基-4-苯基吡啶(1-m ethyl-4-phenylpyrid in ium ion,MPP )诱导的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(Pheochromocytom a,PC12)凋亡模型,探讨菟丝子提取物对MPP 诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法:用四唑盐(MTT)方法检测细胞活力,用Hoechst 33258染色法观察细胞形态变化,用流式细胞技术检测细胞凋亡比例。结果:浓度为0.15 mM MPP 作用于PC12细胞48 h诱导其产生典型的凋亡特征,50 mg/L菟丝子提取物具有抗凋亡作用。结论:菟丝子提取物对MPP 诱导的PC12细胞凋亡有明显的保护作用。     

银杏内酯B对胆固醇和apoE4共损伤海马神经元胆碱能系统的保护作用

[目的]探讨银杏内酯B对高胆固醇和载脂蛋白E4(apoE4)诱导海马神经元胆碱能系统损伤的保护作用。[方法]应用胆固醇和apoE4共处理海马神经元,分别采用微量羟胺比色法,羟胺比色法和放射化学法测定海马神经元乙酰胆碱含量,乙酰胆碱酯酶和胆碱乙酰基转移酶活性。[结果]银杏内酯B可以提高乙酰胆碱酯酶活性和乙酰胆碱水平,对乙酰胆碱酯酶作用不明显。[结论]高胆固醇和apoE4损伤海马神经元胆碱能系统,参与老年性痴呆发生,银杏内酯B对损伤神经元有保护作用。     

4′-甲醚-黄芩素诱导绒毛膜癌JAR细胞凋亡的实验研究

目的探讨4′-甲醚-黄芩素(4-MS)对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制。方法应用MTT法、激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞术和实时定量PCR法,体外观察4-MS对JAR细胞的影响。结果不同质量浓度(10、20、40mg/L)的4-MS对JAR细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖,作用72h后其增殖抑制率分别为(14.14±0.75)%、(34.34±2.99)%、(61.11±2.99)%(P<0.01);4-MS作用72h后细胞内Ca2 浓度分别为81.3±6.7、103.3±5.9、120.7±11.0,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。40mg/L4-MS作用12、24、36h后其早期凋亡率分别为(2.36±0.19)%、(4.22±2.44)%、(7.34±0.56)%,明显高于对照组(P<0.01)。20、40mg/L4-MS作用48h后hTERT mRNA的表达量为0.05±0.01和0.02±0.01,明显低于对照组(P<0.01)。结论4-MS能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2 浓度、降低hTERT mRNA的表达有关。