树突状细胞与特异性肿瘤免疫治疗

树突状细胞（DC）是体内功能最强的抗原提呈细胞（APC）,也是抗原特异性免疫应答的始动者,由DC活的T细胞介导的免疫应答在机体抗肿瘤过程中起着主导作用。本主要对DC参与抗肿瘤的机制,DC与肿瘤免疫逃逸的关系及近年来DC在肿瘤生物治疗方面的研究进展作一综述,以DC为基础的肿瘤治疗主要有两种方式：（1）免疫治疗：肿瘤抗原体外冲击致敏DC后回输体内;（2）基因治疗：以目的基因转染DC后回输体内。     

基因疫苗与遗传免疫

遗传免疫是近二、三年发展起来的一种新的免疫接种技术。将抗原编码基因插入带有启动子的质粒载体，然后用物理方法将此重组质料入体内细胞，抗原编码基因即在细胞内报导合成抗原蛋白，诱发机体产生保护性免疫反应。本文回顾了基因疫苗的研究过程，并对遗传免疫的原理和应用前景进行了讨论。     

基因疫苗与遗传免疫

遗传免疫（ｇｅｎｅｔｉｃｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）是近二、三年发展起来的一种新的免疫接种技术。将抗原编码基因插入带有强启动子的质粒载体，然后用物理方法将此重组质粒导入体内细胞，抗原编码基因即在细胞内报导合成抗原蛋白，诱发机体产生保护性免疫反应。本文回顾了基因疫苗的研究过程，并对遗传免疫的原理和应用前景进行了讨论。     

EDTA作为抗原修复液用于脑石蜡片NMDA-R2A免疫组织化学检测的方法与效果探讨

石蜡切片进行免疫组织化学染色的优势在于能得到极为清晰美观的组织形态,其中修复待检测物质的抗原性（抗原修复）是一个关键步骤。抗原修复的效果直接影响到最终的染色结果。用pH值6．0的枸橼酸（柠檬酸）缓冲液进行微波修复或高压修复目前使用最广,是国内外绝大多数实验室的首选方法。该方法能有效修复大多数物质的抗原性,得到阳性强、结果美观的图像,重复性好,颇受广大实验工作的欢迎。但经过长期实践和总结发现枸橼酸缓冲液用于抗原修复有一个比较隐蔽的缺陷：它能使某些膜受体的阳性分布区域向细胞质内扩大。比如NMDA-R2A是一种广泛分布于脑内的促离子型谷氨酸受体,免疫电镜显示它应当分布在神经细胞的突触后膜上。但使用枸橼酸缓冲液对大鼠中脑石蜡切片进行抗原修复后,阳性结果分布于神经细胞的整个胞质（图113）;这与NMI）A-R2A的实际分布有明显出入。由于细胞质阳性的图像比较美观,并且这种阳性的成因也有解释的余地,因此常常被实验人员误认为是正常的。我们尝试了其它一些修复方法,综合比较后认为乙二胺四乙酸（EDTA）溶液对于NMDA-R2A这类膜受体的检测是一种更好的抗原修复液,并对其使用方法和效果探讨如下。[第一段]     

小鼠乳腺癌干细胞免疫相关分子表达和免疫浸润的分析

目的 分析小鼠乳腺癌干细胞（BCSCs）中免疫相关分子的表达和肿瘤组织中免疫细胞的浸润。方法 用成球培养的方法在体外富集小鼠乳腺癌细胞系4T1和4T07的肿瘤干细胞（CSCs）;用实时定量PCR检测BCSCs中免疫检查点与抗原递呈相关基因的表达;用小鼠乳腺癌原位移植瘤模型和流式细胞测量术分别检测脾脏和肿瘤组织中各类免疫细胞的比例。结果 用成球培养的方法可以成功富集小鼠乳腺癌干细胞4T1和4T07;与贴壁培养的肿瘤细胞相比,小鼠BCSCs中免疫检查点和抗原递呈相关基因的表达有明显差异（P<0.05）。体内的结果表明,与贴壁肿瘤细胞来源的肿瘤组织相比,肿瘤干细胞来源的肿瘤组织中浸润更多的CD4⁺ T和CD8⁺ T细胞（P<0.05）,但是CD11b⁺ F4/80⁺的巨噬细胞浸润更少（P<0.05）。结论 小鼠BCSCs中免疫检查点与抗原递呈相关基因的表达有改变,且在体内可招募更多的T细胞到肿瘤组织中去。     

DNA免疫制备单克隆抗体的研究进展

DNA免疫是近年发展起来的一种新型抗体制备法。DNA免疫克服了传统蛋白质免疫方法的缺陷,能更为有效地激发机体的体液和细胞免疫应答。尤其是在仅知DNA编码而不能获得目的蛋白或获得的抗原蛋白为低免疫性的情况下,蛋白质免疫将很难得到特异性的抗体,但通过DNA免疫可制备高效价特异性的抗体,这为某些疾病如病毒性疾病和肿瘤等的诊断和免疫治疗开拓了新的途径。     

真核表达单纯疱疹病毒糖蛋白模拟表位mgC及其基因免疫效果的观察

目的 鉴定单纯疱疹病毒（HSV）糖蛋白C(gC)一个短肽模拟表位mgC基因作为HSV DNA表位疫苗的可能性。方法 将mgC基因克隆入真核载体pcCNA3.1中,并在CHO细胞中表达,免疫荧光法鉴定表达效果。DNA免疫不同种属小鼠,ELISA法观察HSV gC特异结合抗体的诱生。结果 含mgC的真核载体在哺乳动物细胞中可以成功表达外源蛋白。重组载体DNA在BALB／c小鼠体内可诱导抗天然HSV gC蛋白的抗体,而在C57BL鼠体内未见明显的抗体反应。结论 成功构建了可表达模拟表位mgC的真核表达载体。证明了应用gC模拟短肽基因作为DNA免疫的基因源是可行的,但其对不同种属动物的反应性不同,提示DNA免疫还应针对不同免疫对象调整免疫策略。这一研究为HSV多表位组合多肽疫苗的研制提供了一个新的备选组份。     

习惯性流产与HLA免疫关联研究进展

人类对于人类学的研究，从传统依靠化石的手段进步到利用免疫遗传标志进行系统，来识别人类进化的演变过程还是近20年的事情，但是，从分子遗传学角度了解分析人类的遗传信息的技术却以惊人的发展速度渗透到自然科学的各个领域中。一、概述HLA（humanleukocyteantigen）是迄今为止已知的人类最复杂的遗传多态性，被WHO命名委员会认可的HLA基因遗传座位有3个区域，HLA－A，－B，－C，－DR，－DQw，－G和补体组分。HLA基因不仅是人类遗传标志中最复杂的多态性系统，而且每个座位的抗原间存在自然选择作用下的显著联锁不平衡，赋予人…     

基因免疫研究进展

基因免疫的研究已成为免疫治疗研究的热点之一。其产生的机制目前认为主要是注射的DNA直接转染专职递呈细胞,它可激活CD4 T细胞、B细胞和CD8 T细胞。但也有证据表明DNA转染的肌细胞或角质细胞产生抗原后,转送给浸润在附近递呈细胞,激活相应的细胞。DNA免疫刺激序列的发现,使我们在基因免疫时应用或设计特殊DNA的结构成为可能。细胞因子和共刺激分子是基因免疫中最有前途的生物佐剂。     

结核分枝杆菌含信号肽的Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗免疫保护效果研究

目前人类预防结核病的惟一疫苗——卡介苗（BCG）存在着不足，研制新型、有效、安全的预防结核病的疫苗成为国内外学者共同关注的一个重要课题。目前由于大多数结核病DNA疫苗的免疫保护效果尚不如BCG，因此，提高DNA疫苗免疫效力是目前结核病核酸疫苗研究的热点。本研究选择新近从结核杆菌培养滤液（CF）中纯化分离出的一种低分子量蛋白抗原——含信号肽的Mtb8．4（Ms）作为目的抗原，与人白细胞介素12（hIL-12）构建成结核病嵌合基因疫苗，旨在提高MS的免疫效力。     

超抗原与自身免疫性疾病

超抗原是指一些细菌外毒素和逆转录病毒的基因产物，包括Ｔ细胞超抗原（Ｔ－ＳＡｇ）和Ｂ细胞超抗原（Ｂ－ＳＡｇ）。它与自身免疫性疾病密切相关，参与免疫性疾病的致病过程。这为自身免疫性疾病发病机制的研究提供了新途径。     

RNA干涉(RNAi)及其应用

基因沉默（gene silencing）是指生物体内的特定基因由于种种原因不表达的遗传现象，它有两方面的功能：一方面，它是生物遗传操作创造新的遗传修饰生物（genetically modified organisms）的障碍；另一方面，它是植物抵御外来核酸入侵（如病毒）的一种反应，为植物抗病毒的遗传育种提供了具有实用价值的策略。近年来，不同的研究领域和生物中发现了许多新的使基因关闭或者沉默的类型，并赋予其不同的名称：植物中称为RNA共抑制（co-suppression），真菌中叫RNA压制（RNA quelling），动物中则为RNA干涉（RNA interference，RNAi）。     

乙型肝炎病毒新的免疫逃避株的S基因序列分析

目的分析乙型肝炎患者体内ＨＢＶＳ基因的变异情况及对乙型肝炎的免疫预防的现实意义。方法采用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）、Ｍ１３噬菌体克隆和核苷酸序列分析方法对一例乙型肝炎免疫失败儿童患者体内ＨＢＶＳ基因序列进行分析。结果发现该患儿所感染ＨＢＶ的Ｓ基因上有一个重要的点突变,即第５５１位碱基由野生型的Ａ变为Ｇ。该突变使乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）１３３位氨基酸由甲硫（ＡＴＧ）变为缬（ＧＴＧ）。这一氨基酸替换恰恰发生在ＨＢｓＡｇ中和性α抗原决定簇区段（ａａ１２４～ａａ１４７）内。结论鉴于该患者接种乙型肝炎疫苗,其血清呈抗－ＨＢｓ阳性和ＨＢｓＡｇ阴性,推测其体内的ＨＢＶ为一个新的疫苗诱导的免疫逃避株     

DNA疫苗的运送载体——减毒霍乱沙门氏菌

霍乱沙门氏菌是人兽共患病原菌,遗传背景清楚,利用它作为载体表达外源抗原基因已得到较广泛的研究并取得了一定的效果。本文从沙门氏菌的侵入途径、减毒重组菌对基因疫苗的呈递及诱发免疫应答的机制、作为载体的优势以及免疫存在的问题等方面就减毒霍乱沙门氏菌作为运送DNA疫苗的载体作简要概述。     

免疫PCR:通过特异性抗体-DNA缀合物高敏感性检测抗原

多聚酶链反应(PCR)技术已成为一种分子生物学和基因工程的有力工具,将PCR技术应用于抗原检测,建立了一种称为免疫PCR的抗原检测系统,该系统采用一种特异性抗体-DNA缀合物来检测抗原.免疫PCR方法的原理是通过应用一个对DNA和抗体具有双重结合活性的连接分     

HBsAg基因免疫条件优化的比较

ＨＢｓＡｇ基因免疫条件优化的比较张晓梅周玲刘海鹰曾毅基因免疫（Ｇｅｎｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）是基于裸露ＤＮＡ转基因成功这一最新发现而发展起来的新的免疫技术〔１〕。是利用各种方法，将重组表达的带目的基因的质粒ＤＮＡ不经体外表达直接转化到体内，诱导机...     

抗HBV的治疗性双质粒DNA疫苗的构建及初步药效学研究

目的：构建抗乙型肝炎病毒（HBV）的治疗性DNA疫苗并进行体外、体内鉴定。方法：采用PCR技术扩增含有HBV包膜中蛋白（preS2.S）抗原基因和hIL-2/hIFN-γ融合蛋白的基因,将目的基因分别亚克隆于pVAX1真核表达载体,并进行酶切和测序分析;转染双质粒于COS-7细胞检测基因及蛋白表达情况;利用Combinatotial Extension（CE）软件模建分析佐剂质粒表达融合蛋白的空间结构;双质粒联合在体电脉冲技术（EP）注射BALB/c小鼠以检测特异性的体液和细胞免疫应答。结果：经酶谱和测序分析表明,构建的双质粒pVAX1/S2.S（pS2.S）和pVAX1/IL-2IFN-γ（pIIF）的基因片段的方向、序列完全正确;ELISA法定量检测双质粒转染COS-7细胞后48小时目的基因（preS2.S和hIL-2/hIFN-γ）的蛋白表达水平较高,HBsAg、IL-2、IFN-γ的含量分别为45.1、10.03、11.5ng/ml;模拟空间结构分析表明佐剂质粒的融合蛋白中两细胞因子的活性部位均裸露在外;小鼠免疫试验结果表明,疫苗pS2.S能诱导健康小鼠的保护性抗-HBs的抗体产生,且具有剂量相关性;佐剂pIIF可显著增强疫苗pS2.S质粒的免疫效果;在EP辅助作用下,质粒pS2.S和pIIF共肌注BALB/c小鼠,低剂量就能诱导较强特异性的细胞和体液免疫。结论：成功构建了抗HBV的DNA疫苗pS2.S及佐剂pIIF质粒,并具有较特异的体内外活性。     

肿瘤免疫与肿瘤免疫治疗中一些新的思考

随着免疫学、分子生物学与基因工程技术发展 ,以肿瘤免疫治疗为代表的肿瘤生物治疗已成为继手术治疗、化疗和放疗后肿瘤治疗的第四种模式[1] 。本文欲对肿瘤免疫及肿瘤免疫治疗 ,特别是其中一些新的思路和进展作一简要探讨和评述。1　肿瘤免疫从免疫学的角度看 ,肿瘤细胞就是一种能不断表达“正常”抗原 (基因过度表达 )和 /或“异常”抗原 (基因修饰、突变或缺失 )的宿主体内自身组织细胞。因此肿瘤可以被视为一种特殊的自体抗原。在正常情况下 ,机体对自体抗原不产生免疫应答 ,即呈现出免疫耐受。因此 ,肿瘤抗原与肿瘤免疫耐受就构成了肿…     

血细胞表面抗原与遗传

免疫遗传学（Immunogenetics）是免疫学与遗传学互相渗透发展的一门边缘学科,它的主要研究对象是基因、抗原、抗体三者间的关系,以及补体形成、器官移植、临床遗传性疾病的病因探讨等,其研究手段为①用免疫学的方法检测基因遗传因素。②用遗传学的方法研究免疫应答的机理。     

密码修饰可增强沙眼衣原体MOMP DNA质粒免疫小鼠的免疫应答

目的 探讨密码修饰对沙眼衣原体主要外膜蛋白（MOMP）基因表达和DNA质粒免疫的影响。方法 根据人类密码子使用偏好对鼠肺炎沙眼衣原体（Chlamydia trochomatis mouse pneumonitis）MOMP基因进行优化修饰，设计合成人源化MOMP基因（HuMOMP）。构建以pcDNA3为载体的含HuMOMP及含野生型MOMP基因（WtMOMP）的真核表达质粒。瞬时转染COS-1细胞，Western blot方法比较HuMOMP基因及WtMOMP基因在哺乳动物细胞中的蛋白表达水平。DNA质粒肌内免疫BALB／c小鼠，检测小鼠血清特异性抗体、DTH和淋巴细胞增殖反应，比较优化密码MOMP基因和野生型MOMP基因DNA质粒免疫的免疫效果。结果 人工合成HuMOMP基因，成功构建重组真核表达质粒pcDNA3-HuMOMP及pcDNA3-WtMOMP。转染细胞Western blot结果显示，HuMOMP基因的蛋白表达水平明显高于WtMOMP基因。ELISA结果表明，HuMOMP DNA质粒免疫组小鼠血清特异性IgG抗体有所升高；细胞免疫检测结果显示，HuMOMP DNA质粒免疫组小鼠足垫肿胀程度增强、淋巴细胞增殖实验刺激指数（SI）增高，两者与WtMOMP DNA质粒免疫组相比P〈0．05，差异均有统计学意义。结论 人源化密码修饰能够增强沙眼衣原体MOMP基因在哺乳动物细胞中的蛋白表达及DNA质粒免疫小鼠的免疫反应，这对于新型衣原体DNA疫苗的研究具有重要意义。