TNF-α在D-GalN/LPS诱导急性肝衰竭中的作用研究

急性肝衰竭是严重威胁人类健康的疾病之一,其特征表现为机体短期内出现大面积炎症反应和大量肝细胞死亡。D-氨基半乳糖联合脂多糖常被用于构建急性肝衰竭动物模型。大量的研究证实,肿瘤坏死因子-α与急性肝衰竭密切相关。本文拟就肿瘤坏死因子-α在D-氨基半乳糖/脂多糖诱导肝损伤发生、发展中所起的作用进行综述,重点讨论了肿瘤坏死因子-α的表达机制、诱导肝细胞凋亡途径及药物干预作用,以期对急性肝衰竭的防治提供新的靶点和方向。     

骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡与TNF-α关系的探讨

目的：研究并分析骨髓增生异常综合征（MDS）各型骨髓细胞凋亡与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）二者之间的关系。方法观察组选取21例确诊为MDS的患者，对照组选取5例其他科室非血液系统疾病患者的骨髓，分别测定两组细胞凋亡指数和TNF-α的含量。结果在骨髓细胞凋亡指数方面，与对照组相比，观察组MDS各型均有所提高（P〈0.05）。随着疾病发展，凋亡指数有下降趋势；在TNF-α含量方面，与对照组相比，观察组MDS各型均有所提高（P〈0.05）。随着疾病发展， TNF-α含量亦有下降趋势。结论MDS呈现骨髓细胞过度凋亡状态，且早期更加明显，与TNF-α有正相关联系。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人脑胶质瘤细胞凋亡作用的研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）受体在不同级别胶质瘤中的表达及TRAIL对原代培养的胶质瘤细胞凋亡的诱导作用。方法应用原位杂交的方法检测TRAIL受体在45例胶质瘤和5例正常脑组织中的转录表达；分别对其中22例和3例进行原代培养，用流式细胞仪检测TRAIL作用后细胞的凋亡率。结果在45例胶质瘤中，DR4、DR5、DcR1、DcR2的mRNA的表达例数分别为38例、41例、40例、2例。成功培养出18例胶质瘤细胞和3例正常胶质细胞，TRAIL作用后凋亡率在80％以上、50％～80％、50％以下的例数分别为5例、9例、4例，正常胶质细胞无明显凋亡发生。结论TRAIL受体的表达与肿瘤的恶性程度无关；TRAIL能有效地选择性杀死胶质瘤细胞。     

卡维地洛对映体的抗心肌细胞凋亡作用

目的:研究卡维地洛(carvedilol)R(+)和S(-)型对映体对心肌细胞的凋亡保护作用。方法:异丙肾上腺素(ISO)2 mmol.L-1作用12 h以诱导H9C2-1心肌细胞凋亡,Hoechst 33258染色法定性凋亡细胞,AnnexinⅤ-FITC/PI双染标记细胞后以流式细胞仪测定标记率以定量凋亡率。处理组同时加入R(+)或S(-)carvedilol,分2和10μmol.L-1两个浓度组。并分别测定10μmol.L-1R(+)或S(-)carvedilol单一作用的细胞凋亡率。结果:2 mmol.L-1ISO作用12 h后H9C2-1细胞大量凋亡(P<0.01);R(+)或S(-)carvedilol+ISO组细胞凋亡率显著低于ISO组(P<0.05);与低剂量组间比较,R(+)carvedilol+ISO细胞晚期凋亡率和总凋亡率低于S(-)carvedilol+ISO,差异有显著性意义(P<0.05);高剂量S(-)carvedilol组细胞凋亡率略有升高,但显著低于S(-)Carv 10μmol.L-1+ISO组(P<0.05)。结论:ISO可诱导-H9C2-1心肌细胞凋亡,低剂量R(+)或S(-)carvedilol对此均有明显的抑制作用,并且R(+)和S(-)型carvedilol的抗心肌细胞凋亡效应间存在一定的立体选择性差异,R(+)carvedilol显示出更具潜力。     

肝衰竭患者血清TNF-α检测的临床意义

目的:探讨血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对肝衰竭(LF)预后判断的意义.方法:选择LF患者135例,测定血清TNF-α,分析其与肝脏损伤程度的关系.结果:LF患者血清TNF-α均明显高于健康组,随着肝病基础之肝硬化、肝癌发展,TNF-α水平逐渐下降(P＜0.05～0.0001);慢性亚急性肝衰竭(SACLF)患者TNF-α水平高于慢性肝衰竭(CLF)患者(P＜0.05);早中期SACLF患者TGF-β1水平低于晚期(P＜0.05);死亡患者血清TNF-α低于病情好转者(P＜0.05).结论:LF患者血清TNF-α的水平与疾病的严重程度及预后密切相关,它们在LF发生发展过程中起到一定作用.     

卡维地洛对急性病毒性心肌炎小鼠TNF-α,MMP-3及TIMP-1表达的影响

目的:研究卡维地洛对急性柯萨奇B3(CVB3)病毒性心肌炎小鼠的肿瘤坏死因子-α(TNFα-)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及组织型基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)表达水平的影响。方法:将80只雄性Balb/C小鼠随机分为3组:正常对照组(n=20),心肌炎组(n=30),卡维地洛组(n=30)。后2组经腹腔接种CVB3诱发急性VMC,感染24 h后,卡维地洛组小鼠灌胃给予卡维地洛10 m·gkg-1·d-1,连续14 d。于接种d 14随机从各组抽取8只小鼠取血后处死并留取心脏等标本。比较干预组与对照组的心肌病理改变,采用ELISA法检测血清TNFα-,采用RT-PCR法检测心肌MMP-3及TIMP-1 mRNA的表达。结果:与心肌炎组比较,卡维地洛组心肌病理损伤明显减轻;与正常组比较,病毒性心肌炎小鼠血清TNFα-明显升高,心肌MMP-3表达明显上调,TIMP-1表达明显下调;卡维地洛干预后小鼠血清TNFα-明显下降,心肌MMP-3表达明显下调,TIMP-1表达明显上调。结论:卡维地洛通过抑制TNFα-水平、下调MMP-3的表达、以及上调TIMP-1的表达,减轻心肌炎小鼠的心肌损害。     

白介素10对肿瘤坏死因子-α诱导心肌细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨凋亡诱导因子（AIF）在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导心肌细胞凋亡途径中的作用,以及白介素-10（IL-10）对TNF-α诱导心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 原代培养的乳鼠心肌细胞,分为六组（对照组、TNF-α 100 ng/ml 12 h、18 h和24 h组,IL-10 50ng/ml 19 h、IL-10 50.g/ml＋TNF-α 100 ng/ml 18 h组）.用流式细胞仪和Hoeehest 33258染色检测心肌细胞凋亡;weatertrl blot检测AIF蛋白的表达.结果 TNF-α 100ng/ml 12 h、18 h、24 h组心肌细胞的凋亡率较对照组均明显升高：12 h组流式细胞仪法（5.08±0.79）%与（2.2±0.77）%;18 h（14.39±2.31）%与（2.2±0.77）%;24（4.61±0.84）%与（2.2±0.77）%.18 h组Hoechst 33258法（18.936±2.79t）%与（2.890±1.326）%,P〈0.01;18 h凋亡率达高峰,明显高于12 h、24 h组[分别为（14.39±2.31）%与（5.08±0.79）%;（14.39±2.31）%与（4.61±0.84）%]加入TNF-α后12 h、18 h、24 h,较对照组AIF蛋白的表达明显增加,18h的AIF蛋白的表达增加更明显.结论AIF可能是TNF-α诱导心肌细胞凋亡的途径之一;IL-10对TNF-α诱导的心肌细胞凋亡有保护作用.     

褪黑素对内毒素血症大鼠TNF-α表达的影响

目的探讨褪黑素(MT)对脂多糖(LPS)诱导的内毒素血症大鼠循环血和血管组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法雄性SD大鼠,分组如下:(1)溶剂对照组;(2)LPS组;(3)LPS+MT组;(4)MT组。应用酶联免疫吸附法检测血清TNF-α含量;应用RT-PCR和免疫组织化学法检测TNF-α在血管组织的表达。结果与对照组相比,LPS组大鼠血清TNF-α含量、血管TNF-α mRNA水平均增高(P<0.01),TNF-α蛋白在血管内皮和平滑肌细胞阳性表达增多;而给予LPS前后应用MT干预治疗,可显著降低血清TNF-α含量、血管TNF-α mRNA生成,与同时间点LPS组比较均差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MT降低内毒素血症大鼠TNF-α生成和表达。     

灯盏细辛注射液对TNF-α诱导内皮细胞炎症分子的影响

目的：研究灯盏细辛注射液（Erigeron breviscapus injection,EBI）对离体培养的大鼠脑微血管内皮细胞（BMEC）炎症相关细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）蛋白表达的影响,初步探讨EBI抗脑缺血炎症损伤的机制。方法：采用肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）建立离体培养的大鼠BMEC炎症损伤模型,分别用0.1 mg&#8226;L-1和1 mg&#8226;L-1 EBI处理内皮细胞,使用ELISA试剂盒分析IL-1β蛋白表达的变化,流式细胞仪测定ICAM-1和VCAM-1荧光强度的变化。结果：EBI可以抑制TNF-α诱导的内皮细胞IL-1β高表达,降低TNF-α诱导的内皮细胞ICAM-1和VCAM-1高表达。结论：EBI可以降低由TNF-α诱导的内皮细胞过度表达IL-1β,ICAM-1和VCAM-1,从而对脑缺血炎症损伤具有一定保护作用。     

肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β在慢性心力衰竭中的变化及卡维地洛对其影响

目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和（IL-1β）在慢性心力衰竭（CHF）患者血清中的变化及卡维地洛对其影响。方法：采用酶联免疫法测定62例CHF患者和30例健康者（对照组）的血清TNF-α和IL-1β浓度。62例CHF患者随机分为两组：A组32例．给予常规抗心力衰竭治疗;B组在常规治疗的基础上加用卡维地洛。两组治疗3个月。结果：CHF组TNF—α和IL-1β水平显著高于对照组（P〈0．01）;CHF患者TNF-α和IL-1β治疗后心功能均有改善．而B组治疗后TNF—α和TL-1β下降明显（P〈0．01）。结论：TNF—α、IL-1β与心力衰竭的发生发展有关,卡维地洛可降低CHF患者的TNF-α、IL-1β．从而改善心功能。     

TNF-α对原代培养大鼠心肌细胞β_3-AR表达的影响及意义

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对心脏β3-肾上腺素能受体(β3-AR)表达的影响及其在心衰治疗中的意义。方法培养生后2 d SD大鼠心肌细胞,取第4天的细胞加入含不同浓度TNF-α的培养液,检测不同时间作用下β3-AR mRNA及蛋白表达。结果心肌细胞受TNF-α刺激后,β3-AR mRNA及蛋白随着TNF-α作用时间的延长、作用浓度的增加,表达量增加,至作用浓度为1.6 ng/mL、作用时间为12 h达峰值。结论TNF-α作用下心肌β3-AR上调,且有时间及浓度依赖性,这可能是引起心衰的原因之一。     

TNF-α抑制胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的　探讨TNF α对胶质瘤细胞生物学活性的影响。方法　应用MTT法研究经TNF α处理的大鼠C 6胶质瘤细胞的生长和增殖活性 ,采用透射电镜的方法和DNA琼脂糖凝胶电泳的方法观察TNF α诱导胶质瘤细胞的凋亡以及应用免疫细胞化学方法检测抑凋亡蛋白bcl 2的表达。结果　TNF α对体外培养C 6胶质瘤细胞的生长和增殖具有抑制作用 ;并诱导胶质瘤细胞凋亡 ,但抑凋亡蛋白bcl 2的表达无明显变化。结论　TNF α对恶性胶质瘤细胞具有抑制生长和诱导凋亡作用 ,而bcl 2蛋白表达水平不受影响。     

肿瘤坏死因子α诱导人乳腺癌MCF7/hGFP-Bax稳定表达细胞凋亡对Bax转移定位的影响

建立人乳腺癌MCF7细胞hGFP-Bax稳定表达细胞系，观察肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的细胞凋亡对Bax自细胞浆转移定位至线粒体的影响。荧光显微镜观察凋亡细胞Bax从细胞浆至线粒体的转移和对细胞核染色体断裂的影响，并观察和测定TNFα诱导细胞凋亡的量效和时效关系。以免疫荧光法观察GFP-Bax从细胞浆转移至线粒体和定位以及细胞色素c(Cyt-c)从线粒体的释出，MTT法测定TNFα的细胞毒作用，TMRE测定观察对细胞线粒体功能的影响。结果显示TNFα诱导的MCF7/GFP-Bax细胞凋亡与Bax自细胞浆转移定位于线粒体密切相关。     

SC58125抑制IκBα降解调节TNF-α诱导的HT29细胞凋亡

目的观察非甾体类抗炎药SC58125与TNFα是否具有协同诱导HT29细胞的凋亡作用,同时探讨其可能的分子机制。方法用MTT、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术,观察SC58125/TNFα对HT29细胞增殖与凋亡的影响;用EMSA及Westernblot检测转录因子NFκB的结合活性及IκBα的表达。结果SC58125与TNFα在抑制HT29细胞增殖及诱导其凋亡方面具有明显的协同作用,TNFα使HT29细胞生长受到明显抑制,DNA发生典型的“梯型”变化;SC58125可明显增强TNFα抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用,使HT29细胞凋亡率从11.2%±1.1%增加到53.9%±2.1%。凋亡过程中伴随Caspase3活性的激活;经TNFα刺激后的HT29细胞,IκBα迅速降解,NFκB的结合活性大大提高;而加入SC58125后,IκBα降解及NFκB的结合活性均明显受到抑制。结论SC58125与TNFα在诱导HT29细胞的凋亡方面具有明显的协同作用,这可能与SC58125抑制IκBα降解和激活Caspase有关。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与死亡受体结合后，可启动凋亡信号的转导。它对肿瘤细胞的高效杀伤作用使其成为最具有潜力的肿瘤治疗药物，但在TRAIL的研究领域中仍然存在许多热点问题有待解决。本文综述了近年来TRAIL认几诱导肿瘤细胞凋亡的胞内机制、抗肿瘤活性及安全性问题的研究进展。     

氟伐他汀对糖尿病大鼠TNF-α表达的干预作用研究

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在糖尿病肾病中的作用及他汀类药物对其的干预效果.方法 采用链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,给予氟伐他汀进行干预治疗8周,并设立相应对照组.观察药物对大鼠血糖、m脂、尿蛋白、肾功能以及血清和肾脏中TNF-α表达的影响.结果 氟伐他汀对各组大鼠血糖(P>0.10)、血脂(P>0.10)无明显影响,但能减少糖尿病大鼠的尿蛋白排泄量(P<0.01)、降低血清TNF-α(<0.05)和肾脏TNF-α的表达(P<0.01),减轻肾小球肥大和系膜增生.结论 氟伐他汀可能通过对TNF-α的抑制减少糖尿病大鼠的尿蛋白排泄,减轻肾脏病变,延缓糖尿病肾病的发展,且此作用不依赖于他汀类药物的凋脂作用.     

两型TNF-α及其受体在胸主动脉缩窄诱导压力负荷心肌肥厚小鼠中的表达

目的检测压力负荷所致心肌肥厚小鼠模型心肌组织中两型TNF及其受体的表达。方法使用野生型BALB／c小鼠,将其分为假手术组（n=10只）和手术组（n=8只）,通过胸主动脉缩窄术诱导压力负荷性心肌肥厚模型。术后2周处死小鼠,并对小鼠进行心脏形态学、血流动力学检测;使用WesternBlot方法对心肌组织中两型TNF-α及其受体表达进行检测。结果（1）在BALB／c小鼠中成功建立胸主动脉缩窄诱导心肌肥厚模型;（2）术后2周手术组小鼠心脏组织中可见分泌型TNF-α和跨膜型TNF-α表达量均有增加,且分泌型TNF-α表达量明显高于跨膜型TNF-α,差异有统计学意义（P〈0．05）;（3）术后2周小鼠心脏组织中TNFRl和TNFR2表达量均有增加,但TNFRl表达量高于TNFR2（P〈0．05）。结论在小鼠压力负荷诱导心肌肥厚模型中,两型TNF-α及其两种受体表达量均有增加。虽然起负性肌力作用的分泌型TNF-α及TNFRl表达起主导作用,其研究相对集中且广泛,但跨膜型TNF-α和TNFR2表达量增加提示其在这一病理过程中具有生物学作用。其作用和机制仍需进一步研究。     

[H~+]对TNF-α杀伤肝癌细胞7404作用的影响

目的通过调节细胞培养液H+浓度,观察恶性肿瘤细胞外不同H+浓度对TNF-α直接杀伤人肝癌细胞7404作用的影响。方法MTT法于96孔培养板上进行杀伤实验,测定培养液pH值分别为6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6状态下,TNF-α对杀伤人肝癌细胞7404的差异。结果pH值为6.6~6.8时,TNF-α对肝癌细胞7404的杀伤率较低,PH值为7.0、7.2、7.4、7.6时,TNF-α对7404细胞的杀伤率逐渐增高,pH值为7.4时TNF-α对7404细胞的杀伤效果最佳。结论TNF-α对肿瘤细胞杀伤作用在弱碱性环境下高于弱酸性环境。     

双环醇通过抑制线粒体凋亡途径缓解TNF-α/D-GalN诱导的爆发性肝损伤

目的探讨双环醇对肿瘤坏死因子-α/D-半乳糖胺(TNF-α/D-GalN)诱导肝损伤的保护作用及可能机制。方法雄性C57小鼠灌胃给予双环醇50、100及200 mg·kg-1·d-1,连续5 d,末次给药2 h后,腹腔注射TNF-α及D-GalN建立爆发性肝炎模型。观察小鼠生存率,评价血清ALT、AST水平,肝组织病理损伤及细胞凋亡情况。Western blot方法检测肝组织Bax、Bcl-2和激活型caspase-3/-9蛋白表达水平。根据离体线粒体膜通透性转换孔(mPTP)开放程度及线粒体细胞色素C的胞质释放情况评价双环醇抗凋亡效应与线粒体保护作用的相关性。结果双环醇明显提高TNF-α/D-GalN所致肝损伤小鼠的生存率,降低血清ALT、AST水平,减轻肝组织病理损伤和肝细胞凋亡。机制研究显示双环醇降低Bax并升高抗凋亡蛋白Bcl-2水平,减轻TNF-α/D-GalN诱导的线粒体mPTP开放及细胞色素C的胞质释放,进而抑制caspase-3/-9的活性及蛋白激活水平。结论双环醇对TNF-α/D-GalN诱导的爆发性肝损伤具有明显的保护作用,其机制与减轻线粒体损伤,进而抑制线粒体凋亡途径有关。     

[H+]对TNF-α杀伤肝癌细胞7404作用的影响

目的通过调节细胞培养液H 浓度,观察恶性肿瘤细胞外不同H 浓度对TNF-α直接杀伤人肝癌细胞7404作用的影响.方法MTT法于96孔培养板上进行杀伤实验,测定培养液pH值分别为6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6状态下,TNF-α对杀伤人肝癌细胞7404的差异.结果pH值为6.6～6.8时,TNF-α对肝癌细胞7404的杀伤率较低,PH值为7.0、7.2、7.4、7.6时,TNF-α对7404细胞的杀伤率逐渐增高,pH值为7.4时TNF-α对7404细胞的杀伤效果最佳.结论TNF-α对肿瘤细胞杀伤作用在弱碱性环境下高于弱酸性环境.