过滤对超速离心法提取外泌体的影响

目的 明确过滤对超速离心法提取外泌体数量及纯度的影响,为当前外泌体的提取方法提供一定参考。方法 收集健康人血浆和肺癌PC-9/IR细胞培养上清,分为未过滤组(unfiltration group,NC) 和过滤组(filtration group,GL),过滤组采用0.22 μm 过滤器过滤。超速离心法提取外泌体,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)检测过滤前后纳米颗粒(外泌体)数量及粒径大小变化,Aminis成像流式检测过滤前后CD9⁺外泌体(CD9⁺ exosomes,CD9⁺Exo)和CD63⁺外泌体(CD63⁺ exosomes,CD63⁺Exo)数量及百分比。结果 NTA结果显示,与NC组相比,血浆过滤后外泌体数量下降4.7倍,培养上清过滤后外泌体数量下降2.5倍。Aminis成像流式结果显示,血浆中CD9⁺Exo和CD63⁺Exo的数量过滤后分别下降了5倍和2.6倍,培养上清中CD9⁺Exo和CD63⁺Exo的数量过滤后分别下降了3倍和2.3倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。同时,Aminis成像流式结果显示,过滤后颗粒中CD9⁺Exo和CD63⁺Exo的百分比没有提高,差异无统计学意义。结论 过滤降低了超速离心法提取外泌体的数量,并未提高外泌体的纯度。     

口腔鳞癌细胞来源外泌体的提取与鉴定

目的 提取并鉴定口腔鳞癌细胞来源的外泌体。方法 超速离心法自口腔鳞癌CAL27细胞培养上清中提取外泌体,利用透射电镜观察其形态特征和大小,纳米粒度分析检测其粒径大小和分布,Western blot检测其外泌体特异性蛋白CD9、CD81和CD63的表达。结果 自口腔鳞癌CAL27细胞上清中分离出的外泌体,形态为具有膜结构的囊泡,直径约30-100 nm;粒径分析显示其粒径的主峰为127.0 nm,大小分布集中于(127.9±4.1)nm; Western blot结果显示其具有外泌体特异性蛋白CD9、CD81和CD63的表达。结论 利用超速离心法可成功提取口腔鳞癌CAL27细胞来源的外泌体,为后续探究外泌体调控口腔鳞癌发生发展的相关机制奠定实验基础。     

非小细胞肺癌外泌体的研究进展

外泌体是具有脂质双层膜结构的纳米囊泡,含有大量生物活性物质。非小细胞肺癌(NSCLC)的外泌体,通过与肿瘤微环境中的其他细胞相互作用,具有调节肿瘤病理进程、血管生成、转移和免疫逃逸等生物学功能。NSCLC外泌体中的特异性蛋白质和微RNA(miRNA)存在差异性表达,可作为诊断和预后的生物标志物,具有较大的潜在临床应用价值。目前,NSCLC外泌体中对肺癌发生、发展起关键作用的成分仍待明确,外泌体的应用标准化等问题是临床应用亟待解决的问题。     

非小细胞肺癌细胞外泌体源性FZD10促进体外血管生成

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）细胞外泌体源性FZD10在血管生成中的作用及其机制。方法 采用超速离心法分离外泌体,并利用Western blot和RT-qPCR技术分析NSCLC细胞（95D和H1299）、正常人支气管上皮细胞（BEAS-2B）及其外泌体中FZD10的表达;通过转染FZD10-siRNA敲低FZD10表达,用FZD10未敲低和敲低的NSCLC细胞外泌体分别处理HUVEC细胞,利用体外血管生成实验观察其成管能力,采用ELISA和RT-qPCR技术分析血管生成相关因子VEGFA和Ang-1的表达;进一步利用Western blot分析外泌体源性FZD10对信号通路PI3K、Erk1/2和YAP/TAZ激活的影响。结果 同BEAS-2B细胞及其外泌体相比较,FZD10在95D和H1299细胞及其外泌体中高表达（P<0.01）;95D和H1299细胞来源的外泌体可促进HUVEC的微管形成及VEGFA、Ang-1的蛋白分泌、m RNA的表达（P<0.01）,但在95D和H1299细胞敲低FZD10后这些效果受到抑制。FZD10的敲低可抑制PI3K、Erk1/2信...     

外泌体在非小细胞肺癌中的研究现状及进展

外泌体是一种由脂膜包被的、由大多数活细胞分泌的囊泡小体,携带有大量的miRNA和其他的核酸、蛋白等物质。外泌体中的内含物能够用于肺癌的诊断,且与肺癌细胞的生物学功能有关。在肺癌的发生发展过程中,癌细胞来源的外泌体既能够直接影响癌细胞的生物学功能,也能够通过影响巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞等其他细胞,进而间接促进肿瘤生长。了解外泌体与肺癌细胞的分子机制能够为肺癌的早期诊断与精准治疗提供新的契机,有望使其成为肺癌诊断的有效标志物和治疗的潜在靶点。本文就目前外泌体在肺癌中的相关研究进程展开综述。     

多步离心法提取K526细胞外泌体

目的:探讨多步离心提取K526细胞外泌体的实验方法.方法:选用白血病细胞株K562细胞为研究对象,取其培养上清液,经多步骤离心获取提取物,然后进行形态和蛋白成分分析.结果:形态和蛋白成分分析证实所提取到的物质正是K526细胞外泌体.结论:多步离心是一种方便实用的提取外泌体的方法.     

外泌体在非小细胞肺癌诊断及治疗中的作用

非小细胞肺癌(non-small cell lunch cancer,NSCLC)是最常见的肺癌类型,约占肺癌比例的85%,尽管NSCLC的病理生理学、诊断和预后等对本病的认识较强,但因其早期特异性诊断标志物的缺乏、对放化疗药物的耐药及转移扩散迅速等原因,现已成为全球病死率最高的恶性肿瘤之一。外泌体(exosomes)是由微环境中的各种细胞分泌的直径30～100nm的外囊泡,含有核酸、蛋白质等,能传递microRNAs、脂类等多种生物活性分子,并通过调节肿瘤与宿主间的相互作用等途径在肺癌的诊断和治疗中有着较大的潜在价值。本文就外泌体在NSCLC诊断及治疗中的作用做一综述。     

巨噬细胞来源外泌体的分离与鉴定

目的 分离并鉴定巨噬细胞来源的外泌体,为当前外泌体的提取研究提供一定参考,并为后续开展外泌体与牙周组织再生的相关研究奠定基础.方法 体外培养巨噬细胞RAW264.7,使用超速离心和超滤结合法提取其外泌体,通过BCA试剂盒测定外泌体的蛋白总量,透射电镜下观察其形态特征,粒径分析仪测定其粒径大小及浓度,免疫印迹法检测外泌体...     

脑源性外泌体助力精准诊断阿尔茨海默病

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种持续进展的神经变性病,在过去不到30年的时间内一跃成为全球第5大死因,然而,目前仍缺乏有效的治疗方法.早期、精准的诊断AD是目前研究的重点和难点,开展便捷、有效并且能够反映AD内在病理学改变的生物学标志物研究,将有助于进行二级预防和药物研发.脑源性外泌体...     

TNF-α刺激的IEC-6细胞源性外泌体miRNAs表达谱差异

目的:分析肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激的IEC-6小肠上皮细胞源性外泌体miRNAs的表达差异.方法:以TNF-α(终浓度50 ng/mL)刺激IEC-6细胞4 h(TNF-α-exosome组)后收集上清液,外泌体提取试剂盒结合超速离心法分离提取上清液中的外泌体;...     

小鼠胰岛微血管内皮细胞外泌体的提取和鉴定方法

目的：建立小鼠胰岛微血管内皮细胞来源的外泌体的提取和鉴定方法,为糖尿病胰岛微血管内皮受损的发病机制研究及重建胰岛微循环完整性的应用提供必要材料。方法选取小鼠胰岛微血管内皮细胞株（MS-1）细胞作为研究对象,取其培养上清液,经多步离心结合蔗糖／D2O垫超速离心方法获取提取物,然后采用透射电镜和Western blotting 法对提取物进行形态和蛋白成分分析,以确定其是否为外泌体。结果提取物呈形态均一的类圆形囊泡,有完整双层膜包绕,内部含有低电子密度物质。囊泡大小约为40～100 nm,可散在分布,也可聚集成团,提取物均阳性表达CD63、CD9和TSG101分子。结论经过形态和蛋白成分分析证实所提取到的物质正是MS-1细胞来源的外泌体,便于后续临床和基础研究工作的开展。     

树突状细胞外泌体与肺癌免疫治疗

树突状细胞（DC）是目前所发现的体内功能最强的抗原递呈细胞。DC可将抗原信息传递给T细胞,诱导高效而特异的抗肿瘤免疫应答。外泌体是直径为30～100 nm的纳米级囊泡,可携带源细胞的多种功能分子,并可在细胞间进行信息传递。DC来源的外泌体（DEXs）由于携带亲代DC主要组织相容性复合体（MHC）-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80、CD86和细胞间黏附分子（ICAM）等特征蛋白,被认为可以用来代替DC,从而激活免疫应答。     

干细胞源外泌体及改良外泌体在治疗急性心肌梗死中的研究进展

干细胞疗法可缩小急性心肌梗死的梗死面积,而干细胞源外泌体可能是干细胞发挥心肌保护作用的主要载体,外泌体内包含脂质、蛋白质、信使RNA、微RNA等,是细胞间传递信息的重要载体,可通过抗凋亡、抗纤维化、抗炎、促进内皮细胞增殖和血管生成在急性心肌梗死中发挥生物学作用.近年来通过各种方法改良干细胞源外泌体,提高了体内移植后外泌...     

肝癌细胞外泌体的摄取与作用研究

目的 目前不同类型细胞对同一种外泌体摄取差异性比较的报道尚不多见,为进一步明确肝癌细胞外泌体的信息转运机制和生物学功能,文中旨在通过研究不同类型细胞对肝癌外泌体摄取的差异,探讨肝癌外泌体对不同肿瘤细胞增殖的影响和对肝细胞的影响.方法 用超高速离心法提取肝癌外泌体并通过透射电镜、BCA、Western blot验证;利用...     

鼻咽癌细胞来源外泌体的提取和鉴定

目的：从鼻咽癌细胞系CNE－1、CNE－2及SUNE－1中分离外泌体,并对CNE－2所得外泌体进行鉴定。方法使用ExoQuick－TC（ SBI）试剂盒法从鼻咽癌细胞系CNE－1、CNE－2及SUNE－1培养上清液分离出外泌体,使用透射电镜观察其形态特征,BCA法进行蛋白定量,Western blot进行外泌体特异性抗原分子CD63及筏蛋白－1鉴定。结果3种鼻咽癌细胞系培养上清液中均分离出大量泡状物,透射电镜下观察呈圆形的囊泡,直径为40～130 nm,具有完整胞膜。且CNE－2来源的此种泡状物表达外泌体特异性膜筏蛋白－1、CD63。10 mL对数生长期CNE－2培养上清液得到487μg／mL（以蛋白计）的外泌体200μL。结论本实验室保存的3种鼻咽癌细胞系很可能均能产生外泌体,ExoQuick－TC（ SBI）法能够简便快速地从鼻咽癌细胞系中提取到外泌体,不需要超速离心,为鼻咽癌的防治研究提供了新的研究方法和靶点。     

外泌体源性环状RNA在胃癌中的研究进展

外泌体是由多种细胞分泌的囊性小泡,其内包含多种物质,如脂质、蛋白质、环状RNA(circRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)和微小RNA(miRNA)等物质。而多种外泌体源性环状RNA在胃癌患者血浆中的表达量与正常人血浆中的表达量具有明显差异,直接或间接地影响肿瘤的代谢、转移及预后。较多研究表明,外泌体源性环状RNA在胃癌的发展及向远处转移等事件中起着重要作用,文章重点从外泌体源性环状RNA在胃癌中的诊断、转移及预后等方面的作用进行综述。     

前列腺癌细胞外泌体抑制成骨细胞分化

目的：探讨前列腺癌细胞外泌体对成骨细胞分化的影响。方法：采用ExoQuick?TC试剂盒与超滤法结合分离纯化前列腺癌细胞系PC3的外泌体,通过电镜、外泌体蛋白标志物CD63进行鉴定。用纯化的前列腺癌细胞外泌体处理前成骨细胞,提取总RNA,采用荧光实时定量PCR检测早期成骨分化标志物Runx2、Osx和中期成骨分化标志物 Alp的表达情况。此外利用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色、茜素红染色方法检测成骨分化情况。结果：前列腺癌细胞外泌体可以进入到前成骨细胞中,并且外泌体处理前成骨细胞后,与对照组相比,Alp、Runx2与Osx的表达量显著降低（P < 0.05）,染色结果显示成骨分化受抑制。结论：在前列腺癌中,前列腺癌细胞会分泌出外泌体作用于前成骨细胞,并抑制成骨细胞的分化。