人参总皂甙对骨髓巨噬细胞的影响及与造血调控的关系

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对骨髓巨噬细胞(BMMφ)生物学活性的影响及其与造血调控关系。方法：采用骨髓造血祖细胞体外培养，造血生长因子生物活性检测，免疫细胞化学，核酸探针原位杂交等技术。结果：经TSPG诱导制备的BMMφ的培养上清可提高髓系造血祖细胞的集落产率；经TSPG诱导后，BMMφ表达EPO，IL-3，IL-6，GM-CSF的蛋白水平有不同程度提高；EPO mRNA，GM-CSF mRNA的表达水平和强度明显提高。结论：TBPG可以刺激造血诱导微环境中的巨噬细胞，从基因水平和蛋白水平2级层次上促进造血调控因子的合成和分泌，进而促进CFU-Mix，CFU-E，CFU-GM的增殖分化。     

人参总皂甙诱导淋巴细胞表达GM-CSF的实验研究

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人淋巴细胞表达GM-CSF的影响，及其与人粒细胞．巨噬细胞系血细胞发生调控的关系。方法：采用造血祖细胞、胸腺细胞和脾细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。结果：TSPG能显著刺激粒细胞，巨噬细胞系造血祖细胞(CFU-GM)增殖；经TSPG诱导制备的胸腺细胞和脾细胞条件培养液富含GM-CSF样活性；TSPG能显著促进胸腺细胞和脾细胞的GM-CSF蛋白和，mRNA表达。结论TSPG可能通过直接和／或间接途径促进淋巴细胞合成和分泌GM-CSF，进而促进CFU-GM的增殖分化。     

人参总皂甙对人淋巴细胞表达早期造血生长因子的影响

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人淋巴细胞表达早期造血生长因子的影响,探讨人参“补气生血”的现代分子生物学机理。方法：采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物活性检测、免疫细胞化学、核酸分子原位杂交技术,研究TSPG对胎儿胸腺细胞、脾细胞表达早期造血生长因子的影响及其机理。结果：经TSPG诱导制备的胎儿胸腺细胞条件培养液(HTCM)、脾细胞条件培养液(HSCM)对人髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)的增殖分化有明显促进作用;经TSPG诱导后胎儿胸腺细胞、脾细胞内IL-3的蛋白及mRNA表达显著提高。结论：TSPG可能诱导人淋巴细胞表达早期造血生长因子,从而促进人早期血细胞增殖分化。     

人参总皂甙诱导人造血基质细胞表达IL-3的实验研究

目的 研究人参总皂甙(TSPG)对人早期血细胞发生的影响及其机理，进一步探讨人参“补气生血”的现代分子生物学机理。方法 采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子(HGF)生物活性检测、免疫细胞化学、核酸分子原位杂交技术，研究TSPG对造血基质细胞表达白细胞介素-3(IL-3)的影响及其机理。结果 TSPG体外作用能明显促进人早期髓系多向性造血祖细胞(CFu-Mix)的集落形成；经TSPG诱导制备的人骨髓基质细胞(BMSG)、脐静脉内皮细胞株(EcV304)、单核细胞株(THP)条件培养液对CFU-Mix的增殖分化有明显促进作用；经TSPG诱导后BMSC、EcV304、THP细胞内IL-3的蛋白及mRNA表达显著提高。结论 TSPG能促进人早期血细胞的增殖分化，其机理可能与TSPG诱导人造血基质细胞表达IL-3有密切关系。     

人参多糖对粒单系造血祖细胞增殖分化的影响

本文采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物活性检测、免疫细胞化学等实验血液学技术检测人参多糖(GPS)体外作用对人粒单系造血祖细胞(CFU—GM)增殖分化的影响及GPS刺激制备的胸腺细胞培养上清液(HTCM)、脾细胞培养上清液(HSCM)、骨髓基质细胞条件培养液(HBMSCM)中GM-CSF的生物活性。结果发现：①在有外源性粒单系集落刺激因子(GM—CSF)存在的情况下,GPS能显著促进CFU—GM的增殖与分化。②经GPS体外诱导制备的胸腺细胞、脾细胞、骨髓基质细胞的条件培养液能明显提高人CFU—GM的产率。③经GPS体外刺激后,胸腺细胞、脾细胞、骨髓基质细胞GM-CSF蛋白表达水平较对照组明显提高。结果表明GPS可能通过直接和/或间接途径促进胸腺细胞、脾细胞和造血诱导微环境中的基质细胞合成和分泌GM—CSF或GM-CSF样活性,进而促进CFU-GM的增殖和分化。     

造血生长因子的临床应用

造血生长因子(Hemtopoietic Growth Factors, HGF)是细胞因子中的一大类，可以在体内、外刺激造血干/祖细胞增殖、分化、成熟和释放。随着生物医学工程的急速发展和制药工艺的进步，目前研制出多种造血生长因子供临床使用或试用。其中，促红细胞生成素(EPO)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素3(IL-3)、白细胞介素11(IL-11)和促血小板生成素(TPO)已有较多的临床经验，本文分别对这些HGF的应用作一简介。1 促红细胞生成素(EPO)EPO是分子量为18kDa的蛋白，充分糖基化后，分子量在34—39k…     

人参总皂甙诱导L—细胞产生造血调节因子的实验研究

为探讨中药人参的重要有效成分人参总皂甙（TotalSaponinsofPanaxGinseng，TSPG）调节造血的可能机制，在体外祖细胞培养中以TSPG诱导（LCCMTSPG）或未经诱导（LSCM）的L—细胞条件培养液替代祖细胞生长因子，观察集落产率的变化，并与TSPG和LcCM共同作用（LcLM＋TSPG）后的集落产率作比较。结果如下：LcCMTSPG作用后的CFU－GM（位—单系祖细胞）、BFU－E（早期红系祖细胞）、CFU－E（晚期红系祖细胞）的集落产率分别为24．8±9．01、61．73±11．26、145．93±17．22，与LcCM组（51．85±10．08、33．95±825、108．66±13．56）相比分别为下降（P＜0．05）、提高（P＜0．01）、提高（P＜0．01）。提示TSPG可诱导L—细胞产生选择性作用于粒—单系的造血抑制因子和作用于红系的生长因子。LCCM＋TSPG作用后CFU－GM、BFU－E、CFU－E集落产率分别为74．25±10．67、42．5±9．32、98±10．81，与LcCM组相比分别为提高（P＜0．05）、提高（P＜0.05）、无变化，提示TSPG可能与LcCM中促进CFU－E、BFU—E生长的因子协同作用。该研究表明TSPG可经影响基质细胞产生造血调节因子或与造血调节因子共同调节血细胞发生。     

过表达miR-16下调IL-4诱导分化的THP-1细胞IL-10和Arg1的表达

目的探讨慢病毒介导的miR-16对THP-1巨噬细胞表达白细胞介素10(IL-10)和精氨酸酶1(Arg1)的影响。方法利用重组人IL-4(rh IL-4)将THP-1细胞诱导分化为M2型巨噬细胞,利用ELISA检测诱导前后细胞IL-10的分泌,实时荧光定量PCR检测THP-1巨噬细胞诱导前后miR-16的表达;通过慢病毒感染获得miR-16过表达细胞;ELISA检测miR-16过表达细胞和对照细胞IL-10的分泌;流式细胞术检测miR-16过表达细胞和对照细胞IL-10的表达;Western blot法检测miR-16过表达细胞和对照细胞Arg1的表达。结果 THP-1细胞经IL-4诱导后,培养上清中IL-10的分泌逐渐增加,并在第6天达峰值。IL-4将THP-1细胞诱导为M2型巨噬细胞后,miR-16表达下调;慢病毒感染M2型巨噬细胞经嘌呤霉素筛选后GFP表达率提高至97.7%;ELISA检测M2型巨噬细胞miR-16过表达组上清液中IL-10的分泌量为(72.15±0.16)pg/m L,较对照组(103.47±0.14)pg/m L低。流式细胞术检测显示miR-16过表达细胞IL-10的平均荧光强度(Gm)为3.47,胞内IL-10的表达水平较对照组(Gm=12.40)低。过表达miR-16后,M2型巨噬细胞中Arg1表达降低。结论慢病毒介导的miR-16能够抑制IL-4诱导分化的THP-1巨噬细胞中IL-10和Arg1的表达。     

人参总皂甙体外诱导CD34+造血干/祖细胞增殖的作用

目的：探讨人参总皂甙(TSPG)协同造血生长因子体外诱导CD34~ 造血干/祖细胞(HSC/HPC)增殖的作用。方法：收集人脐血细胞,采用Stemsep TM干细胞分选系统分离纯化CD34~ HSC/HPC,经不同剂量TSPG加入不同造血生长因子组合进行培养,检测细胞总数、CD34~ 细胞及集落形成细胞总数(CFCs)的变化。结果：TSPG 10、20、50和70μg/ml均可不同程度地提高细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞扩增倍数,TSPG 50μg/ml是最佳刺激浓度,可使细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞分别增至(2470．50±79．96)倍、(53．96±4．29)倍和(21．86士3．09)倍。结论：合适剂量的TSPG能够促进CD34~ 造血干/祖细胞体外增殖。     

人参总皂甙诱导造血生长因子生成的实验研究

为探讨人参“补气生血”的现代生物学机理，采用造血祖细胞体外培养，造血生长因子生物活性检测等技术，研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对造血生长因子的诱导生成作用。结果表明，经ＴＳＰＧ诱导分别制备的脾细胞、巨噬细胞、成纤维细胞和骨髓基质细胞的培养上清对髓系造血祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＭＫ）的体外集落增殖均有显著刺激作用。ＴＳＰＧ也能促进脾细胞、成纤维细胞和巨噬细胞分泌ＩＬ－６；刺激脾细胞产生     

小鼠下颌下腺条件培养上清对造血祖细胞增殖的影响

目的　研究下颌下腺与血细胞发生的关系 ,探讨下颌下腺对造血功能的调节作用。　方法　采用造血祖细胞体外培养及造血生长因子 (HGF)活性检测法。　结果　正常雄性和雌性小鼠下颌下腺组织培养上清(SGCM)对粒单系祖细胞 (CFU - GM)、红系祖细胞 (BFU - E、CFU - E)和巨核系祖细胞 (CFU - Meg)的增殖有明显促进作用 ;正常雄性小鼠 SGCM对 CFU - E和 CFU - Meg的刺激活性明显高于正常雌性小鼠 SGCM。贫血模型雌、雄小鼠的 SGCM能提高 BFU - E、CFU - E的产率 ;雌性贫血模型小鼠的 SGCM亦能提高 CFU - Meg的产率。IL - 3能促进 SGCM对 BFU - E、CFU - E的增殖。　结论　小鼠下颌下腺可能通过分泌造血生长因子样物质促进造血祖细胞增生 ,从而发挥造血调控功能     

当归多糖诱导L－细胞产生造血生长因子的实验研究

用造血祖细胞体外培养、造血生长因子检测和流式细胞术等方法,研究当归多糖（ＡＰ）诱导Ｌ－细胞（成纤维细胞株）产生造血生长因子及其对血细胞发生的调节作用。结果表明,Ｌ－细胞条件培养液（ＬｃＣＭ）对造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｅ）的体外增殖呈双向调节作用;１０％ＬｃＣＭ能促进骨髓造血细胞进入增殖活跃的Ｓ＋Ｍ／Ｇ２期;经ＡＰ诱导制备的ＬｃＣＭ在有或无外源性造血生长因子（如Ｅｐｏ,ＢＰＡ,ＧＭ－ＣＳＦ）存在时均对造血祖细胞的克隆增殖显示较高刺激活性;ＡＰ或ＩＬ－１与造血生长因子间似无协同作用。本研究提示ＡＰ可能通过诱导造血微环境的成纤维细胞分泌某些造血生长因子,从而促进造血祖细胞增殖分化,这或许是当归＂补血＂的生物学机理之一。     

脐带血清对骨髓粒—巨噬细胞集落形成的影响

在骨髓细胞半固体琼脂培养体系中，研究脐带血清（ＣＢｓ）对骨髓粒—巨噬细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）的影响，单纯应用ＣＢｓ培养可使骨髓ＣＦＵ－ＧＭ（ｘ±ｓ为２６．０３７５±１０．２３２７）显著的高于正常成人外周血清（ＰＢｓ）组（ｘ±ｓ为１１．５９１７±３．６０４７；Ｐ＜０．００１）。ＣＢｓ加粒－巨噬细胞刺激因子，ＧＭ－ＣＳＦ组ＣＦＵ－ＧＭ（ｘ±ｓ为１１９．０７９２±３５．０９９１）是单纯ＣＢｓ组的４．５７倍；而ＰＢｓ加ＧＭＣ－ＳＦ组（ｘ±ｓ为９７．１２５±２６．７５５９）是单纯ＰＢｓ组的８．３８倍。有白细胞介素－６（ＩＬ－６）存在的ＣＢｓ组，ＣＦＵ－ＧＭ（ｘ±ｓ为３１．９３３３±１０．９１４４）明显的高于单纯ＣＢｓ组（Ｐ＜０．０２）。提示ＣＢｓ中含有较高水平的内源性ＧＭ－ＣＳＦ。     

人参总皂甙对造血生长因子活性及其mRNA表达的影响

目的　探讨人参“补气生血”的现代生物学机理。　方法　采用核酸分子原位杂交和造血生长因子生物活性检测等技术,研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对造血生长因子活性及其ｍ ＲＮＡ表达的影响。　结果　ＴＳＰＧ能显著促进小鼠骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ）、腹腔巨噬细胞（ＰＭ）和脾细胞（ＳＰＣ）的粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白细胞介素－６（ＩＬ－６）ｍ ＲＮＡ的表达,经ＴＳＰＧ诱导制备的ＢＭＳＣ、ＰＭ和ＳＰＣ条件培养上清液含有较高的爆式红系集落刺激活性（ＢＰＡ）、粒－巨噬细胞集落刺激活性（ＧＭ－ＣＳＡ）和巨核细胞集落刺激活性（ＭＫ－ＣＳＡ）。　结论　ＴＳＰＧ促进血细胞生成的机理与其诱导造血生长因子的基因表达有密切关系。     

抗凋亡Bcl－2蛋白在人骨髓造血组织中的定位与分布

通过双际记免疫组织化学技术，探讨了抗细胞凋亡的Ｂｃｌ－２蛋白在１２例反应性骨髓组织中的定位与分布。结果显示，ｂｃｌ－２特异性单克隆抗体与荆豆素ＵＥＡ－１标记的骨髓造血细胞彼此分离、互不重叠。提示人骨髓中Ｂｃｌ－２蛋白阳性造血细胞源自粒系或淋巴系，而不是红系或巨核系。     

PERSISTENT and ENHANCED EXPRESSION OF c-fos GENE PRODUCTS IN VARIOUS KINDS OF HUMAN HEMATOPOIETIC CELL LINES. Immunofluorescence Study Using Prepared Monoclonal Antibodies

Two kinds of monoclonal antibodies recognizing fos proto-oncogene (c-fos) products were prepared using a synthetic oligopeptide corresponding to amino acids 127-152 of the fos oncogene products. These monoclonal antibodies (FO-120 & FO-145) detected fos gene products induced in a human monocyte cell line (U-937) by phorbol acetate (TPA) and induced in both human and mouse fibroblast cell lines (284, BALB/c 3T3) by serum-stimulation. One of the monoclonal antibodies (FO-120) reacted with 50-kDa and 42-kDa proteins and the other antibody (FO-145) reacted with a 30-33-kDa protein. The expression of the fos gene in various human hematopoietic cell lines was investigated using these prepared monoclonal antibodies. While almost all hematopoietic cell lines tested reacted with these monoclonal antibodies to various degrees, the majority of normal peripheral blood lymphocytes cultured with lectin (PHA) and interleukin 2 (IL-2) did not, suggesting that cells of some permanent hematopoietic cell lines, irrespective of their lineage specificity and growth factor dependency, continuously express the fos oncogene. These monoclonal antibodies may be useful for detecting early neoplastic changes in hematopoietic cells. ACTA PATHOL JPN 38: 1523-1536, 1988.     

血液系统肿瘤细胞系中CD34+干细胞特性研究

目的探讨造血系统多种肿瘤细胞系中CD34^＋干细胞是否存在,并对其性质进行研究。方法利用流式细胞检测技术,检测了急性单核细胞白血病细胞THP-1、红白血病细胞MEL、慢性粒细胞白血病细胞K562,急性淋巴细胞白血病细胞MOLT-4,恶性淋巴瘤细胞RAJ1,多发性骨髓瘤细胞RPM18226、SP2／0和树突状细胞肉瘤DCS肿瘤细胞中CD34^＋的肿瘤细胞所占的比例。选取了MOLT-4和K562细胞系,分选出CD34^＋细胞,继续培养,观察CD34^＋细胞比例变化;比较CD34^＋与CD34^＋肿瘤细胞在功能状态、细胞周期、分化状态、耐药性的差异。结果8种不同类型造血系统肿瘤细胞中CD34阳性率依次为2．5％、5．2％、3．1％、2．1％、1．4％、0、0和6．2％。从K562细胞中分选出CD34^＋细胞,继续培养后恢复为原来比例。MOLT-4和K562细胞系中分离出的CD34^＋细胞RNA含量低、细胞处于Gn／G,期的比率较高（81．5％和77．9％）、分化抑制蛋白Id-1表达强阳性／阳性（分化程度低）、多耐药蛋白p-gP高表达（耐药性强）。结论血液系统肿瘤细胞系中有一小部分肿瘤细胞带正常造血干细胞的标记,并且带有这种标记的细胞表现出更为原始的细胞特性,其中包括血液肿瘤细胞干细胞。