拓扑异构酶——癌化疗的新靶

一类具有调节DNA三维结构的核酶称为DNA拓扑异构酶(Topoisomerases),它们在细胞的翻译、转录和有丝分裂的生命过程中起重要作用。抗癌药蒽环类、鬼臼霉素类和吖啶类干扰这些酶,尤其是干扰TopoⅡ酶的活性。DNA—拓扑异构酶Ⅱ复合物是酶活性的中介体,其如果被药物所稳定则形成一种“断裂复合物”而显示药物的细胞毒作用。 拓扑异构酶有二型,即TOPOⅠ和TOPOⅡ。TOPOⅠ酶是分子量为100KD的单体,它能断裂一条     

若干植物生长控制剂衍生物的细胞毒作用研究

我们研究了19种有生物活性载体(磺胺、9-氨吖啶、对氨水杨酸及异烟肼)的植物生长抑制剂(4氯或2,4—双氯或2,4,5一三氯苯氧乙酸,2,3,5一三氯苯甲酸或α—蔡乙酸)衍生物在体外对低分化鼻咽癌细胞株CNE_2生长的抑制作用。属于含二或三氯的苯氧乙酸与磺胺类或9—氨吖啶的结合物,在100μg/ml浓度下,对细胞生长的抑制率>50％者有9种药物,>80％者有5种,其IC_(50)已测定,效力最强的2,4一二氯苯氧乙酰9—氨基吖啶(2,4—D—ACD的IC_(50)为4.58μg/ml,有进一步作体内抗癌作用研究的价值。     

二乙基鄰菲缠啉二氯锡的细胞毒作用和对DNA的损伤

本文研究了二乙基鄰菲缠啉二氯锡(SnI)的细胞毒作用和对DNA的损伤。用噻唑蓝(MTT)法,SnI与HeLa细胞一起温育48小时后,细胞生长半数抑制浓度(IC50)为4.4μg/ml。用台盼蓝拒染法,SnI与HeLa细胞一起温育72小时后,IC50为0.32μg/ml。两种方法表明二乙基鄰菲缠啉二氯锡对HeLa细胞有显著的细胞毒作用。用琼脂糖凝胶电泳技术表明,SnI浓度为50μg/ml能直接使P_4DNA和PBR_(322)DNA断裂水解而不要求DNA拓扑异构酶Ⅱ的参予。     

以DNA拓扑异构酶Ⅱ为靶点的一种抗癌药筛选的新方法

借鉴文献方法,我们以小鼠L_(1210)白血病细胞为村料,提取DNA拓扑异构酶Ⅱ,鉴别了其生物学特性,并观察了十多种已知及未知的抗癌药物对其活性的影响,初步建立了以DNA拓扑异构酶Ⅱ为靶点的新抗癌药筛选方法。实验表明DNA拓扑异构酶Ⅱ对DNA链切割反应是可逆的,并且高浓度的氯化钠对其活性有抑制作用。许多药物能促进拓扑酶Ⅱ引起的DNA链断裂如ADM、DNR、Vp16及ACM—B等,而另一些药物如萜类化合物BC_1、BC_4等则能抑制链断裂反应。     

灵芝提取物对DNA拓扑异构酶的抑制作用及诱导K562细胞凋亡

目的 :研究中华灵芝宝的抗肿瘤作用机理。方法 :DNA超螺旋解旋法检测中华灵芝宝对拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ (TOPOⅠ、Ⅱ )活性的影响 ;琼脂糖凝胶电泳检测其对DNA的直接打断作用及诱导K5 6 2细胞凋亡的能力。结果 :中华灵芝宝能抑制TOPOⅠ、Ⅱ的活性 ,促进DNA的解旋、断裂 ;同时还能直接打断质粒和大分子DNA ;作用于K5 6 2细胞后电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带。结论 :中华灵芝宝能同时抑制TOPOⅠ、Ⅱ活性 ,直接打断质粒和大分子DNA ,并能诱导K5 6 2细胞凋亡。     

DNA拓扑酶抑制剂诱导细胞凋亡的研究

目前 ,以 DNA拓扑异构酶为靶点的抗癌药已成为临床有效的抗肿瘤一线药物 ,随着此类药物越来越多地被开发 ,其作用机制的研究受到广泛关注。迄今其诱导肿瘤细胞凋亡的机制仍有探索中 ,现作一简要综述。1　 DNA拓扑异构酶主要生理功能及其抑制剂的作用机制　　　真核细胞 DNA拓扑异构酶 (Topoi-som erase Topo)主要分为 Topo 及Topo ,其生理功能主要以两种方式体现 ,一是调节控制 DNA超螺旋状态及打结或解结 DNA的环连体状态 ;二是直接参与那些需打断并重新连接 DNA分子链的细胞过程。Topo与 DNA共价结合形成断裂复合物 ,使 DNA产…     

SOD模型化合物对离体肝癌细胞DNA的损伤作用

目的：探讨超氧化物歧化酶模型化合物(models of superoxide dismutase．MSOD)对离体人肝癌细胞毒作用。方法：采用离体培养的人肝癌细胞SSMC-7721细胞株．常规方法接种入14孔板．加入SOD模型化合物．以彗星实验为终点效应．检测其对肿瘤细胞的影响。结果：通过彗星试验检测，各剂量组所起的肝癌细胞DNA损伤或DNA断裂的程度呈明显的剂量效应关系。结论：这种模型化合物对离体培养的肝癌细胞有明显细胞毒作用。     

SOD模型化合物对离体肝癌细胞DNA的损伤作用

目的 :探讨超氧化物歧化酶模型化合物 (modelsofsuperoxidedismutase ,MSOD)对离体人肝癌细胞毒作用。方法 :采用离体培养的人肝癌细胞SSMC 772 1细胞株 ,常规方法接种入 2 4孔板 ,加入SOD模型化合物 ,以彗星实验为终点效应 ,检测其对肿瘤细胞的影响。结果 :通过彗星试验检测 ,各剂量组所起的肝癌细胞DNA损伤或DNA断裂的程度呈明显的剂量效应关系。结论 :这种模型化合物对离体培养的肝癌细胞有明显细胞毒作用。     

拓扑异构酶与肿瘤细胞耐药性

拓扑异构酶可分为二类即拓扑异构酶Ⅰ(TOPOI)和拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)。TOPOⅠ在细胞中DNA空间构型变化,DNA复制、重组、转录、切割、再连接、细胞染色质的组化以及有丝分裂中均起重要作用。TOPOⅡ是真核细胞生存所必不可少的核酸,它的作用涉及到核酸代谢的诸方面,包括DNA复制、mRNA加工、染色体的分离及浓缩、核基质的组成等。许多抗癌药物正是通过干扰DNA的正常代谢而发挥抗癌作用。肿瘤化疗失败的重要原因之一是耐药性的产生。耐药性的原因多种多样,最近研究表明拓扑异构酶的变化是一个不可忽视的原因,现综述如下。     

顺铂、卡铂和双环铂对pBR322质粒DNA的断裂作用

目的：研究铂类抗癌药顺铂、卡铂和双环铂对pBR322质粒DNA的致断性。 方法：用琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像分析方法 结果：顺铂、卡铂、双环铂均可诱发pBR322质粒DNA断裂,对质粒DNA的半数致断剂量分别为33.71 μmol/L、3.31 mmol/L和1.61 mmol/L。 结论：对pBR322质粒DNA的致断性强弱依次为：顺铂>双环铂>卡铂。     

不同细胞DNA氧化损伤及自身修复能力的分析

本文利用先进的“彗星”电泳法分析了不同种类细胞ＤＮＡ氧化损伤及自身修复能力，结果显示Ｈｅｌａ，ＧＭ１８９９，ＨｅｐＧ２，分化的成纤维细胞对Ｈ２Ｏ２引起的损伤具有高度敏感性，当Ｈ２Ｏ２剂量达到１００μＭ时，四种细胞ＤＮＡ损伤率在室９８－９９％，然后淋巴细胞在１００μＭＨ２Ｏ２剂量处理后ＤＮＡ损伤率仅有４２．１％显示出对氧化损伤具有较高的抵抗力，在分析ＤＮＡ修复能力时发现，ＤＮＡ损伤率达到９８％的Ｈｅ     

子宫内膜增生过长与内膜腺癌腺上皮细胞DNA定量分析

本文采用显微分光光度计技术对26例正常子宫内膜、子宫内膜增生过长和子宫内膜腺癌的腺上皮细胞DNA进行定量测定,结果表明:7例囊腺型增生过长细胞核DNA含量与正常增殖期内膜相近;7例腺瘤型增生DNA平均含量介于囊腺型增生与内膜癌之间,其中2例DNA含量及细胞倍体分布与内膜癌相似;8例内膜癌DNA含量显著高于增殖期内膜细胞,非整倍体细胞明显增多。DNA含量的测定能更客观精确地反映内膜细胞的增生、分化程度,并作为探索内膜癌早期诊断的一项指标。     

甲醛和丝裂霉素C的DNA交联作用研究

目的：探讨用彗星试验检测DNA交联剂作用的时间－效应关系及验证其应用的可行性。方法：以过氧化氢（H2O2）作标准DNA断裂剂,用慧星试验对甲醛诱导TK6细胞DNA交联作用的时间－ 效应关系进行了探讨,并用甲醛和丝裂霉素C进行验证。结果：在一定浓度范围内,随着甲醛和丝裂霉素C浓度的增加,由H2O2造成的TK6细胞DNA迁移距离逐渐减少,时间效应的研究表明,在H2O2浓度一定时,随着甲醛染毒 时间的延长,其DNA交联作用增加,结论：彗星试验既可检测DNA－蛋白质交联又可检测DNA－DNA交联,对DNA－蛋白质交联的检测更敏感。     

VEGF在甲状腺癌及转移淋巴结中的表达及与DNA倍体、AgNOR的关系

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）在甲状腺癌及其转移淋巴结中的表达及与癌细胞DNA倍体、核仁形成区（AgNOR）的关系。方法应用免疫组织化学SABC法检测136例甲状腺癌及淋巴结中VEGF的表达，同时进行细胞DNA含量及AgNOR自动图像分析检测，10例正常甲状腺组织作对照。结果10例正常甲状腺组织VEGF（一），136例甲状腺癌组织中VEGF阳性表达72．79％（99／136），淋巴结中VEGF阳性表达97％（132／136）。DNA倍体平均值及AgNOR计数5年以上生存组病例明显低于5年以内死亡组（P＜O．01，P＜O．05）。结论检测VEGF、DNA倍体及Ag－NOR有助于评估甲状腺癌的生物学行为及预后。     

气功外气对人鼻咽癌细胞株的抑制作用和DNA合成影响的初步探讨

为寻找祖国医学治疗鼻咽癌的新途径,我们进行了气功外气对体外培养的人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE—2)的抑制作用试验,实验共进行了三次,光镜观察受功组比对照组生长缓慢,外气对细胞生长的抑制率分别为33％(P<0.05);43％(P<0.05);55％(P<0.001)。同时进行了~3H—TdR掺入试验,观察外气对CNE—2细胞株DNA合成的影响。实验进行了四次,其抑制率分别为:34％(P<0.01);35％(P<0.01);39％(P<0.01),53％(P<0.001),模仿者为17％(P>0.05)。     

甲状腺癌中VEGF表达与DNA含量、AgNOR关系的研究

目的研究血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在甲状腺癌及其区域淋巴结中的表达及与癌细胞ＤＮＡ含量、ＡｇＮＯＲ的关系。方法应用免疫组织化学ＳＡＢＣ法检测１３６例甲状腺癌及淋巴结中的ＶＥＧＦ表达,同时进行细胞ＤＮＡ含量及ＡｇＮＯＲ,自动图像分析检测,１０例正常甲状腺组织作对照。结果１０例正常甲状腺组织中未发现ＶＥＧＦ的表达,１３６例甲状腺癌组织中ＶＥＧＦ阳性表达７２．９７％（９９／１３６）,区域淋巴结中ＶＥＧＦ阳性表达９１％（１２４／１３６）。ＤＮＡ倍体平均值及ＡｇＮＯＲ５年以上生存组病例明显低于５年以内死亡组（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）。结论检测ＶＥＧＦ、ＤＮＡ含量及Ａｇ┐ＮＯＲ有助于评估甲状腺癌的生物学行为及预后。     

细胞DNA图像分析技术的应用方法

本文结合多年软件开发和图像分析仪的应用实践,介绍了利用图像分析仪进行细胞DNA含量的定量分析的具体步骤, 对照明光源不稳、照射视场不匀、系统吸光度线性不好带来的误差,提出切实可行的减少误差的办法。通过对鸡红细胞核、肝细胞核DNA含量的定量结果,得到了其二、四、八倍体的倍体关系直方图。     

“彗星”分析法检测鼻咽癌细胞DNA放射损伤与修复

目的　探讨“彗星”分析法(CometAssay)检测鼻咽癌细胞DNA放射与修复反应的可能性。　方法　采用碱性“彗星”分析法的微胶电泳技术,定量检测评价人高、低分化鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z细胞在接受X射线照射后,其DNA单链断裂(SingleStrandBreaks,SSBs)的程度,及其与放射剂量的关系和DNA的SSBs在不同检测时间的自身修复情况。　结果　用碱性“彗星”分析法可准确地检测出2Gy单一放射剂量所诱导的两系细胞DNA的SSBs;可见DNA损伤程度在不同照射剂量其结果不同,随剂量递增DNA的损伤加重,与放射剂量呈良好线性相关。15Gy诱导两系细胞的DNA损伤后,10min即可定量检测出受损DNA的确切恢复变化,在照射30min内,其修复较迅速,其损伤程度可降至初时的一半以下,其后修复缓慢,约需持续2h才能复至无照射细胞水平。　结论　“彗星”分析法检测结果能准确反映人鼻咽癌细胞DNA的定量损伤程度及其与放射剂量的关系,以及损伤后自身修复能力在受测时间中的定量变化情况     

卵巢恶性肿瘤细胞DNA含量的测定与临床及预后的关系

作者用计算机图像分析系统测定了50例卵巢恶性肿瘤细胞DNA含量,并分析其与患者的临床分期及预后关系。结果提示:卵巢恶性肿瘤细胞DNA含量可分为3种类型,3型各组患者的5年存活率分别为89％、21％、0.07％(P<0.005),平均存活时间分别为282.83周、110.43周、15.04周(P<0.01)。本文还比较了同一病理分级但不同DNA分型的患者存活率。计算了长期存活者异倍体细胞少于50％,高异倍体细胞少于10％(P<0.01)。结果表明:患者存活率随卵巢肿瘤细胞DNA含量增加而降低,DNA含量是判断卵巢恶性肿瘤临床生物学行为的一个客观指标。     

药物诱变效应与其和DNA园二色谱变化的关系探讨

DNA是药物所致突变效应的分子学基础。园二色谱(CD谱)是研究大分子物质在溶液中构象的1种可靠方法。具有诱变作用的药物如顺铂、碳铂、丝裂霉素C、放线菌素D、高三尖杉酯碱等均影响小牛胸腺DNA的CD谱。而环磷酰胺对DNA的CD谱影响不大,它本身不作用于DNA,需经代谢活化后才具效应。无诱变作用的药物:双酚胺酸、氧化赖氨酸、前者具有强致畸作用,后者能抑制有丝分裂,均不影响CD谱。其它所测试无诱变作用的药物均不影响DNA CD谱。结果表明药物诱变作用及对DNA CD谱的影响具有一定依存关系。