肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与肝癌细胞凋亡

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL是近年来发现的极具潜力的抗肿瘤药物,尽管TRAIL对大多数肿瘤细胞表现出强大的诱导凋亡作用,但几乎所有的肝细胞肝癌(HCC)细胞系均对TRAIL表现出不同的耐药性。c-FLIP的过度表达及Caspase-8低表达可能是HCC细胞系耐受TRAIL的主要机制,NF-κB途径的激活及死亡受体的表达不足也参与了这一耐受过程。化疗药物及其他一些生物制剂联合TRAIL可以改变HCC细胞对TRAIL的敏感性,大大提高了TRAIL应用于肝癌临床治疗的可能性。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL是近年来发现的极具潜力的抗肿瘤药物,尽管TRAIL对大多数肿瘤细胞表现出强大的诱导凋亡作用,但几乎所有的肝细胞肝癌(HCC)细胞系均对TRAIL表现出不同的耐药性。c-FLIP的过度表达及Caspase-8低表达可能是HCC细胞系耐受TRAIL的主要机制,NF-κB途径的激活及死亡受体的表达不足也参与了这一耐受过程。化疗药物及其他一些生物制剂联合TRAIL可以改变HCC细胞对TRAIL的敏感性,大大提高了TRAIL应用于肝癌临床治疗的可能性。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的：研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对骨肉瘤OS-732细胞的诱导凋亡作用，探寻骨肉瘤临床化疗的斯方案。方法：将TRAIL应用于体外培养的骨肉瘤OS-732细胞，采用MTr法检测细胞毒性作用，倒置相差显微镜及荧光染色方法观察肿瘤细胞形态改变，扫描及透射电镜在亚细胞形态上证实凋亡细胞。结果：不同浓度TRAIL作用下，细胞抑制率问差别十分显著（P〈0.01）。超微结构观察显示骨肉瘤细胞凋亡。结论：TRAIL诱导骨肉瘤细胞凋亡，且具有浓度依赖性。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体和顺铂对Hela细胞的诱导凋亡作用

目的 观察不同浓度的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和顺铂对Hela细胞的诱导凋亡作用.方法 采用不同浓度的TRAIL作用于Hela细胞24 h,TRAIL 100 ng/mL、顺铂10 μmol/L及两者联合作用于细胞24 h,应用ELISA方法检测细胞凋亡率.结果 不同浓度的TRAIL作用于细胞后,细胞凋...     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）与死亡受体结合后,可启动凋亡信号的转导。它对肿瘤细胞的高效杀伤作用使其成为最具有潜力的肿瘤治疗药物,但在TRAIL的研究领域中仍然存在许多热点问题有待解决。本文综述了近年来TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的胞内机制、抗肿瘤活性及安全性问题的研究进展。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其在妇科肿瘤中的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是近年来发现的肿瘤坏死因子家族新成员。TRAIL能选择性地诱导多种肿瘤细胞凋亡,而对大多数正常细胞无毒性作用。目前发现的该家族成员包括TRAIL和它的5个受体。多种妇科恶性肿瘤表面表达TRAIL和TRAIL受体,并可以被其诱导凋亡。因此,TRAIL在妇科肿瘤的治疗领域可能具有一定的应用前景。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对非小细胞肺癌细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导人非小细胞肺癌H596细胞发生凋亡,初步阐明非小细胞肺癌细胞经TRAIL诱导凋亡的作用和机制。方法：培养H596细胞,设对照组和不同浓度(0.01、0.03、0.10、0.30、1.00、3.00、10.00、30.00和100.00 μg•L^-1） TRAIL组,TRAIL作用H596细胞24 h后,酸性磷酸酶法检测细胞凋亡的百分率;Western blotting法检测TRAIL相关蛋白caspase-8、Bcl-2及Fas 相关死亡结构域（FADD）的表达情况。结果：TRAIL浓度为0.01～0.03 μg•L^-1时,对H596细胞的生长无明显抑制作用,细胞出现增殖趋势;从0.10 μg•L-1开始,随着TRAIL浓度升高,细胞开始出现凋亡,至10.00 μg•L^-1时细胞凋亡水平显著增加,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。Western blotting检测,caspase-8、Bcl-2和FADD蛋白表达正常。结论：高浓度的TRAIL可以诱导H596细胞发生凋亡,可能与TRAIL相关蛋白表达正常有关联。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺癌细胞的杀伤作用研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAILR)在肺癌细胞株A549中的表达及TRAIL对肺癌细胞的杀伤作用,探讨TRAIL治疗肺癌的可行性。方法采用RTPCR检测非小细胞肺癌细胞株A549TRAILR的表达。采用不同浓度TRAIL处理A549,MTT法检测药物处理前后肿瘤细胞的凋亡发生率。采用不同浓度TRAIL与不同浓度的化疗药物、中药联合作用于A549,观察其疗效。结果肺癌细胞株A549中有DR5、DR4、DcR2的表达,但DcR1表达缺失。经TRAIL(100μg/L)处理48h,肺癌细胞凋亡发生率约5%。TRAIL联合化疗药物、中药可显著增强A549的凋亡率。结论A549中存在TRAILR类型的表达差异。TRAIL可诱导A549凋亡,联合化疗药物、中药可显著增强A549的凋亡率。     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体与肿瘤治疗的关系进展

 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL）能选择性诱导肿瘤细胞和转化细胞凋亡,对机体正常组织细胞无毒副作用,有望成为新型的抗肿瘤制剂。探讨TRAIL的生物学特点及其对肿瘤的治疗策略,能够为其临床应用于肿瘤治疗提供理论基础。     

紫草素诱导甲状腺髓样癌TT细胞自噬的实验研究

目的探讨紫草素能否诱导甲状腺髓样癌细胞发生自噬。方法采用透射电镜观察不同浓度紫草素对甲状腺髓样癌TT细胞发生自噬的形态。利用Western-blot分析紫草素作用甲状腺髓样癌TT细胞后自噬标志物Beclin-l和LC3蛋白的表达,利用荧光显微镜观察自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的点状聚集情况。结果不同浓度紫草素作用24~72h对TT细胞均有自噬现象发生。2μg/m L、4μg/m L紫草素处理组作用24h后透射电镜观察TT细胞自噬的形态,发现TT细胞出现典型的自噬囊泡：双层膜包绕的圆形或椭圆形结构。紫草素处理自噬相关基因Beclin-l的表达明显低于空白对照组,参与自噬降解的p62表达水平下降,其下降水平与剂量呈相关性,自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的表达明显提高。将TT细胞转染GFP-LC3质粒24h后,用紫草素处理24h,于荧光显微镜下观察,处理组与空白对照组相比,胞浆上出现大量的LC3-Ⅱ点状聚集。结论紫草素能诱导甲状腺髓样癌TT细胞发生自噬,透射电镜下可见自噬体,荧光显微镜下可观察到自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ。紫草素诱导TT细胞自噬,可能与降低自噬抑制基因Beclinl表达水平相关。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体在尖锐湿疣中的研究进展

尖锐湿疣的发生、持续、消退和复发与组织中细胞凋亡相关分子——肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体的异常表达有关，同时人乳头瘤病毒的持续性感染导致细胞凋亡过程的抑制也与其有重要关系。对凋亡分子TRAIL及其受体系统介导细胞凋亡的机制以及TRAIL在人乳头瘤病毒感染方面的研究，不仅有利于最终阐明尖锐湿疣的发病机制，同时也为尖锐湿疣的治疗提供有效的参考。     

细胞自噬在多柔比星诱导淋巴瘤细胞凋亡中的作用

目的 研究细胞自噬在阿霉素诱导Raji细胞发生细胞凋亡过程中所起的作用。 方法 采用Western Blot法观察阿霉素杀伤Raji细胞过程中自噬相关蛋白的表达,并用MDC染色法观察Raji细胞内的自噬体和自噬溶酶体的形成情况;并在给予阿霉素的同时使用PI3K通路抑制剂3-MA和自噬溶酶体抑制剂NH4Cl对细胞自噬进行抑制后利用MTT和流式细胞术测定Raji细胞的细胞活力与凋亡。 结果 阿霉素能诱导Raji细胞发生细胞自噬,并且通过抑制自噬能显著地增强阿霉素诱导的Raji细胞的细胞凋亡（p<0.05, p<0.01）从而增加阿霉素的疗效。 结论 在阿霉素杀伤Raji细胞的过程中,阿霉素诱导的细胞自噬能减弱阿霉素诱导的细胞凋亡作用;并且自噬抑制剂3-MA和NH4Cl抑制细胞自噬能增强阿霉素诱导的Raji细胞的细胞作用,增强对Raji细胞的杀伤,并提示抑制自噬可能能增强阿霉素对淋巴瘤的杀伤。     

银杏内酯K调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对乳腺癌细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨银杏内酯K（GK）调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对乳腺癌细胞自噬和凋亡的影响。方法 取对数生长期的MCF-7细胞,设置分组为对照组、GK低浓度（GK-L,12.5 μg/mL）组、GK中浓度（GK-M,25 μg/mL）组、GK高浓度（GK-H,50 μg/mL）组、GK-H+AMPK抑制剂（Compound C,50 μg/mL GK+50 μmol/L Compound C）组。观察各组细胞形态以及细胞增殖、凋亡、自噬状况并分析自噬相关基因LC3、P62、Beclin1 mRNA表达以及AMPK、p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1、LC3、P62、Beclin1表达。结果 与对照组相比,GK-L、GK-M、GK-H组细胞自噬泡数量增多,增殖率、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1、p62表达显著下降,凋亡率、LC3、Beclin1表达、AMPK蛋白表达显著增加（P＜0.05）;与GK-H组相比,GK-H+Compound C组细胞自噬泡数量减少,增殖率、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1、p62显著增加,凋亡率、LC3、Beclin1表达、AMPK蛋白表达显著降低（P＜0.05）。结论 GK可以诱导乳腺癌细胞自噬和凋亡、抑制其增殖,可能与激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路有关     

紫草素抑制人甲状腺髓样癌TT细胞增殖及其机制的研究

目的：了解紫草素抑制甲状腺癌TT细胞增殖的作用及机制。方法采用MTT法分析紫草素对人甲状腺癌TT细胞增殖的影响;流式细胞术分析紫草素对TT细胞周期分布和凋亡的影响;透射电镜观察紫草素对TT细胞凋亡和自噬的调控。结果不同浓度紫草素作用24-72h对TT细胞均有抑制增殖的作用,并随药物浓度增加和作用时间延长而增强。紫草素作用24h,2、4滋g/ml紫草素组细胞出现凋亡峰（亚二倍体峰）,与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,但未见明显的细胞周期阻滞。Annex-inV- PE/7- AAD双染法分析细胞凋亡,2滋g/ml紫草素作用TT细胞24h,早期凋亡细胞增至8.0%;而空白对照组为0.2%,凋亡后期继发坏死细胞为11.3%,空白对照组为0.1%;作用48h后,早期凋亡细胞为24.9%,凋亡后期继发坏死细胞上升为14.2%。2滋g/ml紫草素作用TT细胞24h,透射电镜观察可见典型的细胞凋亡和自噬结构。结论紫草素具有抑制人甲状腺癌TT细胞增殖的作用,呈剂量和时间依赖关系;其作用机制与诱导细胞凋亡和自噬有关。     

饥饿诱导DRAM介导的自噬与肝细胞凋亡的关系

目的探讨在饥饿情况下,自噬与正常肝脏细胞凋亡的关系,及凋亡与损伤调节自噬调控基因(dam-age-regulated autophagy modulator,DRAM)介导的自噬之间的关系。方法采用无血清培养基培养正常肝脏细胞系7702细胞36h,采用M30免疫荧光染色观察凋亡,采用免疫印记检测自噬和DRAM基因的表达水平;并用DRAM特异的小干扰RNA(siRNA)阻断DRAM作用后,观察凋亡和自噬的水平。结果和0h相比,在12、24和36h3个时间点,饥饿可明显诱导7702细胞凋亡(P<0.001)。免疫印记结果显示,饥饿后第12、24和36小时的DRAM水平和自噬水平均逐渐增高,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。用DRAMsiRNA阻断DRAM功能后,在12、24和36h未检测到DRAM的表达,同时凋亡细胞数明显下降(P<0.05)。DRAMsiRNA阻断DRAM功能后,在12、24和36h的自噬水平无明显差异。结论 DRAM介导的自噬可导致正常肝脏细胞凋亡,其对凋亡的影响可能成为肝癌研究的新思路。     

miR-217靶向调控HMGA2基因对内质网应激介导的口腔癌细胞自噬与凋亡的影响

目的 探究微小RNA 217(miRNA-217)对口腔癌细胞中内质网应激介导的自噬与凋亡的影响及其分子机制。方法 培养人口腔癌细胞和人正常口腔角质形成细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-217与高迁移率族蛋白A2(HMGA2)表达水平;将人口腔癌细胞系SAS分为对照组、miR-NC组、miR-217 mimic组和miR-217 mimic+4-PBA组4组,脂质体法进行转染和内质网应激抑制剂4-苯丁酸处理后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33342染色观察细胞凋亡情况,细胞免疫荧光染色检测细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达,蛋白质免疫印迹(Western Blot)测定细胞中自噬相关蛋白LC3I、LC3II及Beclin-1的表达水平,RT-qPCR和Western Blot测定细胞内质网应激相关分子CCAAT/增强予结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及天冬氨酸蛋白水解酶-12(Caspase-12)的表达水平;双荧光素酶报告基因检测实验和Western Blot验证miR-217对HGMA2的靶向作用。结...     

白杨素敏化TRAIL诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的:研究白杨素(ChR)是否具有增敏肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡作用.方法:体外培养SGC-7901细胞.碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯形条带.结果:ChR(40 μmol/L)、TRAIL(100 ng/mL)以及两...     

PUMA在奥沙利铂治疗大肠癌中作用机制的实验研究

目的：研究凋亡相关基因PUMA在奥沙利铂（oxaliplatin）治疗大肠癌药物机制中的作用,为更好地发挥奥沙利铂的抗肿瘤作用提供实验基础。方法：蛋白印迹法检测在大肠癌LoVo细胞株中奥沙利铂对PUMA蛋白表达的诱导作用;构建稳定表达反义PUMA基因的重组质粒及细胞系;流式细胞术检测细胞凋亡,MTT法测定细胞增殖。结果：成功构建表达反义PUMA基因的重组质粒及细胞系;在大肠癌LoVo细胞株中,奥沙利铂可以诱导PUMA的表达,并在一定范围内呈时间和剂量依赖关系;在PUMA的表达受抑制后,奥沙利铂诱导大肠癌细胞凋亡的作用明显减弱。结论：PUMA的表达在奥沙利铂诱导LoVo细胞凋亡的过程中具有重要作用,PUMA表达的抑制会降低大肠癌LoVo细胞对奥沙利铂治疗的敏感性。     

丹参多糖促进自噬抑制脂多糖诱导的心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探究丹参多糖(SMP)调控脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞凋亡的机制。方法 不同浓度(0.0.5、1、2mg/mL)SMP预处理乳鼠心肌细胞12h后,1μg/mL LPS刺激乳鼠心肌细胞24h,以LPS单独处理构建心肌细胞损伤模型,对照组加入等量生理盐水,四唑盐比色法(MTT)观察细胞存活率改变,流式细胞仪检测细胞凋亡比率改变,免疫印迹(Western blot)检测各组细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1及凋亡相关蛋白Bax、Caspase3变化;SMP联合自噬抑制剂氯喹(CQ)或自噬激活剂雷帕霉素靶蛋白抑制剂(Torin1)处理LPS处理的心肌细胞,MTT观察细胞存活率改变,流式细胞仪(FACS)检测细胞凋亡比率改变,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1及凋亡相关蛋白Bax、Caspase3变化。结果 相比于对照组,LPS 处理乳鼠心肌细胞24h,细胞活力显著下降,凋亡细胞比例升高,凋亡相关蛋白Bax、cleaved-Caspase3表达增多,自噬相关蛋白Beclin1和LC3II表达增多。相比于LPS组,丹参多糖处理组细胞活力升高,凋亡细胞比例下降,Bax、cleaved-Caspase3蛋白表达减少, LC3-II 、Beclin1蛋白表达增多;相比于丹参多糖处理组,CQ抑制细胞活力,增加细胞凋亡数,促进Bax、cleaved-Caspase3和LC3II蛋白表达,抑制Beclin1蛋白表达,Torin1上调细胞活力,减少细胞凋亡数,促进LC3-II 、Beclin1蛋白表达,抑制Bax、cleaved-Caspase3蛋白表达。结论 SMP促进自噬抑制LPS诱导的心肌细胞自噬凋亡。     

饥饿诱导DRAM介导的自噬与HepG2和Hep3B细胞凋亡的关系

目的探讨饥饿诱导损伤调节自噬调控基因(DRAM)介导的自噬在HepG2细胞和Hep3B细胞凋亡中的作用。方法 HepG2细胞和Hep3B细胞经饥饿处理后,观察DRAM的表达和自噬的发生;利用DRAM小干扰RNA(siRNA)阻断DRAM,观察饥饿诱导的自噬水平;采用Calcein AM/PI染色,观察DRAM siRNA对饥饿引起的细胞凋亡的影响。结果经饥饿处理后12、24、36h,HepG2细胞和Hep3B细胞内DRAMmRNA均显著高于处理前(P﹤0.001),细胞凋亡明显增加(P﹤0.01),但两种细胞系间细胞凋亡计数的差异无统计学意义。DRAM siRNA阻断DRAM的功能后,HepG2和Hep3B细胞自噬减少,但对饥饿引起的细胞凋亡没有明显影响。结论 DRAM参与了饥饿诱导的自噬,可能不是饥饿引起肝癌细胞凋亡的机制。     

晚期自噬在非酒精性脂肪肝中的促凋亡作用

目的 在非酒精性脂肪肝体外模型中研究油酸长期刺激对自噬的影响及其作用.方法 用含浓度为400 μmol/L油酸的DMEM高糖培养基培养肝癌HepG2细胞,制作体外非酒精性脂肪肝细胞模型.向肝癌HepG2细胞转染GFP-LC3质粒,通过观察LC3Ⅱ绿色荧光斑点确定自噬的发生.采用PI3k抑制剂LY294002抑制自噬.用...