新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠Beclin1/PI3K-AKT-mTor的影响

目的观察佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜中自噬相关基因5、7、12(Atg5,7,12)mRNA、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬标志物Beclin1、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶向蛋白(m Tor)及血清细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的表达水平变化及新风胶囊对其的影响。方法将48只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、西药组(来氟米特,5.0 mg/kg)和中药组(新风胶囊,3.0 g/kg),每组12只。干预30天后,观察各组大鼠体质量、足趾肿胀度(E%)、关节炎指数(AI)及踝关节病理及超微结构变化;检测大鼠滑膜中Atg5、7、12 mRNA表达;检测滑膜LC3-Ⅱ、Beclin1、PI3K、AKT、m Tor蛋白表达;检测大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10含量。结果与正常组比较,模型组E%、AI、IL-1β、TNF-α升高,体重、IL-4、IL-10、Atg5 mRNA、Atg12 mRNA、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达降低(P0.01,P0.05),PI3K、AKT、m Tor蛋白表达升高(P0.01)。与模型组比较,两个给药组E%、AI、IL-1β、TNF-α、Atg12 mRNA、PI3K、AKT、m Tor蛋白表达降低(P0.01,P0.05),IL-4、IL-10、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达升高(P0.01,P0.05);西药组Atg5降低(P0.01),Atg7 mRNA升高(P0.05)。与西药组比较,中药组体重、IL-4、Atg5 mRNA、Atg12 mRNA、PI3K、m Tor蛋白表达升高(P0.01,P0.05)。结论AA大鼠滑膜细胞自噬水平下降,导致滑膜细胞的过度增生,引起关节肿胀,致炎因子上升,抑炎因子下降,引起关节的炎症反应。中药新风胶囊可以改善关节炎指数、足趾肿胀度,改善滑膜自噬相关基因及蛋白表达。     

丹皮酚对脂多糖刺激的RAW264.7细胞炎症与自噬的影响

目的:以脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激的RAW264.7细胞,以自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin, Rap)促进自噬为主要模型,研究丹皮酚(paeonol,P)对RAW264.7自噬与免疫功能的影响。方法:使用LPS 1μg·ml~(-1)刺激RAW264.7细胞6 h,丹皮酚200μmol/L处理12 h,Rap 100 ng·ml~(-1)作用6 h,蛋白免疫印迹法(western blot,WB)检测自噬相关因子LC3B、Beclin、P62和炎症相关因子TNF-α、IL-1β的表达水平,激光共聚焦荧光共定位法(immunofluorescence,IF)检测LC3B、P62蛋白的荧光表达和定位;酶联免疫分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测RAW264.7细胞TNF-α的分泌。结果:在脂多糖诱导RAW264.7炎症反应的细胞模型中,添加丹皮酚药物后LC3B、Beclin表达增多,P62表达减少,LC3B-l向LC3B-ll的转换效率增强;雷帕霉素抑制IL-1β、TNF-α的表达,与丹皮酚联用进一步抑制IL-1β、TNF-α的表达和分泌。结论:丹皮酚通过促进细胞自噬来抑制炎症反应,丹皮酚与雷帕霉素联用加强了对炎症的抑制作用。     

金匮肾气汤对糖尿病肾病大鼠HMGB1和自噬信号Beclin1表达的影响

目的:探讨金匮肾气汤(JKSQ)对糖尿病肾病(DN)大鼠高迁移率族蛋白B(HMGB1)和自噬信号Beclin1表达的影响。方法:60只大鼠随机分为对照组、模型组和JKSQ高、中、低剂量组(3.6g/kg/d、1.8g/kg/d、0.9g/kg/d),各12只,均采用高脂饲料联合腹腔注射40mg/kg链脲佐菌素复制DN模型。药物干预3周后,测定空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24h尿蛋白、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)和IL-1β水平;Western Blot测定HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、微管相关蛋白I轻链3-I(LC3-I)、LC3-Ⅱ、Beclin 1和p62蛋白表达。结果:与对照组比,模型组大鼠FBG、24h尿蛋白、BUN、Scr、TNF-α、IL-6和IL-1β水平升高(P0.05),HMGB1、TLR4和p62蛋白表达升高(P0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin 1蛋白表达下降(P0.05);与模型组比,JKSQ高剂量组大鼠FBG、24h尿蛋白、BUN、Scr、TNF-α、IL-6和IL-1β水平降低(P0.05),HMGB1、TLR4和p62蛋白表达下降(P0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin 1蛋白表达升高(P0.05)。结论:JKSQ可以抑制HMGB1蛋白表达,促进Beclin 1介导的自噬,减轻DN大鼠肾组织损伤。     

竹节参总皂苷对脂多糖诱导的BV2细胞炎症反应的影响及机制研究

目的 观察竹节参总皂苷（TSPJ）对脂多糖诱导的小鼠小胶质细胞BV2炎症反应的影响，探讨其改善炎症的作用机制。方法 采用脂多糖诱导BV2细胞炎症模型，将细胞分为正常组、模型组和TSPJ低、中、高浓度组，分别进行干预后，ELISA检测细胞上清液一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-4和IL-10含量，免疫荧光染色检测小胶质细胞标志物CD86、Arginase-1及自噬蛋白LC3表达，Western blot检测自噬相关蛋白p62、Beclin1、LC3及Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组细胞上清液NO、TNF-α、IL-1β含量明显增加，IL-4、IL-10含量明显减少，细胞CD86表达明显升高，Arginase-1、LC3表达明显降低，Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达明显降低，p62、p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显升高，差异均有统计学意义（P<0.01）；与模型组比较，TSPJ高浓度组细胞上清液NO、TNF-α、IL-1β含量明显减少，IL-4和IL-10含量明显增加，细胞CD86表达明显降...     

补阳还五汤对LPS诱导巨噬细胞活化与自噬的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路在补阳还五汤抗脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞活化与自噬中的作用。方法:细胞增殖毒性检测(CCK-8)法筛选诱导RAW264.7巨噬细胞活力值的最适LPS浓度。在最适LPS浓度下,利用PI3K阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)(5 mmol·L~(-1)),Akt阻断剂MK2206(5μmol·L~(-1)),m TOR阻断剂Rapamycin(10μmol·L~(-1)),Beclin-1阻断剂Spautin-1(5μmol·L~(-1))及不同剂量的补阳还五汤含药血清(5%,10%,20%)处理RAW264.7巨噬细胞24 h后,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测RAW264.7巨噬细胞炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定磷酸化(p-)PI3K,p-Akt,p-mTOR通路蛋白的表达及微管轻链蛋白3(LC3),泛素结合蛋白1(p62),Beclin-1的水平。自噬双标腺病毒转染检测RAW264.7细胞自噬流的变化。结果:CCK-8结果显示10 mg·L~(-1)LPS作用时,细胞活性显著增强。模型组IL-1β,IL-6,TNF-α浓度显著高于空白组(P0.01),与模型组比较,Rapamycin显著升高IL-6浓度,其他给药组均可降低IL-1β,IL-6,TNF-α的水平(P0.05,P0.01)。模型组p-Akt,p-PI3K,p-mTOR蛋白表达量明显低于空白组(P0.05),LC3,p62蛋白表达量显著高于空白组(P0.01),与模型组比较,Rapamycin显著降低p-Akt蛋白表达量,不影响p-mTOR表达,补阳还五汤各剂量组与其他各阻断剂组均可明显升高p-Akt,p-PI3K,p-mTOR蛋白表达量(P0.05,P0.01),降低LC3,p62蛋白表达量(P0.05,P0.01),各组Beclin-1蛋白表达量均无显著性差异。与空白组比较,模型组中有明显的自噬体斑点形成,自噬流顺畅;与模型组比较,补阳还五汤含药血清组,3-MA,Spautin-1组自噬斑点的形成明显减少或消失,MK2202,Rapamycin组自噬体斑点大小明显减小,但自噬活力仍较强。结论:补阳还五汤抗LPS诱导巨噬细胞活化与自噬与抑制巨噬细胞炎症反应,调控PI3K/Akt/m TOR信号通路,抑制自噬的过度发生有关。     

芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠NLRP3炎症体信号通路相关因子表达的影响

目的观察芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠NLRP3炎症体信号通路相关因子表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、芍药苷低剂量组、芍药苷高剂量组,每组12只。采用线栓阻断法制作大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2 h后进行再灌注,再灌注后1 h腹腔注射芍药苷(2.5、5 mg/kg),每日1次,连续7 d。Zea Longa 5分评价方法对大鼠进行神经功能评分。ELISA检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量。RT-PCR和Westernblot分别检测大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1、NLRP3 mRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,芍药苷低、高剂量组大鼠神经功能评分各时点均降低,芍药苷低剂量组第7日和芍药苷高剂量组第3、5、7日神经功能评分差异有统计学意义(P0.05,P0.01);与假手术组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量均升高,大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1和NLRP3m RNA和蛋白表达均上调;与模型组比较,芍药苷低、高剂量组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量均降低,大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1、NLRP3 mRNA和蛋白表达显著下调(P0.01)。结论芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠具有神经保护作用,其机制可能与抑制NLRP3炎症体信号通路分子的表达、减轻炎症反应相关。     

地黄中毛蕊花糖苷对OxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡与自噬的影响北大核心

目的:研究从地黄中提取的毛蕊花糖苷对氧化低密度脂蛋白(OxLDL)诱导下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用,并进一步探究其对细胞炎症、凋亡与自噬的影响。方法:采用OxLDL(150μg/mL)处理HUVEC细胞建立内皮细胞损伤模型,实验设正常对照组、模型组及毛蕊花糖苷50、100μg/mL组。采用MTT法检测细胞相对存活率;亚硝酸盐显色法及ELISA法检测细胞上清液中NO、eNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α含量;Annexin-V-PE/7AAD双染流式技术检测细胞凋亡;Flow Sight成像细胞仪检测自噬蛋白LC3A/B表达及自噬情况;Western Blot法检测细胞凋亡与自噬相关蛋白Bax、Bcl-2、LC3B的表达。结果:与模型组比较,毛蕊花糖苷可提高HUVEC细胞活力,降低炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α分泌及细胞凋亡率,促进细胞分泌NO与eNOS,升高LC3BⅡ/Ⅰ比值及自噬蛋白LC3A/B在细胞中标记的自噬百分率,降低凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值(P<0.05或P<0.01)。结论:毛蕊花糖苷可抑制炎症因子,减少细胞凋亡,增加细胞保护性自噬,改善内皮功能障碍。     

柴胡皂甙d对特发性肺纤维化肺泡上皮细胞自噬作用机制研究北大核心CSCD

目的研究柴胡皂甙d(SSd)对特发性肺纤维化(IPF)中Ⅱ型肺泡上皮细胞(AT-Ⅱ)自噬的调控作用及其对纤维化程度的干预作用。方法转化生长因子β1(TGF-β1,5 ng/mL)诱导A549细胞48 h建立肺纤维化细胞模型,分别联合SSd低、中、高浓度(2.5、5、10μg/mL)、雷帕霉素(100 ng/mL)处理细胞。CCK8法检测各组细胞存活率,Western Blot法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)/LC3B-Ⅰ、p62、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路活化蛋白表达水平,单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测细胞内自噬泡形成。结果与正常组比较,模型组细胞存活率下降(P<0.05),E-cadherin、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平亦降低(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62、mTOR通路活性蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),胞质内荧光标记的自噬泡较少。与模型组比较,SSd高浓度组细胞存活率升高(P<0.05),SSd组及雷帕霉素组E-cadherin、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),SSd高浓度组及雷帕霉素组p-mTOR/mTOR、p-AKT1/AKT1、p-S6K1/S6K1表达水平降低(P<0.05,P<0.01),SSd高浓度组及雷帕霉素组细胞质内荧光标记的自噬泡增多。与SSd低、中低浓度组比较,SSd高浓度组及雷帕霉素组Ecadherin、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论SSd可改善TGF-β1诱导的ATⅡ纤维化改变,可能通过抑制mTOR通路激活诱导细胞自噬发挥作用。     

高车前素通过调控Orai1介导的Ca2+内流对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响

目的 探讨高车前素(His)对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响,并初步阐明其作用机制。方法 分离大鼠膝骨关节软骨细胞,采用10 ng·mL-1 IL-1β处理软骨细胞建立骨关节炎细胞模型,并采用不同浓度(5、10、20μmol·L^-1)His处理24 h。采用CCK-8检测细胞增殖活性;ELISA法检测细胞培养液中炎症因子IL-6和TNF-α水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平及细胞内Ca²⁺浓度;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3、钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)及内质网应激相关蛋白CHOP、GRP78表达水平。将Orai1过表达质粒(pcDNA-Orai1)转染至软骨细胞中,采用10 ng·mL-1 IL-1β联合20μmol·L-1His处理24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡水平;Fluo-4/AM荧光探针标记法检测细胞内Ca²⁺浓度。结果 10 ng·mL-1 IL-1β可降低大鼠软骨细胞增殖活性,诱导软骨细胞凋亡,提高细胞培养液中IL-6和TNF-α水...     

萜类化合物Telekin通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导HGC-27细胞自噬

目的:研究从天名精中分离得到的萜类化合物Telekin诱导的胃癌细胞HGC-27自噬并探讨其分子作用机制。方法:MTT法研究Telekin对不同肿瘤细胞的细胞毒活性;透射电镜观察Telekin诱导的HGC-27细胞自噬;用mRFP-GFP-LC3点状聚集物的形成,评价HGC-27细胞内自噬流的变化;MTT法研究用不同自噬抑制剂氯喹(CQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)和mTOR抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)预处理时,Telekin对HGC-27细胞的细胞毒活性,研究自噬与细胞死亡的关系。Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-ULK1、ULK1、Beclin1、p-Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白的表达。结果:MTT实验结果表明Telekin对胃癌细胞HGC-27具有较好的细胞毒活性和一定的选择性;透射电镜和激光共聚焦显微镜观察到Telekin诱导HGC-27细胞发生了明显的自噬和显著的自噬流变化;用Rapamycin预处理时增强了Telekin的细胞毒性,IC_(50)值由22.78μM降为14.4μM。用3-MA和CQ预处理后降低了Telekin的细胞毒性,IC_(50)值从22.78μM增加为30.06μM和29.46μM,说明自噬促进了细胞死亡;Western blot结果显示Telekin降低了p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p62、LC3Ⅰ的表达,增强了p-ULK1、p-Beclin1、LC3Ⅱ的表达,而对PI3K、Akt、mTOR、ULK1、Beclin1总蛋白没有明显影响。结论:Telekin通过降低p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p62、LC3Ⅰ的表达水平,增强p-ULK1、p-Beclin1、LC3Ⅱ的表达水平,来诱导HGC-27细胞发生自噬,从而促进细胞死亡。     

基于Akt/mTOR信号通路探讨洋地黄毒苷调控甲状腺滤泡上皮细胞自噬与凋亡的机制

目的 探究洋地黄毒苷对脂多糖刺激下的人甲状腺滤泡上皮细胞系Nthy-roi3-1凋亡与自噬的影响及其作用机制。方法 (1)将Nthy-roi3-1细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+洋地黄毒苷低剂量组、脂多糖+洋地黄毒苷中剂量组及脂多糖+洋地黄毒苷高剂量组,各组进行对应处理后,CCK-8法检测各组细胞活力,免疫荧光染色观察各组细胞自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Bcl-2同源结构域蛋白抗体(Beclin 1)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p70S6K蛋白表达情况。(2)将Nthy-roi3-1细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+洋地黄毒苷组、脂多糖+洋地黄毒苷+自噬抑制剂组,各组进行对应处理后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR及p70S6K蛋白表达情况。结果 (1...     

通痹健骨方水提物对脂多糖诱导人软骨细胞自噬的影响

目的：探讨通痹健骨方水提物对脂多糖（LPS）诱导人软骨细胞的影响及作用机制。方法：提取人软骨细胞及传代培养,采用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光染色法对细胞进行鉴定,LPS诱导软骨细胞模拟膝骨关节炎（KOA）软骨细胞模型,设对照组,模型组,通痹健骨方低、中、高剂量组,ELISA法检测肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-10、IL-1β的水平;Western Blot、qRT-PCR法检测肌球蛋白样BCL2结合蛋白（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、泛素结合蛋白P62(P62)蛋白及mRNA表达情况。结果：提取的细胞符合软骨细胞特征。与模型组比较,通痹健骨方中剂量组TNF-α、IL-1β、P62蛋白及mRNA显著降低（P<0.05,P<0.01）,IL-10含量和LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白及mRNA的表达均显著升高（P<0.01）。结论：通痹健骨方水提物可通过调节软骨细胞自噬,提高软骨细胞的抗应激能力和生存能力,抑制炎症反应,可能是通痹健骨方治疗KOA的机制之一。     

银杏二萜内酯K对D-半乳糖诱导的小鼠原代星形胶质细胞抗衰老作用

目的 研究银杏二萜内酯K(ginkgolide K,GK)对D-半乳糖诱导的小鼠原代星形胶质细胞抗衰老作用及可能机制。方法 以小鼠原代星形胶质细胞为研究对象,建立D-半乳糖诱导的衰老模型,设置对照组、模型组和GK组,GK(50μg/mL)预处理3 h后,以150 mmol/L D-半乳糖造模6 d,采用β-半乳糖苷酶染色法检测衰老星形胶质细胞;Western blotting法测定衰老标志蛋白（p21、p53和Lamin B1）、沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF、自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/I(microtubule associated protein 1light chain 3-Ⅱ/I,LC3-Ⅱ/I)和自噬选择性底物p62表达;ELISA检测衰老相关分泌表型[白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)];免疫...     

芍药苷对大鼠颈椎间盘纤维环细胞炎症模型IL-1β、IL-6和TNF-α表达的影响

目的:观察芍药苷对体外培养的大鼠颈椎间盘纤维环细胞炎症模型IL-1β、IL-6和TNF-α表达的影响。方法:分离3周龄SD大鼠颈椎间盘纤维环细胞,培养至取第三代进行甲苯胺蓝染色及II型胶原免疫组织化学染色鉴定。鉴定成功后,随机分为空白组、模型组和芍药苷组,其中模型组与芍药苷组均采用脂多糖(LPS)诱导,建立体外纤维环细胞的炎症模型,并确定干预的最佳浓度和时间;于造模成功后,芍药苷组分别用不同浓度芍药苷进行干预,其余各组不进行干预,24h后,收集各组细胞上清液,通过ELISA法检测IL-1β、IL-6和TNF-α的表达量。结果:与空白组比较,24h时,LPS10ng/mL、100ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL组细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α含量均显著高于空白组(P0.01)。其中,LPS浓度为10ng/mL时,IL-1β、IL-6和TNF-α表达高于其余各组,差异具有统计学意义(P0.01);10ng/mL LPS分别干预纤维环细胞4h、8h、12h、24h、48h,细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均高于空白组,且24h时细胞上清中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均高于其余各组。芍药苷组采用浓度为20μg/mL、200μg/mL、2 000μg/mL芍药苷溶液干预纤维环细胞的炎症细胞24h,细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均低于空白组,差异具有统计学意义(P0.01),且芍药苷浓度为200μg/mL时IL-1β、IL-6和TNF-α均低于20μg/mL、2 000μg/mL时,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:LPS浓度为10ng/mL时,干预24h时,可成功建立体外纤维环细胞炎症模型;芍药苷浓度为200μg/mL时可有效抑制纤维环细胞炎症模型IL-1β、IL-6和TNF-α的表达。     

健脾益肾化痰方通过VEGF/PI3K/AKT/FOXO1诱导肺鳞癌SK-MES-1细胞自噬的实验研究北大核心CSCD

目的:观察健脾益肾化痰方含药血清对肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖、凋亡、自噬及SK-MES-1细胞内Beclin1、LC3、VEGFR、PI3K、AKT、FOXO1相关蛋白的影响,探讨健脾益肾化痰方通过上述蛋白诱导肺鳞癌细胞SK-MES-1自噬的可能作用机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、32.2 g/kg健脾益肾化痰方组,各组分别灌胃生理盐水或药物,连续7 d后收集血清;采用CCK-8法测定人肺鳞癌细胞株的存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察GFP-LC3脂质体转染干预肺鳞癌细胞后自噬发生情况;Western Blot法检测对人肺鳞癌细胞株SK-MES-1细胞Beclin1蛋白和LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ、VEGFR、PI3K、AKT、FOXO1相关蛋白表达的影响。结果:32.2 g/kg健脾益肾化痰方含药血清各浓度组均能够有效抑制肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖,其抑制率与药物浓度呈正相关;与正常对照组相比,32.2 g/kg健脾益肾化痰方16%含药血清组使SK-MES-1细胞凋亡率明显增高(P<0.05);8%、16%含药血清组自噬小体显著增多(P<0.05);16%含药血清组SK-MES-1细胞内自噬相关蛋白Beclin1、LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ表达显著上调(P<0.01);FOXO1蛋白表达显著上调,VEGFR、PI3K、AKT蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:健脾益肾化痰方含药血清能够诱导肺鳞癌SK-MES-1细胞发生自噬,其作用机制可能是通过调节VEGF/PI3K/AKT/FOXO1信号通路,上调SK-MES-1细胞内Beclin1、LC3蛋白表达,促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ有关。     

薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响

目的 探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响。方法 MTT法检测薯蓣皂苷元对人骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖的影响,透射电镜技术观察细胞超微结构,免疫荧光法观察细胞自噬蛋白Beclin1表达,Western blot法检测细胞自噬分子标记物LC3、Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达。薯蓣皂苷元联合PI3K通路抑制剂LY294002处理MG63和U2OS细胞,RT-qPCR法检测细胞Beclin1 mRNA表达;联合自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)处理MG63和U2OS细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot法检测细胞cleaved-caspase3蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞caspase3 mRNA表达。结果 薯蓣皂苷元能抑制骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖,促使自噬体生成,增加LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低LC3 I蛋白表达(P<0.01),可抑制PI3K/Akt/mTOR通路蛋白磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);联合自噬抑制剂干预后...     

金匮肾气丸通过AMPK/mTOR途径抑制肺组织细胞凋亡和自噬在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用

[目的] 探究金匮肾气丸对慢性阻塞性肺疾病（COPD）的作用及其可能的作用机制。[方法] 40只SD大鼠随机分为空白对照组、COPD组、金匮肾气丸3.7 g/kg组、金匮肾气丸7.4 g/kg组和地塞米松组,每组各8只。除空白对照组外,其余组大鼠采用烟熏联合气管内滴注脂多糖（LPS）法建立COPD大鼠模型。各组给予相应药处理AniRes2005动物肺功能分析系统检测大鼠肺功能;酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒检测白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-17（IL-17）水平;苏木精-伊红（HE）染色检测肺组织病理学变化;TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡;蛋白质免疫印迹（Western blot）检测自噬及磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）途径相关蛋白的表达。[结果] 与空白对照组相比,COPD组大鼠肺功能降低,IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-17水平明显升高（P<0.05）,炎症评分、细胞凋亡率和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,p62和p-mTOR/mTOR蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与COPD组相比,金匮肾气丸3.7 g/kg组、金匮肾气丸7.4 g/kg组和地塞米松组大鼠肺功能升高,IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-17水平明显降低（P<0.05）,炎症评分、细胞凋亡率和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,p62和p-mTOR/mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。[结论] 金匮肾气丸可能通过AMPK/mTOR途径抑制肺组织细胞凋亡和自噬,延缓大鼠慢性阻塞性肺疾病进展。     

定心方抑制PI3K/Akt通路减轻脂质运载蛋白-2诱导巨噬细胞炎症反应的机制研究

目的：探讨定心方（DXR）含药血清对脂质运载蛋白-2(LCN2)诱导巨噬细胞炎症反应的保护作用及机制。方法：以LCN2作用RAW264.7巨噬细胞,分别加入空白血清、5%DXR含药血清、PI3K抑制剂LY294002及Akt抑制剂Triciribine,CCK-8法检测RAW264.7巨噬细胞活力,ELISA法检测细胞培养液炎症标记物白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平,Western blot检测巨噬细胞中IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达,透射电镜检测巨噬细胞自噬小体数量,免疫荧光标记自噬标记物LC3-II。结果：与LCN2组比较,DXR含药血清可显著减轻由LCN2诱导的巨噬细胞活力的下降,减少细胞培养液IL-6、TNF-α、hs-CRP水平,下调巨噬细胞中IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达,增加巨噬细胞自噬小体数量,增加自噬标记物LC3-II表达,均有统计学意义（P<0.05）。与DXR含药血清组比较,LY294002及Triciribine可进一步加强DXR含药血清功效（P<0.05）。结论：...     

黄连解毒汤通过诱导自噬减轻脓毒症小鼠肝损伤

目的:探讨黄连解毒汤对盲肠结扎穿孔术(CLP)诱导的脓毒症小鼠肝损伤保护作用中自噬相关蛋白的表达。方法:将60只8周龄C57BL/6小鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组、黄连解毒汤低、高剂量组(1.44,2.88 g·kg^-1)共4组(n=15)。连续给药3 d,末次给药1 h,盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型。观察小鼠24 h生存率;另取5只,术后12 h处死小鼠,收集血清和肝组织。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中炎症因子白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;生化法检测血中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织的病理变化;TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色观察肝细胞凋亡指数(AI);蛋白免疫印迹法检测肝组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1),自噬效应蛋白1(Beclin1),自噬标志物微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ(LC3-Ⅱ/Ⅰ)的表达。结果:与假手术组比较,模型组小鼠12,24 h生存率明显降低,血清中炎症因子IL-6...     

基于PTEN/PI3K/Akt/mTOR 信号通路探讨淫羊藿苷联合地塞米松对阿霉素诱导足细胞损伤的保护作用及机制

目的 探讨淫羊藿苷联合地塞米松对阿霉素诱导足细胞损伤的保护作用及分子机制。方法 体外培养大鼠肾小球足细胞,阿霉素诱导建立足细胞损伤模型,分为：空白组、模型组、淫羊藿苷联合地塞米松组及氯喹组。免疫荧光法测定足细胞特异性骨架蛋白synaptopodin的表达;转染mRFP-GFP-LC3双荧光自噬指示体系,激光共聚焦显微镜观察足细胞内自噬流的强弱;透射电镜观察足细胞内自噬体、自噬溶酶体的变化;Western Blot法检测足细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62及自噬信号通路蛋白PTEN、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达。结果 与模型组比,淫羊藿苷联合地塞米松组的synaptopodin的表达升高（P<0.05）;足细胞内自噬流水平、自噬体及自噬溶酶体数量均增加（P<0.01）; LC3-Ⅱ、PTEN的表达上调（P<0.01）,但p62、pPI3K、p-Akt、p-mTOR的表达下调（P<0.01）。与淫羊藿苷联合地塞米松组比,氯喹组synaptopodin的表达降低（P<0.05）;足细胞内自噬流的水平降低;自噬体数量增加（P<0.05）,自噬...