柔肝通络汤预处理对MCAO大鼠脑细胞凋亡及神经元形态的影响

目的:探讨柔肝通络汤对大脑中动脉阻断(MACO)所致脑缺血/再灌注损伤大鼠脑细胞凋亡及神经元形态的影响。方法:将实验大鼠分为柔肝通络汤高、中、低剂量组和空白对照组、假手术组、模型组。采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,采用TUNEL法及Nissl染色法分别观察实验动物缺血再灌注后3、6、12、24、48h脑凋亡细胞及神经元形态。结果:柔肝通络汤能够显著降低模型动物的凋亡细胞数,增加活神经元数量。柔肝通络汤组的凋亡细胞数低于模型组(P0.05),活神经元数量高于模型组(P0.05)。结论:柔肝通络汤通过抗细胞凋亡发挥脑保护作用。     

艾灸对脑缺血后内源性神经干细胞分化影响的研究

目的:探讨艾灸对大鼠脑缺血再灌注后内源性神经干细胞分化的影响,明确艾灸治疗脑缺血性卒中的作用机制,为艾灸治疗缺血性卒中提供新的理论依据。方法:选用Wistar大鼠72只,通过改良线栓法制备MCAO模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、艾灸组。每组分3天、7天、14天、21天4个时间点,每个时间点6只。通过腹腔注射Brdu来标记增殖的细胞。取大鼠"百会、太阳(双)"穴进行实验研究。通过TTC染色和HE染色来观察大鼠脑组织的病理学变化。应用免疫荧光技术,进行BrdU/GFAP、BrdU/NSE双标染色。通过显微图像分析系统对阳性结果进行分析。结果:艾灸组各时间点神经功能缺损评分与模型组比较,评分降低,具有显著性差异(P0.05)。同一时间点艾灸组神经功能缺损评分与模型组比较有显著性差异(P0.05);艾灸可促使脑缺血损伤后BrdU/GFAP、BrdU/NSE双标阳性细胞增加,于缺血损伤后3天达高峰。与模型组及假手术组比较有显著性差异(P0.05)。结论:艾灸能显著促进脑缺血再灌注后大鼠神经功能恢复;艾灸能促进脑缺血再灌注后脑组织BrdU/GFAP双标阳性细胞、BrdU/NSE双标阳性细胞的表达,表明了艾灸能够促进神经干细胞向神经元细胞和神经胶质细胞分化。     

芪仙通络方对脑缺血大鼠内源性神经干细胞再生的影响及机制

目的:探讨芪仙通络方对脑缺血大鼠内源性神经干细胞再生的影响及可能机制。方法:采用线栓法复制大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血模型;将160只大鼠随机分为正常组,假手术组,模型组,吡拉西坦组(吡拉西坦片灌胃),芪仙通络方组(芪仙通络方灌胃);5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,Brd U)腹腔注射标记脑内增殖细胞,造模后3,7,14,28 d,分别采用免疫荧光Brd U/神经元核抗原(neuronal nuclei antigen,Neu N),Brd U/胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)双标法检测缺血海马区新生的神经元及星形胶质细胞,并计算其双标阳性细胞率,免疫组化法检测缺血侧脑内脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达。结果:术后7,14,28 d,芪仙通络方组、吡拉西坦组Brd U/Neu N,Brd U/GFAP双标阳性细胞率均高于模型组(P0.01),且各时间点芪仙通络方组Brd U/Neu N阳性细胞均高于吡拉西坦组(P0.05),而仅在术后7 d,芪仙通络方组Brd U/GFAP双标阳性细胞率高于吡拉西坦组(P0.05),随后均呈下降趋势;与模型组比较,术后各时间点芪仙通络方组、吡拉西坦组缺血脑内BDNF表达均升高(P0.01),芪仙通络方组BDNF表达于术后3 d达到高峰,之后水平虽有所下降,但仍高于吡拉西坦组(P0.05)。结论:芪仙通络方可促进脑缺血大鼠内源性神经干细胞再生,以恢复期和后遗症期明显,而早期活化星形胶质细胞及上调BDNF的表达可能是其作用机制之一。     

芪仙通络方及其拆方对脑梗死大鼠室管膜下区神经发生及p38MAPK活化的影响

目的观察芪仙通络方及其拆方对脑梗死大鼠室管膜下区神经发生及p38MAPK活化的影响,探讨其作用机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芪仙通络方组(全方组)、补肾活血拆方组(拆方1组)、益气温阳拆方组(拆方2组)和胞磷胆碱组,线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,造模后第3日开始灌胃给药,同时腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)标记脑内增殖细胞,每日1次,连续12d。于造模后第3、7、14日对大鼠神经功能进行评分;免疫荧光染色观察大鼠缺血侧室管膜下区巢蛋白(Nestin)/Brd U、双肾上腺皮质激素(doublecortin,DCX)/BrdU、神经元核抗原(NeuN)/Brd U双标阳性细胞数;免疫组化检测大鼠缺血侧室管膜下区磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)蛋白表达;Pearson相关分析法分析Nestin/BrdU、DCX/Brd U和NeuN/BrdU双标阳性细胞数与神经功能评分和p-p38MAPK蛋白表达的相关性。结果与假手术组比较,模型组大鼠各时间点神经功能评分明显升高(P0.01),大鼠缺血侧室管膜下区Nestin/BrdU、DCX/Brd U和Neu N/BrdU双标阳性细胞数明显增加(P0.05),p-p38MAPK蛋白表达升高,但差异无统计学意义(P0.05);与模型组比较,各给药组大鼠第7、14日神经功能评分明显降低(P0.01),大鼠缺血侧室管膜下区Nestin/BrdU、DCX/BrdU、NeuN/BrdU双标阳性细胞数明显增多(P0.01),p-p38MAPK蛋白表达显著上调(P0.01),全方组作用最显著(P0.05)。全方组大鼠缺血侧室管膜下区Nestin/BrdU、DCX/BrdU、Neu N/BrdU双标阳性细胞数与神经功能评分呈显著负相关,与p-p38MAPK蛋白表达呈显著正相关。结论芪仙通络方及其拆方可改善脑梗死大鼠受损神经功能,其机制可能与促进缺血侧室管膜下区p38MAPK活化、上调内源性神经发生水平有关。     

脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注海马齿状回细胞增殖分化的影响及量效作用

目的:从海马齿状回(dentate gyrus,DG)细胞增殖和分化的变化揭示脑脉通抗老年脑缺血再灌注损伤的保护机制及其量效关系.方法:采用MCAO方法制作脑缺血(缺血3 h再灌注12 d)动物模型,观察脑脉通(大、中、小剂量)对脑缺血再灌注大鼠神经症状积分、脑组织含水量、病理变化、海马齿状回细胞增殖、分化及其变化的影响.结果:老龄模型组脑组织含水量、神经症状积分、Brdu阳性细胞、BrdU/NeuN双标阳性细胞、BrdU/GFAP双标阳性细胞数目均高于假手术组;脑脉通组(大、中、小剂量)、尼莫地平组脑组织含水量、神经症状积分均低于模型组,脉通组(大、中、小剂量)、尼莫地平组Brdu阳性细胞、BrdU/NeuN双标阳性细胞数目高于模型组,BrdU/GFAP双标阳性细胞数目低于模型组;脑脉通中剂量组神经症状积分、Brdu阳性细胞数目高于尼莫地平组;脑脉通中剂量组大鼠神经症状积分、脑组织含水量、病理变化、均低于脑脉通小剂量组,Brdu阳性细胞、BrdU/NeuN双标阳性细胞数目高于脑脉通小剂量组.结论:脑缺血可激活大鼠DG神经干细胞增殖;脑脉通拮抗脑缺血再灌注损伤机制与其促进DG区神经干细胞增殖和分化有关,且以脑脉通中剂量效果最全面.     

康脑液1号预处理对大鼠脑缺血再灌注病灶和GFAP表达的影响

目的观察康脑液1号预处理对SD大鼠脑缺血再灌注后病灶和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响,探讨其对脑缺血再灌注保护作用的可能机制。方法将180只大鼠随机分为5组（各36只）,假手术组、模型（缺血再灌注）组、盐酸法舒地尔注射液组、康脑液1号A组、康脑液1号B组。采用线栓法复制SD大鼠大脑中动脉梗死模型（MCAO）,分别于缺血2h后再灌注1d、7d、14d。观察康脑液1号预处理对大鼠脑缺血再灌注神经功能、梗死面积和病理形态学的影响。采用免疫组化法检测缺血半暗带和病灶中心区星形胶质细胞GFAP表达的变化。结果模型组与假手术组相比,GFAP表达阳性细胞数增多;康脑液1号预处理可不同程度地降低实验性脑缺血大鼠的神经功能评分、减小梗死面积和减轻病理形态改变（P〈0.05）;康脑液1号各组大鼠脑组织缺血半暗带GFAP表达减少,而梗死灶中心GFAP表达却增多;康脑液1号A组与康脑液1号B组之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论康脑液1号预处理可能通过调节脑缺血再灌注后GFAP表达而促进脑损伤修复及重塑,从而发挥脑保护作用。     

柔肝通络汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠脑保护作用

目的观察柔肝通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法将SD大鼠分为柔肝通络汤高、中、低剂量组和空白对照组、假手术组、模型组。采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤(MCAO)模型,分别观察缺血再灌注后3、6、12、24、48 h神经学评分及再灌24 h脑梗死面积。结果柔肝通络汤能够明显改善模型动物的神经病学症状,缩小脑梗死面积。柔肝通络汤各剂量组的神经功能缺损评分及梗死灶面积均低于模型组(P0.05)。结论柔肝通络汤在防治大鼠脑缺血再灌注损伤方面具有脑保护作用。     

醒脑通络片对脑缺血损伤大鼠内源性神经干细胞的影响

目的观察醒脑通络片(黄芪、川芎、桃仁、红花、鸡血藤等)对脑缺血损伤大鼠内源性神经干细胞的影响。方法将120只SD大鼠随机分为假手术组和模型组(生理盐水灌胃),醒脑通络片小、中、大剂量组5组,每组各24只,采用线栓法致大鼠脑缺血再灌注损伤模型。脑缺血再灌注后3、7、14、28 d时,神经功能评分后处死动物,用免疫组化法观察缺血侧海马溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)、巢蛋白(Nestin)的表达。结果假手术组海马区仅有少量Brd U、Nestin阳性细胞表达,模型组及醒脑通络片各组再灌注3 d后Brd U、Nestin阳性细胞表达开始增多,7~14 d达高峰,28 d明显下降。和模型组比较,醒脑通络片各组Brd U、Nestin阳性细胞明显增多(P0.05或0.01)。醒脑通络片各组在再灌注14和28 d神经功能均显示恢复,和模型组比较有显著性意义(P0.05或0.01)。结论醒脑通络片可以促进内源性神经干细胞增殖、分化,可能为其治疗缺血性脑血管病的机制之一。     

柔肝通络汤对MCAO大鼠自噬蛋白Beclin1及LC3表达的影响

目的 从细胞自噬的角度探讨柔肝通络汤治疗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法 将120只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组及柔肝通络汤组。空白组不予处理，假手术组及模型组予蒸馏水灌胃，柔肝通络汤组柔肝通络汤灌胃，均预处理1周。末次灌胃30min后，建立脑缺血再灌注模型。按再灌注3、6、12、24h时间点进行大鼠神经功能缺损评分并取脑，进行神经功能评分、TTC染色、HE染色、免疫组化法检测Beclin1、LC3蛋白的表达。结果 与空白组及假手术组相比，模型组大鼠神经功能缺损评分升高(P<0.01),模型组与柔肝通络汤组均可见面积不等的梗死灶(P<0.01);模型组大鼠梗死侧脑组织细胞形态变性、坏死，出现噬神经细胞现象，且随时间增长而加重，Beclin1及LC3表达升高(P<0.01)。与模型组比较，柔肝通络汤组神经功能缺损评分下降(P<0.05),梗死面积有所减小，差异有统计学意义(P<0.05)。且柔肝通络汤组各亚组较模型组细胞形态损伤明显减轻，Beclin1及LC3表达均降低(P<0.01)。结论 柔肝通络汤能改善大鼠神经功能缺损，缩小脑梗死灶，...     

黄芩苷预处理对大鼠脑缺血再灌注GFAP表达的影响

目的:观察黄芩苷预处理对SD大鼠脑缺血再灌注GFAP表达的影响,探讨其对脑缺血再灌注保护作用的可能机制。方法:采用线栓法复制大鼠大脑中动脉梗塞模型(MCAO),分别于缺血2h后再灌注1d、3d、5d。将180只大鼠随机分为5组:假手术组、模型(缺血再灌注)组、盐酸法舒地尔注射液组、黄芩苷50mg/kg、黄芩苷100mg/kg。观察黄芩苷预处理对大鼠脑缺血再灌注GFAP表达的影响。采用免疫组化法检测缺血半暗带和灶中心区GFAP表达的变化。结果:模型组与盐酸法舒地尔组缺血梗死边缘缺血半暗带区星形胶质细胞GFAP的表达明显高于假手术组,并且随着再灌注时间的延长而增多,5d达到高峰(P0.05)。黄芩苷预处理各组梗死灶周边缺血半暗带区GFAP的表达很少,与模型组、盐酸法舒地尔组比较差异有统计学意义。模型组与盐酸法舒地尔组梗死灶中心GFAP的表达很少,黄芩苷预处理各组梗死灶中心GFAP的表达较多,与模型组、盐酸法舒地尔组比较差异有统计学意义。黄芩苷A组与黄芩苷B组之间比较差异不显著。结论:黄芩苷预处理可能通过调节脑缺血再灌注GFAP表达而促进脑损伤修复,从而发挥脑保护作用。统计学意义。黄芩苷A组与黄芩苷B组之间比较差异不显著。结论:黄芩苷预处理可能通过调节脑缺血再灌注GFAP表达而促进脑损伤修复,从而发挥脑保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后神经干细胞增殖分化和雌二醇变化及通心络对其影响

探讨大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)后内源性神经干细胞的增殖分化情况,以及大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)后血浆雌二醇(E2)含量变化和通心络对其影响。方法:采用大鼠缺血再灌注损伤(MCAO)模型,应用放免方法观察缺血后3天、7天、14天以及21天E2含量变化,免疫组织化学方法观察缺血后缺血侧室管膜及室管膜下区(SVZ)、海马齿状回(SGZ)BrdU阳性细胞数的变化。结果:造模后通心络组BrdU阳性细胞荧光强度值明显高于脑缺血再灌注模型组,差异显著(P<0.05);MCAO血浆E2浓度显著降低(P<0.05),通心络能升高E2浓度。结论:大鼠缺血再灌注损伤后可引起其缺血侧SVZ、SGZ区星形胶质细胞及神经细胞反应和增殖;而通心络可显著增加MCAO大鼠神经干细胞增殖分化能力,E2可能起着重要作用。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后高同型半胱氨酸血症和BrdU变化及通心络对其影响

目的:探讨大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)后内源性神经干细胞的增殖分化情况,以及大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)后血浆高同型半胱氨酸血症(Hcy)含量变化和通心络对其影响。方法:采用大鼠缺血再灌注损伤(MCAO)模型,应用放免方法观察缺血后3天、5天、14天以及30天Hcy含量变化,免疫组织化学方法观察缺血后缺血侧室管膜及室管膜下区(SVZ)、海马齿状回(DG)BrdU阳性细胞数的变化。结果:造模后通心络组BrdU阳性细胞荧光强度值明显高于脑缺血再灌注模型组,差异显著(P<0.05)。MCAO血浆Hcy浓度显著升高(P<0.05),通心络能降低Hcy浓度。结论:大鼠缺血再灌注损伤后可引起其缺血侧SVZ、DG区星形胶质细胞及神经细胞反应和增殖;而通心络可显著增加MCAO大鼠神经干细胞增殖分化能力。Hcy可能起着重要作用。     

养阴通脑颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠内源性神经干细胞表达的影响

目的观察养阴通脑颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠内源性神经干细胞表达的影响。方法线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,缺血90 min后再灌注。大鼠随机分为假手术组、模型组、养阴通脑颗粒组(1. 65 g/kg),再灌注后24 h灌胃给药。给药后第1、7、14天,Longa法进行神经功能评分,同时各组随机选择6只大鼠处死,免疫荧光检测缺血侧室管膜下区(SVZ)、颗粒下层区(SGZ) Brd U、Brd U/Nestin、Brd U/Neu N、Brd U/GFAP阳性细胞数。结果与模型组比较,给药后第7、14天养阴通脑颗粒组Longa评分显著降低(P 0. 05,P 0. 01),Brd U/Nestin阳性细胞数显著增加(P 0. 01);第1、7、14天Brd U阳性细胞数显著增加(P 0. 01),Brd U/GFAP阳性细胞数显著减少(P 0. 01);第14天Brd U/Neu N阳性细胞数显著增加(P 0. 05)。结论养阴通脑颗粒可通过激活内源性神经干细胞来促进其增殖,并分化为成熟的神经元,同时能减轻神经胶质细胞过度增殖,促进神经发生,减轻神经功能缺损。     

清脑滴丸对急性脑缺血大鼠大脑皮层GFAP、NeuN蛋白表达的调节作用

目的动态观察清脑滴丸对急性脑缺血大鼠大脑皮层胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元核抗原(Neu N)表达的影响,探究其对急性脑缺血的保护作用。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、清脑滴丸组3组,7个亚组,采用改良的Zea Longa法建立急性脑缺血动物模型,采用HE染色和尼氏染色观察脑组织形态学变化和损伤状况,采用免疫组化法检测GFAP、Neu N的表达水平。结果 HE染色和尼氏染色发现,大鼠在缺血再灌注的不同时点大脑皮层均出现了不同程度的病理形态学改变,以缺血再灌注24 h时较为显著,出现神经元水肿、细胞和血管间隙增宽、核固缩;免疫组化染色法发现再灌注3 h神经元和星形胶质细胞出现损伤,24~72 h神经元损伤较重,星形胶质细胞突起断裂明显,细胞排列稀疏;清脑滴丸组缺血1.5 h再灌注24 h和72 h神经元数量较模型组增多,细胞核着色较深。结论清脑滴丸可减轻急性脑缺血大鼠大脑皮层组织损伤,上调皮层Neu N和GFAP蛋白的过低表达,可减轻急性脑缺血损害。     

补阳还五汤及其拆方对大鼠脑缺血后神经发生的影响

目的研究补阳还五汤及其拆方对大鼠局灶性脑缺血后神经发生（neurogenesis）的影响及作用机制。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,缺血90min后再灌注,分假手术组、模型组、补阳还五汤组、补气组、活血组,缺血后24h灌胃给药,连续14天。并腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bro-modeoxyuridine,BrdU）,1次,天,连续14天。在缺血后第1、7、14天,采用改良的神经症状严重程度评分（mNSS）和角实验评价神经功能;缺血后第14天,采用免疫荧光双标检测BrdU／Nestin、BrdU／NeuN和BrdU／GFAP免疫阳性细胞,Westernblot检测脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白表达。结果与模型组比较,全方组及补气组大鼠mNSS评分降低和右转次数减少（P〈0．05,P〈0．01）,侧脑室下区BrdU／Nestin免疫阳性细胞、缺血皮层周边区BrdU／NeuN和BrdU／GFAP免疫阳性细胞数量增多（P〈0．05,P〈0．01）,BDNF和VEGF蛋白表达增加（P〈0．01）;但补气组BrdU／GFAP差异无统计学意义（P〉0．05）,活血组各项指标差异无统计学意义（P〉0．05）。与全方组比较,补气组和活血组大鼠BrdU／Nestin、BrdU／NeuN和BrdU／GFAP免疫阳性细胞显著减少（P〈0．01）,BDNF和VEGF蛋白表达下降（P〈0．01）。结论补阳还五汤能显著促进脑缺血后神经发生和神经功能恢复,机制可能与上调BDNF和VEGF蛋白有关,方中补气药和活血药具有协同作用。     

柔肝通络汤对脑缺血大鼠外周血内皮祖细胞影响的实验研究

目的:观察柔肝通络汤对脑缺血大鼠内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)的影响,探讨其改善脑缺血神经功能缺损的可能机制。方法:采用线栓法制备大脑中动脉闭塞的脑缺血大鼠模型,随机分为0.9%氯化钠注射液组、辛伐他汀组、柔肝通络汤组,每组各10只;另取10只设为假手术组。各组分别于造模成功后第1天开始灌胃给药,连续7d。采用Longa神经功能评分评价造模术后3h及给药前后各组大鼠神经功能缺损情况,于造模前及给药前后使用CD_(34)、CD_(133)双抗体标记结合流式细胞仪检测各组大鼠外周血EPCs数量。结果:各治疗组给药前Longa评分均较造模术后3h降低;给药后Longa评分柔肝通络汤组、辛伐他汀组均低于0.9%氯化钠注射液组,且柔肝通络汤组低于辛伐他汀组,差异均有统计学意义(P0.01);急性脑缺血发生后,大鼠外周血CD_(34)+CD_(133)+EPCs数量先下降再上升,柔肝通络汤与辛伐他汀可使EPCs数量增加,且柔肝通络汤作用优于辛伐他汀。结论:柔肝通络汤可能通过增加EPCs数量及功能来促进大鼠脑缺血后神经功能的恢复。     

补阳还五汤对大鼠内源性神经干细胞GFAP、SYN表达的影响

目的:研究补阳还五汤对大鼠内源性神经干细胞GFAP、SYN表达的影响。方法:将240只雄性大鼠随机分为模型组、假手术组、补阳还五汤治疗组、正常对照组,采用线栓法制作脑梗死模型,分别给予不同处理,于术后1、3、7、14、21、28天6个时间点分批处死大鼠。采用免疫组织化学方法检测各组大鼠梗死区域GFAP、SYN标记的阳性细胞情况。结果:模型组大鼠脑缺血区域相对应区域可见大量的GFAP、SYN标记阳性细胞,差异均无明显统计学意义(P0.05)。与假手术组相比,模型组和补阳还五汤治疗组大鼠GFAP标记阳性细胞数目增多,SYN标记阳性细胞数目减少,差异均具有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,补阳还五汤治疗组大鼠GFAP、SYN标记阳性细胞数目均增多,第14天时GFAP、SYN标记阳性细胞数目达到高峰,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:补阳还五汤是治疗脑梗死恢复期的中药经验方,在改善神经功能缺损方面有显著疗效。补阳还五汤能促进脑梗死后内源性神经干细胞增殖分化为神经元、星形胶质细胞等神经组织的后备细胞,并能增强神经突触之间的联系,使神经元发挥正常的兴奋性,促进神经功能恢复。     

补肾化痰祛瘀方对血管性痴呆大鼠脑组织星形胶质细胞影响的实验研究

目的观察补肾化痰祛瘀方对血管性痴呆（VaD）大鼠脑组织星形胶质细胞的影响。方法采用改良线栓法制作大鼠VaD模型，缺血2h分别再灌注6h、24h、48h、72h、28d，随机分为正常组、假手术组、模型组、阿米三嗪组和补肾化痰祛瘀方组，并分别施以相应的处理。于不同再灌注时间点检测大鼠脑组织GFAP的表达。结果正常组与假手术组大鼠脑额顶叶皮层缺血半暗带区可见GFAP阳性细胞散在分布，假手术组与正常组阳性细胞数和平均光密度相近；模型组大鼠GFAP表达在6h增加，24、48、72h表达进一步增加，72h最高，28d仍维持较高水平，与正常组阳性细胞数和平均光密度差异显著；补肾化痰祛瘀方组于6、24、48、72h时可见GFAP的表达增加，与模型组阳性细胞数和平均光密度相近，于28d增加明显，与模型组差异显著；阿米三嗪组在不同时段可见GFAP的表达增加，与模型组阳性细胞数和平均光密度部分时段差异显著（72h、28d）；补肾化痰祛瘀方组与阿米三嗪组阳性细胞数和平均光密度在28d时差异显著。结论补肾化痰祛瘀方可调节脑缺血星形胶质细胞的GFAP表达，可能对损伤具有一定修复作用。     

电针预处理对脑缺血再灌注大鼠大脑皮质一氧化氮合酶及胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的:观察电针预处理对脑缺血再灌注大鼠大脑皮质神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,探讨其可能的保护机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针预处理组,每组8只。采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型。电针预处理组在造模前取"百会"和"大椎"穴给予电针刺激,1次/d,连续7d。造模后24h进行神经功能评分,尼氏染色观察大脑皮质神经细胞形态及存活数,免疫组织化学法检测大脑皮质nNOS、iNOS及GFAP的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠的神经功能评分明显增高,大脑皮质神经细胞存活数明显减少(P0.01),nNOS、iNOS及GFAP的表达明显增高(P0.01);与模型组比较,电针预处理组能明显改善脑缺血再灌注后大鼠的神经功能症状(P0.01),增加大脑皮质神经细胞的存活数(P0.01),降低nNOS、iNOS的表达(P0.01),促进GFAP的表达(P0.01)。结论:电针预处理对脑缺血再灌注大鼠脑损伤有保护作用,其机制可能与下调nNOS和iNOS、上调GFAP的表达,诱导脑缺血耐受有关。     

头针联合川芎嗪对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织MyD88和皮层神经元损伤的影响

目的:观察头针联合川芎嗪(TMP)对脑缺血再灌注模型大鼠神经功能缺损、脑梗死体积、皮层神经元损伤及MyD88表达的影响,探讨头针联合川芎嗪对脑缺血再灌注模型大鼠的脑保护作用及可能的作用机制。方法:165只大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、头针组(C组)、TMP组(D组)、头针+TMP组(E组)五组。每组根据再灌注时间分为IR1d(n=13)、IR3d(n=10)、IR7d(n=10)三亚组。采用改良的Zea Longa线栓法,制备右侧大脑中动脉缺血2 h再灌注(MCAO/R)大鼠模型;A组不中断大脑中动脉血流。C组和E组大鼠在右侧头部百会至曲鬓穴线进行透刺治疗;D组和E组分别给予腹腔注射TMP 20 mg/kg/次,每日一次。各组大鼠相应时间点进行神经功能评分测定;TTC染色检测再灌注1 d大鼠脑梗死体积;HE染色观察皮层神经元损伤及炎性细胞浸润情况;免疫组化、Western blot技术检测各组大鼠缺血侧脑组织MyD88表达水平。结果:E组大鼠在再灌注1 d、3 d、7 d,神经功能缺损程度均较其余四组明显减轻(P0.05)。在再灌注1 d,E组大鼠相对脑梗死体积最小,与其余四组比较有统计学差异(P0.05)。再灌注各个时间点,E组大鼠缺血侧皮层神经元损伤程度及炎性细胞浸润情况均较其余四组明显减轻;且缺血侧脑组织中MyD88阳性细胞数和相对蛋白含量均较其余四组明显降低(P0.05)。结论:头针联合川芎嗪治疗可显著改善MCAO/R大鼠神经功能缺损,减少梗死体积,减轻皮层神经元损伤、炎性细胞浸润,具有脑保护作用,其机制可能与抑制缺血侧脑组织中MyD88蛋白表达、降低脑缺血再灌注后的炎症级联反应有关。