扶正抑瘤方醇提物对人肺癌A549细胞增殖和调亡的影响

目的:探讨扶正抑瘤方醇提物对人肺癌A549细胞增殖抑制和诱导调亡的作用。方法:将人肺癌A549细胞在体外加入不同浓度的扶正抑瘤方醇提物72小时后,采用CCK8法检测该方的增殖抑制作用,以Annexin V-EGFP标记法,通过流式细胞术检测该方对人肺癌A549细胞凋亡的影响。结果:扶正抑瘤方醇提物能抑制人肺癌A549细胞的增殖,与浓度相关,与空白对照组比较有明显差异(P0.05);显微镜下可见到明显的凋亡细胞,流式细胞检测结果提示随着浓度的增加,细胞凋亡率增加。结论:扶正抑瘤方醇提物能显著抑制人肺癌A549细胞增殖,可能与诱导细胞凋亡有关。     

蜈蚣提取物抗肺癌活性的体内外实验研究

目的探讨蜈蚣提取物对人肺癌A549细胞的增殖抑制、凋亡诱导及裸小鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法采用酶解法合丙酮沉淀法分离纯化蜈蚣提取物处理人肺癌A549细胞,MTT法检测细胞增殖抑制并计算半数抑制率(IC50),流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化,Hoechst荧光染色观察细胞凋亡的形态变化。制备人肺癌细胞裸小鼠皮下移植瘤模型,随机分为模型组、对照组和蜈蚣提取物组,每组10只,观察裸小鼠皮下移植瘤瘤体体积、质量及抑瘤率变化。结果体外实验结果显示,蜈蚣提取物对人肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,IC50为0.603 mg/m L;蜈蚣提取物作用48 h后,细胞周期表现为G0/G1期细胞比例下降,S期与G2/M期细胞比例均升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01);Hoechst荧光染色可观察到明显的凋亡细胞及凋亡特征性的形态学改变;动物体内抑瘤实验结果发现,经蜈蚣提取物治疗后,瘤体质量与体积显著减少,与模型组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论蜈蚣提取物对人肺癌A549细胞具有浓度依赖性增殖抑制作用,可诱导细胞凋亡,使A549细胞停滞于G2/M期,并能有效抑制人肺癌裸小鼠皮下移植瘤的生长。     

兴安升麻总苷抗肿瘤药效研究

目的观察升麻总苷对小鼠移植性肿瘤和人肿瘤细胞裸鼠移植瘤的体内抗肿瘤作用，以及体外对人肿瘤细胞株的抑瘤活性，并对其抑瘤机制进行初步探讨。方法MTT法检测体外升麻总苷对人肿瘤细胞的增殖抑制作用；体内实验观察其对小鼠S180和裸鼠体内移植人肺腺癌A549的抑制作用；同时采用流式细胞仪和肿瘤病理切片对接种的A549肿瘤细胞凋亡进行观察。结果升麻总苷对A549、HepG2、HL60、Eca-109、MDA-MB231肿瘤细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为20．3、27．1、21．2、23．4和32．7gg／mL。小鼠口服升麻总苷100mg／kg和200mg／kg可明显抑制S180移植瘤（抑瘤率分别为42．8％和54．6％）和裸鼠移植人肺腺癌A549的生长（T／C值分别为58．1％和52．2％），肿瘤组织病理切片和流式细胞仪对A549肿瘤细胞凋亡的检测显示，升麻提取物可诱导体内肿瘤细胞凋亡。结论升麻体内体外均具有抗肿瘤活性，其体内抑制肿瘤生长可能与诱导细胞凋亡相关。     

砒霜纳米乳治疗小鼠Lewis肺癌的效果初步评价

目的评价砒霜纳米乳治疗小鼠Lewis肺癌的效果及对免疫系统的毒性。方法采用MTT法及流式细胞仪分别检测A549细胞的增殖和凋亡；采用小鼠Lewis肺癌皮下移植肿瘤模型观察砒霜的抗肿瘤作用，通过小鼠碳粒廓清和迟发性变态反应考察砒霜对免疫系统的毒性。结果砒霜纳米乳可诱导A549细胞的凋亡，流式结果出现DNA亚二倍体凋亡峰；砒霜纳米乳与其水溶液连续灌胃给药8d对小鼠Lewis肺癌皮下肿瘤的抑瘤率分别为42．0％和33.2％，砒霜水溶液对小鼠碳粒廓清能力及迟发性变态反应均有降低作用，但其纳米乳对两者均无明显影响。结论砒霜纳米乳对小鼠Lewis肺癌皮下肿瘤的效果优于其等剂量水溶液，且能降低对机体免疫系统的损害。     

益气扶正方对Lewis肺癌小鼠抑瘤作用的实验研究

目的:观察益气扶正方对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的影响,并通过拆方和不同时间点预防性给药研究其抑瘤作用。方法:选用5周龄纯系C57BL/6雄性小鼠150只,将Lewis肺癌细胞悬液接种于小鼠右侧腋下建立皮下肺癌模型,接种后小鼠随机分组,治疗组给予相应中药汤剂灌胃,对照组给予同体积生理盐水,测量肿瘤体积大小并统计。结果:益气扶正方能抑制Lewis肺癌皮下移植瘤小鼠的肿瘤生长(P0.05),拆方后的加减四君子汤和黄芪、党参、白术、茯苓、陈皮均未观察到抑瘤作用。益气扶正方接种前2周、接种前1周、接种后给药均能发挥抑瘤作用(P0.05)。结论:益气扶正方能明显抑制Lewis肺癌皮下移植瘤小鼠的肿瘤生长,预防性给药则起效更早,抗癌作用更显著。     

血三七醋酸乙酯提取物促进肺癌细胞凋亡的调控机制研究

目的研究血三七Polygonum amplexicaule var. sinense醋酸乙酯提取物(EAEP)对人肺癌A549和H1299细胞凋亡的影响及其机制。方法通过CCK-8细胞增殖检测试剂盒及流式细胞术检测EAEP对A549和H1299细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westernblotting法检测EAEP对A549和H1299细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果 EAEP能显著促进A549和H1299细胞凋亡;显著提高促凋亡因子Bax、Caspase-3 mRNA表达水平,降低抗凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达水平;显著提高Bax蛋白表达水平,降低Bcl-2蛋白表达水平。结论 EAEP能通过促进Bax的表达和抑制Bcl-2的表达诱导肺癌细胞凋亡。     

扶正消积胶囊对人肺癌细胞株A549增殖抑制及凋亡的影响

目的:研究扶正消积胶囊在体外对人肺癌细胞A549增殖抑制及凋亡的影响。方法:应用MTT法检测扶正消积胶囊对A549细胞增殖的影响,应用流式细胞仪检测扶正消积胶囊对A549细胞凋亡的影响,应用Western bolt检测扶正消积胶囊对A549细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:与空白组比较,扶正消积胶囊作用A549细胞24h后,能显著抑制A549细胞的增殖,且这种抑制成浓度依赖关系。Annexin-V/PI双染法结果显示扶正消积胶囊能诱导A549细胞的凋亡,且呈现浓度依赖关系。Western bolt结果显示,扶正消积胶囊能上调Bax表达,下调Bcl-2表达,激活caspase-3、caspase-9、PARP的活性。结论 :扶正消积胶囊能有效抑制人胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过激活caspase家族蛋白酶活性以及上调Bax、下调Bcl-2表达而实现的。     

黄芪水提物抑制PI3K/Akt通路预防肺癌发生的作用及机制研究

目的探讨黄芪水提物对肺癌的抑制作用及相关机制。方法采用MTT实验、Ed U实验以及划痕实验检测黄芪水提物对肺癌A549和H1299细胞的活性、增殖能力和迁移能力的影响,采用流式细胞仪考察黄芪水提物对肺癌细胞周期的影响,通过Western blotting实验检测PI3K/Akt通路相关蛋白表达,通过苯并芘诱导的小鼠肺癌模型观察黄芪水提物对体内肺癌的影响。结果 MTT实验结果表明,黄芪水提物作用于A549和H1299细胞48 h后,细胞的生长活性被抑制;Ed U实验结果表明,黄芪水提物能够显著抑制A549和H1299细胞的增殖能力;对细胞周期考察的实验结果表明,黄芪水提物能够将A549和H1299细胞周期阻滞在S期;划痕实验结果表明,黄芪水提物作用于A549和H1299细胞24 h和48 h后,能够显著抑制细胞的迁移能力;Western blotting实验结果表明,黄芪水提物能够下调A549和H1299细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(p-PDK1)和磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平;体内实验结果表明,黄芪水提物能够显著抑制小鼠肺部肿瘤数量及大小。结论黄芪水提物能够抑制肺癌,该机制可能与PI3K/Akt信号通路受阻有关。     

扶正解毒方含药血清对人肺癌细胞(A549)增殖和凋亡的影响

目的:研究扶正解毒方含药血清对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法:在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的扶正解毒方含药血清,计算细胞抑制率、观察细胞形态学变化、检测细胞凋亡率。结果:MTT提示扶正解毒方含药血清对肺腺癌A549细胞具有特异性抑制效应并存在效应-剂量依赖关系;肺腺癌A549细胞随药物浓度增加及处理时间的延长细胞凋亡特征越明显;细胞凋亡率随着药物剂量的增加和作用时间的延长而增加,存在效应-剂量、效应-时间依赖关系。结论:扶正解毒方含药血清可抑制肺腺癌A549细胞生长、诱导细胞凋亡。     

益气养阴方通过p53依赖AKT/NF-κB信号传导抑制肺癌细胞增殖研究

目的:探讨益气养阴方对肺癌细胞增殖及存活的影响及机制。方法:应用MTS法检测益气养阴方对A549(p53野生型)及H1299(p53缺失型)细胞增殖的影响;应用Western Blotting法检测益气养阴方对于A549及H1299细胞AKT/NF-κB传导相关蛋白及其磷酸化、A549细胞p53蛋白表达的影响;应用RT-PCR法检测益气养阴方对于A549细胞p53及其下游靶基因表达的影响。结果:益气养阴方呈剂量依赖性地抑制人肺癌细胞A549及H1299细胞增殖,IC、IC_(50)值分别为0.22 g/mL、0.15 g/mL;益气养阴方通过抑制A549细胞AKT及其磷酸化蛋白、下游磷酸化IKKα/β以及NF-κB蛋白的表达,抑制肺癌细胞存活,而对于H1299细胞相应蛋白的抑制作用不明显;益气养阴方可促进A549肺癌细胞p53及下游基因BAX、Bim、Puma的表达。结论:益气养阴方可以通过下调p53依赖AKT/NF-κB信号传导抑制肺癌细胞增殖与存活,通过上调p53及其下游基因的表达促进肺癌细胞凋亡。     

秦皮甲素对肺癌小鼠抑瘤作用的研究

目的探讨秦皮甲素对小鼠肺癌移植瘤的影响及作用机制。方法分组对比观察秦皮甲素对小鼠Lewis肺癌移植瘤的影响,瘤组织称重计算抑瘤率,免疫印迹法检测秦皮甲素对凋亡基因Bax、Bcl-2的影响。流式细胞仪检测瘤细胞增殖周期及凋亡,JC-1染色检测线粒体膜电位。结果秦皮甲素可抑制小鼠肺癌移植瘤的生长和瘤细胞的增殖周期,降低线粒体膜电位,在上调Bax蛋白表达的同时下调Bcl-2蛋白表达,且呈剂量依赖性。结论秦皮甲素对小鼠肺癌移植瘤有显著的抑制作用。使肿瘤细胞阻滞于S期,并通过线粒体途径诱导凋亡。     

六君二陈解毒汤及拆方抗Lewis肺癌作用的比较研究

目的:比较研究代表性益气健脾、祛湿化痰、清热解毒三法配伍的六君二陈解毒汤及其拆方对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用。方法:建立C57BL/6J小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,给药15d后取瘤称重,计算抑瘤率;应用流式细胞仪检测分析小鼠肿瘤细胞的周期变化及凋亡百分率。结果:六君二陈解毒汤及其拆方六君二陈汤、半夏陈皮汤和清热解毒汤皆可抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长,抑瘤率分别为33.15%,21.54%,19.05%和17.59%;4个中药复方治疗组处于G0/G1期的肿瘤细胞及其平均凋亡率皆显著高于生理盐水对照组。结论:六君二陈解毒汤及其拆方均能抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长,但以三法配伍的六君二陈解毒汤疗效最好,其作用机制可能与阻滞细胞于G0/G1期并诱导癌细胞凋亡有关。     

牡荆葡基黄酮抑制自噬诱导非小细胞肺癌A549 细胞凋亡及对移植瘤裸鼠存活的影响

目的:探讨牡荆葡基黄酮对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡和移植瘤裸鼠存活的影响。方法:体外实验:用不同浓度(10,20,40μmol/L)的牡荆葡基黄酮作用于肺癌A549细胞。CCK8法检测细胞增殖;流式细胞技术检测细胞凋亡;蛋白印迹法检测Ki67,PCNA,Caspase-3,Caspase-9,P62,Beclin1,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,ATG5的蛋白表达及JNK1/2,ERK1/2的磷酸化情况。体内实验:皮下注射A549细胞建立移植瘤模型,分别腹腔注射0.5,1,2 mg/kg牡荆葡基黄酮,于第30天绘制存活曲线,免疫组化检测组织中Ki67和Caspase-3的表达情况。结果:牡荆葡基黄酮能抑制A549细胞存活和Ki67、PCNA蛋白表达;促进细胞凋亡和Caspase-3、Caspase-9蛋白表达;下调自噬标记物Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、ATG5,上调P62蛋白表达;增加JNK1/2,减少ERK1/2的磷酸化水平;还能增加移植瘤裸鼠存活率,下调Ki67而上调Caspase-3的表达水平。结论:牡荆葡基黄酮能通过抑制细胞自噬而诱导A549细胞凋亡,同时增加移植瘤裸鼠的存活率。     

培元固本方抑制肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长并延长生存期的实验研究

目的:观察培元固本方对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及H1299肺癌小鼠生存期的影响。方法:将100只C57BL/6纯系小鼠随机分10组,每组10只。分别是正常组、Lewis肺癌对照组、Lewis肺癌+顺铂组、Lewis肺癌+高剂量组、Lewis肺癌+中剂量组、Lewis肺癌+低剂量组、H1299肺癌对照组、H1299肺癌+高剂量组、H1299肺癌+中剂量组和H1299肺癌+低剂量组。正常组、对照组和顺铂组给予0. 2 m L/(只·d)生理盐水,观察组分别给予0. 2 m L/(只·d)高、中、低剂量(4. 496 g/m L、2. 248 g/m L和1. 124 g/m L)的培元固本方,连续灌胃15 d。实验结束后,测量Lewis肺癌皮下移植瘤模型小鼠的免疫器官重量、肝肾功能、瘤重和皮下瘤体积并计算抑瘤率,计算H1299肺癌腹水种植瘤模型小鼠生存率,绘制生存曲线图。结果:高、中剂量组的胸腺指数和脾脏指数与荷瘤对照组比较变化不明显(P 0. 05),且低剂量组的胸腺指数明显升高(P 0. 05),顺铂组的胸腺指数(P 0. 01)和脾脏指数(P 0. 05)均明显下降;培元固本方组的肝肾功能均正常,顺铂组肝肾功能均不正常,2组患者比较,差异有统计学意义(P 0. 01);高、中剂量组的抑瘤率分别为50%和42%,与荷瘤对照组比较瘤重减轻(P 0. 05),皮下瘤体积缩小(P 0. 05),顺铂组的抑瘤率为73%,与荷瘤对照组和培元固本方组比较,差异有统计学意义(P 0. 05);高、中、低剂量组的生命延长率分别为:47%、55. 3%和45%,生存期与荷瘤对照组比较明显延长。结论:培元固本方安全无肝肾毒性,且高、中剂量的培元固本方还具有抑制肿瘤生长、提高免疫能力和延长生存期的作用。     

扶正解毒方选择性抑制肿瘤血管生成及调控VEGF/VEGFR-2信号通路的实验研究

目的:探讨扶正解毒方选择性抑制肿瘤血管生成及其相关作用机制。方法:以肿瘤血管内皮细胞模型、正常血管内皮细胞及Lewis肺癌荷瘤小鼠为研究对象,随机分为生理盐水组、贝伐单抗组、扶正解毒组及其拆方扶正、解毒药物组,采用MTT法观察扶正解毒方药、贝伐单抗对肿瘤血管内皮细胞与正常血管内皮细胞增殖的影响;采用免疫组化法观察药物对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤组织VEGF表达的影响;采用Western Blotting法观察药物对血管内皮细胞VEGFR-2(KDR)表达的影响。结果:扶正解毒方能够抑制肿瘤血管内皮细胞增殖(P0.05),而对正常血管内皮细胞增殖没有明显影响(P0.05),贝伐单抗对肿瘤血管内皮细胞及正常血管内皮细胞增殖均有抑制作用(P0.01),扶正解毒组与贝伐单抗组比较有明显差异(P0.05);扶正解毒方能降低瘤组织VEGF表达及肿瘤血管内皮细胞VEGFR-2表达(P0.05),扶正解毒方组VEGFR-2表达水平与正常血管内皮细胞相近。结论:扶正解毒方能够选择性抑制肿瘤血管生成,其作用机制与调控VEGF/VEGFR-2信号传导有关。     

蛇葡萄素钠体外协同卡铂抗小鼠肺癌Lewis细胞的作用

目的:研究蛇葡萄素钠单用及与卡铂联合用药对小鼠肺癌Lewis细胞的体外抗肿瘤作用,初步探讨蛇葡萄素钠抑瘤作用机制。方法:应用MTT比色法测定蛇葡萄素钠单用及与卡铂联合用药对小鼠肺癌Lewis细胞增殖的抑制作用;使用流式细胞仪检测蛇葡萄素钠单用及与卡铂合用诱导细胞凋亡作用。结果:MTT实验结果表明,蛇葡萄素钠单用在12.5、25、50、100μg/ml浓度范围内对小鼠肺癌Lewis细胞的增殖具有浓度依赖性的抑制作用;6.25~50μg/ml的蛇葡萄素钠与卡铂3.12~25μg/ml联合用药对卡铂抑制Lewis细胞的增殖作用具有协同效应;流式细胞仪结果表明,蛇葡萄素钠25、50、100μg/ml与卡铂25μg/ml联合应用时,凋亡率显著增高。结论:蛇葡萄素钠单用在一定的浓度范围内对Lewis细胞增殖具有浓度依赖性抑制作用,蛇葡萄素钠与卡铂合用可以增强卡铂的活性,有协同抑制作用,蛇葡萄素钠可能是通过诱导凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

丹参水提液对肺癌A549细胞增殖的抑制作用

目的:探讨不同浓度的丹参水提液对体外培养的人肺癌细胞系A549细胞增殖及凋亡的影响。方法:不同浓度的丹参水提液作用于人肺癌细胞A549细胞株24,48,72h后,MTT法观察药物对肺癌A549细胞生长的抑制效应;作用于细胞48h后倒置显微镜观察细胞形态学的改变;应用AO/EB荧光染色法观察不同浓度丹参水提液作用细胞48h后对细胞凋亡的影响;AnnexinV/PI双染流式细胞仪检测经药物作用24h后A549细胞凋亡情况。结果:丹参水提液可剂量依赖性地抑制A549细胞的增殖,抑制增殖作用以48h效果最佳;通过倒置显微镜可观察到细胞的形态学改变;细胞荧光染色出现了明显的凋亡细胞,表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂等凋亡特征性的形态学改变;流式细胞仪检测结果显示丹参水提液可诱导细胞凋亡。结论:丹参水提液可对人肺癌细胞系A549细胞具有显著的体外增殖抑制作用,其主要作用可能与诱导细胞凋亡有关。     

中药复方对小鼠肝癌皮下移植瘤细胞凋亡和免疫功能的影响

目的研究复方中药解毒消u饮和扶正抑瘤方对小鼠肝癌皮下移植瘤细胞凋亡和免疫功能的影响。方法将30只雄性ICR小鼠随机分为3组,即种瘤并灌胃解毒消瘢饮和扶正抑瘤方组（中药组）,种瘤并灌胃生理盐水组（模型组）,不接种移植瘤组（空白组）,分段给药4周后流式细胞仪测定细胞免疫功能及肿瘤细胞早期凋亡和晚期坏死率。结果模型组CD3^＋、CD3^＋CD4^＋细胞较空白组显著下降（P〈0．05）,中药组CD3^＋、CD3^＋CD4^＋细胞较模型组显著增多（P〈0．05）,各组间CD8^＋、CD^4＋／CD8^无显著性差异（P〉0．05）。中药组肿瘤细胞早期凋亡和晚期坏死率较模型组显著升高（P〈0．01）。结论解毒消瘕饮和扶正抑瘤方的联合用药能提高移植瘤小鼠细胞免疫功能,诱导移植瘤细胞凋亡。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌细胞H22凋亡的影响

目的:研究中药复方扶正抑瘤颗粒药物血清对小鼠肝癌H22细胞凋亡的影响.方法:扶正抑瘤颗粒含药血清温育体外培养的小鼠肝癌H22细胞,利用光镜、电镜、流式细胞仪、原位末端标记(TUNEL)等方法观察其诱导小鼠肝癌H22细胞的凋亡作用.结果:扶正抑瘤颗粒含药血清可明显诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡,随着培养时间的延长和用药剂量的增加,细胞凋亡率随之增加,与空白对照组比较P＜0.01或0.05.结论:扶正抑瘤颗粒药物血清可诱导肝癌H22细胞凋亡.     

消岩汤通过WNT通路抑制肺腺癌A549细胞增殖、促进细胞凋亡的机制研究

[目的] 探讨扶正祛瘀解毒法经典用药消岩汤抑制人肺腺癌A549细胞增殖、促进细胞凋亡的可能机制。[方法] 体外培养A549细胞,乳酸脱氢酶（LDH）、CCK8、流式细胞术检测对照组、消岩汤组、消岩汤加WNT通路激动剂组、WNT通路抑制剂XAV939组、单独WNT通路激动剂组细胞毒性、存活率和凋亡率。通过聚合酶链式反应（RT-PCR）测定对照组、消岩汤组和WNT通路抑制剂XAV939组中WNT通路相关基因β-catenin、c-myc,凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3表达情况;通过荧光素酶报告基因检测反应WNT通路活性。[结果] 消岩汤可以抑制A549细胞的增殖,促进细胞凋亡,而消岩汤加WNT通路激动剂组可以减弱以上作用;同时消岩汤可以显著降低A549细胞中β-catenin、c-myc的表达水平,抑制WNT通路活性,并通过降低Bcl-2表达、增强Caspase-3表达来促进了肿瘤细胞凋亡。[结论] 扶正祛瘀解毒法消岩汤可以抑制A549细胞的增殖、促进凋亡,其作用机制可能是抑制WNT通路活性。