益气养阴方对白血病细胞衰老和细胞周期的影响

目的观察益气养阴方对急性白血病细胞HL-60衰老和细胞周期的影响。方法制备益气养阴方含药血清,设对照组、低、中、高剂量含药血清组细胞,利用SA-B-Gal染色法和流式细胞仪分别检测细胞衰老和细胞周期变化。结果对照组、低剂量组、中剂量组与高剂量组的细胞染色阳性率分别为(3.0±0.75)%、(10.8±1.8)%、(26.7±2.9)%和(43.5±3.1)%,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05);G_2-M期细胞分别占细胞总数的(6.6±0.1)%、(8.1±0.3)%、(11.3±0.6)%、(14.7±0.4)%,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论益气养阴方可诱导急性白血病细胞HL-60衰老和使细胞阻滞在G2-M期。     

六神丸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:从细胞凋亡角度探讨六神丸治疗白血病的机理,为临床应用提供依据。方法:分别制备六神丸乙醇提取剂和六神丸含药血清,用MTT法检测六神丸对HL-60细胞增殖的抑制作用,吉姆萨染色观察细胞凋亡的形态学变化,原位末端标记(POD)法检测细胞凋亡现象。结果:六神丸乙醇提取剂对HL-60细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈现浓度依赖关系;中剂量组所得六神丸含药血清对HL-60细胞增殖的抑制作用优于低剂量组和高剂量组。吉姆萨染色显示六神丸乙醇提取剂和六神丸含药血清处理过的HL-60细胞均出现典型的凋亡形态。原位末端标记表明,六神丸乙醇提取剂诱导HL-60细胞凋亡在一定范围内呈现时间-浓度依赖关系;六神丸含药血清诱导HL-60细胞凋亡作用优于As_2O_3血清组和空白血清组(P<0.01)。结论:六神丸体外诱导HL-60细胞凋亡可能是六神丸治疗白血病的作用机制之一。     

益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡干预作用的初步研究

目的:探讨益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡作用的影响。方法:采用血清药理学方法制备益气养阴解毒方含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562/A02白血病细胞,采用MTT比色法观察益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖的影响。应用流式细胞术检测益气养阴解毒含药血清诱导K562/A02细胞凋亡的影响。结果:不同浓度益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。高、中、低剂量的益气养阴解毒方含药血清可诱导K562/A02细胞的凋亡,其凋亡作用以中、高剂量中药血清组最强。结论:益气养阴解毒方含药血清具有抑制K562/A02白血病细胞增殖作用,可诱导K562/A02白血病细胞明显凋亡,其作用机理可能与其直接细胞毒作用有关。     

益气养阴法方药促进KG1a进入细胞周期而增强DNR敏感性的研究

目的:探讨益气养阴法方药对白血病干细胞(Leukemia Stem Cells,LSC)KG1a细胞周期及其增殖的影响。方法:WST-8法检测益气养阴方含药血清对KG1a体外增殖的影响;WST-8法检测经益气养阴方含药血清联合柔红霉素(DNR)对的KG1a细胞体外增殖的影响;流式细胞术分析益气养阴方含药血清对KG1a细胞周期G0/G1期、S期、G2M期的影响。结果:益气养阴方含药血清对KG1a细胞体外增殖抑制作用不明显,呈一定时间及剂量依赖性,但各浓度相比抑制率无明显差异;含药兔血清20μL、40μL浓度组联合DNR对KG1a细胞有明显的抑制作用,且随浓度的增加和作用时间的延长而增强,且40μL浓度组含药兔血清联合DNR组48 h(72.5%)后抑制率显著高于DNR组(P<0.01);益气养阴方含药血清可促使KG1a细胞由G0期进入细胞周期,并呈剂量依赖性;结论:益气养阴含药血清可能通过促进KG1a细胞由G0期进入细胞周期,从而增强DNR的体外杀伤作用,可显著降低白血病细胞的耐药性。     

六神丸含药血清诱导HL-60细胞凋亡实验研究

目的:观察六神丸含药血清诱导白血病细胞凋亡,探讨六神丸治疗急性白血病的部分机制。方法:制备含药血清,用MTT法、胎盘蓝染色法观察六神丸对HL-60细胞的增殖抑制作用。用吉姆萨染色法观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪、原位末端标记法(TUNEL)定量检测细胞凋亡程度。结果:六神丸含药血清对白血病细胞有明显的抑制,且随药物血清浓度和培养时间的延长而增加,吉姆萨染色、流式细胞仪检测、原位末端标记检测均证明六神丸含药血清能诱导HL-60白血病细胞凋亡。结论:六神丸含药血清能诱导细胞凋亡,这可能是六神丸治疗白血病的机制之一。     

髓清丸对HEL细胞系作用的血清药理学研究

目的 :研究中药复方髓清丸对白血病细胞的作用。方法 :采用血清药理学方法体外培养观察人红白血病细胞系 (HEL)的增殖、凋亡、细胞周期、细胞形态等细胞学指标。结果 :活细胞百分率各含药血清组均较对照组低 ,MTT法测定髓清丸中剂量组和高剂量组OD值明显低于对照组 (p<0 0 1) ,中剂量组和高剂量组细胞毒活性均大于 2 0 %,高剂量含药血清组G1期DNA含量明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ,中剂量组凋亡细胞百分率较高 (P <0 0 5 )。结论 :髓清丸能抑制HEL细胞的增殖 ,并有一定的诱导HEL细胞分化、凋亡的作用。     

解毒化瘀含药血清抗白血病细胞及白血病多药耐药细胞的体外实验研究

目的:以解毒化瘀法立意,选取解毒化瘀中药复方,拟通过体外细胞培养证实其是否存在抗白血病细胞及多药耐药白血病细胞的作用。方法:采用MTT比色法,选择白血病细胞K562、HL-60及阿霉素诱导的白血病多药耐药细胞株K562/A、HL-60/A为靶细胞,观察不同浓度解毒化瘀含药兔血清对其细胞毒作用。结果:解毒化瘀含药兔血清对K562、HL-60及K562/A、HL-60/A均有明显的抑制作用,且对其细胞毒作用呈剂量依赖性。结论:解毒化瘀中药在抑制白血病细胞生长及白血病多药耐药细胞生长方面具有深入研究的价值。     

莪芪抗瘤方剂对白血病HL-60细胞的凋亡作用及对细胞内Ca2+水平的影响

目的:研究中药复方莪芪抗瘤方剂在体外对白血病HL-60细胞凋亡作用,并探讨凋亡发生与细胞内Ca2 浓度变化的关系。方法:通过血清药理学方法,选择10%浓度的含药血清与白血病HL-60细胞共同培育24,48,72,96 h后,应用荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰(亚二倍体峰),用Fura-2/AM荧光负载方法测定细胞内Ca2 浓度的变化。结果:10%浓度的含药血清处理组,细胞体积缩小,细胞核固缩,膜起泡,核断裂及形成凋亡小体等,以72 h最为明显;可见DNA含量低于G1期的凋亡细胞群,其凋亡百分率随时间的递增而增加;10%浓度的含药血清处理组的细胞内Ca2 浓度也明显高于对照组(P<0.01)。结论:莪芪抗瘤方剂含药血清诱导白血病HL-60细胞发生凋亡的作用可能与细胞内Ca2 水平上调有关。     

莪芪抗瘤方剂诱导白血病HL-60细胞凋亡的血清药理学研究

目的研究中药复方莪芪抗瘤方剂在体外对白血病HL-60细胞凋亡的作用,并探讨凋亡发生与细胞内Ca2 、Caspase-3、Bcl-2的关系。方法通过血清药理学方法,选择10%浓度的含药血清与白血病HL-60细胞共同培育24、48、72、96h后,应用荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰(亚二倍体峰),用Fura-2荧光负载方法测定细胞内Ca2 浓度的变化。比色法检测凋亡相关基因Caspase-3活性变化。亲和免疫组化LSAB法检测HL-60细胞Bcl-2基因表达。结果10%浓度的含药血清处理组细胞体积缩小,细胞核固缩,膜起泡,核断裂及形成凋亡小体等,以72h最为明显;可见DNA含量低于G1期的凋亡细胞群,这群细胞的凋亡百分率随时间的递增而增加。10%浓度的含药血清处理组的细胞内Ca2 浓度也明显高于对照组(P<0.01),Caspase-3浓度明显高于对照组(P<0.01),Bcl-2基因表达明显低于对照组(P<0.05)。结论莪芪抗瘤方剂含药血清诱导白血病HL-60细胞发生凋亡,这种变化可能与细胞内Ca2 、Caspase-3水平上调及Bcl-2表达下调有关。     

莪芪抗瘤方剂对白血病HL-60细胞凋亡的作用及机理研究

目的：研究中药复方莪芪抗瘤方剂在体外对白血病HL-60细胞凋亡影响，并探讨凋亡发生的可能机制。方法：通过血清药理学方法，选择10％浓度的含药血清与白血病HL-60细胞共同培育24、48、72、96h后，应用荧光显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测凋亡峰（亚二倍体峰），用Fura-2荧光负载方法测定细胞内Ca^2＋浓度的变化；比色法检测凋亡相关基因Caspase-3活性变化。结果：10％浓度的含药血清处理组细胞体积缩小，细胞核固缩，膜起泡，核断裂及形成凋亡小体等，以72h最为明显；可见DNA含量低于G1期的凋亡细胞群，这群细胞的凋亡百分率随时间的递增而增加。10％浓度的含药血清处理组的细胞内Ca^2＋浓度也明显高于对照组（P〈0．01），Caspase-3基因活性明显高于对照组相（P〈0．01．P〈0．05）。结论：莪芪抗瘤方剂含药血清诱导白血病HL-60细胞发生凋亡，这种变化可能与细胞内Ca^2＋水平上调，Caspase-3活性增强有关。     

定清片对人急性髓系白血病HL-60细胞侵袭力的影响

目的:探讨我院自制中药制剂定清片对急性髓系白血病HL-60细胞侵袭力的影响。方法:制备定清片含药血清,并以不同浓度含药血清对HL-60细胞进行体外干预,Transwell实验检测定清片含药血清对细胞侵袭力的影响,应用免疫印迹法(Western Bloting,简称WB)检测MMP-2、MMP-9基因的蛋白表达量。结果:与空白对照组比较,不同浓度定清片含药血清(5%、10%、20%)作用于HL-60细胞后,不仅对细胞的侵袭能力具有明显抑制作用(P0.05),还能下调MMP-2、MMP-9基因蛋白表达水平(P0.05),且随着药物浓度的增加,其抑制力及下调蛋白表达水平作用越强。结论:定清片可抑制HL-60细胞的浸润转移能力,其作用机制可能与抑制细胞侵袭能力及下调MMP-2、MMP-9蛋白表达相关。     

益气养阴解毒方对5-Fu诱导HepG2细胞凋亡的影响

目的:观察益气养阴解毒方的含药血清与化疗药5-FU体外共同作用于肝癌HepG2细胞后,对细胞增殖和凋亡的影响。方法:备大鼠的益气养阴解毒方的含药血清,分为中药含药血清组、化疗药物5-Fu组和中药含药血清+5-Fu组,并设不含药的空白大鼠血清为对照组,分别作用于HepG2细胞。结果:1益气养阴解毒复方中药含药血清作用于HepG2细胞24h、48h、72h后,对细胞生长未出现明显的抑制作用(与对照组相比,P>0.05);5-FU组及中药含药血清+5-FU组与HepG2细胞共同培养48h、72h后,HepG2细胞的生长明显受到抑制(与对照组相比,P<0.05);中药含药血清与5-FU共同作用于HepG2细胞抑制作用更明显(与5-FU组相比,P<0.05)。2中药含药血清组作用24h、48h、72h后流式细胞术检测到HepG2细胞凋亡指数与空白对照组无明显差异(P>0.05);5-FU组与HepG2细胞共同培养48h、72h后检测到凋亡指数增多(与对照组相比,P<0.05;P<0.01);中药含药血清+5-FU组48h、72h细胞凋亡指数明显高于5-FU组(P<0.05)。结论:益气养阴解毒方含药血清可增强5-FU对HepG2细胞的凋亡诱导作用,这可能是本方与化疗合用增效的重要机制之一。     

益气养阴方对顺铂诱导HepG2细胞Survivin表达的影响

目的 观察益气养阴方的含药血清与低浓度的顺铂(DDP)体外共同作用于肝癌HepG2细胞后,对HepG2细胞Survivin表达的影响,从而探讨本益气养阴方与化疗合用治疗肝癌的协同增效作用的相关机制.方法 运用血清药理学方法制备大鼠的益气养阴方的含药血清,分为中药含药血清组、化疗药物DDP组和中药含药血清+DDP组,并设不含药的空白大鼠血清为对照组,分别作用于HepG2细胞,应用SP免疫细胞化学染色法及western-blot检测各组细胞24h、48h、72h后Survivin蛋白的表达变化.结果 各组作用24,48,72 h后,中药含药血清组HepG2细胞Survivin蛋白的表达量无明显变化(与对照组相比,P>0.05);DDP组HepG2细胞Survivin蛋白的表达量逐渐升高(与对照组相比,P<0.05),且具有时间依赖性;而中药含药血清+DDP组细胞Survivin蛋白的升高水平与DDP组相比明显降低(P<0.05).结论 益气养阴方含药血清可能通过抑制DDP诱导HepG2细胞中凋亡抑制蛋白Survivin的表达而降低HepG2细胞对化疗的抵抗,这可能是本方与化疗合用增效的重要机制之一.     

莪芪抗瘤方剂（含药血清）诱导白血病HL-60细胞凋亡的实验研究

目的探讨中药复方莪芪抗瘤方剂（舍药血清）在体外对白血病HL-60细胞凋亡影响。方法运用中药血清药理学方法制备莪芪抗瘤方剂血清，四氮唑蓝比色法（MTT法）观察对莪芪抗瘤方剂（含药血清）对HL-60细胞的抑制率；应用形态学，流式细胞术，DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生。 结果莪芪抗瘤方荆（含药血清）对HL-60细胞生长有抑制作用，这种作用呈时间依赖性，诱导人类早幼粒白血病细胞株HL-60凋亡。结论中药复方莪芪抗瘤方剂可诱导白血病HL-60细胞发生凋亡。     

壮药扶正方对TAMs与肿瘤细胞共培养体系A549细胞生物学行为的影响

目的：探讨壮药扶正方含药血清对肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)与肺癌A549细胞共培养体系肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为影响及可能的作用机制。方法：采用氟波酯(PMA)联合白细胞介素-4、白细胞介素-13诱导人急性白血病单核细胞株(THP-1)建立TAMs体外模型,实时定量PCR及酶联免疫吸附试验法分析含药血清(低、中、高剂量组)及药物处理后24、48、72 h对TAMs表型调节;采用共培养体系,以肺癌A549细胞为研究对象,分别采用MTT法、实时细胞分析技术(RTCA)、Transwell法检测不同条件下A549细胞增殖、迁移及侵袭情况。结果：壮药扶正方含药血清能显著上调TMAs中M1型标志物白细胞介素-12、诱导型一氧化氮合酶表达水平,下调M2型标志物白细胞介素-10、CD206表达水平;与空白对照组比较,共培养组A549细胞增殖明显增加,细胞迁移及侵袭能力均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与共培养组比较,壮药扶正方含药血清低、中、高剂量组A549细胞增殖、迁移和侵袭作用受抑制,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论：壮药扶正方含药血清在共培养体系中...     

回药臭壳虫含药血清对人肺腺癌A549细胞生长增殖的影响

目的:探讨回药臭壳虫(CKC)含药血清对人肺鳞癌A549细胞生长的抑制作用及对细胞形态的影响。方法:将40只雄性SD大鼠按体重随机分为生理盐水对照组(NS)、回药臭壳虫低剂量组(CKCL)、回药臭壳虫中剂量组(CKCM)、回药臭壳虫高剂量组(CKCH)各10只,分别给予相应的CKCL、CKCM、CLCH浓缩水煎剂灌胃,NS组给予等量生理盐水灌胃,连续5天。采用血清药理学方法,制备含药血清;体外培养人肺腺癌A549细胞,将细胞分为实验组与对照组,实验组分别给予10%、20%浓度的相应组大鼠含药血清,对照组给予相同浓度对照组大鼠血清,培养24h、48h、72h后观察细胞形态变化,采用MTT法检测不同浓度含药血清对A549细胞的生长抑制率。结果:光镜下观察发现,各浓度臭壳虫含药血清组细胞形态不规则,胞膜出现不同程度的回缩,胞核固缩,细胞间距增大,其中以20%浓度臭壳虫含药血清高剂量组作用72h最为明显。MTT法检测细胞生长抑制率发现,各实验组不同浓度抑制率均高于对照组(P0.05);回药臭壳虫高剂量组72h抑制率高于低剂量组(P0.05);回药臭壳虫各剂量组72h抑制率高于24h抑制率(P0.05)。结论:回药臭壳虫含药血清可抑制A549细胞的生长增殖。     

益气养阴解毒方联合5-FU对HepG2细胞Survivin和Caspase-3的影响

目的:现察益气养阴解毒方的含药血清与化疗药5-FU体外共同作用于肝癌HepG2细胞后,对细胞Survlvin的表达和Caspase-3活性的影响,从而探讨本益气养阴解毒方增强5-FU诱导HepG<,2>细胞凋亡的相关机制.方法:运用血清药理学方法制备大鼠的益气养阴解毒方的含药血清,分为中药含药血清组、化疗药物5-FU组和中药含药血清+5-FU组,并设不含药的空白大鼠血清为对照组,分别作用于HepG<,2>细胞,应用SP免疫细胞化学染色法及 western-blot检测各组细胞24h、48h、72h后Survivin蛋白的表达变化;应用DEVD-DNA降解法检测各组细胞2.4h、48h、72h后Cas-pase-3活性变化.鲒果:(1)各组作用24h、48h、72h后,中药含药血清组HepG<,2>细胞Survivin蛋白的表达量无明显变化(与对照组相比,P>0.05);5-FU组HepG<,2>细胞Survivin蛋白的表达量逐渐升高(与对照组相比,P<0.05),且具有时间依赖性;而中药含药血清+5-FU组细胞Survivin蛋白的升高水平与5-FU组相比明显降低(P<0.05).(2)作用24h、48h、72h后含药血清组HepG<,2>细胞Caspase-3的活性无明显变化(与对照组相比,P>0.05);作用48h、72h后,5-FU组HepG<,2>细胞Caspase-3的活性逐渐升高(与对照组相比,P<0.05);而中药含药血清+5-FU组细胞Caspase-3的活性升高更显著(与5-FU组相比,P<0.05).结论:益气养阴解毒方含药血清可能是通过降低5-FU诱导的凋亡抑制蛋白Survivin的表达,减弱Survivin对Caspase-3活性的抑制,从而促进细胞凋亡的,这可能是本方与化疗合用增效的重要机制之一.     

升麻鳖甲汤加减方对人急性髓系白血病细胞诱导脐静脉内皮细胞迁移、趋化、管腔形成的影响

目的研究升麻鳖甲汤加减方在体外对人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞株HL-60以及人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖的影响;随后以人急性髓系白血病细胞HL-60的培养上清对人脐静脉内皮细胞HUVEC进行诱导培养,并加入不同浓度的升麻鳖甲汤加减方进行干预,检测人脐静脉内皮细胞HUVEC迁移、趋化、管腔形成能力的变化,从而揭示升麻鳖甲汤加减方对人急性髓系白血病细胞诱导的脐静脉内皮细胞迁移、趋化、管腔形成的影响。方法体外培养HL-60以及HUVEC细胞,待细胞进入对数生长期后进行相应实验;首先将不同浓度升麻鳖甲汤加减方在体外分别用于干预人急性髓系白血病细胞HL-60和人脐静脉内皮细胞HUVEC,在干预时间达48 h后,采用MTT法分别检测不同浓度升麻鳖甲汤加减方对HL-60以及HUVEC细胞增殖能力的影响;根据MTT实验的数据提示,选择适宜终浓度的升麻鳖甲汤加减方与HL-60细胞培养上清进行混合制备含药条件培养基用于干预HUVEC细胞,并分别运用划痕迁移、Transwell小室趋化以及Matrigel胶小管形成等实验方法观察HUVEC细胞经干预后的迁移、趋化效应以及成管能力的变化。结果不同浓度的升麻鳖甲汤加减方干预48 h后能够分别显著抑制HL-60以及HUVEC细胞的增殖(P 0. 01),并且这种增殖抑制效应呈现出明显的时间-浓度依赖性,并且在HL-60和HUVEC两种细胞之间存在差异性细胞毒作用,即对HUVEC细胞的增殖抑制显著高于HL-60细胞(P 0. 01);不同终浓度的升麻鳖甲汤加减方对由HL-60细胞上清诱导培养的HUVEC细胞的迁移运动能力均有不同程度的抑制作用(P 0. 05),并且细胞迁移率随着药物浓度的增加而下降;细胞Transwell小室趋化实验结果显示,不同终浓度的升麻鳖甲汤加减方可显著降低HL-60细胞上清诱导培养的HUVEC细胞的趋化性(P 0. 05); HUVEC细胞小管形成连接点、分支数量等均明显低于阳性对照组(P 0. 01),小管形成抑制率随着药物浓度的增加而上升,且HUVEC细胞生成小管的连接点及分支数量与药物浓度呈负相关(P 0. 01)。结论升麻鳖甲汤加减方可抑制HL-60及HUVEC细胞的增殖,并存在差异细胞毒作用,提示该复方可能具有抑制急性髓系白血病肿瘤血管形成的效应,而这种效应的产生可能与其抑制肿瘤血管内皮细胞的迁移、趋化及成管能力等相关。     

回药爱康方含药血清对肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:探讨回药爱康方(HAKF)含药血清对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、爱康方低、中、高剂量组、环磷酰胺(CTX)组、回药爱康方低、中、高剂量分别联合环磷酰胺化疗组,药物低、中、高剂量15.0,30.0,45.0 g·kg-1,连续灌胃15 d,麻醉后心脏取血,制备含药血清。培养细胞,将细胞分为实验组和对照组,实验组分别给予含5%,10%,20%3个体积分数的相应各组含药血清,对照组给予等体积分数的对照组大鼠血清,培养24,48,72 h后采用Annexin-VFITC/PI双染法测定各组含药血清对A549细胞凋亡的影响。结果:与对照组比较,各时段5%,10%,20%浓度含药血清可提高A549的凋亡率(P<0.05),72 h时,各浓度回药爱康方低、中、高剂量含药血清对细胞的凋亡率的提高程度小于CTX(P<0.05);72 h 10%体积分数回药爱康方低剂量联合环磷酰胺血清提高细胞的凋亡率大于单纯CTX(P<0.05);各浓度爱康方中剂量和高剂量血清组,72 h与24 h比较,两组A549细胞的凋亡率均升高(P<0.05);随着血清体积分数的提高,各组细胞的凋亡率和坏死率呈增大趋势。结论:回药爱康方可诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡,且有一定的剂量和时间依赖性。