补元汤干预COPD大鼠Th17细胞分化及其相关炎症因子分泌的影响

目的 观察补元汤对COPD模型大鼠T细胞辅助细胞17(Th17)及相关细胞因子之间的影响。方法 将36只SD大鼠随机分为对照组,模型组,补元汤低、中、高剂量组,氨茶碱组,每组6只。使用烟熏联合气道内滴注脂多糖(LPS)建立COPD大鼠模型,造模4周后开始药物干预,连续给药4周。分别于末次烟熏及末次给药后检测大鼠肺功能：TV、PEF、f、RT。HE染色观察大鼠肺组织病理改变;实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测大鼠肺组织RORγt、IL-17A、IL-21的mRNA及蛋白表达;免疫荧光双标记法检测肺组织RORγt/IL-17A、STAT3/IL-17A及IL-21/IL-17A共定位表达情况,流式细胞术检测肺组织中CD3⁺ CD4⁺ IL17A⁺ Th17细胞占CD4⁺ T细胞比例。结果 与模型组比较,补元汤各剂量组与氨茶碱组大鼠TV、PEF、f、RT指标均明显改善,肺组织病理损伤显著减轻,RORγt、IL-17A、IL-21的mRNA及蛋白含量明显下降,RORγt/IL-17...     

壮医药线点灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织Th17细胞及IL-17F的影响

目的:观察壮医药线点灸干预溃疡性结肠炎(UC)大鼠的疗效,并探讨其对辅助性T细胞17(Th17)/白细胞介素17F(IL-17F)轴的影响。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物组、壮医药线点灸组,每组10只。采用4%葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮水法制备UC大鼠模型。阳性药物组予柳氮磺胺嘧啶(SASP)灌胃,1 mL/次,2次/日,连续干预14 d;壮医药线点灸组予壮医药线点灸"天枢"和"气海"穴,1壮/穴,1次/日,双侧腧穴交替灸疗,连续干预14 d。观察记录大鼠疾病活动指数(DAI)评分;HE染色法观察大鼠结肠组织病理学变化;流式细胞术检测大鼠结肠组织中Th17细胞百分比;酶联免疫吸附法检测大鼠结肠组织中维甲酸相关孤儿核受体γt(RORγt)和IL-17F含量;荧光定量PCR法检测大鼠结肠组织RORγt和IL-17F mRNA相对表达量。结果:模型组大鼠出现粪便不成形、脓性黏液血便;镜下结肠黏膜脱落,杯状细胞消失,大量炎性细胞浸润,成纤维细胞增生;与空白组比较,模型组大鼠DAI评分、结肠组织Th17细胞百分比、结肠组织RORγt和IL-17F含量及mRNA表达量均显著升高(...     

针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠Th17/Treg细胞及其细胞因子表达影响的研究

目的:观察针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠的影响,并探讨针灸对调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞17 (Th17)分化及其细胞因子表达的调控作用。方法:将MRL/lpr狼疮性肾炎模型小鼠随机分为针灸组、地塞米松组、模型组,每组10只。另取10只C57BL/6小鼠作为正常组。采用HE染色法检测小鼠肾脏病理改变;PI单染流式细胞术检测各组小鼠肾脏组织中Th17/Treg比例;采用q RT-PCR和ELISA法检测肾脏中叉头样转录因子3 (Foxp3)、维A酸相关孤儿受体-γt (RORγt)及白细胞介素-17 (IL-17)的水平。结果:与正常组比较,模型组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及RORγt、IL-17蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),Foxp3蛋白及mRNA表达水平均下降(P<0.05)。与模型组比较,地塞米松组、针灸组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及肾脏组织RORγt、IL-17蛋白及m RNA表达水平均显著降低(P<0.05);Foxp3蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。结论:针灸能显著减少狼疮性肾炎小鼠肾脏RORγt及IL-17表达,增加Foxp3水平,调控Th17/Treg比例,改善肾脏病理改变,从而对MRL/lpr狼疮肾炎小鼠肾脏起到保护作用。     

中药苦参水提物对慢性湿疹模型豚鼠炎症反应的影响

目的探讨中药苦参水提物对豚鼠慢性湿疹模型治疗效果。方法豚鼠24只,采用二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNFB)建立皮肤湿疹模型,随机分为3组,分别用生理盐水(模型对照组)、复方醋酸地塞米松软膏(阳性对照组)和苦参水提取物(药物治疗组),对湿疹部位皮肤连续涂抹给药14 d,以左、右耳质量之差来评价皮肤炎症肿胀度;流式细胞术检测外周血辅助性T(T helper,Th)细胞Th17(CD4+IL-17A~+T)的比例;qPCR检测耳片组织中维甲酸相关的孤儿受体γ(retinoic acid-related orphan receptorγ,RORγt)和IL-17AmRNA的相对表达量;Western Blot检测RORγt和IL-17A蛋白的表达;ELISA检测血清中促炎细胞因子白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及抑炎细胞因子IL-10。结果药物治疗组与模型对照组相比豚鼠皮肤肿胀度明显减轻,差异具有统计学意义(P 0.05);与模型对照组相比,药物治疗组不仅降低外周血炎症细胞Th17所占比例,并且能显著降低转录因子RORγt)和IL-17AmRNA相对表达量(P 0.05,P 0.01);同时,RORγt和IL-17A蛋白也均明显下降(P 0.05)。血清中细胞促炎细胞因子IL-6和TNF-α明显降低(P 0.05),而抑炎细胞因子IL-10则显著上升(P 0.05)。结论苦参水提物能够调节Th17细胞的分化从而抑制炎症反应,有效治疗湿疹。     

四磨汤口服液治疗便秘型肠易激综合征的临床疗效观察

目的探讨中药苦参水提物对豚鼠慢性湿疹模型治疗效果。方法豚鼠24只,采用二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNFB)建立皮肤湿疹模型,随机分为3组,分别用生理盐水(模型对照组)、复方醋酸地塞米松软膏(阳性对照组)和苦参水提取物(药物治疗组),对湿疹部位皮肤连续涂抹给药14 d,以左、右耳质量之差来评价皮肤炎症肿胀度;流式细胞术检测外周血辅助性T(T helper,Th)细胞Th17(CD4+IL-17A~+T)的比例;qPCR检测耳片组织中维甲酸相关的孤儿受体γ(retinoic acid-related orphan receptorγ,RORγt)和IL-17AmRNA的相对表达量;Western Blot检测RORγt和IL-17A蛋白的表达;ELISA检测血清中促炎细胞因子白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及抑炎细胞因子IL-10。结果药物治疗组与模型对照组相比豚鼠皮肤肿胀度明显减轻,差异具有统计学意义(P 0.05);与模型对照组相比,药物治疗组不仅降低外周血炎症细胞Th17所占比例,并且能显著降低转录因子RORγt)和IL-17AmRNA相对表达量(P 0.05,P 0.01);同时,RORγt和IL-17A蛋白也均明显下降(P 0.05)。血清中细胞促炎细胞因子IL-6和TNF-α明显降低(P 0.05),而抑炎细胞因子IL-10则显著上升(P 0.05)。结论苦参水提物能够调节Th17细胞的分化从而抑制炎症反应,有效治疗湿疹。     

Th17细胞与肝脏疾病的相关性

Th17细胞与Th1细胞、Th2细胞分属不同的CD4^＋T细胞亚群。Th17细胞分化的关键因子有：白细胞介素6、转化生长因子β（TGF-β）、IL-23、干扰素γ、IL-4、转录因子（ROR-γt）等。Th17细胞能分泌IL-17、IL-6、IL-22等细胞因子,IL-17多通路影响肝细胞损伤,IL-22对肝脏损伤的保护作用,而中医药具有Th17细胞诱导作用。     

吴茱萸碱对结肠炎大鼠炎性树突状细胞的调控作用

目的探讨吴茱萸碱(Evodiamine,Evo)对溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠炎性树突状细胞(Inflammatory dendritic cells,infDCs)的调控作用。方法将SD大鼠随机分为6组,即正常组、模型组、Evo高剂量组(40 mg·kg^-1)、Evo中剂量组(20 mg·kg^-1)、Evo低剂量组(10 mg·kg^-1)及美沙拉嗪组(150 mg·kg^-1),每组8只。除正常组外其余各组采用三硝基苯磺酸(TNBS)-乙醇复合法进行造模。造模24 h后按照相应剂量灌胃给药,连续给药7 d。给药结束后,称定大鼠体质量,处死并分离结肠组织,测量长度,称定质量,计算结肠质量指数;采用HE染色进行结肠组织病理学观察;分离派氏淋巴结和肠系膜淋巴结,采用流式细胞术检测CD11c^+CD103^+E-cadherin+T细胞数量;ELISA法测定大鼠结肠组织匀浆中干扰素-γ(IFN-γ)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)及白细胞介素-2(IL-2)水平。结果与正常组比较,模型组大鼠的体质量及结肠长度均明显降低或缩短(P<0.01),结肠质量、结肠质量指数明显升高(P<0.05,P<0.01);结肠组织CD11c^+CD103^+E-cadherin+T细胞数量显著增加(P<0.01);IL-6、ICAM-1水平明显升高(P<0.05),IFN-γ水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组的结肠质量、结肠质量指数均明显降低(P<0.05),Evo高剂量组的大鼠体质量明显升高(P<0.05),Evo高、低剂量组的大鼠结肠长度明显增加(P<0.05);各给药组的大鼠结肠组织CD11c^+CD103^+E-cadherin+T细胞数量显著降低(P<0.05,P<0.01),IL-10水平明显升高(P<0.05,P<0.01),ICAM-1、IL-2明显降低(P<0.05,P<0.01);Evo高、中剂量组的IL-6明显降低(P<0.05,P<0.01);Evo中、低剂量组的IFN-γ水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论吴茱萸碱可能通过降低infDCs细胞数量,下调IL-2、ICAM-1、IL-6表达,上调IL-10、IFN-γ表达,从而发挥治疗UC的作用。     

PM2.5对哮喘大鼠IL-17/IL-23炎症介质的影响及人参皂苷Rg1干预研究

目的：基于气道IL-17/IL-23炎症介质轴,探讨人参皂苷Rg1对PM2.5哮喘大鼠肺损伤保护机制。方法：采集并分离交通相关大气细颗粒物PM2.5,利用卵白蛋白致敏和激发建立幼龄哮喘大鼠模型,再给予PM2.5气管滴注建立PM2.5哮喘肺损伤模型,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清和肺泡灌洗液IL-17a、IL-6、IL-23、TGF-β1含量,RT-PCR检测RORγt mRNA表达,并行肺组织病理和电镜分析。结果：成功建立PM2.5气管滴注哮喘大鼠模型;哮喘大鼠模型血清和肺泡灌洗液IL-17a、IL-6、IL-23、TGF-β1表达量增大（P<0.01）,肺组织RORγt mRNA表达量增加（P<0.01）;经PM2.5气管滴注后,模型组大鼠血清和肺泡灌洗液IL-17a、IL-6、IL-23、TGF-β1含量进一步增加,RORγt mRNA表达量进一步上升（P<0.01）;经皂苷Rg1干预后,呈现剂量依赖性下调血清和肺泡灌洗液IL-17a、IL-6、IL-23、TGF-β1水平,下调RORγt mRNA表达量。结论：人参皂苷Rg1呈剂量依赖性改善PM2.5致哮喘大鼠肺气道炎症反应、改善肺损伤。     

30例慢性再生障碍性贫血患者Th17细胞、IL-17、IL-23和RORγt表达的研究

目的研究Th17细胞、IL-17、IL-23和RORγt在慢性再生障碍性贫血(CAA)患者外周血中的表达和意义。方法应用流式细胞术(FCM)检测30例CAA患者及10例健康对照外周血Th17细胞表达比例,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IL-17mRNA、IL-23p19mRNA和RORγtmRNA的表达水平,ELISA法检测IL-17、IL-23的表达水平。结果 CAA患者Th17细胞、IL-17mRNA、IL-23p19mRNA、RORγtmRNA、IL-17、IL-23的表达均高于健康对照组。结论 Th17细胞、IL-17、IL-23和RORγt在CAA中异常表达,提示Th17细胞、IL-17、IL-23和RORγt在CAA发病中有一定作用。     

青黛通过影响GPR41/43信号通路调控溃疡性结肠炎大鼠Treg/Th17免疫平衡的机制研究

目的探讨青黛通过影响GPR41/43信号通路调控溃疡性结肠炎大鼠Treg/Th17免疫平衡的机制。方法将24只健康的SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组与青黛组。模型组和青黛组大鼠自由饮用4.5%DSS溶液以制备结肠炎模型,空白组自由饮用去离子水作为对照,同时青黛组大鼠给予青黛(600 mg/kg)灌胃,模型组、空白组大鼠给予去离子水处理,每天观察大鼠一般情况,记录体质量、粪便性状,检测粪便潜血,计算疾病活动指数,干预7 d,麻醉后处死大鼠,取血及结肠组织。RT-qPCR法检测结肠RORγt mRNA、Foxp3mRNA的表达;Western Blotting法检测结肠GPR41、GPR43、RORγt、Foxp3蛋白的含量,ELISA法检测血清IL-10、IL-17水平。结果与空白组相比,DSS诱导的结肠炎大鼠结肠GPR41、GPR43、FOXP3,血清IL-10的表达明显降低(P <0.05或P <0.01),结肠RORγt、血清IL-17表达明显升高(P <0.05或P <0.01);青黛干预后,大鼠结肠GPR41、GPR43、FOXP3、FOXP3 m RNA,血清IL-10的表达较模型组明显升高(P <0.05或P <0.01),结肠RORγt、RORγt mRNA、血清IL-17表达较模型组明显降低(P <0.05)。结论青黛能够上调GPR41、GPR43的表达,进而调节Treg/Th17免疫平衡治疗溃疡性结肠炎。     

助阳舒心方对抑郁大鼠脑组织IL-6、IL-17和RORγt表达的影响

目的:观察助阳舒心方对细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)和视网膜相关孤儿受体-γt(RORγt)的影响,探究其抗抑郁机制.方法:采用慢性不可预见性轻度应激(CUMS)结合孤养法制作抑郁大鼠模型,将30只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(盐酸氟西汀,2 mg/kg)和助阳舒心...     

慢性阻塞性肺疾病患者痰液及肺组织Th17和IL-17表达的研究

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者痰液及肺组织中Th17与IL-17的表达水平及其与COPD的关系。方法选取入院患者与健康体检者分为COPD急性加重期组、COPD稳定期组和健康对照组。采用高渗盐水雾化吸入诱导收集痰液,支气管镜活检留取标本。以ELISA方法测定痰液上清及组织匀浆中的IL-17浓度,Western blot测定活检组织人类Th17细胞的特异性转录因子——维甲酸相关孤独受体γt(RORγt),对活检组织匀浆RORγt蛋白含量与肺功能做直线相关分析。结果研究对象的肺组织病理学状态与实验分组高度吻合。诱导痰中IL-17浓度在健康对照组、稳定COPD组、急性加重COPD组依次为0.56(0.02～1.02)ng/L、0.74(0.44～1.78)ng/L、2.62(1.63～4.51)ng/L,活检匀浆中IL-17浓度分别为4.01(1.82～9.39)ng/g、6.26(3.89～13.81)ng/g、16.38(5.85～91.66)ng/g。Western blot支气管匀浆RORγt蛋白表达水平在健康对照组、稳定COPD组、急性加重期COPD组依次为0.301±0.083,0.575±0.126,0.914±0.133,3组之间两两比较有显著性差异。直线相关分析结果显示RORγt蛋白含量与FEV1占预计值百分比呈显著负相关(P<0.05)。结论 COPD患者肺组织炎细胞浸润明显,痰液与肺组织IL-17水平增高,肺组织RORγt表达增多。Th17、IL-17在COPD的发生和发展中有重要作用。     

Th17/Treg平衡在湿热型结肠炎大鼠中的变化及黄芩汤的调节作用

目的:观察湿热型结肠炎大鼠模型中Th17/Treg的平衡变化以及黄芩汤对Th17/Treg的调节作用,从免疫学的角度探讨其治疗湿热型结肠炎的机制。方法:应用高脂、高糖饲料联合人工气候箱法等复合因素造出大鼠湿热模型,再结合三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法建立湿热+TNBS结肠炎模型;将60只大鼠随机分为空白组、湿热+TNBS结肠炎模型组、黄芩汤组、美沙拉嗪组。对大鼠进行一般临床观察,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分析大鼠血清中白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)水平,用Western blot方法检测结肠组织中Treg转录因子FOXP3和Th17转录因子RORγt的表达水平。结果:黄芩汤免煎剂0.12g/100g能够有效的缓解湿热型结肠炎的炎症反应,与对照组比较,湿热+TNBS结肠炎大鼠模型中Th17/Treg表达失衡,Th17类细胞因子IL-17和IL-6和转录因子RORγt表达升高而Treg类细胞因子IL-10和TGF-β和转录因子FOXP3表达降低;与模型组相比,黄芩汤能够降低IL-17、IL-6和RORγt的水平而增强IL-10、TGF-β和FOXP3的表达。结论:Th17/Treg失衡可能与湿热型结肠炎的发生发展密切相关,黄芩汤能够有效的调节Th17/Treg的平衡关系,这可能是其治疗湿热型结肠炎的免疫机制之一。     

加味归脾合剂治疗慢性免疫性血小板减少症气虚证临床研究

目的:观察加味归脾合剂治疗慢性免疫性血小板减少症(ITP)的疗效,探讨中药复方制剂对ITP患者Treg/Th17免疫紊乱调控的有效干预机制。方法:将符合标准的60例慢性ITP患者随机分为中药组和激素组各30例,中药组予加味归脾合剂治疗,激素组予泼尼松治疗,记录治疗前后ITP患者血清中细胞因子Treg细胞、Th17细胞以及Treg/Th17比值,Foxp3mRNA、RORγt mRNA、Foxp3/RORγt比值检测结果及外周血血小板计数。结果 :(1)血小板计数:中药组和激素组治疗后均有所上升,与治疗前比较差异有统计学意义(P0.01),组间比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)Treg/Th17:中药组与激素组治疗前与正常对照组比较,Treg细胞、Th17细胞、Treg/Th17比值、Foxp3mRNA、RORγt mRNA表达、Foxp3/Ro Rγt比值差异均有统计学意义(P0.05);治疗后中药组Treg细胞表达与Treg/Th17比值、Foxp3mRNA表达、Foxp3/Ro Rγt比值检测均高于激素组,组间比较差异有统计学意义(P0.05);Th17和RORγtmRNA表达,组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:加味归脾合剂可有效提升血小板计数及Treg细胞、Treg/Th17比值、Foxp3mRNA、Foxp3/Ro RγT比值,其上调Treg细胞及Foxp3mRNA表达,从而改善Treg/Th17免疫功能紊乱,健脾益气统血是治疗ITP气虚证的主要机制之一。     

活血药、益气活血药对不同阶段Lewis肺癌转移影响的实验研究

目的揭示活血药、益气活血药在Lewis肺癌转移过程中差异的分子机制,为中药逆转免疫逃逸提供实验依据。方法观察各组小鼠肺转移抑制率;流式细胞术检测各组小鼠脾CD4^＋;T淋巴细胞Thl7/Treg细胞百分比动态变化;ELISA法检测各组小鼠CD;T淋巴细胞培养上清中白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-23（IL-23）、γ干扰素（IFN-γ）动态水平;RT—PCR检测各组小鼠CD4＋T淋巴细胞Foxp3、RORγtmRNA动态表达水平。结果从各组药物抑制肺转移率看出,益气活血药苏木加黄芪优于单纯活血药苏木（P〈0．05）,与环磷酰胺组相似（P〉0．05）;除苏木黄芪组外,各荷瘤组小鼠脾Thl7与Treg细胞随时间迁移呈现出上升趋势;Thl7与Treg细胞的效应因子IL-17、IL-23、IFN-γ以及Thl7与Treg细胞关键转录分子RORTt、Foxp3呈现出与Thl7和Treg细胞相应的动态改变。结论益气活血药苏木加黄芪组在抑制肿瘤免疫耐受的形成和肿瘤形成过程中的免疫炎症反应优于单纯活血药苏木组和环磷酰胺组;各组药物对肿瘤转移机制均有一定的抑制作用,但益气活血药优于单纯活血药和化疗药物。     

五虎汤对RSV诱导的哮喘小鼠模型树突细胞自噬和炎性因子IL-17A和IL-17F水平的影响

目的探讨五虎汤对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)诱导的哮喘小鼠模型树突细胞自噬和炎性因子白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)、白细胞介素-17F(interleukin-17F,IL-17F)的影响。方法采用RSV联合鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立哮喘小鼠模型,将小鼠随机分为对照组、模型组及五虎汤低、中、高剂量(1.6、3.2、6.4g/kg)组和地塞米松(1.82mg/kg)组、雷帕霉素(1mg/kg)组,连续给药14d后采用苏木-伊红(HE)染色法观察各组小鼠肺组织病理变化,电镜观察肺组织自噬小体变化,Westernblotting法检测肺组织树突细胞中微管相关蛋白轻链3I(microtubule-associated protein lightc hain 3I,LC3I)和LC3II表达,ELISA法检测肺泡灌洗液中IL-17A、IL-17F的水平。SD大鼠随机分为对照组及五虎汤低、中、高(1.1、2.2、4.4 g/kg)组,各给药组ig相应药物,2次/d,连续给药7 d后腹主动脉取血,离心取血清,灭活后滤过。将分离的树突细胞与CD4⁺T细胞共培养,采用RSV联合OVA-17肽建立RSV诱导的树突细胞自噬模型,流式细胞术检测五虎汤含药血清对CD4⁺T细胞增殖与T细胞活化标志物CD69表达的影响。结果模型组小鼠气道狭窄,血管周围有大量炎症细胞浸润,肺组织自噬小体增加,自噬蛋白LC3II/LC3I表达水平显著升高(P<0.01),IL-17A和IL-17F水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,五虎汤组肺组织炎症表现减轻,肺组织自噬小体增加,LC3II/LC3I蛋白表达水平显著升高(P<0.01),IL-17A和IL-17F水平显著降低(P<0.05、0.01)。RSV联合OVA-17肽诱导的树突细胞自噬模型中,与对照组比较,模型组CD4⁺T细胞增殖与CD69表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,五虎汤中、高剂量含药血清组CD4⁺T细胞增殖与CD69表达显著降低(P<0.05、0.01)。结论RSV可诱导小鼠肺组织树突细胞自噬水平升高,上调IL-17A和IL-17F水平,从而介导炎症反应;五虎汤可通过上调RSV诱导的哮喘小鼠肺组织树突细胞自噬水平,下调IL-17A和IL-17F水平,从而改善哮喘气道炎症。