血小板裂解液联合脂肪干细胞干预大鼠膝骨关节炎的实验研究

目的:观察血小板裂解液(PL)联合脂肪干细胞(ADSCs)对膝骨关节炎(KOA)大鼠关节疼痛和软骨修复的作用。方法:从SD大鼠腹部抽取脂肪制备培养ADSCs,SD大鼠外周血中分离制备PL,以碘乙酸(MIA)法建立大鼠KOA疼痛模型,分别以低、中、高浓度PL,低、中、高浓度ADSCs以及低、中、高浓度PL联合ADSCs对KOA模型大鼠进行双侧关节腔注射干预,每周注射1次,定期观察生理行为及评价疼痛指标,注射4次后取膝关节进行组织病理学观察及Mankin’s评分。结果:压痛结果表明:造模后第4周,模型组压痛阈值较正常组显著下降,差异有统计学意义(P0.01);低、中、高浓度PL组,高浓度ADSCs组,以及低、中、高浓度联合组压痛阈值分别与模型组比较有显著提高,差异有统计学意义(P0.01)。热痛结果表明:造模后第4周,模型组的热痛阈值较正常组显著下降,差异有统计学意义(P0.01);低、中、高浓度PL组,中、高浓度ADSCs组,以及低、中、高浓度联合组热痛阈值分别与模型组比较有显著提高,差异有统计学意义(P0.01)。膝关节软骨病理学观察结果:大鼠膝关节软骨Mankin’s评分比较,差异有统计学意义(P0.01);模型组的Mankin’s评分高于空白组,差异有统计学意义(P0.01);低、中、高浓度PL组,低、中、高浓度ADSCs组,低、中、高浓度联合组Mankin’s评分较模型组显著下降,差异有统计学意义(P0.01);PL高浓度组的Mankin’s评分低于PL低、中浓度组,差异有统计学意义(P0.01);ADSCs高浓度组的Mankin’s评分低于ADSCs低、中浓度组,差异有统计学意义(P0.01);联合高浓度组Mankin’s评分低于联合低、中浓度组,差异有统计学意义(P0.01);联合高浓度组Mankin’s评分低于PL高浓度组和ADSCs高浓度组(P0.01)。结论:PL联合ADSCs可提高KOA模型大鼠疼痛阈值,修复软骨损伤,且其作用效果优于PL和ADSCs单独使用,PL和ADSCs在治疗膝骨关节炎上有一定的协同作用,可用于临床治疗。     

仙鹿健骨汤对膝骨性关节炎大鼠关节软骨损伤的修复作用及机制研究

目的观察仙鹿健骨汤对膝骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨损伤的修复作用并探讨其机制。方法 SD大鼠100只,根据体质量随机分成5组:对照组、模型组、仙鹿健骨汤各剂量组;模型组、仙鹿健骨汤各剂量组构建KOA大鼠关节软骨损伤模型,并于造模成功第1天开始给予相应药物灌胃,持续给予3个月,对照组和模型组给予等体积0.9%氯化钠注射液。试验结束后,测定大鼠膝骨性骨关节炎软骨Mankin′s评分、p38m RNA、NF-κB mRNA、p38、NF-κB、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白水平。结果与对照组比较,模型组、仙鹿健骨汤各剂量组KOA软骨Mankin′s评分、p38、NF-кB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平明显升高(P 0.05);与模型组比较,仙鹿健骨汤各剂量组KOA软骨Mankin′s评分、p38、NF-κB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平明显降低(P 0.05),且随着仙鹿健骨汤给药剂量的增加,KOA软骨Mankin′s评分、p384、NF-κB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平逐渐降低,剂量-效应关系明显(P 0.05)。结论仙鹿健骨汤能明显减轻软骨细胞损伤程度,对KOA关节软骨损伤具有一定程度的修复作用,其机制与仙鹿健骨汤组能通过抑制炎症信号通路p38、NF-κB m RNA、蛋白表达水平的表达进而抑制细胞因子MMP-9、MMP-13、IL-1β的表达有关。     

黑顺片关节腔注射干预大鼠骨性关节炎的药效作用

目的:探究黑顺片关节腔注射对大鼠骨性关节炎的药效作用。方法:应用高效液相色谱法对黑顺片水提物进行质量控制。采用碘乙酸大鼠骨关节炎模型,选用黑顺片水提物进行双侧关节腔注射干预,观察大鼠生理行为、疼痛指标和组织病理学;制备大鼠原代软骨细胞,设计不同浓度梯度,检测黑顺片水提物对大鼠原代软骨细胞的活性影响。结果:高效液相色谱结果显示,水煎30min的黑顺片,其新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量明显下降。根据热痛阈值和压痛阈值的检测,可以发现模型组压痛和热痛阈值较正常组显著下降,而黑顺片治疗组可显著提高大鼠的热痛和压痛阈值;正常组的关节面完整光滑,关节软骨中软骨细胞排列规整。相比于模型组的SO染色结果,黑顺片治疗组的软骨表面缺损减轻,软骨细胞排列整齐,软骨病变减缓。同样,模型组Mankin’s评分比正常组明显增高,而黑顺片治疗组的Mankin’s评分与模型组相比显著降低;大鼠软骨细胞的MTT活性检测结果显示,黑顺片水提物在一定浓度范围内,能促进大鼠软骨细胞增殖。结论:黑顺片对碘乙酸诱导的骨性关节炎模型具有软骨保护作用,在体内可以预防关节退行性变,降低Mankin’s评分,在体外可以促进软骨细胞增殖,具有较高的安全性。     

右归丸经IL-6/STAT3信号通路对膝骨关节炎模型大鼠软骨组织退变的调控机制

目的:观察右归丸对膝骨关节炎(KOA)模型鼠软骨组织信号转导和转录激活因子3(STAT3)和白细胞介素-6(IL-6)表达水平的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组、右归丸高、中、低剂量组,每组10只。采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,右归丸高、中、低剂量组分别给予右归丸4.8,2.4,1.2 g·kg^-1灌胃,硫酸氨基葡萄糖组给予硫酸氨基葡萄糖0.17 g·kg^-1灌胃,连续给药8周。干预结束24 h后股动脉采血处死各组大鼠,取鼠膝关节软骨,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组软骨的病理改变,并进行Mankin评分;免疫组化法检测各组关节软骨组织中STAT3,超氧化物歧化酶3(SOD3)和Wnt抑制因子1(WIF1)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测软骨组织中IL-6 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组关节软骨组中WIF1蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织Makin评分明显升高,软骨组织STAT3在蛋白水平上的表达明显增加和IL-6 mRNA水平上的表达显著增加,WIF1在蛋白水平上的表达显著降低(P<0.01);模型组关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与模型组比较,右归丸高剂量干预组大鼠软骨组织Makin评分,STAT3的在蛋白水平上的表达明显降低,右归丸各干预组IL-6 mRNA水平上的表达显著降低,WIF1在蛋白水平上的表达显著增加(P<0.05,P<0.01),软骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论:右归丸能显著改善KOA大鼠的关节软骨退变,抑制KOA中软骨组织的炎症反应,这可能与其抑制STAT3和IL-6的表达有关。     

针刺不同敏化状态穴位对KOA模型大鼠的关节软骨形态和关节腔液炎症因子的作用

目的研究针刺不同敏化状态穴位对膝骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨的修复及关节腔液炎症因子的调控作用。方法将成年雄性SD大鼠56只以1:3的比例随机分为空白对照组和KOA造模组。造模组采用单碘乙酸盐(Monoiodoacetic acid,MIA)关节腔内注射法制备KOA模型,采用Von Frey检测临床治疗KOA常用腧穴的机械痛阈值,根据造模前后痛阈值的变化率,筛选具有双向变化的穴位,将该穴痛阈值增高的大鼠分为低敏化组,而降低的分为高敏化组,而痛阈值无明显变化的为模型组。敏化组均接受2周的针刺治疗。观察各组大鼠膝关节周径、行为学评分、关节软骨组织形态学,ELISA检测关节腔冲洗液IL-6、TNF-α和chemerin水平,Western blot检测关节软骨ChemR23蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠关节周径、Lequesne MG评分、关节软骨Mankin’s评分、关节腔冲洗液IL-6、TNF-α和chemerin水平均显著升高(P0.05);与模型组比较,高、低敏化组大鼠关节软骨Mankin’s评分、关节腔冲洗液IL-6、chemerin水平显著下降(P0.05);与低敏化组比较,高敏化组大鼠关节周径、Lequesne MG总分、Mankin’s评分均明显降低,关节腔冲洗液IL-6水平明显下降(P0.05)。结论针刺KOA疾病状态下不同敏化状态的穴位均可改善大鼠行为学表现、促进软骨修复、抑制关节局部部分炎性反应,而针刺高敏化状态穴位的疗效优势还需要进一步验证。     

加味阳和汤对膝骨关节炎大鼠模型基质金属蛋白酶调控及软骨保护作用研究

目的:观察加味阳和汤对软骨细胞MMP-3,9,13及Col2a调控作用及对碘乙酸诱导KOA模型大鼠的软骨保护作用。方法:软骨细胞提取于3周龄SD大鼠关节软骨,第三代软骨细胞加入梯度浓度加味阳和汤干预后使用IL-1β诱导炎症。MTT检测加味阳和汤最佳干预浓度。Western Blot检测MMP-3,9,13及Col2a表达。组织病理学切片KOA大鼠模型软骨退变情况并行Mankin评分。结果:Western Blot结果示加味阳和汤能有效下调异常增高的MMP-3、9、13并上调Col2a表达。Mankin评分结果提示加味阳和汤能有效延缓退变。结论:加味阳和汤可通过抑制MMPs表达从而保护软骨。     

补肾活血方加减对膝骨关节炎大鼠模型疼痛及软骨损伤的影响

目的探索补肾活血方加减对膝骨关节炎大鼠模型疼痛及软骨损伤的影响。方法取50只SD大鼠,随机分为空白组,模型组,补肾活血方加减低、中、高剂量组,每组10只。空白组不造模,余4组用碘乙酸向大鼠双侧膝关节注射进行KOA造模。造模后第2天,补肾活血方加减低、中、高剂量组SD大鼠分别予低、中、高剂量补肾活血方加减进行灌胃,空白组、模型组予0.9%生理盐水灌胃,连续灌胃4周。分别于造模后第2天和第4周测定各组大鼠的压痛值和热痛阈值。第4周痛阈值测定结束后处死大鼠,取双侧膝关节进行组织病理学观察并评定Mankin′s评分。结果灌胃4周后,与模型组比较,补肾活血方低、中、高剂量组大鼠压痛及热痛阈值较模型组均有提高,除补肾活血方低剂量组大鼠热痛阈值与模型组比较无差异性(P0.05),余各组间比较皆有明显差异性(P0.05),其中以高剂量组提高最为明显,中剂量次之,低剂量最末。大鼠膝关节软骨番红染色结果示,与空白组比较,模型组大鼠软骨表面缺损严重,软骨基质染色明显减轻、不均,而补肾活血方低、中、高剂量组的病理变化逐渐减轻,各组大鼠膝关节软骨Mankin′s评分结果显示,与模型组比较,各组大鼠Mankin′s评分均较低,补肾活血方低、中、高剂量组大鼠Mankin′s评分比较有明显差异性(P0.05),且呈剂量依赖性。结论补肾活血方加减能提高KOA模型大鼠疼痛阈值,修复软骨损伤,并与剂量呈正相关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨加味二仙颗粒治疗KOA的作用

目的:基于Wnt/β-catenin信号通路探讨加味二仙颗粒治疗绝经期膝骨关节炎的作用。方法:将SD雌性大鼠分为假手术组、模型组、西乐葆组、加味二仙颗粒高、中、低剂量组,采用双侧卵巢切除8周后膝关节腔注射木瓜蛋白酶结合L-半胱氨酸复制大鼠绝经后KOA模型。造模后每天灌胃给药1次,4周后检测大鼠血清雌二醇(E2)水平和相关基因蛋白的表达并观察膝关节组织病理变化。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血清E2水平显著下降(P<0.01),关节软骨Wnt-4及β-catenin mRNA表达显著升高、GSK-3βmRNA表达显著降低(P<0.05),膝关节软骨表面粗糙,软骨层明显变薄;与模型组对比,加味二仙颗粒组大鼠E2水平有明显提高(P<0.01),膝关节软骨Wnt-4及β-catenin mRNA表达显著降低(P<0.05),Ⅱ型胶原密度升高,MMP-13密度降低,膝关节软骨表面回复平整,软骨细胞数量较多且密集规整。结论:加味二仙颗粒能够提高体内E2水平,通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响软骨细胞影外基质降解和软骨细胞凋亡,从而保护膝关节软骨,发挥治疗绝经期膝骨关节炎的作用。     

电针调节Wnt/β-catenin信号通路抑制大鼠膝骨关节炎软骨退变的研究

目的:基于Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路探讨电针治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用机制。方法:从50只2月龄SPF级雄性SD大鼠中随机抽取10只为假手术组,其余40只采用改良Hulth法复制膝骨关节炎模型,造模4周后随机分为模型组、实验1组、实验2组、实验3组,每组10只。假手术组和模型组不作任何干预,实验1组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预15 min,实验2组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预30min,实验3组取双侧非经非穴电针干预15min。电针干预每天1次,每周5次,共12周。12周后,取大鼠膝关节软骨组织进行染色,光镜下观察关节软骨组织形态学改变;改良Mankin’s评分评价软骨退变程度;ELISA法检测滑膜组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;Western blot检测关节软骨组织Wnt-4、β-catenin、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloprotein-13,MMP-13)蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P0.01)。与模型组比较,实验1组、实验2组大鼠软骨形态结构较整齐,细胞数量增多,基质染色加深,潮线较完整;Mankin’s评分显著降低(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著降低(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著降低(均P0.01)。与模型组比较,实验3组均未见改善。与实验1组比较,实验3组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P0.01)。实验2组与实验1组大鼠软骨形态结构相似,Mankin’s评分、滑膜组织中IL-1β含量及Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:电针"内膝眼""犊鼻"可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路,降低MMP-13的表达,减少炎性因子IL-1β的生成,从而抑制软骨基质的降解和软骨细胞的凋亡,改善软骨形态结构。     

温针灸对膝骨性关节炎兔软骨及软骨下骨形态学的影响

目的:观察温针灸对膝骨性关节炎(KOA)兔软骨及软骨下骨形态学的影响,探讨温针灸能否减轻关节软骨及软骨下骨的退变从而减缓KOA的发展。方法:40只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、温针灸组及阿仑膦酸钠组,每组10只。采用管型石膏伸直位固定法固定兔右后肢6周制备KOA模型。温针灸组给予"内膝眼""外膝眼"及"鹤顶"温针灸治疗,每次15 min,每日1次,连续4周;阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠溶液灌胃(150μg·kg^-1·d^-1),连续4周。治疗结束后对所有新西兰兔膝关节行X线、磁共振成像(MRI)检查。X线结果采用K-L分级法对关节间隙、软骨下骨增生程度进行分级;MRI结果采用Recht分级法对软骨退变程度进行分级,采用WORMS评分法对骨髓水肿程度进行评分;HE染色法观察膝关节软骨组织形态学改变,采用Mankin评分评价软骨退变程度;扫描电镜观察膝关节软骨表面的形态学改变;透射电镜观察膝关节软骨细胞的超微结构。结果:与空白组比较,模型组K-L分级、Recht分级、WORMS评分及Mankin评分明显升高(P<0.05,P<0.01);扫描电镜显示模型组软骨缺损严重;透射电镜显示模型组软骨细胞变性肿胀,细胞器减少、形态紊乱,细胞外基质胶原纤维分布混乱。与模型组比较,温针灸组和阿仑膦酸钠组K-L分级、Recht分级、WORMS评分及Mankin评分明显降低(P<0.05,P<0.01)。扫描电镜显示,温针灸组软骨无明显缺损,软骨表面较平坦;阿仑膦酸钠组软骨有缺损,但再生软骨组织表面平坦。透射电镜显示,温针灸组软骨细胞形态基本正常,细胞器形态明显改善、数量明显增多,胞外基质胶原纤维较丰富,分布较为均匀;阿仑膦酸钠组细胞外形正常,细胞器数量较多,形态紊乱,胞外基质胶原纤维分布较混乱。与阿仑膦酸钠组比较,温针灸组Mankin评分降低(P<0.01)。结论:温针灸治疗可以有效减缓KOA兔软骨及软骨下骨退变,从而起到减缓KOA发展的作用。     

针刀对膝骨性关节炎兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖相关蛋白表达的影响

目的:观察针刀对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)相关蛋白表达的影响,探讨针刀治疗KOA的相关机制。方法:新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组和电针组,每组10只,以左后肢伸直位固定制动法制备KOA模型。针刀组以膝关节内、外侧副韧带及髌韧带为松解对象,以纵疏横剥法进行针刀松解,每周1次,共治疗3周;电针组电针左后肢"阴陵泉""阳陵泉""内膝眼""外膝眼",每次20min,每周治疗3次,共3周。X线观察膝关节影像学改变,光镜观察关节软骨形态学改变,Western blot法分别检测膝关节整合素β1(Integrinβ1)、Col-Ⅱ、基质金属蛋白酶3(MMP-3)及Aggrecan的蛋白表达水平。结果:X线结果显示,造模后,模型制备成功,关节病损情况属于早中期膝骨关节炎。光镜结果显示,模型组关节软骨层表面粗糙不平,表层软骨细胞稀少,细胞排列紊乱,部分软骨细胞坏死,潮线模糊或扭曲不完整,部分软骨有血管通过或血管翳生成,电针组及针刀组关节软骨组织结构均较模型组明显改善,针刀组较电针组改善更明显。Mankin评分比较,模型组较空白组明显升高(P0.01),针刀组较模型组明显降低(P0.01)。Western blot结果显示,模型组膝关节组织中Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较空白组显著降低(P0.01),MMP-3蛋白表达显著升高(P0.01);针刀组Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较模型组显著升高(P0.01,P0.05),MMP-3蛋白表达较模型组显著降低(P0.01);电针组Integrinβ1蛋白表达较模型组明显升高(P0.05),其它指标与模型组的差异均无统计学意义(P0.05)。结论:针刀可能通过对软骨力学环境的影响,激活整合素力学信号转导通路,促进细胞外基质Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达,下调MMP-3的蛋白表达水平,阻抑软骨细胞外基质的降解,延缓软骨损伤与关节退变程度,达到治疗KOA的目的。     

绝经后妇女不同中医证型膝骨关节炎关节软骨ERRα/SOX9信号通路表达分析

目的:探讨ERRα/SOX9信号通路在绝经后妇女不同证型膝骨关节炎(KOA)关节软骨中的作用。方法:选取2018年6月至2019年4月广州中医药大学第三附属医院收治的绝经后KOA患者,根据中医证型标准分为风寒湿痹证、风湿热痹证、瘀血闭阻证和肝肾亏虚证4组,采用RT-PCR和Western Blot检测ERRα/SOX9信号通路表达情况。结果:各组间膝关节软骨组织ERRα、SOX9和Col2α1表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。与风寒湿痹组比较,风湿热痹组ERRα、SOX9和Col2α1表达量之间差异无统计学意义(P>0.05);瘀血痹阻组ERRα表达量升高,SOX9、Col2α1表达量降低(P<0.05);肝肾亏虚组ERRα、Col2α1表达量降低(P<0.05),SOX9表达量升高(P<0.05)。与风湿热痹组比较,瘀血痹阻组ERRα表达量升高,SOX9、Col2α1表达量降低(P<0.05);肝肾亏虚组ERRα、Col2α1表达量降低(P<0.05),SOX9表达量升高(P<0.05)。与瘀血痹阻组比较,肝肾亏虚组ERRα、Col2α1表达量降低(P<0.05);SOX9表达量升高(P<0.05)。结论:绝经后妇女不同中医证型KOA患者关节软骨组织ERRα/SOX9信号通路存在差异,揭示不同证型ERRα/SOX9信号通路的差异将为中医药辨证施治绝经后KOA提供理论基础。     

内热针通过调控Bcl-2/Bax平衡改善大鼠膝骨关节炎损伤

目的:观察内热针治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠的疗效并探究其相关分子机制。方法:32只大鼠随机分为常组、模型组、电疗组和治疗组4组各8例。经过3周治疗后,采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察大鼠膝关节软骨组织病理变化,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠滑膜液中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-17(interleukin-17,IL-17)的分泌水平,RT-qPCR及Western blot分别检测软骨组织中B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2-Associated X(Bax)mRNA及蛋白表达水平,TUNEL染色观察各组大鼠膝骨关节中软骨细胞凋亡情况。结果:与模型组比较,内热针能显著改善膝骨关节炎大鼠软骨组织的病理学变化,下调滑膜液中炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-17的表达水平(P<0.01);上调软骨组织中Bcl-2在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.01),下调Bax在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.01),且能显著抑制膝骨关节中软骨细胞的凋亡。结论:内热针能显著改善膝骨关节炎大鼠的病理学变化,缓解炎症反应,抑制膝骨关节中软骨细胞的凋亡,这可能与其对Bcl-2/Bax平衡的调控密切相关。     

屈膝点按叩揉法调控L型电压依赖性钙通道影响软骨细胞代谢的机制研究

[目的]通过分析屈膝点按叩揉法调控L型电压依赖性钙通道影响软骨细胞合成代谢,探讨该手法防治膝骨性关节炎(KOA)的分子机制。[方法]50只新西兰大耳白兔随机分成5组,运用Hulth造模法构建KOA兔模型,治疗组采用屈膝点按叩揉法治疗,阳性对照组采用关节腔注射玻璃酸钠注射液治疗,正常组、假手术组及模型组同条件饲养。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测L型电压依赖性钙通道α1亚基及合成代谢相关蛋白的表达。[结果]治疗组、阳性对照组Cav1.2、Cav1.3、Cav1.4、PTHr P、ColⅡ蛋白的表达均高于模型组,差异具有统计学意义(P0.05),治疗组Cav1.2、Cav1.3、Cav1.4、PTHr P、ColⅡ蛋白的表达与阳性对照组相比无统计学差异(P0.05)。[结论]屈膝点按叩揉法通过影响L型电压依赖性钙通道蛋白,增加细胞内钙离子浓度,上调甲状旁腺激素相关蛋白(PTHr P)的表达,进而发挥促软骨细胞合成代谢的作用。     

艾灸对膝骨关节炎模型兔软骨病理学改变及行为学改变的影响

目的:观察艾灸"犊鼻""足三里"穴对膝骨关节炎(KOA)模型兔膝关节软骨病理学及行为学的影响,为艾灸的局部抗炎、镇痛作用提供依据.方法:将40只健康新西兰大耳白兔按随机数字表法分为对照组、模型组、艾灸组、抑制剂组,每组10只.模型组、艾灸组、抑制剂组兔采用注射木瓜蛋白酶法造模,造模成功后,艾灸组、抑制剂组实施干预治疗....     

火针膝周密刺对膝关节骨性关节炎鼠关节形态及软骨LOXL2的影响

目的:探讨火针膝周密刺对膝关节骨性关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)大鼠行为学、关节形态及软骨中赖氨酰氧化酶相关蛋白2(LOXL2)影响性。方法:选择30只健康雄性大鼠,10只作为对照不作任何处理。20只大鼠建立KOA模型,成模后随机分成2组,分别予普通针刺和火针膝周密刺,1次/3 d,连续6次。观察各组大鼠Leauesne MG评分、关节软骨细胞情况,外周血及关节软骨转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、LOXL2水平变化。结果:治疗后火针组Leauesne MG评分中的局部疼痛刺激反应、步态、关节活动范围、关节肿胀度较对照组、模型组差异有统计学意义(P<0.05)。血清及关节软骨MMP-3、TGF-β1、TNF-α含量水平显著低于模型组(P<0.05),LOXL2显著高于模型组(P<0.05)。火针组电镜下软骨细胞形状规则、细胞核完整且饱满,微绒毛少量存在,内质网丰富,有散在的染色质。结论:火针膝周密刺能减轻K0A关节软骨损伤,降低炎性反应,改善软骨LOXL2水平,这可能是火针治疗KOA一个作用机制。     

伸筋易骨法调控家兔软骨细胞增殖减轻软骨变性的实验研究

[目的]研究伸筋易骨法影响调控甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)促进兔软骨细胞增殖减轻软骨变性的作用。[方法]新西兰大耳白兔编号后随机分为正常组、假手术组、模型组、推拿组、玻璃酸钠组,每组各10只,改良Hulth法制备膝骨性关节炎(KOA)兔模型,推拿组采用伸筋易骨法治疗21 d,玻璃酸钠组采用关节腔玻璃酸钠注射治疗,每周1次,共治疗3周,取材后透射电镜观察细胞器情况,扫描电镜观察软骨组织表面的变性和修复情况,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTHrP mRNA的表达。[结果]RT-PCR法检测各组软骨组织PTHrP mRNA的表达,假手术组与正常组PTHrP mRNA的表达经统计学比较,无统计学意义(P>0.05),模型组与正常组比较,具有统计学意义(P<0.05),推拿组、玻璃酸钠组与模型组比较,具有统计学意义(P<0.05),推拿组与玻璃酸钠组相比,无统计学意义(P>0.05),推拿组、玻璃酸钠组与正常组相比,具有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜检查显示,模型组软骨表面垄沟样明暗带明显紊乱,胶原纤维裸露;推拿组和玻璃酸钠组软骨表面有纤维爬过,提示软骨修复。透射电镜观察显示,模型组软骨细胞形态肥大,粗面内质网形态异常,核膜上多个膜孔,线粒体消失,胶原纤维断裂;推拿组和玻璃酸钠组软骨细胞细胞形态结构基本正常,细胞内可见多个自噬小体。[结论]伸筋易骨法能够调控软骨合成代谢关键蛋白PTHrP的表达,减缓软骨变性,促进软骨修复,减轻KOA症状。     

女贞子墨旱莲对多发性肌炎模型大鼠肌组织中核转录因子-κB的影响

目的研究中药女贞子墨旱莲配伍对多发性肌炎模型大鼠的治疗作用与疗效,阐明养阴滋补肝肾法对多发性肌炎模型大鼠肌组织中核转录因子-κB(NF-κB)的影响。方法将40只SPF级SD雄性大鼠随机抽取10只作为空白组,其余大鼠皮下注射完全弗氏佐剂与抗原1∶1混合乳化液,成功制备多发性肌炎大鼠模型,成模大鼠随机分为中药组、激素组、模型组,各10只。空白组、模型组给予0.9%氯化钠注射液,激素组给予甲泼尼龙溶液,中药组给予女贞子墨旱莲药物溶液,均给药4周,观察大鼠的一般状态,根据Lennon LA的评分标准进行评分,检测血清中血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肌肉组织中NF-κB的含量水平。结果在各组大鼠进行干预治疗后,中药组的症状评分低于模型组(P0.01),中药组AST水平明显低于模型组(P0.01),中药组与激素组比较差异无统计学意义(P0.05)。中药组LDH水平明显低于模型组(P0.01),中药组与激素组比较,血清中LDH含量较高(P0.05)。中药组CK水平明显低于模型组(P0.01),中药组与激素组,血清中CK含量高(P0.05)。中药组的NF-κB表达水平明显低于模型组(P0.05),中药组与激素组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论中药女贞子墨旱莲阻止炎症细胞凋亡,进而起到抗炎、阻止肌肉组织破坏,是通过抑制NF-κB信号通路,促进抗凋亡蛋白的表达,从而达到对多发性肌炎的治疗作用,表明养阴滋补肝肾法对多发性肌炎模型大鼠肌组织中NF-κB有一定的影响。     

基于纤溶酶途径介导的软骨细胞外基质损伤机制研究温针灸治疗膝骨性关节炎的作用机理

目的通过观察温针灸干预后膝骨性关节炎(KOA)兔关节软骨尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)因子表达的变化,探索温针灸治疗KOA的作用机制。方法将40只新西兰兔随机分为空白组、模型组、温针灸组、u PA抑制剂组,每组10只,采用右后肢石膏管型固定法制备KOA模型,空白组不予处理,模型组每天于兔架上固定15 min,温针灸组予以温针灸治疗,u PA抑制组每两日于关节腔注射u PA抑制剂稀释液1 m L/kg,干预结束后取兔关节软骨行TUNEL、RT-PCR、Western blot检测。结果 TUNEL细胞凋亡检测发现:较空白组,模型组软骨细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组及u PA抑制剂组软骨细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。RT-PCR检测结果发现:较空白组,模型组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);u PA抑制剂组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);Western blot检测发现:较空白组,模型组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05) u PA抑制剂组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);相关性分析显示u PA与MMP-1、MMP-13均由相关关系。结论 (1)温针灸可抑制软骨细胞的过度凋亡;(2)温针灸可有效抑制软骨细胞中u PA、MMP-1、MMP-13的表达,且可通过抑制u PA的生成进而阻断MMP-1、MMP-13的活化,发挥保护关节软骨最终达到治疗KOA的作用。