5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷对乳腺癌细胞RASSF1A甲基化的逆转作用

目的：通过甲基化抑制剂5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）作用于乳腺癌细胞株MCF-7,探索5-Aza-CdR逆转乳腺癌抑癌基因RASSF1A甲基化作用的机理。方法：体外培养乳腺癌细胞株MCF-7细胞,使用不同浓度5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷处理MCF-7细胞,对照组不加药。MSP及Western blot分别检测经5-Aza-CdR处理前、后RASSF1A DNA、蛋白的表达情况。结果：经去甲基化药5-Aza-CdR作用后,实验组恢复了RASSF1A的表达,明显高于对照组（ P〈0.05）。结论：去甲基化药5-Aza-CdR可以逆转乳腺癌细胞RASSF1A的甲基化作用,恢复了RASSF1A蛋白的表达,为临床治疗乳腺癌提供了理论基础。     

P16INK4a和RASSF1a启动子甲基化在非小细胞肺癌中的研究

目的探讨抑癌基因p16INK4a和RASSF1a启动子甲基化在非小细胞肺癌中的作用。方法应用甲基化特异的PCR（methyl-specific PCR,MSP）和RT-PCR法测定基因的甲基化率与mRNA的转录水平,回收PCR产物测序。结果在NSCLC癌/癌旁组织中的甲基化率分别是RASSF1a为55%和10%,p16INK4a为43%和12%,p16INK4a和RASSF1a的甲基化率在〉65岁组高于≤65岁组,两基因甲基化率均随吸烟指数的增加而增高,并且随TNM临床进展而逐渐增加;p16INK4a甲基化率鳞癌组高于腺癌组。甲基化的NSCLC标本mRNA转录失活或下降,在细胞株水平5-aza-deoxycytidine（5-Aza-CdR）处理后,甲基化而转录沉默的细胞株恢复转录活性。结论启动子甲基化是调节p16^INK4a和RASSF1a转录的重要机制,5-Aza-CdR具有逆转甲基化而恢复转录的作用。     

5-氮-2''''-脱氧胞苷诱导E-cadherin基因去甲基化及转录和表达

背景与目的：用去甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对细胞株MDA—MB-435抑癌基因E—cadherin（上皮钙粘附素，简称E—cad）表达的影响。观察DNA甲基化的可逆性，为肿瘤治疗提供新的靶点。方法：在用5-Aza—CdR处理MDA．MB-435细胞株前、后分别应用甲基化特异性PCR（MSP）检测E—cad基因5’-CpG岛甲基化改变；用免疫组化（LsAB法）检测E—cad蛋白表达；用半定量RT—PCR观察E—cad mRNA的变化。结果：①MDA—MB-435细胞在用药前E—cad基因甲基化PCR扩增阳性（116bp），而非甲基化PCR扩增阴性。用0．5μmol／L的5-Aza—CdR处理后发现该细胞E—cad基因甲基化PCR扩增阴性，而非甲基化PCR扩增出阳性条带（97bp）。②免疫细胞化学法检测E—cad蛋白：用药前细胞未见E—cad蛋白表达。用5-Aza—CdR处理后在细胞膜可见E—cad染色阳性。③RT—PCR发现用5-Aza—CdR处理前细胞不能扩增出630bp的E—cadmRNA特异性条带；用0．5、1．0、2．0、5．0μmol／L的5-Aza处理细胞后都可检测到E—cadmRNA转录，且mRNA水平与药物的浓度呈正相关。结论：去甲基化药物5-Aza—CdR能有效地逆转MDA—MB-435细胞株的E—cad基因异常甲基化，诱导mRNA转录和蛋白的表达。     

5氮杂脱氧胞苷对鼻咽癌细胞RASSF1A基因甲基化和mRNA表达的影响

目的:研究5氮杂脱氧胞苷对鼻咽癌CNE2细胞中RASSF1A基因甲基化和mRNA表达的影响。方法:用不同浓度(0、5、10、20μmol/L)5氮杂脱氧胞苷处理CNE2细胞,采用甲基化特异性PCR(MSP)法对处理后细胞中RASSF1A基因甲基化状态进行检测;并用SYBR Green qReal Time-PCR法检测RASSF1A mRNA的表达。结果:阴性对照组CNE2细胞中,RASSF1A基因呈完全甲基化状态,当用5μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理后,CNE2细胞出现非甲基化产物,20μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理后,CNE2细胞甲基化状态完全被逆转,均为非甲基化产物。阴性对照组CNE2细胞RASSF1A基因呈低表达,经5～20μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理后,RASSF1A mRNA的相对表达量逐渐增加,10和20μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理组,RASSF1A mRNA表达水平均明显高于阴性对照组(P0.01);且20μmol/L处理组明显高于5μmol/L处理组(P0.01)。结论:CNE2细胞RASSF1A基因甲基化可以被5氮杂脱氧胞苷逆转,且5氮杂脱氧胞苷可促进RASSF1A mRNA的表达。     

Effect of 5-Aza-CdR on methylation and mRNA expression of RASSF1A gene in nasopharyngeal carcinoma cells

目的:研究5氮杂脱氧胞苷对鼻咽癌CNE2细胞中RASSF1A基因甲基化和mRNA表达的影响.方法:用不同浓度(0、5、10、20μmol/L)5氮杂脱氧胞苷处理CNE2细胞,采用甲基化特异性PCR (MSP)法对处理后细胞中RASSF1A基因甲基化状态进行检测;并用SYBR Green qReal Time-PCR法检测RASSF1A mRNA的表达.结果:阴性对照组CNE2细胞中,RASSF1A基因呈完全甲基化状态,当用5μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理后,CNE2细胞出现非甲基化产物,20μmol/L5氮杂脱氧胞苷处理后,CNE2细胞甲基化状态完全被逆转,均为非甲基化产物.阴性对照组CNE2细胞RASSF1A基因呈低表达,经5～20μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理后,RASSF1A mRNA的相对表达量逐渐增加,10和20μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理组,RASSF1A mRNA表达水平均明显高于阴性对照组(P＜0.01);且20μmol/L理组明显高于5μmol/L处理组(P＜0.01).结论:CNE2细胞ASSF1A基因甲基化可以被5氮杂脱氧胞苷逆转,且5氮杂脱氧胞苷可促进RASSF1A mRNA的表达.     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对肺癌细胞H460生物学行为及抑癌基因RASSF1A表达的影响

 目的　观察5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对肺癌细胞H460的生物学行为及RASSF1A mRNA表达的影响。方法　5-Aza-CdR处理H460细胞,通过MTT方法、平板克隆试验观察细胞生长活性的变化,PCR检测RASSF1A甲基化状态,Western blotting法检测RASSF1A的蛋白表达,流式细胞术进行细胞周期分析。结果　H460细胞经5-Aza-CdR处理后,与未处理组相比,生长速度出现不同程度减慢,克隆形成率明显降低,RASSF1A甲基化程度降低,延缓H460细胞周期G1／S进程,使细胞阻滞于G1期。结论　在肺癌细胞系中,RASSF1A基因甲基化可能导致其表达缺失,而5-Aza-CdR能够恢复RASSF1A基因的表达,为肺癌的去甲基化治疗提供理论依据。     

5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞株RASSF1A基因表达的影响

目的 观察5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对体外培养的人卵巢癌细胞株（SKOV3、3AO） RASSF1A mRNA及蛋白表达的影响.方法 卵巢癌细胞株（SKOV3、3AO）经不同浓度（0.5、5、50 μmol/L）的5-Aza-CdR处理,未经处理的作为对照组,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫印记（Western Blot）检测RASSF1A在mRNA和蛋白质水平表达的变化.结果 对照组细胞株SKOV3、3AO均可见RASSF1A mRNA及蛋白的表达,但表达较弱,经药物处理后的细胞RASSF1A mRNA及蛋白的表达较前明显增强.经不同浓度5-Aza-cdR处理的SKOV3细胞株中,随浓度增加,RASSF1A mRNA及蛋白的表达依次递增.经不同浓度5-Aza-cdR处理的3AO细胞株中,经0.5μmol/L 5-Aza-cdR处理后,RASSF1A mRNA的表达明显低于经5和50 μmol/L 5-Aza-cdR处理后的表达（t=-8.866,P=0.01;t=-12.256,P=0.000）;但经5、50 μmol/L 5-Aza-cdR分别处理的3AO细胞株RASSF1A mRNA的表达差异无统计学意义（t=0.431,P=0.689）.在3AO细胞株中,0.5 μmol/L组与5μmol/L组RASSF1A蛋白表达差异无统计学意义（t=-1.586,P=0.188）.结论 经过5-Aza-CdR处理后,卵巢癌细胞株（SKOV3、3AO） RASSF1A mRNA及蛋白的表达均明显增强,细胞增殖能力受到明显抑制,从而起到抑制肿瘤细胞生长,甚至促进肿瘤细胞凋亡的作用.     

5-氮杂胞苷抑制乳腺癌细胞Bcap-37增殖及逆转RASSF1A基因甲基化作用

背景与目的探讨5-氮杂胞苷对人乳腺癌细胞Bcap-37细胞增殖的抑制作用及作用机制。材料与方法不同浓度的5-氮杂胞苷与Bcap-37细胞共培养后,应用细胞计数法检测Bcap-37细胞生长的情况;应用甲基化特异性PCR法(MethylationspecialPCR,MSP)检测5-氮杂胞苷作用前后RASSF1A基因甲基化、非甲基化状态的改变;采用逆转录PCR检测RASSF1A基因的mRNA表达。结果当5-氮杂胞苷大于5.00μmol/L剂量时对细胞生长呈浓度依赖抑制作用(P<0.01);5-氮杂胞苷作用4d后对Bcap-37细胞RASSF1A基因有去甲基化作用;细胞Bcap-37mRNA表达明显增强。结论特异性甲基转移酶抑制剂5-氮杂胞苷能较好地逆转Bcap-37细胞RASSF1A基因异常甲基化,诱导RASSF1A基因的表达,从而抑制肿瘤细胞生长。     

贲门腺癌中RASSF1A基因的甲基化状态及表达

 目的 研究贲门腺癌（gastric cardiac adenocarcinoma,GCA）中RASSF1A基因的甲基化状态及其蛋白表达情况。 方法 分别应用甲基化特异性PCR（MSP）、RT-PCR及免疫组织化学SP法检测贲门癌组织及相应癌旁组织的RASSF1A甲基化情况和mRNA水平及蛋白表达情况。 结果 92例贲门癌组织中有54例发生了甲基化,甲基化率为58.7%,显著高于癌旁正常组织（P<0.01）。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者中RASSF1A基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P<0.05）。92例贲门癌组织中有43例RASSF1A基因蛋白表达阴性,与相应癌旁正常组织相比有显著性差异（P<0.01）。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌RASSF1A基因蛋白表达显著低于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P<0.05）。发生甲基化的贲门癌组织中RASSF1A的mRNA水平的表达显著低于未发生甲基化的贲门癌组织（P<0.01）。 结论 RASSF1A基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一。     

上皮性卵巢肿瘤RASSF1A基因甲基化与蛋白表达的关系及意义

目的：检测上皮性卵巢肿瘤中RASSF1A基因启动子CpG岛的甲基化状态,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达的关系及其意义。方法：运用甲基化特异性PCR（MSP）方法对62例上皮性卵巢癌、21例交界性囊腺瘤及30例良性囊腺瘤的RASSF1A基因启动子甲基化状态进行检测,免疫组化S-P法检测上述标本中RASSF1A蛋白表达,并结合肿瘤生物学行为进行分析。结果：上皮性卵巢癌组织、卵巢交界性囊腺瘤组织中RASSF1A基因启动子区甲基化率（58.06%、42.85%）显著高于卵巢良性囊腺瘤组织（13.33%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。RASSF1A基因启动子区甲基化与上皮性卵巢癌的细胞分化程度和临床分期密切相关（P〈0.05）而与组织类型和患者年龄及绝经与否无相关性（P〉0.05）;RASSF1A基因甲基化与其蛋白表达下降一致。结论：卵巢癌组织中存在RASSF1A基因启动子CpG岛的异常甲基化,可能和该蛋白表达缺失的主要原因,是导致该基因失活的重要机制之一。     

Pharmacogénétique des fluoropyrimidines. La méthylènetétrahydrofolate réductase

Résumé: Lefficacité optimale des fluoropyrimidines nécessite des concentrations élevées en 5-10 méthylènetétrahydrofolate (CH₂FH₄), contrôlées par la méthylènetétrahydrofolate réductase (MTHFR) qui convertit irréversiblement le CH₂FH₄ en 5-méthyltétrahydrofolate (CH₃FH₄). Les polymorphismes 677CT et 1298AC du gène MTHFR sont associés à une baisse dactivité de lenzyme. Les tumeurs «MTHFR mutées» devraient donc être plus sensibles aux fluoropyrimidines que les tumeurs «MTHFR sauvages». Les études expérimentales et cliniques publiées à ce jour tendent à montrer une plus grande sensibilité au 5-FU (associé ou non à lacide folinique) dans les tumeurs MTHFR mutées par rapport aux tumeurs sauvages. Ces résultats montrent la nécessité de poursuivre ces recherches afin de confirmer limpact de ces polymorphismes sur lefficacité des fluoropyrimidines.     

Oncogénétique et psycho-oncologie, une collaboration recommandée...

Résumé: La possibilité depuis 1994, de connaître la probabilité individuelle de développer certains cancers a permis de proposer de nouvelles modalités de prévention, de traitements et contribué au développement actuel de loncogénétique. Une meilleure connaissance des répercussions psychologiques tant pour les patients que pour les apparentés est désormais possible et limplication des psycho-oncologues dans ce cadre de la réalisation des tests prédictifs, recommandée. La mission de «messager» qui incombe au «cas-index» doit faire lobjet dune attention particulière. La complexité de linformation et la dimension paradoxale que peut avoir parfois la communication à propos des choix, rend difficile lévaluation de la qualité du consentement. La situation particulièrement délicate dune aide à la décision à légard de la chirurgie prophylactique, exige une collaboration étroite des généticiens et des psycho-oncologues.Les soins de support en oncologie     

裘法祖教授生平

Prof.Fazu Qiu,member of the Chinese Communist Party,surgery professor of Tongji Hospital,departed in Tongji Hospital,Wuhan,China,at fourteen to nine a.m,June 14,2008,after a disease.He turns 94 this year.He was the senior academician of the Academia Sinica,the illustrious medical scientist of China,and the Honorary Director of Tongji Medical College,as well as Huazhong University of Science & Technology.     

The role of papillomaviruses in human cancers

This review comprehensively evaluates the influence of gene-gene, gene-environment and multiple interactions on the risk of colorectal cancer (CRC). Methods of studying these interactions and their limitations have been discussed herein. There is a need to develop biomarkers of exposure and of risk that are sensitive, specific, present in the pathway of the disease, and that have been clinically tested for routine use. The influence of inherited variation (polymorphism) in several genes has been discussed in this review; however, due to study limitations and confounders, it is difficult to conclude which ones are associated with the highest risk (either individually or in combination with environmental factors) to CRC. The majority of the sporadic cancer is believed to be due to modification of mutation risk by other genetic and/or environmental factors. Micronutrient deficiency may explain the association between low consumption of fruit/vegetables and CRC in human studies. Mitochondrial modulation by dietary factors influences the balance between cell renewal and death critical in colon mucosal homeostasis. Both genetic and epigenetic interactions are intricately dependent on each other, and collectively influence the process of colorectal tumorigenesis. The genetic and environmental interactions present a good prospect and a challenge for prevention strategies for CRC because they support the view that this highly prevalent cancer is preventable.     

Antifungal combination therapy in localized candidosis

A mouse model of localized candidosis in air-filled subcutaneous cysts imitating thrush has been developed. We have now tested various antifungal combinations in this animal model. Flucytosine (5-FC) + amphotericin B (Amph B) showed the highest efficacy, a clear additive or even synergistic effect was seen. The combination of 5-FC + imidazole or triazole derivative was less efficacious, an additive effect was rare. The combination of 5-FC + Amph B was also tested against Candida albicans strains showing various degrees of 5-FC-resistance. A significant reduction in 5-FC-resistant mutants was seen after the treatment with the combination.     

Les génériques en cancérologie: à molécule identique, médicaments identiques? Les biosimilaires, des super-génériques?

Résumé: Les biosimilaires vont bientôt voir leur apparition en Europe. Comment un laboratoire peut-il aborder le développement de son dossier dAMM? Quelles sont les bases légales et les recommandations officielles? Comment la similarité et/ou le caractère générique peuvent-ils être démontrés? Les règles sont-elles identiques à celles des produits chimiques conventionnels pour lesquels, notamment en cancérologie, il existe des médicaments génériques? Comment faire pour que la sécurité et lefficacité des médicaments biosimilaires soient assurées pour les patients?     

Dermatomycosis in Dogs

During the routine examination of dogs for cutaneous lesions, 205 dogs were screened for fungi other than dermatophytes. Twenty-two dogs (10.8%) revealed the presence of non-dermatophytic fungi suspicious for representing the etiologic agents of the skin lesions. The fungi isolated were Alternaria sp. (2.9%), Penicillium sp. (2.4%), Aspergillus fumigatus (2.0%), Mucor sp. (1.5%), Cladosporium sp. (1.5%) and Fusarium sp. (0.5%). No dermatophyte was isolated in association with these fungi. The incidence of these infections was found to be greater in warm and humid climate.     

PSA-Test zur Früherkennung des Prostatakarzinoms

Zusammenfassung Prostatakrebs ist hierzulande seit einigen Jahren die häufigste Krebserkrankung bei Männern. Da über die Ätiologie wenig gesichertes Wissen vorliegt und daher kaum Möglichkeiten zur primären Prävention bestehen, konzentrieren sich die Anstrengungen auf die Suche nach wirksamen Verfahren zur sekundären Prävention. Hierbei gilt die Verwendung des PSA-Tests zur Früherkennung des Prostatakarzinoms als derzeit aussichtsreichstes Verfahren. Bevor ein neues Früherkennungsverfahren zur breiten Anwendung empfohlen oder in das gesetzliche Früherkennungsprogramm aufgenommen wird, muss jedoch seine Wirksamkeit in hierfür geeigneten wissenschaftlichen Untersuchungen nachgewiesen werden. Bis jetzt gibt es bereits eine ganze Reihe epidemiologischer Studien zur Effektivität des PSA-Screenings, doch konnte ein Wirksamkeitsnachweis bisher nicht erbracht werden. Zwei große randomisierte Studien in Europa und den USA lassen für die Jahre 2005–08 erste Ergebnisse erwarten. Da epidemiologische Arbeiten belegen, dass durch PSA-Screening eine nicht unerhebliche Überdiagnostik und Übertherapie eintritt, d. h. Schaden angerichtet werden kann, ist das Ergebnis der genannten randomisierten Studien vor weitergehenden Entscheidungen unbedingt abzuwarten. Bis dahin sollte von der Anwendung des PSA-Tests zur Prostatakrebsfrüherkennung unmissverständlich abgeraten werden. Da für den Test bereits ausgiebig Werbung betrieben wurde, kommt einer gründlichen ärztlichen Aufklärung von an dem Test interessierten Personen eine Schlüsselrolle zu.     

Cancer immunotherapy

Unprecedented progress has seen made in the last decade in the field of cancer immunotherapy. The recent approval of nivolumab （Opdivo）, the first anti-programmed cell death-1 （PD-1） antibody, for metastatic melanoma in Japan, marked a milestone in the rapidly advancing field of cancer immunotherapy. Nivolumab together with ipilimumab （Yervoy）, the anti-cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 （CTLA-4） antibody, are the first 2 drugs in the class of ＂immune checkpoint inhibitors＂ that have delivered impressive responses in patients with metastatic melanoma and renal cell cancer （RCC） as well as a variety of solid tumors.