Tim-3调控巨噬细胞极化在克罗恩病发生发展中的作用

目的：基于生物信息学技术探索T细胞免疫球蛋白黏蛋白3（Tim-3）基因在克罗恩病（CD）肠组织中的表达、临床意义及可能机制。方法：从公共基因表达数据库（GEO）中下载CD的表达谱芯片GSE112366、GSE75214、GSE16879 和GSE186582。GEO2R在线工具进行数据处理和分析。首先观察Tim-3 在正常组织、活动期CD和缓解期CD肠组织的mRNA表达水平,利用Spearman秩相关分析观察活动期CD患者肠组织Tim-3表达水平与CD简化内镜（SES-CD）评分的关系。随后分析CD患者肠组织Tim-3的表达水平在英夫利昔单抗（IFX）或乌司奴单抗（UST）治疗前后的差异,并利用受试者工作特征（ROC）曲线评估第0周CD患者肠组织Tim-3 的mRNA表达水平对生物制剂临床疗效的预测价值。Cibersort在线工具估算各数据集中CD患者肠组织M0、M1和M2 型巨噬细胞比例,并进行肠组织Tim-3 表达与巨噬细胞比例的相关性分析。收集温州医科大学附属第二医院育英儿童医院12 例活动期CD患者和15 名性别年龄匹配的健康对照者,采用免疫荧光方法测定肠组织中Tim-3、CD68的表达水平和CD68+ Tim-3+巨噬细胞的数量。最后收集6例活动期CD患者和8 名健康对照者,采用荧光定量PCR法测定肠组织中Tim-3 和M1、M2相关细胞因子的mRNA表达水平。结果：在4个数据集中均发现,与正常肠组织相比,Tim-3的mRNA表达水平在活动期CD患者肠组织中显著增高。活动期CD患者较缓解期CD患者肠组织中Tim-3的mRNA表达水平亦显著升高。活动期CD患者肠组织Tim-3的mRNA表达水平与SES-CD评分呈正相关（r =0.39,P ＜0.001）。IFX/UST治疗后CD患者肠组织Tim-3的mRNA表达水平较治疗前降低。此外IFX应答组与无应答组相比,肠组织Tim-3的mRNA表达水平较低。治疗第4～6 周,ROC曲线分析显示第0 周活动期CD患者肠组织Tim-3 表达水平对IFX疗效具有预测价值（AUC=0.70,P =0.04）。Cibersort分析发现肠组织Tim-3的mRNA表达水平与活动期CD患者肠组织中M0及M1型巨噬细胞浸润水平显著正相关（P＜0.05）。免疫荧光结果显示CD患者炎性肠黏膜中CD68 和Tim-3 表达均高于健康对照者（P ＜0.05）。此外,CD68+ Tim-3+双阳性巨噬细胞比例在CD患者炎性部位亦明显增多。荧光定量PCR结果显示CD患者肠组织Tim-3 mRNA表达水平较健康对照者高（P ＜0.05）,且CD患者肠组织Tim-3 mRNA表达水平与M1型巨噬细胞相关细胞因子TNF-α和IL-1β的表达呈正相关。结论：Tim-3 可能通过影响M1型巨噬细胞极化在CD发生发展中扮演重要角色,且可能预测早期IFX疗效。     

非小细胞肺癌中半乳凝素1的表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中半乳凝素1(Gal-1)mRNA及蛋白的表达及临床意义。方法采用RT-PCR、蛋白质印迹技术分别检测35例NSCLC患者的癌组织、癌旁组织及远处正常肺组织(距癌组织边缘大于5cm)中Gal-1mR-NA及蛋白表达情况。结果 NSCLC患者癌组织、癌旁组织以及有淋巴结转移的NSCLC患者正常肺组织中,Gal-1mRNA的表达水平均明显高于无淋巴结转移的NSCLC患者正常肺组织(P<0.05);NSCLC患者癌组织、癌旁组织以及有淋巴结转移的NSCLC患者正常肺组织中,Gal-1蛋白表达水平明显高于无淋巴结转移的NSCLC患者正常肺组织(P<0.05);NSCLC患者癌组织中Gal-1mRNA的表达与患者TNM分期及分化程度密切相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、病理组织类型无明显相关性(P>0.05)。结论 Gal-1表达与NSCLC的发生、发展、侵袭转移密切相关,可作为一个潜在的NSCLC发病与转移的观察指标。     

非小细胞肺癌组织和患者外周血中CD40的表达及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织和患者外周血中CD40的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学和酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法检测经胸外科手术切除的60例NSCLC组织、15例癌旁肺组织和患者外周血中CD40的表达情况.结果 (1)NSCLC组织中CD40阳性表达率较癌旁肺组织明显增加(P＜0.05);(2)有淋巴结转移组的CI4O阳性表达率明显高于无淋巴结转移组(P＜0.05).Ⅲ～Ⅳ期NSCLC组织CD40阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05).(3) NSCLC外周血清可溶性CD40 (sCD40)的表达水平明显高于健康对照组(P＜0.05);(4) NSCLC患者外周血清sCD40含量和NSCLC组织中CD40分子表达成正相关关系(P＜0.05).结论 NSCLC患者体内CD40含量增加可增强肺癌的侵袭和免疫逃逸能力;患者外周血清sCD40含量升高可能和肺癌细胞表面CD40分子释放有关.     

外周血树突状细胞Tim-3蛋白、CD80、CD86表达与骨髓增生异常综合征预后的相关性

目的分析外周血树突状细胞(DC)T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)、CD80、CD86表达与骨髓增生异常综合征(MDS)患者预后的相关性。方法选取2015年11月—2017年11月于四川大学华西医院血液内科就诊的MDS患者104例作为研究对象(观察组),并根据MDS国际预后评分系统(IPSS)将患者分为低危亚组(48例)、中危亚组(31例)和高危亚组(25例);另选取同期于医院体检的健康人50例作为健康对照组。收集受试者的临床资料,取肘静脉血分离外周血单个核细胞(PBMC)并诱导DC,流式细胞术检测CD80、CD86含量;蛋白免疫印迹法检测DC细胞中Tim-3蛋白表达水平;比较健康对照组、观察组及不同IPSS预后亚组间Tim-3蛋白、CD80、CD86水平;Pearson法分析DC细胞中Tim-3蛋白及CD80、CD86与MDS患者骨髓指标相关性;比较不同IPSS预后MDS患者3年累积生存率;Logistic回归分析影响MDS患者预后的危险因素。结果观察组外周血PBMC诱导成熟DC细胞的平均比例高于健康对照组(t/P=18.461/0.000);与健康对照组比较,观察组外周血PBMC诱导成熟DC细胞Tim-3蛋白表达水平及CD80、CD86比例均升高(t/P=19.854/0.000、14.264/0.000、7.366/0.000);低危亚组、中危亚组、高危亚组DC细胞中Tim-3蛋白表达水平及CD80、CD86比例依次升高(F/P=38.819/0.000、31.828/0.000、11.803/0.000);MDS患者DC细胞中Tim-3蛋白分别与环状铁粒幼红细胞占有核红细胞比例、骨髓涂片原始细胞呈正相关(r/P=0.624/0.000、0.486/0.023),与血小板计数(PLT)、红细胞计数(RBC)呈负相关(r/P=-0.458/0.032、-0.536/0.001);CD80与环状铁粒幼红细胞占有核红细胞比例、骨髓涂片原始细胞呈正相关(r/P=0.513/0.002、0.573/0.001)与PLT呈负相关(r/P=-0.526/0.002);CD86与环状铁粒幼红细胞占有核红细胞比例呈正相关(r/P=0.571/0.001);低危亚组、中危亚组、高危亚组MDS患者3年累积生存率依次降低(χ^(2)/P=25.360/0.000);多因素Logistic回归分析显示,Tim-3蛋白、CD80、CD86水平升高是MDS患者不良预后的独立危险因素[OR(95%CI)=2.201(1.338~3.621)、1.982(1.324~2.968)、2.024(1.389~2.949)]。结论MDS患者外周血DC细胞中Tim-3蛋白、CD80、CD86水平均升高,是MDS患者预后不良的危险因素,可作为MDS潜在的诊断指标。     

αB-晶状体蛋白、半乳糖凝集素-9与胰腺癌临床分期及预后的关系

目的:探究αB-晶状体蛋白(CRYAB)、半乳糖凝集素-9(Gal-9)与胰腺癌临床分期及预后关系.方法:选取胰腺癌患者56例为研究对象,均接受手术治疗.对术后病理组织进行免疫组化染色和蛋白免疫印迹法(Western blot)实验,比较胰腺癌组织和癌旁组织中CRYAB、Gal-9蛋白表达水平,分析CRYAB、Gal-9蛋白表达水平与胰腺癌患者临床病理参数及预后的关系.结果:免疫组化染色结果显示,胰腺癌组织中CRYAB蛋白(78.57％ vs 5.36％)、Gal-9蛋白表达水平(39.29％ vs 17.86％)显著高于癌旁组织(P＜0.05);Western blot实验结果显示,胰腺癌组织中CRYAB蛋白(1.65±0.15 vs 0.66±0.07)、Gal-9蛋白表达水平(0.55±0.13vs 0.17±0.02)显著高于癌旁组织(P＜0.05);中低分化组CRYAB蛋白表达水平高于高分化组(1.54±0.11 vs 0.88±0.03);有肿瘤远处转移组CRYAB蛋白表达水平高于无肿瘤远处转移组(1.37±0.16 vs0.79±0.47);临床分期Ⅲ～Ⅳ期组胰腺癌组织中CRYAB蛋白表达水平高于临床分期Ⅰ～Ⅱ期组(1.58±0.19 vs 0.97±0.23,P＜0.05);有肿瘤远处转移组胰腺癌组织中Gal-9蛋白表达水平(0.54±0.01vs0.38±0.02)显著高于无肿瘤远处转移组,临床分期Ⅲ～Ⅳ期组胰腺癌组织中Gal-9蛋白表达水平高于临床分期Ⅰ～Ⅱ期组(0.56±0.02 vs 0.35±0.01,P＜0.05);CRYAB蛋白高表达组术后3年总生存率显著低于低表达组(20.45％ vs 58.33％,P＜0.05);Gal-9蛋白高表达组术后3年总生存率显著低于低表达组(18.18％ vs 47.06％,P＜0.05);肿瘤远处转移、CRYAB蛋白高表达、Gal-9蛋白高表达是影响胰腺癌术后3年总生存率的危险因素(P＜0.05).结论:CRYAB与Gal-9在胰腺癌组织中呈高表达,与胰腺癌患者临床分期及预后关系密切.     

Expression of relevance and significance of MCT1,CD147 in non-small cell lung cancer

目的 探讨单羧酸转运泵家族1(MCT1)、CD147(EMMPRIN)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达规律及其在NSCLC发生、发展、预后中的意义.方法 取经病理确诊的56例NSCLC患者癌组织、癌旁组织(距肿瘤边缘＞5 cm)和20例肺良性病变组织,并将癌旁组和肺良性病变组划为对照组与肺癌组比较,采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测MCT1、CD147蛋白及mRNA表达,进行定性和定量分析.结果 ①在NSCLC组织中MCT1、CD147表达均明显高于癌旁组织及肺良性肿瘤差异具有统计学意义(P＜0.05);② MCT1在肺癌细胞膜中表达、CD147表达呈正相关(P＜0.05);③ MCT1、CD147表达与NSCLC患者的肿瘤组织类型、淋巴转移均有关(P＜0.05),另外MCT1(细胞膜)蛋白表达还与肿瘤分化程度及吸烟史有关(P＜0.05),MCT1 mRNA表达还与肿瘤分化程度有关(P＜0.05).结论 在NSCLC患者组织中MCT1、CD147的表达具有显著相关性.     

CD163、E-Cadherin在非小细胞肺癌肿瘤芽殖中的表达及意义

目的 探讨血红蛋白清道夫受体(CD163)、E钙粘附蛋白(E-Cadherin,E-Cad)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)肿瘤芽殖(Tumor Budding)中的表达情况及对预后的影响.方法 收集海口市人民医院手术切除经病理证实的NSCLC组织标本60例(其中鳞状细胞癌30例,肺腺癌30例),采用免疫组化法检测CD163、E-Cad在实体瘤、肿瘤芽殖(Tumor budding)及周围正常肺组织中的表达情况.结果 NSCLC肿瘤芽殖中CD163阳性率为55.0％(33/60)显著高于实体瘤的31.7％(19/60)和正常肺组织的0％(0/60),肿瘤芽殖中CD163阳性率与病理分级、淋巴结转移有关(P＜0.05).E-Cad在肿瘤芽殖中的阳性率33.3％ (20/60),明显低于实体瘤的51.7％(31/60)和正常肺组织的100％ (60/60).肿瘤芽殖中E-Cad与病理分级、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 NSCLC肿瘤芽殖中的CD163高表达、E-Cad低表达与临床预后有一定关系.     

连翘苷对H1N1病毒株感染小鼠的作用

目的 研究连翘苷对H1N1病毒株感染小鼠的影响。方法 60只H1N1病毒株感染小鼠经随机数字法分为感染组、连翘苷组、连翘苷+罗唑利宾(Loxoribine)[Toll样受体7(TLR7)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路激活剂]组,各20只;20只健康小鼠滴鼻等体积0.9%氯化钠溶液,设为正常组。流式细胞仪检测外周血CD4＋、CD8＋T淋巴细胞占比;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测肺组织病毒相对表达量;Western blot法检测肺组织TLR7、MyD88蛋白表达量。结果 与感染组比较,连翘苷组外周血CD8＋T淋巴细胞占比、肺组织病毒相对表达量、TLR7、MyD88蛋白表达量降低,外周血CD4＋T淋巴细胞占比、CD4＋/CD8＋升高(P＜0.05);与连翘苷组比较,连翘苷+Loxoribine组外周血CD8＋T淋巴细胞占比、肺组织病毒相对表达量、TLR7、MyD88蛋白表达量升高,外周血CD4＋T淋巴细胞占比、CD4＋/CD8＋降低(P＜0.05)。结论 连翘苷可抑制H1N1病毒株感染小鼠病毒复制,改善肺功能及免疫功能,可能通过抑制TLR7/MyD88信号通路活性降低炎性细胞因子水平,从而保护H1N1感染小鼠。     

T淋巴细胞亚群水平对IPF诊断及预后的评估价值

目的分析特发性肺间质纤维化(IPF)患者T淋巴细胞亚群变化及其与预后的关系。 方法选取60例IPF患者作为IPF组,根据随访结果分为预后不良组和预后良好组,另选取30例健康体检者作为对照组。比较各组外周血T淋巴细胞亚群水平,分析IPF患者T淋巴细胞亚群水平与高分辨率计算机断层扫描(HRCT)纤维化评分、肺功能及预后的关系。 结果治疗前,IPF组患者外周血CD8＋水平高于对照组,CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8＋水平低于对照组(P＜0.05)。IPF组患者入院时CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8＋水平与肺功能指标呈正相关,与HRCT评分呈负相关(P＜0.05);CD8＋水平与肺功能指标呈负相关,与HRCT评分呈正相关(P＜0.05)。预后良好组治疗后外周血CD8＋水平低于预后不良组,CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8＋水平高于预后不良组(P＜0.05);IPF患者治疗后外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋ROC曲线下面积分别为0.732、0.744、0.756、0.796(P＜0.05)。 结论T淋巴细胞亚群水平与IPF患者的预后密切相关,CD8＋高水平,CD3＋、CD4＋低水平可提示其预后不良。     

MIF和CD147在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 利用组织芯片技术探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)在非小细胞肺癌(NSCLC)及其淋巴结转移灶中的表达和意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测40例良性病变肺组织、327例NSCLC原发灶以及112例淋巴结转移灶中MIF和CDl47的表达.结果 MIF和CD147在良性病变肺组织、NSCLC原发灶以及淋巴结转移灶中的表达逐渐增强,差异具有统计学意义(P＜0.05).在NSCLC原发灶中,MIF和CD147的表达与淋巴结转移和TNM分期密切相关(P均＜0.05).Spearman等级相关分析显示MIF与CD147的表达呈正相关(r=0.400,P=0.000).Kaplan-Meier生存分析显示MIF和CD147高表达组的总体生存率均低于低表达组(P＜0.05).Cox回归分析提示肿瘤的分化程度、淋巴结转移、TNM分期以及CD147的表达是影响NSCLC患者预后的独立危险因素(P＜0.05).结论 MIF和CD147在NSCLC的浸润、转移中具有重要意义,有助于对NSCLC患者预后的评价.     

抗精子抗体和抗子宫内膜抗体与不孕及流产的关系

目的　探讨抗精子抗体（ＡｓＡｂ）与抗子宫内膜抗体（ＥＭＡｂ）在不孕、流产中的作用及二者关系,进一步 揭示不孕、流产的病因。方法　采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测３４５例不孕、流产妇女血清中的ＡｓＡｂ与 ＥＭＡｂ,按ＡｓＡｂ检测结果分阳性组和阴性组,比较两组ＥＭＡｂ阳性率的差异。结果　原发不孕及自然流产妇女中, ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率高达１６．６７％和１９．５１％,而ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率高达４３．６４％和４２．８６％,显著高于 ＡｓＡｂ（－）组（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）。继发不孕妇女中ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率为１８．１８％,ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率 为３２．２％,二者无显著性差异（０．０１＞Ｐ＞０．０５）。结论原发不孕及自然流产妇女中因个体免疫反应差异使某些 人易对体内、外物质发生免疫反应而产生抗体,从而导致不孕或流产。     

亚硝基脲类和亚硝基硫脲类的理化性质及致突变能力

本题选择N,N′-二甲基亚硝基脲(DMNU),N,N′-二乙基亚硝基脲(DENU),及其类似物N,N′-二甲基亚硝基硫脲(DMNTU)、N,N′-二乙基亚硝基硫脲(DENTU)为代表,测定了这些化合物的水解反应速度、脂溶性(HPLC的logk′值)、水解产物和致突变能力。证明了硫脲的脂溶性大于脲的脂溶性。DMNTU对TA100菌株的致突变能力最强,其它较弱。     

水疗联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响

目的探讨新生儿游泳联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响。方法将经阴道顺产分娩的正常新生儿100例随机分为两组，观察组（水疗联合抚触组）50例，对照组（单纯沫浴组）50例。①测定两组10日、28日的体重、身长、上臂围；②观察记录胎便转黄时间，测定皿清胆红素；③记录24h睡眠时间。结果两组新生儿10日、28日体重、身长、上臂同增长有显著差异（P〈0．05），两组新生儿5日时，胎便转黄时间及黄疸指数比较均有显著性差异（P〈0．01），两组睡眠时间比较有统计学意义（P〈0．05），两组并发症比较无统计学意义（P〉0．05）。结论新生儿水疗联合抚触可促进新生儿的生长发育，能加速胎粪的早排出，减轻生理性黄疸程度，有效地降低新生儿高胆红素血症的发病率，提高睡眠质量。     

经络腧穴理论的形成与发展

从<脉书·十一脉><黄帝内经>等文献人手,梳理了血气、经络、腧穴理论的形成与发展,简要介绍了四肢部的基本腧穴、躯体部要穴,以及腧穴配伍的基本要义.     

心肾不交与基因/蛋白质失联之相关性及其临床意义

根据DNA与蛋白质相互作用原理,以及DNA-蛋白质与中医心肾关系的认识,通过分析中西医临床研究,发现中医"心肾不交"与"基因-蛋白质失联"有诸多吻合之处。认为两者相互印证、互补长短、相得益彰的深入研究,将会使中医交通心肾方法与方药得到更多的开发与推广应用。     

Exosomes与肾脏生理及疾病

胞外体（exosomes）是由细胞内多泡体与细胞膜融合后释放到细胞外基质中直径30～100nm的膜性小囊泡,内含来源细胞的mRNA、miRNA和蛋白质等成分,能反映来源细胞的生物学信息,可能成为潜在的生物学标志物。Exosomes在信号转导、诱导机体抗肿瘤和免疫耐受等方面的作用是近年来研究的热点,并已成为一种新型治疗手段。尿液exosomes与肾脏生理功能及疾病之间有着密切的关系,但其研究尚处于初期阶段。文章就exosomes的生物学特性、生理功能、分离纯化及其在肾脏疾病方面的标志物作用和治疗价值的研究进展作一综述。     

浅谈梅毒的流行与防治

本文报告了梅毒的流行、预防和各期的治疗及胎传梅毒的治疗。     

疟疾知信行现状和影响因素

疟疾是世界范围内的重要公共卫生问题。疟疾相关知识、态度和行为的调查有助于了解当地居民对疾病的认知水平,为制定有效的防控措施提供重要依据。本文综述了疟疾相关知信行调查研究现状及其影响因素。     

经络学说与切诊

结合古典文献研究,从对体表循经按压产生的经络反应,腧穴反应,切脉诊反应,切脉诊络、切脉诊络,辨证归纳,辨位归经几个方面论述了经络学说与中医临床诊断的密切关系,从而为中医临床各科的辅助诊断提供依据。     

大鼠/小鼠证候及辨证论治方法学的探索与发展

从大鼠/小鼠四诊和辨证方法的提出与创建,大鼠/小鼠计量化辨证方法的建立,荷瘤小鼠证候发生和演变的揭示,大鼠/小鼠异病同证、同病异证的研究,荷瘤小鼠个体化辨证论治及计量化疗效评价,以及不同证候荷瘤小鼠神经—内分泌—免疫网络基因转录与剪接的特征等方面,总结项目组长期以来所提出的系列假说及开展的大量研发工作,对所解决的学术问题,以及该领域存在问题、前沿和发展趋势做了评述。