HDAC1调控Wnt/β-catenin信号通路对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:研究组蛋白脱乙酰酶1(HDAC1)对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:RT-qPCR和Western blot法分别测定正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平。在MDA-MB-231细胞中转染HDAC1 si RNA,RT-qPCR和Western blot测定HDAC1的表达水平,MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定凋亡,Western blot测定细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cleaved caspase-3的蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理下调HDAC1表达后的乳腺癌细胞,测定细胞活力和凋亡。结果:乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平均明显高于正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P 0. 01),并且MDA-MB-231细胞中的HDAC1水平最高。HDAC1 si RNA可以降低乳腺癌细胞中HDAC1的m RNA和蛋白水平。敲减HDAC1表达后的MDA-MB-231细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3水平升高,β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白水平降低(P 0. 05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以逆转HDAC1下调诱导的MDA-MB-231细胞凋亡和细胞活力降低,减少cleaved caspase-3的水平(P 0. 05)。结论:敲减HDAC1的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活诱导乳腺癌细胞凋亡。     

MDA-7/IL-24 inhibits the growth and induces the apoptosis of human breast cancer MDA-MB-231 cell line

目的 探讨IL-24基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制和促凋亡作用.方法 利用脂质体将穿梭质粒pDC316-hIL-24-EGFP瞬时转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过RT-PCR检测转染后hIL-24基因mRNA的转录,Western blot检测转染后IL-24和caspase-3蛋白的表达,MTT比色法测定细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.结果 IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达.IL-2可上调MDA-MB-231细胞中caspase-3蛋白表达.IL-24基因的表达使得乳腺癌MDA-MB-231细胞出现增殖抑制.流式细胞仪检测显示MDA-MB-231细胞DNA合成受到抑制,细胞周期主要抑制在G2/M期.Hoechst 33258染色显示IL-24基因转染后MDA-MB-231细胞出现凋亡.结论 IL-24基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后可能通过上调caspase-3的表达而抑制细胞增殖,促进其凋亡.     

miR-181通过Prox1促进人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖并抑制凋亡

目的观察miR-181、同源异型盒转录因子(Prox-1)对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响,探讨miR-181及Prox-1在乳腺癌发生发展中的作用。方法荧光定量PCR检测癌旁乳腺组织、导管内癌组织、浸润性导管癌组织中miR-181的表达;pRFP-miR-181-inhibitor质粒转染乳腺癌细胞系MCF-7,荧光定量PCR和Western blot检测Prox1 mRNA及蛋白水平;EdU检测细胞增殖;TUNEL试剂盒检测细胞凋亡。结果与癌旁乳腺组织比较,导管内癌组织、浸润性导管癌组织内miR-181 mRNA表达上调(P0.01);抑制MCF-7细胞内的miR-181的表达,Prox1在蛋白水平明显上调(P0.05);MCF-7细胞的增殖能力减弱(P0.05)而凋亡增强(P0.05)。结论 miR-181可能通过抑制Prox1促进细胞的增殖、抑制细胞的凋亡,参与了乳腺癌的发生。     

乳腺癌组织及细胞系中CCDC34的表达及其生物学功能

目的 探索乳腺癌组织及细胞系中CCDC34的表达情况及其对乳腺癌细胞增殖能力的影响。方法免疫组织化学染色方法检测34例乳腺癌组织及15例癌旁正常乳腺组织中CCDC34的表达和定位情况;利用Kaplan-Meier Plotter和The Human Protein Atlas数据库分析CCDC34与乳腺癌患者预后的相关性;Western blot检测人正常乳腺细胞MCF-10A及乳腺癌细胞SKBR-3、MCF-7、MDA-MB-453和MDA-MB-231中CCDC34的表达情况;在MCF-7和MDA-MB-231细胞中瞬时转染CCDC34,使用MTT的方法检测CCDC34对乳腺癌细胞增殖能力的影响。结果 CCDC34在乳腺癌组织的表达显著低于癌旁正常乳腺组织（P<0.01）;CCDC34在乳腺癌中的表达水平与患者的不良预后显著负相关（P<0.01）;CCDC34在乳腺癌细胞中的表达普遍低于人正常乳腺细胞MCF-10A(P<0.01);MTT检测结果显示,转染CCDC34显著抑制了乳腺癌细胞MCF-7(Luminal A)和MDA-MB-231(basal)细胞的增殖能力（P<0.05）。结论 乳腺癌组织及细胞系中CCDC34的表达普遍降低,CCDC34能够抑制乳腺癌细胞的增殖能力,并与乳腺癌患者的良好预后相关。     

CTCF在乳腺癌中的表达及其对细胞增殖的影响

目的观察抑癌基因CTCF在乳腺癌细胞系、乳腺癌患者肿瘤组织及血清中的表达水平,并初步探讨其对乳腺癌细胞MCF7增殖的影响。方法 Western blot检测人乳腺癌细胞系MCF7、SKBR3和MDA-MB-231及正常乳腺细胞MCF-10A中CTCF蛋白的表达。实时荧光定量PCR和免疫组织化学法分别检测乳腺浸润性导管癌(n=23)、癌旁组织(n=10)及乳腺纤维腺瘤(n=10)中CTCF mRNA和蛋白水平的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中CTCF的水平。进一步构建包装含CTCF的反转录病毒,感染MCF7细胞,筛选出稳定表达CTCF的细胞系,MTT法检测细胞的增殖。结果 CTCF在MCF-10A中表达最高,MCF7、SKBR3和MDA-MB-231中逐渐降低。乳腺癌组织中CTCF表达显著低于癌旁组织及乳腺纤维腺瘤组织(P0.01),CTCF在乳腺癌患者血清中表达量也显著低于健康对照(P0.01)。CTCF过表达能抑制MCF7细胞的增殖。结论 CTCF在乳腺癌细胞系、乳腺癌患者肿瘤组织及血清中表达降低。CTCF可抑制乳腺癌细胞的增殖。     

乳腺癌中HCCR-1的表达及干扰HCCR-1对MCF-7细胞生物学行为的影响

目的 探讨HCCR-1在乳腺浸润性导管癌中的表达及其对乳腺癌细胞体外增殖、凋亡、迁移的影响。方法 采用免疫组化法检测HCCR-1在乳腺浸润性导管癌中的表达，分析其与乳腺癌临床病理特征的关系。应用siRNA干扰乳腺癌细胞株MCF-7中HCCR-1表达，采用qRT-PCR和Western blot法验证siRNA的干扰效率。应用CCK-8实验检测细胞增殖；细胞凋亡实验检测细胞凋亡；Transwell实验检测细胞迁移能力。结果 HCCR-1在乳腺浸润性导管癌中高表达(66.9%,107/160)。HCCR-1表达与临床分期、组织学分级、淋巴结转移、ER表达、PR表达相关(P<0.05)。HCCR-1-siRNA可显著下调MCF-7中HCCR-1的表达(P<0.001)。CCK8实验显示：干扰HCCR-1表达可抑制MCF-7的增殖(P<0.05)。细胞凋亡实验显示：干扰HCCR-1表达可促进MCF-7的凋亡(P<0.05)。Transwell实验显示：干扰HCCR-1表达可抑制MCF-7的迁移(P<0.05)。结论 HCCR-1在乳腺浸润性导管癌中高表达，HCCR...     

长链非编码RNA SPATA31D5P吸附微小RNA-320a促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 乳腺癌(BC)中存在多种长链非编码RNA (lncRNA)的异常表达,并且与生存预后密切相关.本研究旨在探讨lncRNA SPATA31DSP在乳腺癌中的表达并通过吸附miR-320a影响乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力.方法 收集乳腺癌组织及癌旁组织各30例,采用Real-time PCR检测SPATA31 D5P在乳腺癌组织及乳腺癌细胞系中的表达水平.选择乳腺癌MDA-MB-231细胞转染针对SPATA31D5P siRNA干扰载体,采用CCK-8法、5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、Transwell小室实验和细胞划痕实验测定细胞增殖、侵袭和迁移能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡的改变.采用生物信息学方法筛选可与SPATA31D5P互补结合的miRNAs,Real-time PCR及双荧光素酶报告实验验证SPATA31 D5P对miR-320a的调控作用.结果 乳腺癌组织中SPATA31D5P水平显著高于邻近正常乳腺组织,各乳腺癌细胞系中SPATA31 D5P表达都高于正常乳腺上皮细胞MCF10 A.siRNA干扰组的SPATA31D5P水平为0.288±0.052,低于空白对照组的1.114±0.096和阴性对照(NC)组的1.079±0.128(P＜0.01).与NC组和空白对照组相比,干扰组MDA-MB-231细胞的增殖活力明显下降并出现G1期阻滞,凋亡率明显增加(P＜0.01);干扰组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为(14.36±1.75)％和(26±1.52)个,低于NC组的(52.25±1.87)％和(67.33±2.91)个(P＜0.01).双荧光素酶实验证实,SPATA31D5P能够直接调控miR-320a的表达及荧光素酶活性.结论 SPATA31D5P在乳腺癌中高表达,干扰其表达能有效抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向调控miR-320a有关.     

优降宁与奥沙利铂协同抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖

目的研究优降宁抑制赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)对奥沙利铂抗人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖作用的影响及其用于抗人三阴性乳腺癌临床研究的潜在价值。方法优降宁和奥沙利铂单独以及联合处理MDAMB-231细胞后,CCK-8法分析细胞增殖; Western blot检测细胞内LSD1表达及其下游底物组蛋白H3K4二甲基化修饰水平、下游基因E-cardherin表达和Bax、Bcl-2及细胞浆内细胞色素C蛋白水平; Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡。结果优降宁能够以时间和剂量依赖性地抑制MDA-MB-231细胞增殖(P0. 05); 1 mmol/L优降宁可显著抑制MDAMB-231细胞内LSD1蛋白的组蛋白去甲基化酶活性(P0. 05); 1 mmol/L优降宁和奥沙利铂联合处理具有抑制MDAMB-231细胞增殖的药物协同效应; 1 mmol/L优降宁显著促进奥沙利铂诱导MDA-MB-231细胞凋亡发生(P0. 05),伴随着Bax基因表达上调、Bcl-2基因表达下调和细胞色素C从线粒体向细胞浆的转移。过表达LSD1则可部分逆转优降宁与奥沙利铂对MDA-MB-231细胞增殖的协同抑制(P0. 05)。结论优降宁通过抑制LSD1促进奥沙利铂诱导的MDA-MB-231细胞增殖抑制、细胞凋亡,并产生药物协同效应抑制MDA-MB-231细胞增殖。     

长链非编码RNA LSINCT5在乳腺癌的表达及其对细胞增殖和转移的影响

目的探讨长链非编码RNA LSINCT5(lncRNA LSINCT5)在乳腺癌组织的表达及其临床意义,研究其对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭功能的作用。方法选取80例手术切除的乳腺癌组织及癌旁组织为研究对象,采用qRT-PCR检测LSINCT5的表达水平。收集和分析患者临床病例资料与LSINCT5表达水平的相关性。将LSINCT5-si RNA分别转染人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞系,qRT-PCR检测LSINCT5的细胞表达水平,镜下观察细胞形态,CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞术实验检测肿瘤细胞周期变化,通过划痕实验及Transwell实验分别检测细胞迁移及侵袭功能的影响。结果 LSINCT5的表达在乳腺癌组织及细胞系中明显升高(P0.01)。LSINCT5表达水平与乳腺癌患者TNM分期、淋巴结转移、PR和Ki-67相关(P 0.01),而与年龄、病理类型、ER和Her2无关(P 0.05)。下调LSINCT5表达的MDA-MB-231和MCF-7细胞系的增殖能力明显减弱,细胞周期受到抑制,且肿瘤细胞的迁移及侵袭数量显著减少,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论 LSINCT5的表达与乳腺癌发生、进展密切相关,可能成为乳腺癌诊断的潜在生物学标志物。LSINCT5促进乳腺癌细胞的增殖和转移,可能为寻找乳腺癌新的治疗靶点提供理论依据。     

人CYP4Z1基因重组慢病毒载体的构建、鉴定及抑制乳腺癌细胞增殖

目的研究CYP4Z1 RNAi慢病毒表达载体作用人乳腺癌细胞后对CYP4Z1 mRNA表达及对细胞增殖和MAPK信号通路的影响。方法用RT-PCR和Western blot检测MDA-MB-468、T-47D和MDA-MB-231细胞中CYP4Z1的表达。构建3种CYP4Z1 RNAi慢病毒载体,转染CYP4Z1高表达的乳腺癌细胞,筛选出干扰效果最好的靶点序列。用RT-PCR检测转染后CYP4Z1 mRNA表达。用MTT和Western blot分别检测CYP4Z1 siRNA后对乳腺癌细胞增殖和MAPK信号通路的影响。结果在MDA-MB-468细胞中CYP4Z1 mRNA和蛋白表达显著高于MDA-MB-231及T-47D乳腺癌细胞(P0. 05)。成功构建了3组重组慢病毒载体(LV-CYP4Z1-RNAi-1/2/3),3组重组慢病毒感染MDA-MB-468细胞系后,CYP4Z1 mRNA的表达受到抑制,其中以LV-CYP4Z1-RNAi-2组抑制作用最显著,敲减率达到81%(P0. 01)。与正常对照组相比,CYP4Z1-RNAi-2组MDA-MB-468细胞增殖受到抑制,p-ERK1/2表达水平显著降低(P0. 05)。结论成功构建了CYP4Z1 RNAi慢病毒表达载体,且CYP4Z1-RNAi-2可通过下调ERK1/2通路抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖。     

RNA干扰Notch1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默Notch1基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并合成靶向Notch1基因的小分子干扰RNA质粒,在转染试剂Sofast介导下转染人乳腺癌细胞株MCF-7,用RT-PCR和Western blot法检测转染前、后Notch1基因的表达,挑选干扰效率最强的一组表达载体;cck8比色法检测分析各组细胞的存活率;流式细胞术检测细胞凋亡比例;Western blot法检测转染各组MCF-7细胞Notch1、NF-κB及Caspase-3蛋白表达。结果 Notch1-shRNA能有效封闭Notch1基因的表达,Notch1基因和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);Notch1-shRNA能明显抑制细胞增殖(P<0.05);转染48h后细胞凋亡比例增加(P<0.01)。NF-κB蛋白水平表达降低,Caspase-3蛋白表达水平增高。结论利用RNA干扰技术沉默Notch1基因的表达可以明显抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞凋亡,其机制可能通过NF-κB信号通路调节相关凋亡蛋白的表达,进而影响细胞的凋亡和增殖,靶向Notch1的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的研究价值。     

阿魏酸通过雌激素受体α调控人乳腺癌细胞系的增殖、迁移及侵袭

目的观察阿魏酸是否可调控人乳腺癌细胞系MCF-7长非编码RNA(lncRNAs)的表达水平及对细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法用0,1、2. 5、5、7. 5或10 mmol/L阿魏酸处理24 h后,CCK-8法检测细胞活力(n=3);软琼脂成瘤实验检测细胞体外成瘤能力; 0或2. 5 mmol/L阿魏酸处理24 h后,划痕实验及Transwell穿膜实验检测细胞增殖、迁移及侵袭能力(n=3);基因干扰和过表达技术检测雌激素受体α(ERα)是否参与阿魏酸对乳腺癌细胞的调控;反转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MALAT-1 mRNA表达。结果相比于对照组,阿魏酸呈浓度依赖性增加MCF-7细胞活力、增殖、成瘤、迁移和侵袭能力(P0. 05)。干扰ERα减弱阿魏酸对MCF-7细胞生理过程的调控;过表达ERα增强阿魏酸对MB231细胞的调控。同时发现阿魏酸通过ERα调控MALAT-1的表达。结论阿魏酸通过MCF-7中ERα的介导,调控了MALAT-1的表达与乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

沉默PARP-1对乳腺癌细胞MCF-7顺铂耐药的影响

目的:探究沉默多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)对乳腺癌细胞MCF-7顺铂耐药的影响及可能的作用机制。方法:Western blot及real-time PCR实验检测乳腺癌细胞株MCF-7及相应耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的表达情况。采用转染PARP-1小干扰RNA(siRNA)的方法沉默乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测PARP-1、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、caspase-3、细胞色素C(Cyto-C)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化ERK(p-ERK)的蛋白水平。结果:耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株(P0.05);并且在亲本细胞株MCF-7中加入顺铂刺激后,PARP-1的蛋白表达水平明显升高(P0.05)。沉默PARP-1可诱导乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP的凋亡,增强细胞对顺铂的敏感性,还可下调Bcl-2/Bax和p-ERK的蛋白水平,同时上调cleaved caspase-3及Cyto-C的蛋白水平。而应用ERK特异性抑制剂U0126后,PARP-1沉默组的细胞活力进一步降低。结论:沉默乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的表达可恢复细胞对顺铂的敏感性,促进细胞经线粒体途径的凋亡,其机制可能与其抑制ERK的磷酸化,进而阻断该信号通路有关。     

二甲双胍联合紫杉醇对人乳腺癌细胞凋亡及AMPK信号通路的影响

目的:探索二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞活力和凋亡的影响及其可能的机制。方法:采用不同浓度(2、5、10、20、40和80 mmol/L)二甲双胍作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞的活力。采用2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合处理细胞,并加入一磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)信号转导通路抑制剂compound C。实验分为对照组、二甲双胍组、紫杉醇组、联合组和联合+compound C组;流式细胞术检测细胞的凋亡率,采用RT-qPCR和Western blot法检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA和蛋白表达量,Western blot检测AMPK和P21蛋白的表达量。结果:不同浓度二甲双胍(2、5、10、20、40和80 mmol/L)显著抑制乳腺癌细胞的活力(P 0. 05),且具有一定浓度依赖性。与对照组相比,2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合均可显著抑制细胞活力并诱导其凋亡(P 0. 05),显著下调Bcl-2水平(P 0. 05),上调Bax和caspase-3水平(P 0. 05),促进AMPK和P21蛋白表达。联合使用的效果优于单独使用。加入AMPK抑制剂可削弱此作用。结论:二甲双胍联合紫杉醇可抑制乳腺癌MCF-7细胞活力,诱导其凋亡。此作用与激活AMPK信号转导通路并调节细胞凋亡信号通路有关。     

IL-6调控miR-204及Notch1促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

为探讨IL-6在人乳腺癌组织中的表达水平及其对人乳腺癌细胞MCF-7 Notch信号通路、增殖、迁移和侵袭的影响,采用免疫组化法检测IL-6在人乳腺癌组织中的表达水平,并以50 ng/mL外源性IL-6干预MCF-7细胞,采用MTT、Transwell和qRT-PCR检测细胞增殖、迁移、侵袭能力及细胞中miR-204和Notch1的表达。在MCF-7细胞中过表达miR-204后检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。用TargetScan在线预测、双荧光素酶报告基因试验和Western blotting验证miR-204与Notch1的靶向关系。将miR-204 mimics转染至MCF-7细胞并联合外源性IL-6干预后检测细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果显示,与癌旁正常组织比较,IL-6在人乳腺癌组织中高表达(P0.05)。以50 ng/mL外源性IL-6干预MCF-7细胞对细胞的增殖、迁移和侵袭具有促进作用(P0.05),同时能够下调miR-204 mRNA(P0.05)、上调Notch1 mRNA表达(P0.05)。而过表达miR-204能够抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P0.05)。miR-204能够靶向调控Notch1表达(P0.05)。过表达miR-204能够减弱外源性IL-6对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用(P0.05)。该研究提示,IL-6可通过调控miR-204和Notch信号通路促进MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭。     

VDUP1对乳腺癌细胞MCF-7增殖及迁移的影响

目的:探讨过表达/沉默维生素D3上调蛋白1(vitamin D3 up-regulated protein 1,VDUP1)基因对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖和迁移能力的影响及相关作用机制。方法:通过基因过表达/干扰技术上调/下调乳腺癌细胞系MCF-7中VDUP1基因的表达;实时荧光定量PCR检测细胞中VDUP1的mRNA表达水平;CCK-8法、Brd U实验和Transwell细胞迁移实验分别用于检测细胞增殖和迁移能力;Western blot检测细胞中Akt、p-Akt、GSK3β和p-GSK3β的蛋白水平。结果:基因过表达/干扰技术可上调/下调乳腺癌细胞系MCF-7中VDUP1基因的表达;过表达VDUP1基因后,MCF-7的细胞活力、DNA合成和细胞迁移能力显著降低(P0.05),而沉默VDUP1基因后,MCF-7的细胞活力、DNA合成和细胞迁移能力则显著升高(P0.05)。此外,过表达VDUP1基因可下调p-Akt和p-GSK3β的蛋白水平(P0.05),而沉默VDUP1基因的结果则相反。结论:改变VDUP1基因表达水平可影响MCF-7细胞的增殖和迁移能力,其作用机制可能与Akt/GSK3β信号通路有关。     

靶向沉默IL-6对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:观察白细胞介素6(IL-6)与人乳腺癌MCF-7细胞生长、侵袭和迁移的关系及其作用机制。方法:合成IL-6小干扰RNA(si RNA),并转染至MCF-7细胞中。实验分为空白对照组、阴性对照组和IL-6 si RNA组。通过MTT实验观察沉默IL-6基因表达对细胞活力的影响,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力的变化,采用q PCR和Western blot法检测转染后IL-6表达水平的变化,同时采用Western blot法观察上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白水平。结果:与对照组相比,转染IL-6 si RNA的MCF-7细胞中IL-6的表达量显著下降(P 0. 05)。沉默IL-6表达显著抑制MCF-7细胞的活力(P 0. 05),并降低其侵袭和迁移能力(P 0. 05),显著抑制N-cadherin和vimentin的表达(P 0. 05),细胞中STAT3无明显变化,p-STAT3、MMP-2和MMP-9的蛋白水平显著降低(P 0. 05)。结论:沉默IL-6表达可能通过抑制EMT,并降低STAT3的磷酸化水平进而抑制MMP-2和MMP-9的分泌,从而减弱乳腺癌MCF-7细胞的活力,并降低其侵袭和迁移能力。     

敲减Rab1A表达通过抑制AKT的磷酸化抑制乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探究Rab1A基因表达的改变对乳腺癌细胞MDA-MB-231恶性生物学行为的影响。方法:Western blot检测Rab1A在乳腺癌组织及癌旁正常组织的表达和Rab1A在乳腺正常上皮及不同乳腺癌细胞系中的基础表达。设计并构建靶向Rab1A的小干扰RNA(siRNA),Western blot法验证敲减效果;分别采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞术和Western blot观察Rab1A基因表达改变对乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响和相关蛋白表达的改变。结果:Rab1A在乳腺正常组织和细胞中低表达,在癌组织及癌细胞中高表达(P0.05);与对照组相比,干扰Rab1A的表达可以显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的活力(P0.05),诱导凋亡增加(P0.05),G_2/M期细胞比例增加(P0.05),迁移与侵袭能力减弱(P0.05),p53、Bax、cleaved caspase-3和PTEN的蛋白水平升高(P0.05),Bcl-2、cyclin D1、cyclin B1、基质金属蛋白酶2(MMP2)、p-AKT和mTOR的蛋白水平降低(P0.05)。结论:Rab1A具有调控乳腺癌细胞生长、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡的能力,并调控增殖、周期和凋亡相关蛋白的表达。干扰Rab1A可通过抑制AKT通路的磷酸化从而抑制乳腺癌的演进与发展;Rab1A可能是基因治疗乳腺癌的一个潜在靶点。     

FOXM1在人乳腺癌组织和MCF-7细胞中的表达及临床意义

目的研究FOXM1在乳腺癌组织中的表达与患者临床病理学特征的关系及其对乳腺癌细胞增殖能力的影响。方法在组织水平,用免疫组织化学法检测147例乳腺癌组织中FOXM1和Ki-67的表达,用卡方检验分析FOXM1的表达与临床病理学特征及Ki-67表达之间的关系。在细胞水平,对乳腺癌MCF-7细胞进行血清饥饿72 h后用Western blot法检测乳腺癌细胞周期。最后干扰MCF-7细胞中FOXM1的表达,分析细胞的增殖能力。结果FOXM1在乳腺癌组织中高表达,FOXM1与Ki-67的表达趋势一致。乳腺癌组织中FOXM1的表达与Her-2(P0.05)、淋巴结转移(P0.05)和Ki-67(P0.05)相关。MCF-7细胞血清饥饿释放后增殖能力增强(P0.05);敲低FOXM1表达水平后,MCF-7细胞的增殖能力减弱(P0.05)。结论 FOXM1表达异常可能与乳腺癌的发生与进展关系密切;其可作为判断乳腺癌预后的指标和潜在的治疗靶点。     

乳腺癌中Livin基因及蛋白表达与细胞凋亡、增殖的关系

目的探讨Livin在乳腺癌表达及其与caspase-3蛋白表达和细胞增殖的相互关系。方法采用SP法免疫组化和原位杂交技术检测Livin在正常乳腺组织（14例）、乳腺增生性病变（14例）、乳腺非浸润性癌（20例）和乳腺浸润性癌组织（52例）中Livin mRNA和其蛋白的表达以及caspase-3、Ki-67在乳腺癌组织中的表达。结果Livin蛋白和mRNA在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌组织中阳性率分别为（7．1％、7．1％）、（28．6％、28．6％）、（65．0％、70．0％）、（73．1％、75．0％）,差异有统计学意义（P〈0．01）。Livin蛋白与mRNA表达之间差异无统计学意义（P〉0．05）。Livin表达与临床分期、淋巴结转移和年龄有关（P〈0．05）,与肿瘤大小和组织学分级无关。Livin蛋白与caspase-3的在乳腺癌表达呈负相关（P〈0．01）。Livin蛋白表达阳性的乳腺癌Ki-67增殖指数（47．32％±22．34％）明显高于Livin蛋白表达阴性的乳腺癌Ki．67增殖指数（18．01％±23．34％）（P〈0．01）。结论Livin基因及蛋白在乳腺癌中表达上调,提示在乳腺癌发生、发展中起重要作用,可作为乳腺癌新的分子标记物,可能成为乳腺癌诱导凋亡治疗的新靶点。Livin蛋白通过与执行型caspase-3结合,抑制其活性,从而阻止细胞凋亡。Livin不仅参与细胞凋亡的调控,还促进了细胞增殖及肿瘤的发生、发展。