最适苦参碱浓度并用冻存保护剂对L-02人肝细胞系冻存保护的效应

目的：观察不同浓度剂量苦参碱与冻存保护剂联用对L-02人肝细胞系液氮冻存复苏后功能的影响，探索一种适合肝细胞保存的新方法。 方法：实验于2005—01／07在南方医科大学中心实验室进行。常规培养的L—02人细胞系用胰酶消化后，将收集的L-02人肝细胞系分别以6种不同的冻存液（10％二甲基亚砜、5％二甲基亚砜＋0mg／L苦参碱、5％二甲基亚砜＋0．2mg／L苦参碱、5％二甲基亚砜＋2mg／L苦参碱、5％二甲基亚砜＋6mg／L苦参碱、5％二甲基亚砜＋10mg／L苦参碱）在液氮中冷冻保存1个月。1个月后快速复苏L-02人肝细胞系，进行存活率、形态学及功能检测。结果：03复苏后L-02人肝细胞系的活存率5％二甲基亚砜＋6mg／L苦参碱组明显高于其他处理组[胰酶刚消化的细胞活率为（96．2&;#177;1．4）％，10％二甲基亚砜组（76．6&;#177;3．8）％，5％二甲基亚砜组（81．9&;#177;2．4）％，5％二甲基亚砜&;#177;0．2mg／L苦参碱组（81．6&;#177;2．4）％，5％二甲基亚砜＋2mg／L苦参碱组（84．7&;#177;2．8）％，5％二甲基亚砜＋6mg／L苦参碱组（89．6&;#177;3．4）％，5％二甲基亚砜＋10mg／L苦参碱组（86．9&;#177;1．6）％，P〉0．051。②复苏后5％二甲基亚砜＋6mg／L苦参碱组肝细胞完整性恢复快，肝细胞生长旺盛，细胞膜完整，胞浆内有丰富颗粒，核仁清楚，与未冻存组肝细胞形态相似。③复苏后L-02人肝细胞系培养上清液尿素含量、上清液白蛋白含量5％二甲基亚砜＋6mg／L苦参碱组明显高于其他处理组，与对照组无显著差异。 结论：①苦参碱对L-02人肝细胞液氮冻存有保护作用，6mg／L苦参碱是最好的浓度。②苦参碱、二甲基亚砜有协同作用，5％二甲基亚砜＋6mg／L苦参碱联合冻存保护体系显著提高L-02人肝细胞系的冻存质量。     

最适苦参碱浓度并用冻存保护剂对L-02人肝细胞系冻存保护的效应

目的:观察不同浓度剂量苦参碱与冻存保护剂联用对L-02人肝细胞系液氮冻存复苏后功能的影响,探索一种适合肝细胞保存的新方法。方法:实验于2005-01/07在南方医科大学中心实验室进行。常规培养的L-02人细胞系用胰酶消化后,将收集的L-02人肝细胞系分别以6种不同的冻存液(10%二甲基亚砜、5%二甲基亚砜 0mg/L苦参碱、5%二甲基亚砜 0.2mg/L苦参碱、5%二甲基亚砜 2mg/L苦参碱、5%二甲基亚砜 6mg/L苦参碱、5%二甲基亚砜 10mg/L苦参碱)在液氮中冷冻保存1个月。1个月后快速复苏L-02人肝细胞系,进行存活率、形态学及功能检测。结果:①复苏后L-02人肝细胞系的活存率5%二甲基亚砜 6mg/L苦参碱组明显高于其他处理组[胰酶刚消化的细胞活率为(96.2±1.4)%,10%二甲基亚砜组(76.6±3.8)%,5%二甲基亚砜组(81.9±2.4)%,5%二甲基亚砜 0.2mg/L苦参碱组(81.6±2.4)%,5%二甲基亚砜 2mg/L苦参碱组(84.7±2.8)%,5%二甲基亚砜 6mg/L苦参碱组(89.6±3.4)%,5%二甲基亚砜 10mg/L苦参碱组(86.9±1.6)%,P>0.05]。②复苏后5%二甲基亚砜 6mg/L苦参碱组肝细胞完整性恢复快,肝细胞生长旺盛,细胞膜完整,胞浆内有丰富颗粒,核仁清楚,与未冻存组肝细胞形态相似。③复苏后L-02人肝细胞系培养上清液尿素含量、上清液白蛋白含量5%二甲基亚砜 6mg/L苦参碱组明显高于其他处理组,与对照组无显著差异。结论:①苦参碱对L-02人肝细胞液氮冻存有保护作用,6mg/L苦参碱是最好的浓度。②苦参碱、二甲基亚砜有协同作用,5%二甲基亚砜 6mg/L苦参碱联合冻存保护体系显著提高L-02人肝细胞系的冻存质量。     

不同冻存液改善人胎肝细胞冻存质量比较

目的：通过对不同冻存液冻存人胎肝细胞进行比较,探索一种效果较好的冻存液以改善冻存肝细胞质量.方法：实验于2004-08/11在南方医科大学珠江医院中心实验室完成.采用二步灌注法分离人胎肝细胞,将分离后的胎肝细胞分别以3组不同冻存液（HAMF-12,RPMI-1640,DMEM）在液氮中冷冻保存4周.4周后快速复苏胎肝细胞,进行存活率、形态学及尿素、白蛋白、谷草转氨酶分泌量检测.结果：①HAMF-12组生存率为（86.0&;#177;2.4）%,明显优于RPMI-1640组（81.9&;#177;6.5）%和DMEM组（82.1&;#177;4.6）%.②HAMF-12组肝细胞极性恢复快,肝细胞生长旺盛,细胞膜完整,胞浆内有丰富颗粒,核仁清楚,少数细胞内出现空泡,与对照组肝细胞形态相似.③用HAMF-12组液冻存人胎肝细胞复苏后,尿素、白蛋白、谷草转氨酶分泌量优于RPMI-1640组和DMEM组.结论：①在其他冻存条件相同下,HAMF-12冻存液显著提高了人胎肝细胞冻存质量,优于RPMI-1640液、DMEM液.②复苏后HAMF-12组肝细胞形态学光镜下观察与刚分离的肝细胞无明显差异,进行原代培养后肝细胞极性恢复较好.     

不同冻存液改善人胎肝细胞冻存质量比较

目的:通过对不同冻存液冻存人胎肝细胞进行比较,探索一种效果较好的冻存液以改善冻存肝细胞质量。方法:实验于2004-08/11在南方医科大学珠江医院中心实验室完成。采用二步灌注法分离人胎肝细胞,将分离后的胎肝细胞分别以3组不同冻存液(H AM F-12,RPM I-1640,DM EM)在液氮中冷冻保存4周。4周后快速复苏胎肝细胞,进行存活率、形态学及尿素、白蛋白、谷草转氨酶分泌量检测。结果:①HAM F-12组生存率为(86.0±2.4)%,明显优于RPM I-1640组(81.9±6.5)%和DM EM组(82.1±4.6)%。②H AM F-12组肝细胞极性恢复快,肝细胞生长旺盛,细胞膜完整,胞浆内有丰富颗粒,核仁清楚,少数细胞内出现空泡,与对照组肝细胞形态相似。③用H AM F-12组液冻存人胎肝细胞复苏后,尿素、白蛋白、谷草转氨酶分泌量优于RPM I-1640组和DM EM组。结论:①在其他冻存条件相同下,HAM F-12冻存液显著提高了人胎肝细胞冻存质量,优于RPM I-1640液、DM EM液。②复苏后H AM F-12组肝细胞形态学光镜下观察与刚分离的肝细胞无明显差异,进行原代培养后肝细胞极性恢复较好。     

传统及改良冻存法对人胎肝细胞保护效果的比较

目的:比较传统及改良冻存法对人胎肝细胞保护效果,建立一种适合于人胎肝细胞冷冻保存的方法。方法:实验于2006-07/11在广州医学院进行。①人胎肝组织取自中期终止妊娠胎儿(20周,经胎儿亲属知情同意及医院伦理委员会批准)。冷冻保护液包括A液(DMEM培养液含1.5mol/L乙二醇 体积分数为0.2胎牛血清);B液(A液 0.1mol/L蔗糖)两部分。②传统冻存法:用0.025%Ⅰ型胶原酶消化胎肝组织,分离、收集消化后的胎肝细胞。胎肝细胞在A液、B液中分别渗透平衡20min后,在冷冻保护B液中经液氮蒸汽冷平衡5min后迅速入液氮冻存,1周后复苏培养观察。③改良冻存法:胎肝组织在A液、B液中分别渗透平衡20min后,在冷冻保护液B液中经液氮蒸汽冷平衡5min后迅速入液氮冻存,1周后复苏,入DMEM培养液37℃孵育1h,胶原酶消化胎肝组织,分离、收集消化后的胎肝细胞培养观察。④新鲜分离的胎肝细胞做为对照组。⑤复苏后分离所得胎肝细胞用锥虫兰染色评估细胞活率,并记录贴壁时间,观察集落生长情况。结果:①锥虫兰染色结果显示传统冻存法复温后的胎肝细胞活率为(73.8±2.2)%,明显低于新鲜分离的胎肝细胞活率(89.2±3.6)%及改良冻存法所得胎肝细胞活率(82.5±4.2)%(P<0.01)。②贴壁情况观察发现新鲜胎肝细胞与改良冻存法胎肝细胞于培养24h开始贴壁,而传统冻存法胎肝细胞贴壁时间滞后48h。③新鲜胎肝细胞及改良冻存法胎肝细胞于第3天出现生长集落(细胞数>10为一个集落),传统冻存法胎肝细胞在第5天出现生长集落,集落的数量低于改良冻存法及对照组(P<0.01)。结论:改良冻存法可避免冻存前损伤,提高细胞对冷冻的耐受性和冻存复温后细胞的活率。     

人胎肝细胞输注治疗肝病在我国的应用

<正> 自从1958年 Uahoff 用胎肝代替骨髓移植成功地治愈了致死量照射的小鼠后,国内外有不少胎肝细胞治疗的实验和临床研究报道,首先应用胎肝细胞(Fetal LiverCell FLC)悬液输注治疗免疫性疾病、代谢病、血液病以及肿瘤化疗的支持疗法,并且取得了肯定的疗效。近年来的动物实验表明,输注同种或异种动物肝细胞,可提高实验性肝功衰竭的存活率。因同种肝细胞来源困难、许多技术问题尚未解决及异种肝细胞的免疫排斥反应等,故目前国外尚未广泛应用肝细胞治疗人类肝病,大多仍处于动物实验阶段。从1985年始,我国学者首先应用 FLC 治疗重症肝炎获得成功,此后又相继应用于慢性肝炎及肝硬化的治疗,初步效果令人满意。兹将 FLC 近年来临床应用治疗上述疾病的进展综述如下。一、治疗重症肝炎 1985～1986年陈成伟首次用 FLC 悬液治疗重症肝炎7例、5例临床治愈,2例有肝昏迷症状者明显好转,以后死于消化道大出血。输注 FLC 后24小时凝血酶元活动度(PA)平均提高16.5%,48     

叶下珠提取物对体外四氯化碳损伤肝细胞的保护作用

目的:观察叶下珠不同溶剂提取物对体外四氯化碳损伤肝细胞的保护作用。方法:实验于2005-07/2006-09在湖南农业大学完成。①称取3份适量叶下珠药材,分别用水、体积分数为0.95的乙醇、体积分数为0.70的乙醇各回流提取3次,分别得到各自的提取物,实验时稀释到所需质量浓度(1,10,100g/L)。②称取叶下珠适量,用体积分数为0.70的乙醇回流提取3次,将其提取液浓缩至干,然后用200～300mL水溶解,其溶解液分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次提取,将各提取液浓缩制成干粉,得各自提取物,实验时稀释到所需质量浓度(1,10,100g/L)。③取生长良好的L-02细胞,制成单个细胞悬液以5×108L-1分别接种于96孔板和24孔板,培养24h后,分为正常组,损伤组,各提取物组。损伤组细胞用含有10mmol/L四氯化碳培养液培养4h。各提取物组预先加叶下珠各提取物干预1h后,再换成含有10mmol/L四氯化碳培养液,继续培养4h,收集上清液用来测谷丙转氨酶活性、谷草转氨酶活性、丙二醛的含量以及用MTT法测定细胞的存活率。结果:①损伤组的谷丙转氨酶活性、谷草转氨酶活性、丙二醛水平明显高于正常组,而经过叶下珠提取物预先处理过的细胞,其谷丙转氨酶活性、谷草转氨酶活性、丙二醛水平显著低于损伤组,各提取物中以100g/L体积分数为0.70的乙醇回流提取物效果最好,而且各提取物对细胞的保护呈剂量依赖关系。②体积分数为0.70的乙醇提取物的不同溶剂提取物组谷丙转氨酶活性、谷草转氨酶活性、丙二醛水平显著低于损伤组,对细胞的保护作用与剂量呈一定剂量依赖性关系,其中以100g/L乙酸乙酯提取物对细胞抗四氯化碳损伤作用效果最为明显。③MTT法测定结果表明,四氯化碳损伤后的损伤组细胞活性明显下降,仅为正常组的25.5%。而预先用叶下珠提取物处理过的细胞,其存活率明显高于损伤组,叶下珠体积分数为0.70的醇提物及其乙酸乙酯提取物组效果最为明显,且存在明显剂量效应关系。结论:叶下珠体积分数为0.70的乙醇提取物及其乙酸乙酯提取物对四氯化碳损伤肝细胞有很好的保护作用,其中以质量浓度为100g/L时,效果最为显著。     

C3A细胞与L-02永生化肝细胞低温保存条件下的生物学特性比较

背景:获得大量功能良好的肝细胞是生物人工肝的核心。探索出一种可靠的肝细胞低温保存方法进而构建一个肝细胞库是目前生物人工肝研究的热点。目的:比较用UW液在4℃条件下保存已经进入Ⅲ期临床试验的C3A细胞与国内构建的永生化肝细胞株L-02细胞的生物学特性。方法:贴壁培养C3A与L-02细胞,胰酶消化,制备成细胞悬液,UW液保存。4℃低温保存0,24,48及72h后,采用流式细胞术分别测定细胞存活率与凋亡率,测定谷草转氨酶与乳酸脱氢酶释放、尿素合成功能及白蛋白分泌功能。结果与结论:随低温保存时间延长,C3A与L-02细胞存活率呈下降的趋势,但C3A细胞的存活率明显高于L-02细胞(P<0.01);细胞凋亡率呈上升趋势,但48h后C3A细胞同L-02细胞无差异(P>0.05)。谷草转氨酶及乳酸脱氢酶释放呈现上升的趋势,但C3A细胞明显低于L-02细胞(P<0.01)。白蛋白分泌功能呈下降的趋势,但C3A细胞明显优于L-02细胞(P<0.01)。尿素合成功能呈下降的趋势,但是L-02细胞明显优于C3A细胞(P<0.01)。结果提示,UW液4℃保存C3A细胞与L-02细胞时间不易超过48h。以C3A细胞为材料的人工肝可能更适用于肝功能衰竭合并低白蛋白血症,以L-02细胞为材料的人工肝更适用于肝功能衰竭合并肝性脑病。     

C3A细胞与L-02永生化肝细胞低温保存条件下的生物学特性比较

背景：获得大量功能良好的肝细胞是生物人工肝的核心。探索出一种可靠的肝细胞低温保存方法进而构建一个肝细胞库是目前生物人工肝研究的热点。目的：比较用UW液在4℃条件下保存已经进入Ⅲ期临床试验的C3A细胞与国内构建的永生化肝细胞株L-02细胞的生物学特性。方法：贴壁培养C3A与L-02细胞,胰酶消化,制备成细胞悬液,UW液保存。4℃低温保存0,24,48及72h后,采用流式细胞术分别测定细胞存活率与凋亡率,测定谷草转氨酶与乳酸脱氢酶释放、尿素合成功能及白蛋白分泌功能。结果与结论：随低温保存时间延长,C3A与L-02细胞存活率呈下降的趋势,但C3A细胞的存活率明显高于L-02细胞（P〈0.01）;细胞凋亡率呈上升趋势,但48h后C3A细胞同L-02细胞无差异（P〉0.05）。谷草转氨酶及乳酸脱氢酶释放呈现上升的趋势,但C3A细胞明显低于L-02细胞（P〈0.01）。白蛋白分泌功能呈下降的趋势,但C3A细胞明显优于L-02细胞（P〈0.01）。尿素合成功能呈下降的趋势,但是L-02细胞明显优于C3A细胞（P〈0.01）。结果提示,UW液4℃保存C3A细胞与L-02细胞时间不易超过48h。以C3A细胞为材料的人工肝可能更适用于肝功能衰竭合并低白蛋白血症,以L-02细胞为材料的人工肝更适用于肝功能衰竭合并肝性脑病。     

苦参碱联合化疗治疗急性淋巴细胞白血病疗效分析

目的观察苦参碱联合长春新碱＋柔红霉素＋强的松（VDP）方案对成人急性淋巴细胞白血病诱导化疗的疗效。方法将57例诊断明确的成人急性淋巴细胞白血病患者分为两组,分别用苦参碱联合VDP方案（34例）和单用VDP方案（23例）进行诱导化疗,对比观察两组疗效。结果苦参碱联合VDP方案与单用VDP方案诱导化疗后完全缓解率（CR）分别为82．35％和52．17％,两组间疗效比较差异有显著性（x^2=5．9701,P〈0．05）,而骨髓抑制方面差异无显著性（x^2=1．7210,P〉0．05）。结论苦参碱联合VDP方案能提高成人急性淋巴细胞白血病的诱导缓解率。     

苦参碱处理的K562细胞中IER3IP1基因表达及其对细胞增殖的影响

目的 研究苦参碱诱导K562细胞分化过程中IER3IP1基因的表达，以明确IER3IP1基因表达与苦参碱作用的量效及时效关系，并初步探讨该基因在K562细胞中的功能。方法 锥虫蓝染色分析苦参碱对K562细胞的生长抑制作用；用RT—PCR半定量方法观察K562细胞在不同时间、不同剂量苦参碱作用下IER3IP1基因的表达情况；对IER3IP1基因重组质粒转染的K562细胞（K562／eYFP—IER3IP1）作细胞形态学及细胞增殖变化的观察，同时进行细胞周期检测以及超微结构观察。结果 苦参碱对K562细胞有增殖抑制作用，在苦参碱作用3h后IER3IP1基因表达可升高3—4倍，并呈剂量依赖性，其后6～48h表达下降，低于非苦参碱处理组。K562／eYFP—IER3IP1细胞的增殖速度显著减缓，G0／G1期细胞数升高（P〈0．05）；且苦参碱作用24h后在光镜和电镜下均可见红系分化细胞增多。结论 苦参碱抑制K562细胞生长，同时使IER3IP1基因表达以剂量依赖的方式瞬时升高，转染了IER3IP1基因的K562细胞对苦参碱敏感性增高，提示该基因可能参与了苦参碱作用于K562细胞的早期反应，并在后续的红系分化中发挥作用。     

Metabolism and toxicity of coumarin on cultured human, rat, mouse and rabbit hepatocytes

Summary— We compared the cytotoxic effect of coumarin and its derivatives, 7-hydroxycoumarin (7-OHC), 4-hydroxycoumarin (4-OHC), o -hydroxyphenyl acetic acid (OHPAA) and o -coumaric acid (CA), on cultured hepatocytes from human, rat, mouse and rabbit liver. At 10⁻⁵ and 5 × 10⁻⁵ M, coumarin and its derivatives did not give rise to any signs of toxicity on cultured hepatocytes of the four species. At 10⁻⁴ M, coumarin, but not its derivatives, induced release of lactate dehydrogenase (LDH) into the medium, especially in rat hepatocyte cultures. Intracellular LDH activities were correspondingly reduced. The cytotoxic effect of coumarin in cultured rat hepatocytes was evidenced on morphological examination and from the results of the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium (MTT) reduction test. At higher concentrations (5 × 10⁻⁴ M), 7-OHC and CA were also found to be cytotoxic in cultured rat hepatocytes. The cytotoxic effect of coumarin (5 × 10⁻⁴ M) was decreased in the presence of SKF 525-A, a cytochrome P450 inhibitor. Interspecies comparisons showed that rat hepatocytes were the most sensitive to the toxicity of coumarin and its derivatives, whereas human hepatocytes were the most resistant. Our results suggest that the cytotoxicity of coumarin is metabolism and species-dependent. Thus, the rat may not be a suitable model for evaluating the pharmacological hazards of coumarin in humans.     

GYC和甘油两种保护剂对精子动态参数的影响

[目的]比较甘油和甘油-卵黄-柠檬酸钠（GYC）2种冷冻保护剂对精子动态参数影响。[方法]精液标本进行速冻和缓慢冷冻保存，计算机精液分析仪进行精子动态参数分析。[结果]冷冻复温后精子动态参数特征与冷冻前精子动态参数特征比较均有显著差异（P〈0．001，P〈0．05）；2种保护剂间精子动态参数比较有显著性差异（P〈0．05）。[结论]冷冻保存影响精子动态参数，GYC保护作用优于甘油。     

复方苦参注射液联合GP方案治疗晚期非小细胞肺癌的评价与分析

目的研究复方苦参注射液联合吉西他滨加顺铂（GP）方案治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效及毒副反应。方法入选病例均为Ⅲ／Ⅳ期非小细胞肺癌,共80例,分为两组：第一组50例,复方苦参注射液联合GP方案;第二组30例,单纯GP方案。结果第一组,完全缓解（CR）0例,部分缓解（PR）24例,总有效率（CR＋PR）48％;第二组完全缓解（CR）0例,部分缓解（PR）13例,总有效率43．33％,两组有效率比较P〉0．05,无显著性差异。结论复方苦参注射液联合GP方案对晚期非小细胞肺癌有减毒增效,提高生存质量的作用。     

苦参碱对受192铱照射人员骨髓细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的:观察苦参碱对受192铱(192Ir)低剂量照射人员骨髓细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法:以受192Ir迁延性低剂量照射(0.05～0.66 Gy)患者54例为研究对象,分别予复方皂矾丸、苦参碱和安慰剂组治疗。采用端粒重复扩增(TRAP)-ELISA方法检测端粒酶活性,AnnexinV-FITC及PI双染,应用FACScan进行流式细胞术定量检测细胞凋亡率,观察受照人员治疗前后骨髓象、骨髓细胞端粒酶活性、细胞凋亡率变化。结果:受照人员骨髓各系均可见形态学异常,总异常率(减低+极度活跃)为20.4%;骨髓细胞端粒酶活性随时间迁延而升高,细胞凋亡率则随时间迁延而降低。经苦参碱及复方皂矾丸组治疗后6个月各系形态异常、端粒酶活性亦逐步恢复接近正常,骨髓细胞凋亡率增高。其中以苦参碱组治疗后疗效更为显著(P<0.01)。结论:苦参碱作为辐射防护剂可诱导受辐照射人员骨髓细胞凋亡,抑制其端粒酶活性高表达。     

The effect of pancreatic islets on transplanted hepatocytes in the treatment of acute liver failure in rats

We previously reported that co-transplantation of hepatocytes and islets of Langerhans in the spleen reduces the mortality rate after 90% hepatectomy in the rat. In the present study, we examined whether implantation of isolated hepatocytes into the pancreas is as efficient as co-transplantation of hepatocytes and islets in this respect. We found that cotransplantation of hepatocytes and islets into the renal subcapsule reduced the long-term (30-day) mortality rate after 90% hepatectomy from 100% to 36% (P<0.05) when performed the day before the hepatectomy. In contrast, there was no significant reduction of mortality when the hepatocytes were transplanted into the pancreas. The results show that a close proximity of transplanted pancreatic islets to the hepatocytes is of critical importance for the improved survival in acute liver failure.     

苦参碱对体外人肺癌A549细胞的抑制作用

目的:研究苦参碱对体外培养人肺癌A549细胞的抑制作用及其机制.方法:用不同浓度的苦参碱作用A549细胞24、48、72 h,以MTT法检测苦参碱对A549细胞的抑制作用,流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期分布时相,TRAP-ELISA法检测端粒酶的活性.结果:随着时间和浓度的增加,苦参碱对A549细胞的抑制作用逐渐增强(P＜0.01);不同浓度苦参碱(0.5、1.0、1.5、2.0 mg/mL)诱导A549细胞的凋亡率分别为3.2%、9.5%、13.4%、17.6%;G0/G1期细胞比例增加,G2/S期细胞比例下降;端粒酶的活性呈浓度和时间依赖性降低.结论:苦参碱可通过抑制端粒酶活性、诱导细胞凋亡抑制体外培养的A549细胞的增殖.     

交感神经递质去甲肾上腺素对肝细胞内核转录因子活化的调控

目的了解交感神经递质去甲肾上腺素对肝细胞内核转录因子NFkB p50／p65及其配体IkBα的表达变化的调控。方法应用终浓度为10μmol／L的去甲肾上腺素作用于Wistar大鼠原代培养肝细胞,作用时相点为5、15、30和60min。收集细胞提取细胞核蛋白,采用EMSA法检测NFkB p50／p65的变化。同样以Western blotting法进行Irk3a含量的检测。结果由EMSA电泳图像中可见NE作用5分钟时即可见到有NFkB p50／p65明显活化,并随时间增强而活化逐渐明显。计算灰度面积值在5min后各测得值均较对照组明显增高（P〈0．01）。NE作用肝细胞5min后,IkBa表达量明显减少,刺激30～60min时只能检测到其微量表达（P〈0．01）。结论NE可导致内皮细胞NFkB p50／p65发生核移位,并使IkBα降解,进而活化NFkB,诱导肝细胞分泌细胞因子。