肠三叶因子在新生鼠坏死性小肠结肠炎模型中对Bax和Bcl-2及Caspase-3表达的影响及意义

目的 通过研究肠三叶因子(ITF)对新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)模型肠组织病理学改变及肠道组织中蛋白酶Caspase-3、蛋白Bax和Bcl-2的含量变化,探讨ITF对NEC保护作用的可能机制.方法 30只新生1日龄Wistar大鼠随机分为3组,正常对照组、实验组、干预组,每组10只.实验组为NEC模型后加生理盐水0.2 ml腹腔注射;干预组为NEC模型后予以腹腔注射TTF 0.2 mg(0.2 ml);正常对照组未予处理.第4天处死所有大鼠,取肠组织待检,取近回盲部1～2 cm肠道组织,采用分光光度法检查Caspase-3的表达、采用免疫组化法检测肠道组织中Bax及Bcl-2的含量变化并做病理学检查.结果 实验组Caspase-3表达高于正常对照组和干预组(P均＜0.05),干预组与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);实验组Bax表达高于正常对照组和干预组(P均＜0.05),干预组与正常对照组相近(P＞0.05);干预组Bcl-2表达高于正常对照组和干预组(P均＜0.05),实验组高于正常对照组(P＜0.05).正常对照组的肠组织病理学未见异常,病理评分为0分;实验组HE染色切片见肠壁损伤轻重不一,可见全肠黏膜绒毛坏死,病理评分的中位积分为3分;干预组肠上皮细胞少量脱落,顶端绒毛坏死,病理评分的中位积分为1分.与实验组比较,ITF治疗后NEC导致的组织病理学改变明显减轻.结论 注射ITF可通过减少Caspase-3、Bax表达和增加Bcl-2表达减轻NEC肠道损伤.     

谷氨酰胺对坏死性小肠结肠炎新生大鼠Toll样受体4的调控

目的：研究坏死性小肠结肠炎（NEC）新生大鼠肠道组织中Toll样受体4（TLR 4）和caspase-3的表达情况,探讨谷氨酰胺（Gln）对NEC肠道保护作用的可能机制。方法：60只早产新生大鼠随机分为模型组、Gln组和对照组（n=20）。代乳品人工喂养+缺氧+冷刺激建立NEC模型,Gln组采用代乳品+Gln（0.3 g/kg）人工喂养,同时给予缺氧冷刺激,对照组未进行任何干预,第3天处死后取出肠道,苏木素-伊红染色后对回肠进行病理评分,免疫组织化学检测空肠、回肠及结肠caspase-3、TLR-4蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测空肠、回肠及结肠TLR-4 mRNA的表达。结果：与对照组相比,模型组的病理评分、caspase-3、TLR-4蛋白和TLR-4 mRNA的表达均增加（P＜0.01）;与模型组相比,Gln组的各项指标均有所下降（P＜0.05）。结论：TLR-4可能参与了NEC的发病机制,降低TLR-4的表达,抑制肠黏膜细胞的凋亡可能是Gln保护NEC新生大鼠肠道的机制之一。     

肠三叶因子在新生鼠坏死性小肠结肠炎模型中对Bax和Bcl-2及Caspase-3表达的影响及意义

目的通过研究肠三叶因子(ITF)对新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)模型肠组织病理学改变及肠道组织中蛋白酶Caspase-3、蛋白Bax和Bcl-2的含量变化,探讨ITF对NEC保护作用的可能机制。方法30只新生1日龄Wistar大鼠随机分为3组,正常对照组、实验组、干预组,每组10只。实验组为NEC模型后加生理盐水0.2ml腹腔注射;干预组为NEC模型后予以腹腔注射ITF 0.2 mg(0.2 ml);正常对照组未予处理。第4天处死所有大鼠,取肠组织待检,取近回盲部1～2 cm肠道组织,采用分光光度法检查Caspase-3的表达、采用免疫组化法检测肠道组织中Bax及Bcl-2的含量变化并做病理学检查。结果实验组Caspase-3表达高于正常对照组和干预组(P均<0.05),干预组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);实验组Bax表达高于正常对照组和干预组(P均<0.05),干预组与正常对照组相近(P>0.05);干预组Bcl-2表达高于正常对照组和干预组(P均<0.05),实验组高于正常对照组(P<0.05)。正常对照组的肠组织病理学未见异常,病理评分为0分;实验组HE染色切片见肠壁损伤轻重不一...     

促红细胞生成素对坏死性小肠结肠炎新生大鼠肠道Bcl-2及caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)的作用机制。方法出生48 h的新生SD大鼠60只随机分为正常对照组、NEC模型组及rhEPO干预1、2、3组。采用人工喂养、缺氧、冷刺激方法制备NEC模型;rhEPO干预组分别在鼠乳代乳品中加入rhEPO 0.1、1及10 U/ml干预3天,以苏木精-伊红(HE)染色,按Nadler标准行肠道组织病理学评分,免疫组化(二步法)检测大鼠肠道Bcl-2及活性caspase-3蛋白情况。采用图像分析系统对免疫组化的图像进行阳性表达积分光密度值测量。结果 NEC模型组大鼠造模24 h后出现腹胀、活动减少、反应迟钝,严重者出现皮肤苍白、皮温降低、呼吸节律改变,3组rhEPO干预组上述症状出现较晚且较轻。正常对照组、NEC模型组、干预1组、干预2组和干预3组新生大鼠NEC发生率分别为0%、60%、30%、18.2%和9.1%,组间差异有统计学意义(P=0.008)。5组新生大鼠肠道病理组织学评分、肠道Bcl-2表达以及活性caspase-3蛋白表达的差异均有统计学意义(P均0.01);NEC模型组肠道病理损伤最重,肠道活性caspase-3蛋白合成最多;予rhEPO干预后,肠道损伤有减轻趋势,Bcl-2表达上调,活性caspase-3合成减少。结论口服rhEPO能使肠道活性caspase-3蛋白合成减少,Bcl-2表达上调,降低NEC发生率,且对肠道的保护作用呈剂量依赖性。     

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨泛素-特异性蛋白酶7（USP7）及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法 将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组,每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091（5 mg/kg）,高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本,通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化;采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA及其蛋白表达水平。结果 空气各组肺组织形态结构基本正常;高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱,有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变;高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚;高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻;各时间点高氧各组放射状肺泡计数（RAC）均明显低于相应空气各组（P < 0.05）,且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高（P < 0.05）。实验第3、5、9天时,高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加（P < 0.05）;高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少（P < 0.05）;高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）,空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路;USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤;USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解,减少肺上皮-间质转化,从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。     

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨泛素-特异性蛋白酶7（USP7）及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法 将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组,每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091（5 mg/kg）,高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本,通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化;采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA及其蛋白表达水平。结果 空气各组肺组织形态结构基本正常;高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱,有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变;高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚;高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻;各时间点高氧各组放射状肺泡计数（RAC）均明显低于相应空气各组（P < 0.05）,且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高（P < 0.05）。实验第3、5、9天时,高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加（P < 0.05）;高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少（P < 0.05）;高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）,空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路;USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤;USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解,减少肺上皮-间质转化,从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。     

肠道损伤与修复模型中PTEN、Lgr5和β-catenin的表达变化

目的 观察肠道损伤与修复模型中PTEN、Lgr5和β-catenin的表达变化,探讨其在肠道损伤和修复中的作用.方法 通过含6％O2的N2缺氧和4℃冷刺激制备新生大鼠坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)肠道损伤与修复模型.随机分为对照组和实验组,分别于制模后24、72、120 h获取末端回肠组织,利用Realtime PCR方法,测定组织匀浆中PTEN、Lgr5和β-catenin mRNA的表达水平.结果 成功制备新生大鼠NEC肠道损伤与修复模型.制模后24 h,实验组PTEN、Lgr5和β-catenin mRNA表达水平(7.564、4.23、4.864)均明显高于对照组(3.028、2.2、1.296),差异有统计学意义(P＜0.05).制模后72 h和120h,实验组上述三者表达水平(72 h:1.477、1.45、1.604;120 h:1.590、0.85、1.174)与对照组(72 h:2.340、2.21、2.487;120 h:1.855、1.73、2.718)比较,差异均无统计学意义.结论 含6％O2的N2缺氧和4℃冷刺激是制备肠道损伤与修复模型的可行条件.肠道损伤早期,PTEN、Lgr5和β-catenin mRNA表达水平增加,可能与促进肠道干细胞增殖有关.肠道损伤后期及修复期,三者表达较早期明显下降,可能与PTEN负性调节β-catenin活性、平衡干细胞增殖速度有关.     

Toll样受体阻断剂对内毒素血症小鼠肠黏膜损伤的影响

目的 探究Toll样受体（TLR）阻断剂对小鼠肠黏膜上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1的影响及对核转录因子-κB （NF-κB）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法 将32只BALB/C小鼠分为对照组、模型组、TLR4处理组、TLR2处理组（n=8）,腹腔注射LPS建立内毒素血症小鼠模型,TLR4处理组、TLR2处理组在腹腔注射LPS同时分别给予TLR4抗体和TLR2抗体（10 μg/只）腹腔注射,对照组以生理盐水替代。取各组小鼠远端小肠组织,采用RT-PCR及免疫组化法检测ZO-1、NF-κBp65及TNF-α的mRNA和蛋白定位表达。结果 模型组ZO-1 mRNA及蛋白表达明显低于对照组（P < 0.05）,NF-κBp65、TNF-α mRNA及蛋白表达明显高于对照组（P < 0.05）;TLR4处理组及TLR2处理组ZO-1 mRNA及蛋白表达明显高于模型组（P < 0.05）,NF-κBp65、TNF-α mRNA及蛋白表达明显低于模型组（P < 0.05）;TLR4处理组与TLR2处理组ZO-1、NF-κBp65、TNF-α mRNA及蛋白表达比较差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 抗TLR2、TLR4单克隆抗体可减少核转录因子的激活,抑制炎症因子大量分泌,保护紧密连接蛋白,有望对治疗肠源性感染疾病提供新的思路。     

姜黄素对新生大鼠坏死性小肠结肠炎的保护作用

目的：通过研究姜黄素对新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)肠组织病理改变,环氧合酶-2(COX-2)表达,肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-10 (IL-10)生成的影响,探讨姜黄素对NEC是否有保护作用。方法：40只新生大鼠随机分为4组：正常对照组,溶剂对照组,NEC模型组,姜黄素干预组,每组10只。每日定时观察各组大鼠的一般情况,连续3 d并于第4天处死,取肠道组织检测病理改变,TNF-α、IL-10含量及COX-2的表达。结果：姜黄素能改善NEC模型大鼠一般情况及病理组织学征象;与正常对照组、溶剂对照组比较,NEC模型组,姜黄素干预组TNF-α、IL-10浓度显著增高(P<0.05);姜黄素干预组TNF-α浓度较NEC模型组显著下降(P<0.05)、IL-10浓度较NEC模型组显著升高(P<0.05);姜黄素干预组COX-2表达量显著低于NEC模型组。结论：姜黄素对NEC大鼠具有保护作用,其机制可能与姜黄素抑制COX-2的表达,减少TNF-α的含量、增加 IL-10的含量有关。［中国当代儿科杂志,2010,12（2）：132-136］     

酪酸梭菌对坏死性小肠结肠炎新生鼠肠损伤的保护作用

目的探讨酪酸梭菌对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠肠组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体2(VEGFR-2)、增殖细胞核抗原(PCNA)及紧密连接蛋白claudin-2表达的影响。方法将出生48 h的SD新生大鼠随机分为模型组,对照组及低、中、高剂量组,每组12只。各组大鼠均以鼠乳代乳品喂养。模型组及低、中、高剂量组定时以缺氧和冷刺激连续3 d,建立NEC模型;低、中、高剂量组在建模的同时分别予酪酸梭菌0.2、0.4、0.8 g/(kg·d)。第4天处死大鼠取肠组织,观察病理变化,免疫组化法检测VEGF、PCNA及claudin-2蛋白表达,RT-PCR法检测VEGFR-2表达。结果各组间的肠组织病理评分差异有统计学意义(P?0.05),模型组病理评分高于低、中、高剂量组及对照组,各干预组高于对照组,差异均有统计学意义(P?0.05);模型组VEGF、VEGFR-2和紧密连接蛋白claudin-2的表达高于各干预组及对照组,各干预组高于对照组,差异均有统计学意义(P?0.05);模型组PCNA表达低于各干预组及对照组,各干预组低于对照组,差异均有统计学意义(P?0.05);各干预组间VEGF、VEGFR-2、PCNA及claudin-2的表达两两比较差异无统计学意义(P?0.05)。结论 NEC新生鼠VEGF、VEGFR-2和紧密连接蛋白claudin-2表达增高,PCNA表达降低;补充酪酸梭菌能作用于这些因子而对新生鼠起保护作用。     

糖皮质激素对高氧诱导新生大鼠肺组织RAGE-NF-κB通路的影响

目的探讨RAGE-NF-κB信号通路在新生大鼠高氧肺损伤过程中的变化,以及糖皮质激素对其的影响。方法 24只新生大鼠随机分为空气对照组、高氧模型组和激素干预组。模型组新生大鼠于生后即暴露于95%氧气浓度环境中1周,空气对照组大鼠生后仅暴露于同室内空气中饲养7 d,激素干预组于造模后行尾静脉注射地塞米松(1 mg/kg),隔天1次,共3次。日龄13 d时处死全部大鼠,RT-PCR检测各组肺组织RAGE m RNA及NF-κB m RNA的表达;Western blot检测RAGE及NF-κB蛋白水平;ELISA法检测血清及肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α和s RAGE含量;苏木精-伊红染色后行肺组织病理学评估。结果与对照组和激素干预组相比,高氧模型组肺组织RAGE、NF-κB的m RNA和蛋白表达水平均明显增高(均P0.05),血清中s RAGE含量明显升高(P0.01),BALF中s RAGE含量下降(P0.01);与对照组相比,激素干预组肺组织RAGE、NF-κB的m RNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05),血清中s RAGE含量明显升高(P0.05),而BALF中s RAGE含量明显下降(P0.05)。结论 RAGE-NF-κB通路在高氧诱导的新生大鼠肺损伤中活化增强,糖皮质激素可能通过下调RAGE-NF-κB信号通路对高氧肺损伤发挥保护作用。     

益生菌对肥胖大鼠血脂紊乱及胰岛素抵抗的影响

目的 观察益生菌嗜酸乳杆菌和短双歧杆菌对肥胖大鼠血脂及胰岛素抵抗相关指标的影响。方法 50只Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为对照组（n=10）和高脂饮食组（n=40）,分别予以普通饲料及高脂饲料喂养。4周后再将经高脂饮食诱导成功的36只肥胖大鼠随机分为高脂组、嗜酸乳杆菌组和短双歧杆菌组,每组12只;嗜酸乳杆菌组和短双歧杆菌组分别予以嗜酸乳杆菌150B菌液、短双歧杆菌DM8310菌液灌胃,其余组以生理盐水灌胃,每日1次。4周后测大鼠体重、腹围、体长,检测空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（Fins）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）及低密度脂蛋白（LDL）水平,并计算Lee’s指数、胰岛素敏感指数（IAI）、胰岛素分泌指数（IS）和胰岛素抵抗指数（IRI）。结果 高脂组大鼠的体重、腹围、Lee’s指数,以及TC、TG、LDL、FPG、Fins水平和IS、IRI均显著高于对照组（均P<0.05）,嗜酸乳杆菌组和短双歧杆菌组上述指标均显著低于高脂组（均P<0.05）,但仍高于对照组（均P<0.05）;高脂组大鼠的 HDL及IAI显著低于对照组（均P<0.05）,而嗜酸乳杆菌组和短双歧杆菌组上述指标显著高于高脂组（均P<0.05）,但仍低于对照组（均P<0.05）;短双歧杆菌组大鼠的Fins水平、IS和IRI显著低于嗜酸乳杆菌组（均P<0.05）,而IAI则显著高于嗜酸乳杆菌组（P<0.05）。结论 嗜酸乳杆菌及短双歧杆菌均能一定程度的改善肥胖大鼠的肥胖指数、血脂紊乱及胰岛素抵抗;短双歧杆菌DM8310改善胰岛素抵抗的作用优于嗜酸乳杆菌150B。     

脂氧素A4对脓毒症肥胖大鼠肝脏TLR4、TRAF6表达的影响

目的 探讨脂氧素A4（LXA4）对脂多糖诱导肥胖大鼠感染脓毒症的保护作用及其对肝脏Toll样受体4（TLR4）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）表达的影响。方法 选取3周龄雄性SpragueDawley大鼠60只随机分为普通组和肥胖组（n=30）,建立高脂饮食诱导的肥胖大鼠模型,将两组大鼠再随机分成对照组、脓毒症组、脂氧素组,每组各取8只大鼠。对照组、脓毒症组、脂氧素组分别予生理盐水、脂多糖、脂氧素A4+脂多糖腹腔注射,观察12 h后心脏采血并采集肝脏组织。ELISA法检测血清白细胞介素6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;蛋白免疫印迹法检测肝脏组织TLR4、TRAF6蛋白水平;实时荧光定量PCR法检测TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA的表达水平。结果 高脂饮食喂养6周后,肥胖组大鼠的平均体重、Lee's指数明显高于普通组（P < 0.05）。与普通组比较,肥胖组血清IL-6、TNF-α水平明显增高（P < 0.05）;同一饮食组内,脓毒症组较对照组血清IL-6、TNF-α水平明显增高（P < 0.05）,脂氧素组较脓毒症组血清IL-6、TNF-α水平显著降低（P < 0.05）。与普通组比较,肥胖组大鼠肝脏组织中TLR4、TRAF6蛋白及TLR4 mRNA、TRAF6mRNA表达水平上调（P < 0.05）;同一饮食组内,脓毒症组较对照组TLR4、TRAF6蛋白及TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA表达量明显增高（P < 0.05）,而与脓毒症组比较,脂氧素组TLR4、TRAF6蛋白及TLR4 mRNA、TRAF6 mRNA表达量显著降低（P < 0.05）。结论 LXA4能降低血清IL-6、TNF-α水平,减轻炎症反应。LXA4能抑制TLR4、TRAF6在脓毒症大鼠肝脏中的表达,可能是通过抑制TLR4的信号传导途径来实现的。     

大黄对高氧致新生大鼠支气管肺发育不良的影响

目的 探讨大黄对高氧致新生大鼠支气管肺发育不良（BPD）的影响。方法 将64只生后4 d大鼠随机分成空气对照组、大黄对照组、高氧模型组和高氧+大黄组（n=16）。大鼠暴露于60%氧浓度中构建BPD模型。造模同时,两个大黄干预组每天给予600 mg/kg大黄提取物混悬液灌胃1次。各组大鼠于生后14 d、21 d,苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织形态学改变;分光光度计法检测丙二醛（MDA）水平及超氧化物歧化酶（SOD）活性;RT-PCR、Western blot法检测肺组织中TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白表达水平。结果 高氧模型组大鼠肺组织出现肺泡数目减少、体积增大、结构简单化等发育受阻的表现,并随高氧暴露时间的延长损伤加重;高氧+大黄组大鼠肺组织病理改变明显减轻。大鼠生后14 d及21 d,与两对照组相比,高氧模型组放射状肺泡计数（RAC）明显减少,肺组织中SOD活性降低,MDA水平、TNF-α mRNA及蛋白水平、IL-6 mRNA及蛋白水平均升高（P < 0.05）。与高氧模型组相比,高氧+大黄组RAC明显增加,肺组织中SOD活性升高,MDA水平、TNF-α mRNA及蛋白水平、IL-6 mRNA及蛋白水平均降低（P < 0.05）。结论 大黄可能通过抑制炎症和氧化应激反应对高氧致新生大鼠BPD发挥保护作用。     

eNOS和NADPH氧化酶在慢性缺氧条件下小鼠肺组织中表达关系的研究

目的 探讨eNOS 和NADPH 氧化酶在慢性缺氧条件下小鼠肺组织中表达的关系。方法 将野生型及eNOS 基因敲除的C57BL/6 雄性小鼠各30 只随机分为常氧组、低氧7d组、低氧21d组、治疗7d组和治疗21d组,每种每组小鼠各6只。低氧和治疗组小鼠在10% 氧浓度条件下进行饲养,治疗组小鼠饮水中加入10 mmol/L 4-羟基-2, 2, 6, 6-四甲基哌啶(TEMPOL)进行干预。比较各组小鼠肺小动脉重塑(MT%)及右心室肥厚指标的变化;ELISA 法检测各组肺组织ROS 浓度的变化;RT-PCR 法检测各组肺组织NOX2、4 及eNOS 基因表达的变化。结果 野生型及基因敲除低氧组小鼠肺血管重塑及右心室肥厚指标较常氧组和治疗组均明显上升(P<0.05),而治疗组和常氧组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。野生型低氧及治疗组小鼠肺组织ROS浓度均低于常氧组(P<0.05),而低氧组和治疗组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。野生型低氧组小鼠eNOS、NOX2 和NOX4 的mRNA 表达较常氧组均显著上升(P<0.05),TEMPOL 干预可逆转上述指标的过度表达。基因敲除常氧组小鼠NOX2 和NOX4 mRNA 表达高于同组野生型小鼠(P<0.05);慢性缺氧后NOX4 mRNA表达较常氧组差异无统计学意义(P>0.05),NOX2 mRNA 表达较常氧组显著下降(P<0.05);治疗组NOX2mRNA 表达较低氧组进一步下降,而NOX4 mRNA 表达较低氧组明显上升(P<0.05)。结论 eNOS 是低氧条件下NOX2、4 表达的重要调控因素,eNOS 和NOX 在低氧性肺血管重塑过程中可能有着重要的联系。     

紧密连接蛋白在缺血再灌注肾损伤小鼠肾脏中的表达及意义

目的 探讨紧密连接蛋白claudin-2、claudin-10和claudin-17在缺血再灌注肾损伤模型小鼠肾脏中的表达及意义。方法 将152只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组（n=8）、假手术组（n=72）及模型组（n=72）。采用夹闭小鼠双侧肾蒂30 min的方法建立缺血再灌注肾损伤小鼠模型，假手术组及模型组依据再灌注后时间点（0、3、6、12、24、48、72 h及5 d、7 d）分为9个亚组，每组8只小鼠。分别采用RT-PCR法及免疫组化法分别检测各组小鼠肾组织紧密连接蛋白claudin-2、-10、-17 mRNA及其蛋白表达水平。结果 对照组及假手术组小鼠肾组织claudin-2、-10、-17 mRNA及其蛋白表达水平随再灌注时间点无明显变化（P > 0.05）。与对照组及假手术组比较，再灌注后模型组claudin-2、-10 mRNA及其蛋白表达水平降低，且随着再灌注时间的推移逐渐减弱，至再灌注24 h时达到最低水平（P < 0.05）；再灌注后模型组claudin-17 mRNA及其蛋白表达水平增高，且随再灌注时间的推移逐渐增高，至再灌注12 h时mRNA及24 h时蛋白水平达到最高（P < 0.05）。结论 缺血再灌注肾损伤与紧密连接蛋白claudin-2、-10、-17的异常表达密切相关。     

丙氨酰-谷氨酰胺对低出生体重新生大鼠缺氧性肠损伤后胰岛素样生长因子1的影响

目的　探讨丙氨酰-谷氨酰胺(Ala-Gln)对低出生体重(LBW)新生大鼠缺氧后肠组织胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及IGF-1受体(IGF-1R)水平的影响。方法　将孕鼠分别置于吸烟和非吸烟环境中饲养, 非吸烟条件下饲养孕鼠所分娩的新生大鼠设为A组; 将吸烟条件下饲养孕鼠所分娩的正常体重新生大鼠设为B组, LBW新生大鼠随机分为对照组(C组)、缺氧-复氧组(D组)和Ala-Gln组(E组); 每组24只。D、E组行缺氧-复氧操作连续3 d, 每天2次造模, E组在每日缺氧处理前腹腔注射Ala-Gln(10 mL/kg), C、D组以等量生理盐水行替代注射。各组于生后第4、7、10天分别处死8只大鼠取肠组织。采用ELISA法检测各组肠组织IGF-1水平; 免疫组化法检测各组肠组织IGF-1R水平。结果　A组与B组IGF-1及IGF-1R蛋白水平在各时间点差异无统计学意义(P>0.05)。C组IGF-1及IGF-1R蛋白水平呈上升趋势, 第7天时均较其他各组升高(P<0.05), 第10天时趋于正常水平, 与A、B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。D组各时间点IGF-1及IGF-1R蛋白水平均明显低于C组(P<0.05)。E组在第4、7天IGF-1及IGF-1R蛋白水平低于C组(P<0.05), 但到第10天上升至接近C组水平, 且显著高于D组水平(P>0.05)。结论 宫内和生后缺氧易使LBW新生大鼠出现肠损伤, 肠道外给予大剂量Ala-Gln可减轻LBW新生大鼠缺氧性肠损伤程度, 对缺氧性肠损伤有一定保护作用。     

雷帕霉素逆转大鼠肺动脉高压的作用机制研究

目的 探讨雷帕霉素(RAP)对大鼠肺动脉高压的作用,为临床药物治疗肺动脉高压的选择提供新思路。方法 将健康雄性Sprague-Dawley 大鼠50 只随机分为空白对照组、模型组、溶剂对照组、RAP 干预1 组(术后5 d 开始干预)和RAP 干预2 组(术后35 d 开始干预)。左肺切除(PE)联合野百合碱(MCT)诱导肺动脉高压大鼠模型;造模后5 d 分别给予溶剂对照组溶媒和RAP 干预1 组RAP 肌肉注射;造模后35 d 给予RAP 干预2 组RAP 肌肉注射。测定各组平均肺动脉压(mPAP)和RV/(LV+S)比值。苏木精-伊红染色观察各组右肺组织病理学改变。Real-time PCR 测定各组平滑肌α 肌动蛋白(α-SMA)及平滑肌22α 蛋白(SM22α)mRNA 的相对表达量。结果 模型组及溶剂对照组大鼠术后35 d mPAP 明显高于空白对照组,RAP 干预1 组及RAP 干预2 组大鼠的mPAP 明显低于溶剂对照组(P<0.05);模型组及溶剂对照组大鼠RV/(LV+S)明显高于空白对照组,RAP 干预1 组大鼠RV/(LV+S)低于溶剂对照组(P<0.05),而RAP 干预2 组大鼠RV/(LV+S)与溶剂对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);右肺病理组织学HE 染色可见模型组及溶剂对照组的肺动脉壁较空白对照组明显增厚,管腔狭窄,RAP 干预后可见增厚肺动脉壁有不同程度逆转;Real-time PCR 结果显示,模型组及溶剂对照组SM22α 及α-SMA 基因相对表达量明显低于空白对照组,RAP 干预1 组及RAP 干预2 组的SM22α 及α-SMA 相对表达量高于溶剂对照组(P<0.05)。结论 RAP 可逆转肺动脉压力的升高及右心室肥厚程度,其作用机制可能为通过调节血管平滑肌细胞表型转换而实现。     

血管内皮生长因子A对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺血管重塑的影响及其机制研究

目的 探讨血管内皮生长因子A（VEGF-A）调控生存素（SVV）在缺氧性肺动脉高压（HPH）新生大鼠肺血管重塑中的作用。方法 96只新生大鼠随机分为HPH+VEGF-A组、HPH组和对照组,每组再随机分为3 d、7 d、10 d和14 d亚组,每个亚组8只大鼠。HPH+VEGF-A组和HPH组分别经气管内转染携带/不携带VEGF-A的腺病毒载体后建立HPH模型,对照组气管内注射0.9% NaCl溶液后常氧下饲养。直接测压法测定新生大鼠平均右心室收缩压（RVSP）;苏木精-伊红染色后光镜下观察肺血管形态学变化,计算肺小动脉中层血管壁厚度占肺小动脉外径的百分比（MT%）和肺小动脉中层横截面积占总横截面积的百分比（MA%）;免疫组化法检测肺组织中VEGF-A和SVV的表达水平。结果 HPH组新生大鼠平均RVSP高于同时间点对照组和HPH+VEGF-A组（P < 0.05）。缺氧7 d,HPH组出现肺血管重塑,HPH+VEGF-A组自缺氧10 d开始出现。缺氧7 d时,HPH组MT%和MA%高于对照组和HPH+VEGF-A组（P < 0.05）;缺氧10 d和14 d时,HPH组及HPH+VEGF-A组MT%和MA%均高于对照组（P < 0.05）。缺氧各时间点HPH组和HPH+VEGF-A组VEGF-A表达均高于对照组（P < 0.05）;缺氧3 d和7 d时,HPH+VEGF-A组VEGF-A表达高于HPH组（P < 0.05）。缺氧14 d时,HPH组SVV表达高于对照组（P < 0.05）;缺氧各时间点HPH+VEGF-A组SVV表达均高于对照组（P < 0.05）;缺氧3 d和7 d时,HPH+VEGF-A组SVV表达高于HPH组（P < 0.05）。结论 预防性外源性气管内给予HPH新生大鼠VEGF-A,可在缺氧早期通过上调SVV表达抑制肺血管重塑,降低肺动脉压力,为新生儿HPH肺血管重塑干预治疗提供了依据。