一株胃癌耐药细胞系的建立及其耐药的可能机制

本采用大剂量阿霉素诱导出一株对阿霉素耐药的胃癌细胞系SGC7901／Adr。SGC7901／Adr对长春新碱、丝裂霉素C有交叉耐药性，其中对长春新碱耐药性最高，但对5-Fu依然存在敏感性，应用流式细胞术检测细胞阿霉索荧光强度，发现SCG7901／Adr细胞内阿霉索浓度明显低于SGC7901，提示细胞内药物蓄积减少是导致SGC7901／Adr产生多药耐药性的主要原因。     

可溶性耐药相关钙结合蛋白高表达在胃癌细胞耐药中的作用机制

目的 探讨可溶性耐药相关钙结合蛋白(Sorcin)在胃癌耐药中的作用及机制.方法 采用逆转录(RT)-PCR法扩增Sorcin cDNA片段编码区序列全长.DNA重组技术构建FLAG-Sorcin融合表达载体.经脂质体介导稳定转染胃癌SGC7901细胞.RT-PCR及Western印迹法分别检测转染细胞中Sorcin mRNA水平和蛋白水平的表达变化.高效液相色谱(HPLC)法检测Sorcin转染细胞(SGC7901-F-Sor)及对照细胞(SGC7901)内长春新碱(VCR)的浓度及维拉帕米(VRP)对其的影响.结果 RT-PCR法成功扩增出Sorcin eDNA片段编码区序列全长,并构建FLAC-Sorcin融合表达载体.RT-PCR及Western印迹法证实,Sorein在SGC7901转染细胞中高表达.HPLC检测显示Sorcin高表达的SGC7901细胞胞内VCR浓度较其亲本SGC7901细胞降低76.89%.VRP能增加VCR在细胞内的蓄积,VRP处理后,SGC7901-F-Sor细胞内VCR浓度增加2.41倍.结论 Sorcin高表达可致胃癌SGC7901细胞内VCR蓄积减少,提示Sorcin可能通过改变细胞膜两侧药物转运参与胃癌耐药,VRP能部分逆转此作用.     

人肺腺癌细胞系A549线粒体差异蛋白质组学研究

目的 研究人肺腺癌细胞系A549与人正常支气管上皮细胞系16HBE线粒体蛋白质组的差异表达.方法 传代培养细胞系A549及16HBE,用线粒体提取试剂盒获取细胞线粒体蛋白质,进行双向凝胶电泳,运用液相色谱串联质谱分析技术筛选出A549和16HBE细胞系线粒体间表达水平显著差异的蛋白,所得结果通过Data Analysis软件标峰,用MASCOT进行结果搜索和数据分析.结果 双向电泳结果显示A549、16HBE细胞系线粒体存在差异的蛋白质点共41个,3倍以上差异的16个,A549细胞系中表达上调的15个,表达下调的26个,其中3倍以上差异表达上调的7个,表达下调的9个.运用液相色谱串联质谱技术鉴定出A549细胞系线粒体表达上调的蛋白质2个:AAA+ ATP酶家族结构域蛋白3B、tRNA鸟嘌呤糖基转移酶,表达下调的蛋白质7个:热休克蛋白75、复合物Ⅲ亚基1、复合物Ⅲ亚基2、鸟氨酸氨基转移酶、异柠檬酸脱氢酶亚基α、SLP-2、抗增殖蛋白.结论 应用亚细胞蛋白质组学方法,鉴定出肺腺癌细胞系线粒体差异表达蛋白,为阐明肺腺癌发生的分子机制、筛选早期诊断标志物提供了有益的线索.     

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞系DNA polβ的表达

目的建立人肺腺癌紫杉醇多药耐药细胞系,测定耐药细胞系DNA聚合酶β（DNA polβ基因和蛋白表达。方法以紫杉醇为诱导药．人肺腺癌细胞系（A549）为诱导对象,逐步增加紫杉醇药物浓度进行诱导,建立耐紫杉醇的多药耐药细胞系A549／TXL20。采用MTT法检测A549／TXL20耐药指数,同时对顺铂、长春新碱、5氟脲嘧啶、丝裂霉素和羟基尿素五种药物进行交叉耐药检测。RC—PCR法和Western blotting法分别测定细胞内DNApolβ表达水平。结果A549／TXL20对紫杉醇及其他五种抗癌药物均有不同程度的耐药性。A549／TXL20细胞中DNA polβ mRNA及蛋白的表达水平均高于A549细胞（P〈0．05）。结论A549／TXL20具有多药耐药表型,耐药性产生可能与细胞内DNA polβ表达增高有关。     

人子宫内膜腺癌细胞系的建立

目的构建人子宫内膜腺癌细胞系。方法将1例高分化子宫内膜腺癌手术切除的肿瘤组织制成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM/F-12培养基进行原代培养,倒置显微镜下观察细胞形态,并用免疫荧光染色法检测其角蛋白。结果体外培养细胞传至50代以上,传代后细胞单层贴壁,散在生长,密度增加时见堆积现象,失去接触抑制,细胞质中角蛋白表达阳性。结论成功建立了人子宫内膜腺癌细胞系。     

人结肠癌HCT_（V2000）细胞系耐药机制的初步研究

目的研究人结肠癌耐药细胞系的耐药机制．方法采用抗Ｐ糖蛋白单抗ＪＳＢ１和ＭＲＫ１６以免疫细胞化学染色法（ＡＢＣ）检测ＨＣＴＶ２０００及亲本ＨＣＴ８细胞的Ｐ糖蛋白表达；提取两种细胞的ＤＮＡ和ＲＮＡ，与探针ＰＨＤＲ５Ａ杂交检测耐药基因ｍｄｒ１的表达和扩增；ＭＴＴ法测定ＶＣＲ对两种细胞的细胞毒作用．结果细胞系ＨＣＴＶ２０００对抗Ｐ糖蛋白单抗呈阳性反应，编码Ｐ糖蛋白的多药耐药基因ｍｄｒ１过度表达，但未见扩增或重排．异博定（１０μｇ／ｍｌ）使ＨＣＴｖ２０００细胞内３ＨＶＣＲ蓄积增加将近４倍，对ＶＣＲ的敏感性提高８４倍，可部分逆转耐药．结论多药耐药基因ｍｄｒ１ｍＲＮＡ过度表达是ＨＣＴＶ２０００细胞耐药的重要原因，但还有其他机制参与     

胃腺癌的研究进展

胃腺癌的研究进展张玉明，段芳龄，吴醒民ＯａｖｉｄＰ．Ｋｅｌｓｅｎ，ＣｈａｒｌｅｓＪ．Ｌｉｇｈｔｄａｌｅ，ＪｏｈｎＣ．Ｍａｒｓｈ，ＲｏｂｅｒｔＣ．Ｋｕｒｔｚ，ＪｏｓｅｐｈＲ．Ｂｅｒｔｉｎｏ（河南医科大学郑州４５００５２）９０％以上的胃恶性肿瘤均系胃腺癌...     

人肝癌顺铂耐药细胞模型的建立及耐药机制的初步探讨

多药耐药性(multidrug resistance,MDR)的产生常常导致化疗失败。我们采用逐步递增顺铂(CDDP)浓度,间歇作用体外诱导法,建立了人肝癌顺铂耐药细胞模型,并对亲代细胞系与耐药细胞系进行了对比研究,以期寻找出肿瘤细胞对CDDP产生耐药的可能机制,为临床筛选耐药逆转剂提供依据。     

人胃腺癌分化相关基因的克隆与鉴定

差异显示技术可用于研究多种组织中ｍＲＮＡ的表达差异。荧光差异显示技术 (ＦＤＤ)是在放射性差异显示技术基础上发展起来的一种新的识别基因差异表达的方法 ,我们使用此方法用来筛选与胃癌分化过程中相关表达的基因。材料与方法一、细胞系人胃腺癌ＭＫＮ 2 8(高分化 )细胞 ,ＭＫＮ 45 (低分化 )细胞 ,购自日本ＲｉｋｅｎＣｅｌｌＢａｎｋ (ＲＣＢ) ,ＲＰＭＩ 16 40 ,10 %ＦＢＳ常规培养。二、ＲＮＡ提取ＭＫＮ 2 8和ＭＫＮ 45细胞按常规培养至对数生长期 ,待细胞融合约 6 0 %～ 70 %时 ,用Ｔｒｉｚｏｌ试剂 (ＧｉｂｃｏＢＲＬ公司 )处理 ,…     

脑胶质瘤多药耐药机制的研究

为提高脑胶质瘤的化疗疗效 ,探讨胶质瘤的耐药机制 ,利用已建立的胶质瘤多药耐药细胞株 (C6 /adr) ,采用 RT- PCR法、免疫组织化学法分别对 C6及 C6 / adr细胞株 mdr- 1基因及其编码产物 P糖蛋白 (Pgp)进行了定性研究 ,同时采用流式细胞免疫学方法分别进行耐药蛋白及靶酶定量分析。结果显示 ,C6 mdr- 1基因表达阴性 ,C6 / adr mdr- 1基因表达阳性 ;C6 / adr Pgp强阳性 ,主要位于细胞膜及突起上。 C6、C6 / adr中的 Pgp分别为4.17%± 0 .6 3%、40 .5 9%± 4.77%(P<0 .0 1) ;其肺阻蛋白 (L RP)分别为 2 .92 %± 0 .2 2 %、2 1.17%± 1.79%(P<0 .0 1) ;拓扑异构酶 α(TOPO α)分别为 2 2 .88%± 1.94%、16 .77%± 1.0 8%(P>0 .0 5 ) ;谷胱甘肽 S-转移酶л(GST- л)分别为 5 .93%± 0 .78%、31.81%± 8.76 %(P<0 .0 1)。认为 Pgp、多药耐药相关蛋白 (MRP)、L RP在耐药胶质瘤中可共同表达 ,Pgp、MRP、L RP、GST-л在胶质瘤继发性耐药中起重要作用 ,测定其变化有助于化疗药物的选择。     

酞胺哌啶酮对耐顺铂人肺腺癌细胞系血管生成因子的影响

血管生成在恶性肿瘤的增殖与转移中起重要作用[1 ] ,血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ)与碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)的促血管生成活性已被公认[2 ] 。近来发现酞胺哌啶酮具有免疫调节及抗炎活性 ,且具有强大的抗血管生成效应。本研究通过采用逆转录 (ＲＴ) 聚合酶链反应 (ＰＣＲ)与免疫细胞化学方法 ,检测酞胺哌啶酮处理耐顺铂人肺腺癌细胞系Ａ549ＤＤＰ前后ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ的表达水平 ,探讨酞胺哌啶酮在降低人肺腺癌细胞系顺铂耐药中的作用。一、材料与方法1 .细胞培养 :用含 1 0 %胎牛血清的Ｄｕｌｂｅｃｃｏ改良培养基在 37℃、5 …     

人肺腺癌A549细胞系培美曲塞耐药细胞株模型的建立

目的建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。方法以人肺腺癌A549细胞为亲本株,应用高浓度反复间歇法模拟临床给药模式建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株。MTT法绘制生长曲线、计算倍增时间,同时检测耐药株细胞对顺铂、依托泊苷、紫杉醇、长春新碱的药物敏感性。结果亲本株IC_50为(181.75±12.56)ng/ml,耐药株IC_50为(4930.40±129.71)ng/ml,最终获得耐药指数为27.18±1.16的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株,命名为A549/PEM。A549和A549/PEM增殖速度接近,倍增时间分别为(62.78±1.06)h和(62.35±0.89)h(P=0.773)。A549/PEM同时对顺铂、依托泊苷耐药,耐药指数分别为(1.93±0.02)、(8.26±1.55);对紫杉醇、长春新碱敏感,耐药指数分别为(0.89±0.10)、(0.95±0.11)。结论本研究成功建立的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。     

脑胶质瘤化疗药物亚硝基脲类的耐药机制研究进展

目前 ,临床治疗脑胶质瘤多采取以手术为主的综合方案 ,即术后辅以放射治疗和化学治疗 ,亚硝基脲类药物 (NU s)是化疗的首选药物。临床常用的 NUs有卡氮芥 (BCNU)、环己亚硝脲 (CCNU)、甲环亚硝脲 (Me CCNU)、嘧啶亚硝脲 (AC-NU)、甲基亚硝脲 (MNU) ,这些药物虽在一定程度上改善了患者的预后 ,但其有效率不足 30 %,且其抗药性的产生限制了 NUs的临床效果 [1 ]。探索 NU s的耐药机制 ,寻找有效的耐药逆转剂 ,成为目前脑胶质瘤化疗研究的热点。1　 NUs的作用机理NUs属于烷化剂 ,主要通过对脱氧核糖核酸 (DNA)的烷化损伤而发挥其…     

肺腺癌细胞系H114的建立

目的建立国人男性肺腺癌细胞系,为肺癌的防治研究提供理想的体外实验模型。方法以经组织学和／或细胞学确诊的标本进行原代培养,通过光镜观察、细胞苏木精．伊红（HE）染色、细胞生长曲线、异体移植实验及组织HE染色等对其进行分析鉴定,建立细胞系。结果细胞经液氮罐或-80℃低温冰箱反复冻存复苏后仍保持良好的增殖活性,复苏细胞经0．4％胎盘蓝染色,活细胞比率均保持在85％以上。在整个168h的观察时间里,肺腺癌H114细胞始终处于持续增殖状态,可见潜伏期和指数生长期,由于本细胞系传代次数较少,生长活跃,7d还没出现平顶期和退化衰亡期;体外培养细胞生长稳定,细胞形态学及浸润性生长结果表明该细胞系符合恶性细胞特性,裸鼠接种成功致瘤,瘤细胞形态与原患者的病理切片相似,命名为H114细胞系。结论该细胞系符合建系标准,是一株新建的人肺腺癌细胞系。     

人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞PC9/ER的建立及奥曲肽改善耐药机制研究

目的探讨人肺腺癌耐厄洛替尼细胞系PC9/ER的耐药机制,及奥曲肽(OCT)改善PC9/ER耐药的可能机制。方法采用CCK-8法检测PC9/ER的耐药指数,奥曲肽(OCT)对PC9/ER改善耐药的倍数,Western bolt方法比较PC9、PC9/ER及OCT作用后PC9/ER细胞IGF-1R、p-IGF-1R、Akt、p-Akt的表达。实时荧光定量PCR法检测IGF-1,IGF-1R的mRNA表达量。酶联免疫吸附方法(ELISA)检测OCT作用后IGF-1的表达变化。结果 PC9/ER的耐药指数为10.4。厄洛替尼和OCT对PC9/ER的抑制作用增强,改善倍数为9.62。单独用药OCT可抑制PC9/ER细胞IGF-1,联合用药可抑制PC9/ER细胞IGF-1R、p-IGF-1R、Akt、p-Akt蛋白的表达。结论 OCT可通过抑制IGF-1,进而通过抑制IGF-1R、PI3KAkt信号通路来提高PC9/ER对厄洛替尼的敏感性。     

p38分裂原激活蛋白激酶信号转导途径与胃癌细胞长春新碱耐药相关

目的 研究p38分型原激活蛋白激酶（MAPK）信号转导途径在胃癌耐药形成中的意义。方法 用免疫共沉淀法及Western bolt法分别研究长春新碱处理胃癌细胞SGC7901及胃癌多药耐药SGC7901／VCR细胞内p38MAPK活性及量的变化。结果 胃癌多药耐药SGC7901／VCR细胞及亲本SGC7901细胞内均存在活性p38MAPK,长春新碱处理此两种细胞均可引起p38MAPK活性增强,后者反应迅速,可在2min内刺激p38MAPK活性增高,而前者反应较慢,至30min时才观察到p38MAPK活性增高。结论38MAPK信号转导途径可能与和长春新碱的抗肿瘤活性相关,肿瘤细胞内p38MAPK对长春新碱刺激的反应速度可能与胃癌长春新碱耐药相关。     

念珠菌耐药机制研究新进展

念珠菌是临床上深部真菌感染的主要致病菌,随着抗真菌药物的广泛应用,临床念珠菌耐药性变得严重。本文综述了念珠菌对各类常用抗真菌药物如唑类、多烯类、棘白菌素类等的耐药机制研究进展,为进一步开展念珠菌耐药机制研究及指导临床合理使用抗真菌药物提供理论依据。     

肺癌耐药机制的研究进展

肺癌对抗癌药产生耐药性是肺癌治疗中影响疗效的重要因素。这个问题至今尚无确切有效的解决方法。近年来,人们对肺癌的耐药机制进行了深入的研究,并总结出几点相对一致的结论,现综述如下。一、肺癌细胞膜ATP依赖性转运蛋白过度表达ATP依赖性膜转运蛋白的主要作用是在消耗ATP的基础上将细胞内的阳离子或细胞毒物质逆浓度梯度转运出细胞,对细胞具有保护作用。通常这类蛋白也存在于正常细胞,但在对抗癌药不敏感的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和对抗癌药产生耐药的小细胞肺癌(SCLC)细胞,这类蛋白常过度表达[1] 。在其作用下,因肺癌细胞抗癌…