α晶状体蛋白与白内障的研究进展

晶状体是人体内蛋白含量最高的组织结构。白内障被认为是一种构象性疾病,当α晶状体蛋白受到氧化损伤,晶状体蛋白错误折叠增多,加剧蛋白质变性、聚集和光散射,这可能是白内障发生的关键环节。α晶状体蛋白分子伴侣活性保护因子的发现,将对白内障发病机制和临床治疗研究开辟新领域。本文综述了近年来对α晶状体蛋白结构功能,表达部位及分子伴侣活性影响因素的研究。     

6-磷酸果糖和核糖对α-晶状体蛋白分子伴侣活性的作用

目的:探讨糖基化对α-晶状体蛋白的修饰.方法:分离牛αL和βL-晶状体蛋白.分别与100 mmol/L 6-磷酸果糖(F6P)和核糖孵育0～25 d,于0,15和25 d监测200～600 nm波长范围的吸光度(A)值,色氨酸和非色氨酸荧光值,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析蛋白质交联物.测定αL-晶状体蛋白对加热诱导βL-晶状体蛋白凝聚的保护作为分子伴侣活性.结果:F6P和核糖对αL-晶状体蛋白的修饰,主要表现为时间依赖性的色氨酸荧光强度降低,非色氨酸荧光强度增强,交联物形成,分子伴侣活性降低,F6P较核糖的修饰作用显著.孵育4 d,F6P组伴侣活性下降约24% (P＜0.01),15 d,伴侣活性几乎殆尽,而核糖组伴侣活性下降约60% (P＜0.01).结论:糖基化可导致α-晶状体蛋白色氨酸残基内环境的构象改变,形成交联物,降低其分子伴侣活性.     

αB—晶状体蛋白在保护过氧化氢所致心肌细胞损伤中的作用

采用热休克对新生大鼠心肌细胞进行预处理,以诱导αＢ－晶状体蛋白的表达,并观察其对１ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１的过氧化氢所致心肌细胞损伤的保护作用。发现：热休克预处理组心肌细胞中αＢ－晶状体蛋白表达明显增加,Ｈ２Ｏ２所致的细胞死亡率及ＬＤＨ释放率降低,总抗氧化能力增强;Ｈ２Ｏ２可引起αＢ－晶状体蛋白从胞浆向胞核及微丝位。     

αB晶状体蛋白在晶状体外的研究概况

αB晶状体蛋白是脊椎动物眼晶状体中的主要蛋白成分之一,在机体各种组织中都有广泛表达,它是小分子热休克蛋白家族成员之一,具有分子伴侣活性,能抑制多种环境变化下的细胞凋亡,同时与某些肿瘤的发生发展及肿瘤治疗中的抗药性都有密切关系,作者就此对近年来的相关研究作一概述.     

α-硫辛酸对体外培养兔晶状体氧化损伤的保护作用

目的 研究α-硫辛酸对体外培养兔晶状体氧化损伤的保护作用.方法 将正常兔晶体分为对照组,氧化损伤组和不同浓度α-硫辛酸保护组,培养48 h后观察各组晶状体混浊情况,测定各组晶状体谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC).结果 氧化损伤组晶状体全部混浊,对照组基本透明、0.5 mol/L和1 mol/L α-硫辛酸组分别为67%和33%.和对照组相比,氧化损伤组T-AOC及GSH含量明显降低,MDA含量明显升高,0.5 mol/L和1 mol/L α-硫辛酸组上述指标有不同程度改善.结论 α-硫辛酸可保护晶状体免受氧化损伤,减少白内障的发生.1 mol/L α-硫辛酸效果最佳.     

αB-晶状体蛋白促进体外培养人RPE细胞的增殖

目的 测定αB-晶状体蛋白在体外培养人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell,RPE)中的表达,探讨αB-晶状体蛋白对体外培养人RPE细胞增殖的影响.方法 传代培养人A-RPE19细胞系,免疫荧光技术检测αB-晶状体蛋白在RPE细胞中的表达.用不同稀释浓度(体积比分别为1/102、1/103、1/104、1/105、1/106)的αB-晶状体蛋白以及其抗体干预各组(对照组、蛋白组、抗体组)细胞,MTT方法检测不同时间点各组细胞光密度值,流式细胞术检测各组细胞不同时间点的周期及凋亡情况.结果 αB-晶状体蛋白在体外培养人RPE细胞质中表达;在48 h,浓度为1/104～1/102时,3组细胞的光密度值差异有统计学意义(P＜0.05);蛋白组与对照组相比,0～48 h蛋白组的G1期比例减小,S、G2期比例增加,抗体组与对照组相比,G1期比例增加,S、G2期比例减少(P＜0.05,P＜0.01);48 h时3组之间凋亡细胞的构成比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 αB-晶状体蛋白在体外培养人RPE细胞质中表达,并对体外培养人RPE细胞增殖起明显促进作用.     

近紫外线对兔晶状体上皮细胞Cx43蛋白影响的研究

目的:探讨近紫外线抑制兔晶状体上皮细胞通讯功能的机制.方法:将兔晶状体前囊膜行组织块细胞培养,2∽3代细胞分为正常对照组和近紫外线照射组(同一近紫外线光源下一固定位置50 cm,测得该点的功率为0.2mW/cm2,给于同一强度,5、10、15 min不同时间的近紫外线照射),应用Western-blot方法,从翻译水平检测近紫外线对兔晶状体上皮细胞(Rabbit 1ens epithelia cells,RIECs)的连接蛋白43(Connexin43,cx43)表达变化的影响;采用间接免疫荧光染色法,对RLECs的Cx43蛋白进行定位分析.结果:Cx43蛋白在各组晶状体上皮细胞中均有表达,并且正常对照组为高表达,随着近紫外线照射时间的增加,其Cx43蛋白的表达逐渐降低;并经近紫外线照射后正常定位于晶状体上皮细胞膜上的Cx43发生了内移.结论:证实近紫外线抑制品状体上皮细胞通讯功能的机制可能与细胞缝隙连接通讯(Gzp junction-mediated intercellulai.communication,GJIC)的关键蛋白Cx43蛋白表达的下降和功能定位的改变有关.     

水通道蛋白在大鼠氧化性白内障晶状体上的表达

目的 观察Ⅰ型水通道蛋白（AQP1）在正常及氧化性白内障模型大鼠晶状体上的表达，探讨其在氧化性白内障发生过程中的作用。方法 将健康清洁级Wistar大鼠60只离体透明晶状体随机分为2组，实验组加2mmol／L H2O2，空白组不加H2O2，其余处理相同。分别于12、24及48h观察两组大鼠晶状体的混浊情况；运用免疫组织化学方法及计算机图像分析技术检测AQP1的表达。结果 加入培养液后48h，空白组晶状体透明，而实验组的晶状体有不同程度的混浊；实验组晶状体的AQP1表达较空白组少，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论 AQP1的减少在氧化性白内障的发生中有一定作用，氧化损伤可能通过减少AQP1在晶状体上皮细胞膜上的表达，影响晶状体囊膜水代谢，以诱发白内障。     

HSF4b基因敲除下调αB-晶状体蛋白表达介导白内障发生

目的阐明热休克转录因子4b（HSF4b）对αB-晶状体蛋白（αB-crystallin, CRYAB）的调控在白内障发病过程中的作用及其机制。方法采用qPCR、Western印迹法和免疫荧光检测Hsf4tm1Xyk基因敲除小鼠晶状体中CRYAB和HSF4的表达情况;通过凝胶迁移实验、染色质免疫共沉淀、双报告基因检测等方法研究HSF4b对CRYAB的调控作用;通过免疫荧光分析和免疫共沉淀研究CRYAB与波形蛋白（vimentin, VIM）的相互作用。结果Hsf4tm1Xyk基因敲除小鼠晶状体中CRYAB表达下调;体外试验证实HSF4b和CRYAB的表达呈现正相关性;HSF4b直接与CRYAB启动子结合,激活CRYAB表达的转录过程;CRYAB与VIM存在相互作用。结论阐明了Hsf4tm1Xyk基因敲除小鼠中晶状体发育异常和白内障形成的分子机制。鉴定出CRYAB是HSF4b的下游调控分子。CRYAB对VIM具有稳定作用,有可能是抗白内障药物的作用靶点。     

硫氧还蛋白-2 在氧化损伤的人晶状体上皮细胞中的表达及其意义

目的：探讨硫氧还蛋白-2(thioredoin-2,Trx-2)是否参与白内障的发病过程及其对过氧化氢(H2O2)诱导的 人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响。方法：选取志愿者(因外伤行透明晶状体取出术患者)10例和行超声乳化白内 障手术患者(年龄大于60岁)30例的晶状体前囊膜,采用链霉素亲生物素蛋白-过氧化物酶标免疫组织化学法检测志 愿者和白内障患者晶状体上皮细胞中Trx-2蛋白的表达情况。体外培养SRA01/04细胞,根据不同处理分为空白对照 组、20 μmol/L H2O2组、50 μmol/L H2O2组、100 μmol/L H2O2组、阴性对照组(转染对照空pCMV6质粒并用100 μmol/L H2O2处理)和过表达Trx-2组(转染pCMV6-Trx-2过表达质粒并用100 μmol/L H2O2处理)。采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2- thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法检测各组细胞活力;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡;采用 化学比色法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性,谷胱甘肽 (glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用Western印迹检测各组细胞中Trx-2以及B细胞淋巴瘤/白 血病-2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸 蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)的表达。结果：与志愿者相比,白内障患者晶状体上皮 细胞中Trx-2蛋白表达明显减少(P<0.05)。与空白对照组比较,20, 50,100 μmol/L H2O2组Trx-2蛋白表达量均明显降低 (均P<0.05)。与空白对照组相比,100 μmol/L H2O2组和阴性对照组细胞存活率降低、凋亡率增加,细胞内SOD和CAT 活性降低、GSH含量减少、MDA含量增加,Trx-2和Bcl-2蛋白表达降低,Bax和caspase-3蛋白表达增加(均P<0.05)。与 阴性对照组比较,过表达Trx-2组细胞存活率增加、凋亡率降低,SOD和CAT活性增加、GSH含量升高、MDA含量降 低,Trx-2和Bcl-2蛋白表达增加,Bax和caspase-3蛋白表达减少(均P<0.05)。结论：Trx-2参与白内障发病中上皮细胞的凋 亡,过表达Trx-2能够减少H2O2诱导的细胞凋亡,这可能与拮抗H2O2诱导的氧化损伤有关。     

晶状体蛋白αB对卵巢癌细胞恶性行为的影响

目的 研究晶状体蛋白αB(αB-crystallin)在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖及迁移侵袭能力的影响.方法 免疫组织化学法检测人正常卵巢组织和上皮性卵巢癌组织中αB-crystallin表达;针对蛋白αB-crystallin的基因(CRYAB基因)设计合成靶向小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)重组慢病毒,并感染人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3;流式细胞仪、平板克隆、MTT检测细胞凋亡和增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 αB-crystallin在卵巢癌组织中表达高于正常卵巢组织,在Ⅱ型卵巢癌组织中呈明显高表达(P＜0.01),稳转CRYAB siRNA慢病毒后SKOV3细胞内αB-crystallin蛋白表达降低64％,其凋亡和增殖无明显改变,但SKOV3细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P＜0.01),同时蛋白MMP-2和MMP-9表达下调(P＜0.01).结论 αB-crystallin能够影响卵巢癌SKOV3细胞浸润转移,其在Ⅱ型卵巢癌组织中的高表达可能与其高侵袭潜能相关.     

不同损伤条件下热休克蛋白27在人晶状体上皮细胞中的表达

目的 观察不同损伤条件下热休克蛋白27( HSP27)在人晶状体上皮细胞系SRA01中的表达情况.方法 体外培养人晶状体上皮细胞系SRA01,在添加香烟烟雾凝聚物(CSC,25 mg/mL)或过氧化氢(H202,50 mmol/L)条件下培养30 min后,恢复至正常培养条件.分别于处理0,2,4,6,16,24 h时,采用免疫细胞化学、RT-PCR法检测细胞中HSP27的表达情况.结果 在生理和应激情况下,人晶状体上皮细胞内均有HSP27的表达.应激损伤后4h,HSP27 mRNA和蛋白的表达明显增加,8h达最高峰,24 h仍维持在较高水平.CSC组细胞HSP27的表达较过氧化损伤组弱(P＜0.05).结论 体外培养的人晶状体上皮细胞中存在HSP27的表达.不同损伤应激可诱导HSP27的表达增加,HSP27可能通过对抗应激作用保护晶状体上皮细胞.     

CT-B Conjugates顺行示踪显色α-晶状体蛋白对损伤后视神经纤维保护作用的实验研究

目的 观察α-晶状体蛋白对损伤后视神经纤维的保护作用.方法 将成年Long evens大鼠26只,其中10只用于提取α-晶状体蛋白,另外16只分成4组,分别为正常对照组和伤后2,4,6周组,每组4只.损伤神经后分别右眼经玻璃体腔注射浓度为1×10 -5g/L的α-晶体蛋白5 μl,左眼牛血清白蛋白5 μl,分别于伤后2,4,6周进行视神经取材.取材前48 h,在每只眼玻璃体腔中注射CT-B(霍乱毒素B亚单位)Conjugates 2.5 μl,取材固定脱水并行冰冻切片后进行激光共聚焦照相(488 nm波长光)观察.结果 CTB Conjugates标记的夹伤视神经中可见线状条索神经纤维染色,并呈现一定扭曲,夹杂点状或者小团块状染色.α-晶状体蛋白组的荧光强度显著高于牛血清白蛋白组.结论 CTB Conjugates顺染视神经示踪技术是观察和研究损伤后视神经病理变化的有效和简便的方法,α-晶状体蛋白对损伤后的视神经纤维具有保护作用.     

αB-晶状体蛋白、半乳糖凝集素-9与胰腺癌临床分期及预后的关系

目的:探究αB-晶状体蛋白(CRYAB)、半乳糖凝集素-9(Gal-9)与胰腺癌临床分期及预后关系.方法:选取胰腺癌患者56例为研究对象,均接受手术治疗.对术后病理组织进行免疫组化染色和蛋白免疫印迹法(Western blot)实验,比较胰腺癌组织和癌旁组织中CRYAB、Gal-9蛋白表达水平,分析CRYAB、Gal-...     

热休克蛋白70及其抑制剂的研究进展

热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)是一种在应激条件下诱导表达的伴侣蛋白,能帮助细胞内新生蛋白折叠,蛋白细胞内运输、蛋自装配和降解,并能在应激状态下维持蛋白质构象.研究表明,Hsp70与许多疾病有关,如癌症、神经退行性疾病、异源移植的排斥、感染等,有望成为新的药物作用靶点.本文综述了...     

高迁移率族蛋白1在心肌缺血再灌注损伤中的研究进展

高迁移率族蛋白1(HMGBl)是一种染色体结合蛋白,广泛存在于哺乳动物体内,能够维持染色体结构稳定,调控基因的复制、重组、转录等过程,直接或间接参与免疫反应、炎性反应等。近些年来,随着基础及临床研究的深入,发现HMGB1在心脏缺血再灌注损伤中发挥了重要的作用。本文对其进行综述。     

热休克蛋白70促进脊髓损伤恢复研究进展

脊髓损伤(SCI)是由椎骨骨折或脱位造成的一种高致残率疾病,严重降低患者生活质量。热休克蛋白(Hsps)是正常的细胞内蛋白,在细胞受到应激或损伤时大量产生。热休克蛋白70(Hsp70)是热休克蛋白家族中的重要成员,该蛋白已被证明在SCI后的继发性损伤调节中起着关键作用。故对SCI后,Hsp70的产生和作用机制进行综述,以期为后续相关研究提供参考。     

αB-晶状体蛋白基因rs14133G/C和rs2070894G/A多态性在广西西部人群中的分布

目的检测中国广西西部人群αB-晶状体蛋白(CRYAB)基因rs14133 G/C和rs2070894 G/A位点多态性,并探讨中国广西西部人群αB-晶状体蛋白基因多态性与其他4个种族人群的差异。方法通过聚合酶链式反应结合单碱基延伸技术和DNA测序方法检测199名广西西部健康人CRYAB基因rs14133 G/C和rs2070894 G/A位点基因型,并与国际人类基因组单倍型图谱计划公布的欧洲人、非洲人、日本人、中国北京人的CRYAB基因多态性进行对比。结果在199名广西西部健康人中,男女性组间CRYAB基因rs14133 G/C位点、rs2070894 G/A位点的基因型和等位基因型频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。中国广西西部人群和欧洲人相比,CRYAB基因rs14133 G/C和rs2070894 G/A位点基因型和等位基因型频率比较,差异有统计学意义(P<0.05);与非洲人、日本人、中国北京人相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CRYAB基因多态性分布具有种群和地域差异,这种差异可能是相同疾病在不同人群中临床表现不同的原因之一。     

肝型脂肪酸结合蛋白研究进展

肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)是脂肪酸结合蛋白超家族中的重要成员,主要功能是机体对脂肪酸的吸收、转运及细胞内长链脂肪酸的转运,以及脂肪酸在细胞器内的再分布利用。L-FABP调节过氧化物酶体增殖子激动受体α介导的靶基因转录,影响机体的脂质代谢和能量平衡,起到信号转导分子的作用。L-FABP与代谢性疾病及组织器官缺血损伤等密切相关,有望成为肝、肠、肾等组织损伤的敏感标志物,并可能成为某些代谢性疾病的药物治疗靶点。     

高迁移率族蛋白B1在神经系统疾病中的研究进展

高迁移率族蛋白B1是一种在哺乳动物中广泛表达的非组蛋白染色体结合蛋白,并通过晚期糖基化终产物受体和TOLL样受体参与炎症反应过程,而大多数神经系统疾病的发病机制与自身免疫或免疫炎性损伤相关.本文就高迁移率族蛋白B1在神经系统疾病中的研究进展进行综述.